化学发光-免疫层析试纸及其检测方法与流程

本发明涉及医学检验领域，具体地说是一种化学发光-免疫层析试纸及其检测方法。

背景技术：

目前常见的免疫层析试纸为胶体金，乳胶，或荧光。但其灵敏度和抗干扰性没有化学发光法有优势。

目前常见的化学发光则主要是湿法则在试管中溶液反应，其有灵敏度高的优点，但对设备的要求比较高，也不太适合单人份操作；

层析试纸为胶体金标记或荧光标记，其检测时需要额外给予一定的光源，胶体金为可见光，荧光为激发光。这些光都是通过led灯发出，容易出现灯与灯之间的差异，继而导致检测结果的差异。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种化学发光-免疫层析试纸及其检测方法，使其在反应后自行发光，无需额外光源，且集合了免疫层析试纸便利性，又兼备了化学发光的高灵敏度抗干扰的优势，提高了诊断试剂盒的灵敏度。

本发明第一方面保护一种化学发光-免疫层析试纸，包括：带外壳的层析试纸以及与层析试纸配套使用的加液管，加液管内装有用于滴加至试纸上后反应并化学发光显色的溶液。

本发明第二方面保护所述第一方面层析试纸的检测方法，包括以下步骤：

s1、将待测样品滴加至层析试纸上，当样品为阳性时，检测线上会生成复合物；

s2、按压加液管，使得加液管内的溶液混合后滴入层析试纸的样品垫上，并向吸样垫方向移动，当与检测线上的复合物反应后发光；

s3、将步骤s2发光的层析试纸放入荧光检测系统的暗盒内，再开启电源开关，计时器开始计时，通过光电倍增管收集检测线上的光，并通过cpu电路板的控制，显示屏显示相关信息，绘制标准曲线计算待测抗原的含量。

一种化学发光-免疫层析试纸及其检测方法，其优点是：

1、本发明层析试纸的结构设计集合了免疫层析试纸的便利性，又兼具有化学发光的高灵敏度抗干扰的优势；

2、本发明中试纸与加液管的配合使用，可即时了解发光情况，提高了诊断的灵敏度，操作简单、成本低；

3、本发明中通过化学试剂方法进行发光检测，配合发光倍增管、计时器等，可自动读取试纸上的光强，并了解光强度与检测物质的浓度关系，可对待测样本进行定量检测。

附图说明

图1为化学发光-免疫层析试纸的装配示意图；

图2为外壳内部设置层析试纸的部分侧视结构示意图；

图3为本发明滴样后的试纸进行发光检测的部分侧视结构示意图；

图4为本发明方法中检测结构的电路连接图；

其中：

外壳1、加样孔11、检测视窗12、吸样垫视窗13；

层析试纸2、样品垫21、硝酸纤维素膜22、吸样垫23、底板24；

加液管3、按压端31、滴液端32、储液腔33、刺针34；

电源开关4、计时器5、光电倍增管6、cpu电路板7、显示屏8。

具体实施方式

根据图1所示：化学发光-免疫层析试纸，包括：带外壳1的层析试纸2以及与层析试纸2配套使用的加液管3，加液管3内装有用于滴加至试纸上后反应并化学发光显色的溶液。

优选地，所述加液管3中的溶液为两种或以上的显色反应试剂；

所述加液管3的上下端部分别为按压端31和滴液端32，所述按压端31和滴液端32之间布置有多个独立储存显色反应试剂的储液腔33，所述按压端31的内面布置有刺针34，用于一次性同时刺破多个所述储液腔33及滴液端32，并可快速混合；

所述加液管3的主体为圆柱形，主体下端部渐缩成倒锥形为滴液端32，所述加液管3内的多个储液腔33沿轴向切面平行布置。

进一步地，如图2、图3所示：外壳1包括依次开设的加样孔11、检测视窗12、吸样垫视窗13，加样孔11与层析试纸2上的样品垫21对应，检测视窗12与层析试纸2上硝酸纤维素膜22包被的检测线、质控线对应，吸样垫视窗13与层析试纸2上的吸样垫23对应，用于观察样本是否到达吸样垫23，当待测液通过加样孔11滴入层析试纸2上反应完成后，通过加液管3向加样孔11下的样品垫21上滴加发光显色溶液，使得检测线、质控线显色。

进一步地，滴液端32孔径与加样孔11大小吻合。

加液管3为软质材料，便于挤压。

进一步地，层析试纸2上的样品垫21、硝酸纤维素膜22、吸样垫23依次搭接，且硝酸纤维素膜22两端分别与样品垫21、吸样垫23搭接的长度均为1～2cm；

样品垫21、硝酸纤维素膜22、吸样垫23均粘接于底板24上，且底板24为pvc不干胶背衬板。层析试纸2卡固与外壳1内部。

样品垫21上喷涂有吖啶酯或发光催化用酶标记的抗体1(或抗原)；且样品垫21为玻璃纤维膜；

硝酸纤维素膜22上的检测线、质控线上分别划有抗体2、二抗。

一种化学发光-免疫层析试纸的检测方法，包括以下步骤：

s1、将待测样品滴加至层析试纸2上，当样品为阳性时，检测线上会生成复合物；

s2、按压加液管3，使得加液管3内的溶液混合后滴入层析试纸2的样品垫21上，并向吸样垫23方向移动，当与检测线上的复合物反应后发光；

s3、将步骤s2发光的层析试纸放入荧光检测系统的暗盒内，再开启电源开关4，计时器5开始计时，通过光电倍增管6收集检测线上的光，并通过cpu电路板7的控制，显示屏8显示相关信息，绘制标准曲线计算待测抗原的含量。

光电倍增管6、cpu电路板7设置于暗盒内；

优选地，步骤s1中，当样品垫21上喷涂有吖啶酯标记的抗体1，硝酸纤维素膜22的检测线上包被抗体2，当样本为阳性时，硝酸纤维素膜22的检测线上生成固定的抗体1-抗原样本-吖啶酯标记抗体1的复合物；步骤s2中，加液管3的两个储液腔33内分别储存的是100μl～1000μl的50mm氢氧化钠溶液、100μl0.9％过氧化氢；

优选地，步骤s1中，当样品垫21上喷涂有碱性磷酸酶标记的抗体(或抗原)，硝酸纤维素膜22的检测线上包被抗体2，当样本为阳性时，硝酸纤维素膜22的检测线上生成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物；步骤s2中，加液管3的一个储液腔33储存的是amppd(3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯-1,2-二氧杂环丁烷)发光剂缓冲液，碱性磷酸酶使amppd脱去磷酸根基团而发光；

优选地，步骤s1中，当样品垫21上喷涂有用辣根过氧化物酶(hrp)标记的抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶(hrp)标记抗体复合物；步骤s2中，加液管3的三个储液腔33内分别储存的是鲁米诺发光剂、h2o2、发光增强剂；

进一步地，发光增强剂优选为对碘苯酚。

cpu电路板7上设置时间信息，计时器5进行计时，同时显示屏8直观地显示相关时间信息，当时间到达后，电源开关4进行对应的开或闭，控制光电倍增管6进入工作状态或停止工作；当到达设定反应时间后，加入显色溶液，会自动读取反应后的检测线、质控线光强，该光强度与检测物质的浓度相关。

光电倍增管6的工作原理是光电效应，是在光电效应的基础上再利用二次子倍增现象而制成的。

电源开关4、计时器5、光电倍增管6、cpu电路板7、显示屏8构成检测试纸上光线强度的检测结构，其连接示意图如图4所示。

本文中未详细说明的部分为现有技术，因此不做赘述。例如，将发光后的试纸进行检测，以绘制标准曲线计算待测抗原的含量等。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。