一种含肉桂醛的化妆品致敏性的检测方法与流程

文档序号:19734336发布日期:2020-01-18 04:17阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种含肉桂醛的化妆品致敏性的检测方法,其特征在于,所述检测方法包括:将待测化妆品样品溶液和多肽贮备液反应,通过液相色谱测试多肽反应前后的响应值,计算多肽的消耗百分比,从而判断致敏性。

2.根据权利要求1所述的含肉桂醛的化妆品致敏性的检测方法,其特征在于,所述多肽储备液包括半胱氨酸多肽贮备液和赖氨酸多肽贮备液;

优选地,所述半胱氨酸多肽贮备液的制备方法包括:将半胱氨酸多肽用ph为7.5±0.5的磷酸盐缓冲液配制成浓度为0.667mmol/l的半胱氨酸多肽贮备液;

优选地,所述半胱氨酸多肽的纯度为90-99.9%;

优选地,所述ph为7.5±0.5的磷酸盐缓冲液的配置方法包括:取浓度为0.1mol/l磷酸二氢钠溶液与浓度为0.1mol/l磷酸氢二钠溶液混合,得到ph为7.5±0.5的磷酸盐缓冲液;

优选地,以磷酸二氢钠溶液的添加体积为18ml计,所述磷酸氢二钠溶液的添加体积为82ml;

优选地,所述赖氨酸多肽贮备液的制备方法包括:将赖氨酸多肽用ph为10.2的醋酸铵缓冲液配制成浓度为0.667mmol/l的赖氨酸多肽贮备液;

优选地,所述赖氨酸多肽的纯度为90-99.9%;

优选地,所述ph为10.2的醋酸铵缓冲液的配置方法包括:将醋酸铵加水溶解,用氨水调节ph值,得到ph为10.2的醋酸铵缓冲液;

优选地,以醋酸铵的添加量为1.542g计,所述水的添加体积为200ml。

3.根据权利要求1或2所述的含肉桂醛的化妆品致敏性的检测方法,其特征在于,所述检测方法包括:

(1)将待测化妆品样品溶液和半胱氨酸多肽储备液反应,用液相色谱测试反应前后半胱氨酸多肽的响应值,计算半胱氨酸多肽的消耗百分比;

(2)将待测化妆品样品溶液和赖氨酸多肽储备液反应,用液相色谱测试反应前后赖氨酸多肽的响应值,计算赖氨酸多肽的消耗百分比;

(3)将步骤(1)得到的半胱氨酸多肽的消耗百分比和步骤(2)得到的赖氨酸多肽的消耗百分比取平均值m,根据平均值m判断含肉桂醛的化妆品的致敏性。

4.根据权利要求3所述含肉桂醛的化妆品致敏性的检测方法,其特征在于,步骤(1)中所述反应包括:取750μl半胱氨酸多肽贮备液、200μl乙腈和50μl待测化妆品样品溶液混合反应;

优选地,步骤(2)中所述反应包括:取750μl赖氨酸多肽贮备液和250μl待测化妆品样品溶液混合反应。

5.根据权利要求3或4所述的含肉桂醛的化妆品致敏性的检测方法,其特征在于,所述反应为避光反应;

优选地,所述反应的时间为15-24h;

优选地,所述检测方法还包括将反应后得到的反应物进行分离;

优选地,所述分离的方法包括先进行离心,而后将离心得到的下层清液进行过滤;

优选地,所述离心的速率为2000-6000r/min;

优选地,所述离心的时间为5-15min。

6.根据权利要求3-5任一项所述的含肉桂醛的化妆品致敏性的检测方法,其特征在于,所述待测化妆品样品溶液为待测化妆品样品的乙腈溶液;

优选地,以待测化妆品样品的添加量为0.5-1.5g计,乙腈的添加量为0.75-2.25ml。

7.根据权利要求3-6任一项所述含肉桂醛的化妆品致敏性的检测方法,其特征在于,所述响应值为液相色谱特征峰的峰面积;

优选地,所述液相色谱的检测器为dad检测器;

优选地,所述液相色谱的紫外吸收波长为220nm;

优选地,所述液相色谱的流速为0.5-2ml/min,优选1ml/min;

优选地,所述液相色谱的柱温为20-30℃,优选25℃;

优选地,所述液相色谱的进样量为3-20μl,优选10μl;

优选地,所述液相色谱的色谱柱的内径为4.6mm,长度为150mm,粒径为3.5μm;

优选地,所述液相色谱的色谱柱为agilentzorbaxsb-c18;

优选地,所述液相色谱的色谱柱保护柱为phenomenonc-18。

8.根据权利要求3-7任一项所述含肉桂醛的化妆品致敏性的检测方法,其特征在于,所述液相色谱的流动相包括水和乙腈;

优选地,所述水为含0.1%三氟乙酸的水溶液,所述乙腈为含0.085%三氟乙酸的乙腈溶液;

优选地,所述液相色谱采用的洗脱方式为梯度洗脱;

优选地,所述梯度洗脱的流程为:以水和乙腈的体积加和为100%计,在第0-10min内,水的体积百分含量由87%连续降低至64%,乙腈的体积百分含量由13%连续增大至36%;第10-11min内,水的体积百分含量由64%连续降低至10%,乙腈的体积百分含量由36%连续增大至90%;第11-14min内,水的体积百分含量恒定为10%,乙腈的体积百分含量恒定为90%;第14-14.5min内,水的体积百分含量由10%连续增加至87%,乙腈的体积百分含量由90%连续降低至13%;第14.5-22min内,水的体积百分含量恒定为87%,乙腈的体积百分含量恒定为13%。

9.根据权利要求3-8任一项所述含肉桂醛的化妆品致敏性的检测方法,其特征在于,所述检测方法还包括空白对照、溶剂对照、样品对照以及阳性对照。

10.根据权利要求3-9任一项所述含肉桂醛的化妆品致敏性的检测方法,其特征在于,化妆品样品和与半胱氨酸多肽和赖氨酸多肽均不发生共洗脱,所述步骤(3)中判断标准为:0%≤平均值m≤6.38%,反应等级为1级,致敏性为阴性;6.38%<平均值m≤22.62%,反应等级为2级,致敏性为阳性;22.62%<平均值m≤42.47%,反应等级为3级,致敏性为阳性;42.47%<平均值m≤100%,反应等级为4级,致敏性为阳性。

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