一种保健食品中ε-六六六的检测方法与流程

本发明涉及保健食品技术领域，特别是涉及一种保健食品中ε-六六六的检测方法。

背景技术：

六六六在工业上是由苯与氯气在紫外线照射下合成。过去主要用于防治蝗虫、稻螟虫、小麦吸浆虫和蚊、蝇、臭虫等。由于对人、畜都有一定毒性，20世纪60年代末停止生产或禁止使用。

六六六属有机氯广谱杀虫剂，8种异构体分别称为：α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、ε-六六六、η-六六六、θ-六六六和ξ-六六六。

现行检测标准中蜂蜜、果汁、果酒、蔬菜、水果及粮谷中的ε-六六六可分别采用gb23200.7-2016、gb23200.8-2016和gb23200.9-2016，这些方法都采用gc/ms检测；部分保健食品使用植物提取物，样品有效成分由植物提取液浓缩提纯，基质较复杂，gc/ms检测常存在干扰。

目前，针对保健食品中ε-六六六的检测，没有明确规定的测试方法。

技术实现要素：

鉴于上述问题，提出了本发明实施例以便提供一种克服上述问题或者至少部分地解决上述问题的一种保健食品中ε-六六六的检测方法。

为了解决上述问题，本发明实施例公开了一种保健食品中ε-六六六的检测方法，包括如下步骤：

步骤s1，样品预处理：利用超声萃取法对保健品样品进行预处理，得到保健品样品提取液；步骤s2，试样净化：将所述保健品提取液在固相萃取仪上通过envi-18柱净化，使用乙腈冲洗净化柱，在固相萃取仪中收集萃取液及洗涤液，将所述收集萃取液及洗涤液放在旋转蒸发器上浓缩，得到净化浓缩溶液；步骤s3，标准溶液配制：将所述净化浓缩溶液使用envi-carb串联sep-paknh2柱，用乙腈-甲苯洗涤样液瓶并移入envi-carb串联sep-paknh2柱中，再用乙腈-甲苯溶液洗涤envi-carb串联sep-paknh2柱，收集所有流出物后旋转浓缩，加入正己烷进行溶剂交换两次，得到标准溶液；步骤s4，分析检测：将所述标准溶液使用gc-ms/ms进行测定；

进一步地，所述步骤s1，样品预处理：利用超声萃取法对保健品样品进行预处理，得到保健品样品提取液的过程，包括：称取指定重量的保健品样品置于离心管中，加入乙腈溶液振荡，超声提取法预置时间，将离心管放入离心机，在预置转速下离心设定时间，取上清液；重复提取设定次数，合并提取液，得到保健品样品提取液；

进一步地，所述指定重量为9.5～10.5g，所述离心管为50ml，所述乙腈溶液为5～15ml，所述预置时间为9～11min，所述预置转速为4000r/min，所述设定时间4～6min；所述设定次数为1次；

进一步地，所述步骤s2，包括：将所述保健品样品提取液在固相萃取仪上通过envi-18柱净化，使用5ml乙腈冲洗净化柱，在固相萃取仪中收集萃取液及洗涤液，将所述萃取液及洗涤液放在旋转蒸发器上浓缩至1ml，得到净化浓缩溶液；

进一步地，所述步骤s3，包括：标准溶液配制：将所述净化浓缩溶液使用envi-carb串联sep-paknh2柱，用3×2ml乙腈-甲苯洗涤样液瓶并移入envi-carb串联sep-paknh2柱中，再用25ml乙腈-甲苯溶液洗涤envi-carb串联sep-paknh2柱，收集所有流出物后旋转浓缩至0.5ml，加入2×5ml正己烷进行溶剂交换两次，得到标准溶液体积为1ml；

进一步地，所述gc-ms/ms测定时条件如下：

采用的色谱条件：色谱柱：db-5ms，规格30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度：270℃；载气：氦气；载气流速为1.20ml/min；进样量：1μl；不分流进样；程序升温：所述升温梯度为初温100℃，保持1min，后以20℃/min升温至300℃，保持2.5min；离子源温度：300℃；接口温度：300℃；

采用的质谱条件：采用选择反应检测采集模式。

本发明实施例包括以下优点：检测低限可达0.01mg/kg；采用分散固相萃取净化，重复性和重现性更优，操作简便；相比固相萃取法而言，可省去装柱、过柱及大量溶剂洗脱等操作，速度更快，成本更低、回收率更高的优势；gc-ms/ms结合了色谱的高分离能力和质谱的高选择性及高灵敏度，从而奠定了微量及痕量测定准确性的基础。此外，gc-ms/ms自动化程度高、可以实现批量处理、可以对结果的科学分析，从而大大简化了操作、提高了检测工作效率，同时也提高了分析测试工作的质量。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。

图1是保健品样品溶液的标准物质色谱图；

图2是ε-六六六标准物质曲线图；

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

现在结合附图对本发明作进一步详细的说明。这些附图均为简化的示意图，仅以示意方式说明本发明的基本结构，因此其仅显示与本发明有关的构成。

本发明的一种保健食品中ε-六六六的检测方法，包括如下步骤：

步骤s1，样品预处理：利用超声萃取法对保健品样品进行预处理，得到保健品样品提取液；步骤s2，试样净化：将所述保健品样品提取液在固相萃取仪上通过envi-18柱净化，使用乙腈冲洗净化柱，在固相萃取仪中收集萃取液及洗涤液，将所述收集萃取液及洗涤液放在旋转蒸发器上浓缩，得到净化浓缩溶液；步骤s3，标准溶液配制：将所述净化浓缩溶液使用envi-carb串联sep-paknh2柱，用乙腈-甲苯洗涤样液瓶并移入envi-carb串联sep-paknh2柱中，再用乙腈-甲苯溶液洗涤envi-carb串联sep-paknh2柱，收集所有流出物后旋转浓缩，加入正己烷进行溶剂交换两次，得到标准溶液；步骤s4，分析检测：将所述标准溶液使用gc-ms/ms进行测定，得到所述标准溶液中的ε-六六六的检测数据。

其中步骤s1中，样品预处理：利用超声萃取法对保健品样品进行预处理，得到保健品样品提取液的过程，包括：称取指定重量的保健品样品置于离心管中，加入乙腈溶液振荡，超声提取法预置时间，将离心管放入离心机，在预置转速下离心设定时间，取上清液；重复提取设定次数，合并提取液，得到保健品样品提取液。

所述指定重量为9.5～10.5g，所述离心管为50ml，所述乙腈溶液为5～15ml，所述预置时间为9～11min，所述预置转速为4000r/min，所述设定时间4～6min；所述设定次数为1次。

其中步骤s2中，将所述保健品样品提取液在固相萃取仪上通过envi-18柱净化，使用5ml乙腈冲洗净化柱，在固相萃取仪中收集萃取液及洗涤液，将所述萃取液及洗涤液放在旋转蒸发器上浓缩至1ml，得到净化浓缩溶液。

其中步骤s3中，标准溶液配制：将所述净化浓缩溶液使用envi-carb串联sep-paknh2柱，用3×2ml乙腈-甲苯洗涤样液瓶并移入envi-carb串联sep-paknh2柱中，再用25ml乙腈-甲苯溶液洗涤envi-carb串联sep-paknh2柱，收集所有流出物后旋转浓缩至0.5ml，加入2×5ml正己烷进行溶剂交换两次，得到标准溶液体积为1ml。

其中步骤s4中，所述gc-ms/ms测定时条件如下：采用的色谱条件：色谱柱：db-5ms，规格30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度：270℃；载气：氦气；载气流速为1.20ml/min；进样量：1μl；不分流进样；程序升温：所述升温梯度为初温100℃，保持1min，后以20℃/min升温至300℃，保持2.5min；离子源温度：300℃；接口温度：300℃；采用的质谱条件：采用选择反应检测采集模式。

实施例一

本发明的一种保健食品中ε-六六六的检测方法，包括如下步骤：

步骤s1，样品预处理：利用超声萃取法对保健品样品进行预处理，得到保健品样品提取液；

步骤s2，试样净化：将所述保健品样品提取液在固相萃取仪上通过envi-18柱净化，以5ml乙腈冲洗净化柱，在固相萃取仪中收集萃取液及洗涤液，将所述萃取液及洗涤液放在旋转蒸发器上浓缩至1ml，得到净化浓缩溶液；

步骤s3，标准溶液配制：将所述净化浓缩溶液使用envi-carb串联sep-paknh2柱，用3×2ml乙腈-甲苯洗涤样液瓶并移入envi-carb串联sep-paknh2柱中，再用25ml乙腈-甲苯溶液洗涤envi-carb串联sep-paknh2柱，收集所有流出物后旋转浓缩至0.5ml，加入2×5ml正己烷进行溶剂交换两次，得到标准溶液体积为1ml；

表1标准物质曲线

步骤s4，分析检测：将所述标准溶液使用gc-ms/ms进行测定。

所述步骤s1，样品预处理：利用超声萃取法对保健品样品进行预处理，得到保健品样品提取液的过程，包括：称取10g均匀粉碎的保健品样品置于50ml离心管中，加入10ml乙腈溶液振荡，超声提取法10min，将离心管放入离心机，在4000r/min离心5min，取上清液；重复提取1次，合并提取液，得到保健品样品提取液；

所述gc-ms/ms测定时条件如下：采用的色谱条件：色谱柱：db-5ms，规格30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度：270℃；载气：氦气；载气流速为1.20ml/min；进样量：1μl；不分流进样；程序升温：所述升温梯度为初温100℃，保持1min，后以20℃/min升温至300℃，保持2.5min；离子源温度：300℃；接口温度：300℃；采用的质谱条件：采用选择反应检测采集模式。

表2保留时间及离子对

通过保健食品的检测和加标回收试验，检测低限均可达0.01mg/kg。

尽管已描述了本发明实施例的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明实施例范围的所有变更和修改。

以上对本发明所提供的一种保健食品中ε-六六六的检测方法，进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。