本发明涉及种子生物学技术领域，具体涉及一种确定种子萌发抑制物生物测定时浸提液使用浓度的方法及其应用。
背景技术：
种子休眠是指具有生活力的种子在适宜的环境条件(光照、温度、水分、氧气)下不能萌发的现象。不同的物种具有不同的内源休眠机制。目前认为种皮(果皮)吸水障碍、胚休眠与种子中存在萌发抑制类物质是种子休眠的三大原因。
植物种子萌发抑制物是引起种子休眠的重要原因之一。抑制物质是指可以推迟或抑制同种或异种植物种子发芽的物质。许多植物种子都被证实含有萌发抑制物质，会抑制白菜、莴苣等植物种子甚至自身种胚的萌发。
现有技术中，在进行抑制物生物测定时所采用的种子浸提液浓度千差万别，没有统一的、合适的标准，这在一定程度上影响了利用试验结果判断种子中萌发抑制物质活性的准确性，从而影响了对种子萌发抑制物质活性与种子休眠关系的判断。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种确定种子萌发抑制物生物测定时浸提液使用浓度的方法及其应用。利用本发明提供的方法确定的浸提液的使用浓度进行生物测定，能够很好地反映种子中抑制物质活性的状态。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种确定种子萌发抑制物生物测定时浸提液使用浓度的方法，包括如下步骤：
(1)测定第一种子的干重数值和第二种子吸水直至吸水饱和时的鲜重数值；
(2)用所述鲜重数值减去所述干重数值，得到差值；
(3)用所述干重数值除以所述差值，得到比值；
所述比值即为种子萌发抑制物生物测定时浸提液原液的浓度；
所述种子萌发抑制物生物测定时浸提液的使用浓度≤所述浸提液原液的浓度；
所述第二种子的种类、重量和数量与所述第一种子相同；
所述浸提液原液的浓度单位为g/ml。
优选地，所述第一种子的数量≥25粒。
优选地，所述测定的次数≥3次。
优选地，所述第二种子在吸水达到饱和的过程中，每隔1.5～2.5h测量一次一次鲜重数值。
优选地，每隔2h测量一次鲜重数值。
优选地，所述浸提液原液浓度稀释10倍的浓度≤所述种子萌发抑制物生物测定时浸提液的使用浓度。
优选地，所述浸提液原液浓度稀释5倍的浓度≤所述种子萌发抑制物生物测定时浸提液的使用浓度。
优选地，所述浸提液原液浓度稀释2倍的浓度≤所述种子萌发抑制物生物测定时浸提液的使用浓度。
本发明还提供了上述技术方案所述方法确定的种子萌发抑制物生物测定时浸提液使用浓度在反映种子中抑制物质活性状态中的应用。
优选地，所述种子包括花曲柳种子、油松种子和暴马丁香种子。
本发明提供了一种确定种子萌发抑制物生物测定时浸提液使用浓度的方法。本发明通过测定第一种子的干重、第二种子吸水达到饱和时的鲜重，计算出种子进行抑制物生物测定时种子浸提液的最大浓度值，进而确定了种子萌发抑制物生物测定时浸提液的使用浓度。通过本发明的方法确定的浸提液的使用浓度进行生物测定，能够很好地反映种子中抑制物质活性的状态。
具体实施方式
本发明提供了一种确定种子萌发抑制物生物测定时浸提液使用浓度的方法，包括如下步骤：
(1)测定第一种子的干重数值和第二种子吸水直至吸水饱和时的鲜重数值；
(2)用所述鲜重数值减去所述干重数值，得到差值；
(3)用所述干重数值除以所述差值，得到比值；
所述比值即为种子萌发抑制物生物测定时浸提液原液的浓度；
所述种子萌发抑制物生物测定时浸提液的使用浓度≤所述浸提液原液的浓度；
所述第二种子的种类、重量和数量与所述第一种子相同；
所述浸提液原液的浓度单位为g/ml。
本发明对所述测定第一种子的干重数值的方法没有特殊限定，优选采用烘干法测定，所述烘干的温度优选为105℃。本发明对所述测定种子的数量没有特殊限定，优选≥25粒。本发明对所述测定种子的次数没有特殊限定，优选至少3次。
本发明对所述测定第二种子吸水达到饱和时的鲜重数值的方法没有特殊限定，优选清水浸种后，每隔1.5～2.5h测量一次第二种子鲜重数值；更优选每隔2h测量一次第二种子鲜重数值。在本发明中，所述测定第一种子的重量与数量与第二种子相同。
在本发明中，所述种子萌发抑制物生物测定时浸提液使用浓度优选≥浸提液原液浓度稀释10倍的浓度，更优选浸提液原液浓度稀释5倍的浓度，最优选浸提液原液浓度稀释2倍的浓度。
在本发明中，所述浸提液是将种子的不同部位，利用水、亲水性的溶剂进行水提，提取亲水性的抑制物质；或对于非水溶性抑制物质，采用有机试剂进行提取。然后将选取的白菜种子用以上浸提液处理进行生物测定，对所得的种子发芽率数据进行分析确定浸提液是否存在抑制活性。
本发明所述的种子萌发抑制物浸提液使用浓度的确定是通过利用种子的干重，种子吸水达到饱和时的鲜重计算得到的。
本发明还提供了上述技术方案所述的方法确定的种子萌发抑制物生物测定时浸提液使用浓度在反映种子中抑制物质活性状态中的应用。本发明对所述种子的种类没有特殊限定，优选包括花曲柳种子、油松种子和暴马丁香种子。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
称取100粒花曲柳种子于105℃烘干测定干重为2.67g；另称取质量相同的100粒花曲柳种子于清水中浸种吸水达到饱和时测定鲜重7.50g。用花曲柳种子的鲜重数值减去干重数值，得到差值4.83g；再用干重数值除以差值，得到比值0.55。
根据上述计算结果，确定花曲柳种子浸提液原液的浓度为0.55g/ml，原液浓缩得到的加倍液浓度为1.11g/ml，原液经稀释2.5倍和5倍得到的稀释液浓度分别为0.22g/ml和0.11g/ml。取上述4种浓度溶液各3ml分别添加到垫有一层滤纸的培养皿中，以加3ml蒸馏水的处理为对照，然后每个培养皿中放置50粒白菜种子，重复4次。将不同处理的培养皿置于恒温(25℃)光照培养箱中进行发芽试验，24h后测定不同处理白菜种子发芽率，发芽试验结果(见表1)。
表1不同浓度的花曲柳种子浸提液对白菜种子发芽率的影响
由表1可知，花曲柳种子浸提液的浓度范围在0.11～0.55g/ml时，与蒸馏水对照组中白菜种子发芽率92％相比，白菜种子发芽率有所下降，但均有部分种子能够发芽，发芽率达18％～88％；但当浸提液浓度超出浸提原液0.55g/ml，即浓度达到1.11g/ml，白菜种子发芽率为0。因此，种子萌发抑制物生物测定时浸提液的使用浓度小于等于0.55g/ml时能够很好地反映种子中萌发抑制物质活性的状态；当浸提液使用浓度超出浸提原液0.55g/ml，不能准确反映种子中萌发抑制物质活性的状态。
实施例2
称取100粒油松种子于105℃烘干测定干重为3.44g；另称取质量相同的100粒油松种子于清水中浸种吸水达到饱和时测定鲜重15.54g。用油松种子的鲜重数值减去干重数值，得到差值12.10g；再用干重数值除以差值，得到比值0.28。
根据上述计算结果，确定油松种子浸提液原液的浓度为0.28g/ml，原液浓缩得到的加倍液浓度为0.57g/ml，原液经稀释2.5倍和5倍得到的稀释液浓度分别为0.11g/ml和0.06g/ml。取上述4种浓度溶液各3ml分别添加到垫有一层滤纸的培养皿中，以加3ml蒸馏水的处理为对照，然后每个培养皿中放置50粒白菜种子，重复4次。将不同处理的培养皿置于恒温(25℃)光照培养箱中进行发芽试验，24h后测定不同处理白菜种子发芽率，发芽试验结果(见表2)。
表2不同浓度的油松种子浸提液对白菜种子发芽率的影响
由表2可知，油松种子浸提液的浓度范围在0.06～0.28g/ml时，与蒸馏水对照组中白菜种子发芽率92％相比，白菜种子发芽率有所下降，但均有部分种子能够发芽，发芽率达78％～97％；但当浸提液浓度超出浸提原液0.28g/ml，即浓度达到0.57g/ml，白菜种子发芽率为0。因此，种子萌发抑制物生物测定时浸提液的使用浓度小于等于0.28g/ml时能够很好地反映种子中萌发抑制物质活性的状态；当浸提液使用浓度超出浸提原液0.28g/ml，不能准确反映种子中萌发抑制物质活性的状态。
实施例3
称取100粒暴马丁香种子于105℃烘干测定干重为3.14g；另称取质量相同的100粒暴马丁香种子于清水中浸种吸水达到饱和时测定鲜重6.89g。用暴马丁香种子的鲜重数值减去干重数值，得到差值3.75g；再用干重数值除以差值，得到比值0.84。
根据上述计算结果，确定暴马丁香种子浸提液原液的浓度为0.84g/ml，原液浓缩得到的加倍液浓度为1.67g/ml，原液经稀释2.5倍和5倍得到的稀释液浓度分别为0.33g/ml和0.17g/ml。取上述4种浓度溶液各3ml分别添加到垫有一层滤纸的培养皿中，以加3ml蒸馏水的处理为对照，然后每个培养皿中放置50粒白菜种子，重复4次。将不同处理的培养皿置于恒温(25℃)光照培养箱中进行发芽试验，24h后测定不同处理白菜种子发芽率，发芽试验结果(见表3)。
表3不同浓度的暴马丁香种子浸提液对白菜种子发芽率的影响
由表3可知，暴马丁香种子浸提液的浓度范围在0.17～0.84g/ml时，与蒸馏水对照组中白菜种子发芽率92％相比，白菜种子发芽率有所下降，但均有部分种子能够发芽，发芽率达60％～88％；但当浸提液浓度超出浸提原液0.84g/ml，即浓度达到1.67g/ml，白菜种子发芽率仅为11％。因此，种子萌发抑制物生物测定时浸提液的使用浓度小于等于0.84g/ml时能够很好地反映种子中萌发抑制物质活性的状态；当浸提液使用浓度超出浸提原液0.84g/ml，不能准确反映种子中萌发抑制物质活性的状态。
由实施例1～3的结果可知，本发明提供的方法确定的浸提液的使用浓度进行生物测定，能够很好地反映种子中抑制物质活性的状态。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。