含偶联纳米酶抗体、抗原检测HIV抗原和抗体检测卡的制作方法

本实用新型属于医用器械领域，具体涉及含偶联纳米酶抗体、抗原检测HIV抗原和抗体检测卡。

背景技术：

人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)是一种感染人类免疫系统细胞的病毒，通过破坏人体免疫细胞，导致免疫系统失去抵抗力，而导致各种疾病。国家疾控中心统计，自2007年起，艾滋病成为中国造成死亡人数最高的传染病并延续至今。值得注意的是，目前中国仍有32.1％感染者未被发现。确定一个人是否感染艾滋病毒的唯一办法是进行艾滋病毒检测。数据显示，2008-2015年间中国HIV检测量快速上升。据统计，仅2015年，全国约有超过1.43亿人接受了HIV检测，占总人口的10％。

如此大规模的HIV检测对人力、物力、财力、时间都是一个严峻的挑战，特别是随着艾滋的全球蔓延、医护人员被感染的风险事例对HIV检测技术的开发和创新提出了“精准、快速、无创”的要求。

目前有关于艾滋诊断程序是初筛为阳性后再进行Westernblot确诊。初筛的主要检测方法有两种：

1、血液检测：主要方法有免疫层析法(胶体金法或胶乳法)、化学发光法、时间分辨荧光法，即采集患者血样，用于体外定性或定量检测人血清、血浆和全血中的人类免疫缺陷病毒 (HIV-1/HIV-2)抗体。这些方法主要是通过检测可疑者血液的HIV抗体的有无判断是否感染。

但是血液检测的方法是一种创伤性血液检测，而血液传播也是艾滋传播的3大途径之一，其中，化学发光和时间分辨荧光需要大型设备，只有县级及以上的医院配备。其次，这2种方法耗时长，需要专门的操作人员和培训。三者的共同缺点是：

A、医护人员在抽血过程中被戳伤而感染的风险；

B、抽血后的各种医疗器械垃圾及处理(如：针头、针灸针、牙科器械、美容器械等)存在感染的风险；

C、采集的血样需要离心，难以进行患者自我检测从而保证患者的隐私。

2、口腔粘膜渗出液检测：主要方法有免疫层析法(胶体金法或胶乳法)。即用口腔拭子在牙龈线不断擦拭后的渗出液，检测人口腔粘膜渗出液中的HIV-1/2型人类免疫缺陷病毒抗体。

该法是一种微创检测，相比血液传播的风险小很多，但仍存在传播的风险如艾滋接触人群的高危人群。

尿液中存在HIV特异性的抗体已经被大量研究和证实。无/极弱传染性的尿液检测方法 CFDA批准的目前只有酶联免疫法，耗时长(3h)，且只能定性检测。同样可进行定性检测的胶体金法由于其操作简便、耗时短而被青睐和考虑的首选，但由于尿液抗体含量很低存在灵敏度的问题，故现有市场还未发现同类产品，此外，有报道，尿液检测相比于血液，唾液存在较高的假阳性问题。

技术实现要素：

本实用新型的目的在于提供一种含偶联纳米酶抗体、抗原检测HIV抗原和抗体检测卡，以方便的检测HIV。

为此，本实用新型提供了一种含偶联纳米酶抗体、抗原检测HIV抗原和抗体检测卡，用于对尿液、精液、阴道分泌物、唾液、血液中的一种进行检测，包括：

底座，设有若干安装槽，所述安装槽的长度方向沿所述底座的长度方向延伸；

第一检测条，设于所述安装槽内，包括第一底片、第一上样片、第一纳米酶片、第一硝酸纤维素膜和第一吸水纸，所述第一上样片设于所述第一底片的一端，所述第一纳米酶片的一端与所述第一上样片接触，另外一端与所述第一硝酸纤维素膜的一端接触，所述第一硝酸纤维素膜的另外一端与所述第一吸水纸接触，其中，所述第一纳米酶片含偶联纳米酶颗粒的 HIV抗原gp41和gp36，所述第一硝酸纤维素膜包括沿长度方向分布并且相互分离的第一检测线和第一质控线，所述第一检测线为包被在所述硝酸纤维素膜上的HIV抗原gp41和gp36 抗原，所述第一质控线为包被在所述硝酸纤维素膜上的抗HIV抗原的抗体。

优选地，还包括：

第二检测条，设于所述安装槽内，包括第二底片、第二上样片、第二纳米酶片、第二硝酸纤维素膜和第二吸水纸，所述第二上样片设于所述第二底片的一端，所述第二纳米酶片的一端与所述第二上样片接触，另外一端与所述第二硝酸纤维素膜的一端接触，所述第二硝酸纤维素膜的另外一端与所述第二吸水纸接触，其中，所述第二纳米酶片含偶联纳米酶颗粒的抗HIV p24抗体，所述第二硝酸纤维素膜包括沿长度方向分布并且相互分离的第二检测线和第二质控线，所述第二检测线为包被在所述硝酸纤维素膜上的抗HIV p24抗体，所述第二质控线为包被在所述硝酸纤维素膜上的抗鼠IgG抗体。

优选地，所述纳米酶颗粒为四氧化三铁颗粒。

优选地，所述底座还包括若干卡座，所述卡座设于所述安装槽附近，用于卡持所述第一检测条和第二检测条。

优选地，所述底座还包括导向部，设于所述安装槽的端部，用于引导所述第一检测条和第二检测条移动至所述安装槽内。

优选地，还包括盖体，所述盖体覆盖在所述底座上；

所述盖体包括透明的第一观察窗和第二观察窗，所述第一观察窗与所述第一检测条对应，用于透过所述第一观察窗观察所述安装槽内的第一检测条；所述第二观察窗与所述第二检测条对应，用于透过所述第二观察窗观察所述安装槽内的第二检测条。

优选地，所述盖体还包括与所述安装槽对应的插口，所述第一检测条和第二检测条通过所述插口进入所述安装槽内。

优选地，所述上样片为采用玻璃纤维膜或者无纺布材料制作的上样片。

优选地，还包括与所述第一检测条对应的第一滴管，以及与所述第二检测条对应的第二滴管，所述第一滴管安装于所述盖体，下端位于所述第一检测条的第一上样片的上方；所述第二滴管安装于所述盖体，下端位于所述第二检测条的第二上样片的上方。

优选地，所述第一滴管和第二滴管包括密封盖和管体，所述密封盖的底部嵌入所述管体内，所述管体的底部设有密封片，所述密封片通过通孔线连接于所述管体，在所述尿液，精液，阴道分泌物，唾液中的一种滴入所述管体后，所述密封盖嵌入所述管体内，使得所述检测物挤压所述密封片使得所述密封片破裂，所述检测物以滴入所述第一检测条或者第二检测条上。

与现有技术相比，本实用新型提供的检测HIV的检测卡采用偶联纳米酶的HIV抗体和抗原联合检测，使目前的偶联纳米酶诊断试剂能提高HIV的检出率，缩短HIV检测的窗口期，同时保持纳米酶试剂适于现场检测，操作简单，试剂的稳定性好等特点。

另外，实用新型提供的偶联纳米酶检测试剂检测HIV的检测卡通过将第一检测条和第二检测条装入同一个底座上，分别检测HIV的抗体和抗原。虽然采用了两条检测条，但检测时只需要直接加入被检样品，并不增加检测的步骤和复杂性，极大地减少了检测卡的复杂性。

附图说明

图1是本实用新型所述一种含偶联纳米酶抗体、抗原检测HIV抗原和抗体检测卡的结构示意图。

图2是本实用新型所述一种含偶联纳米酶抗体、抗原检测HIV抗原和抗体检测卡的结构示意图。

图3是本实用新型所述一种含偶联纳米酶抗体、抗原检测HIV抗原和抗体检测卡的第一检测条的结构示意图。

图4是本实用新型所述一种含偶联纳米酶抗体、抗原检测HIV抗原和抗体检测卡的第二检测条的结构示意图。

图5是本实用新型所述一种含偶联纳米酶抗体、抗原检测HIV抗原和抗体检测卡的第一滴管的结构示意图。

图中：

10-盖体；11-第一观察窗；12-第二观察窗；13-第一滴管；131-密封盖；132-管体；133- 密封片；14-第二滴管；15-插口；20-底座；21-安装槽；22-卡座；23-导向部；30-第一检测条； 31-第一底片；32-第一上样片；33-第一吸水纸；34-第一纳米酶片；35-第一硝酸纤维素膜； 351-第一检测线；352-第一质控线；40-第二检测条；41-第二底片；42-第二上样片；43-第二吸水纸；44-第二纳米酶片；45-第二硝酸纤维素膜；451-第二检测线；452-第二质控线。

具体实施方式

下面结合附图，对本实用新型做进一步说明。

图1是本实用新型所述一种含偶联纳米酶抗体、抗原检测HIV抗原和抗体检测卡结构示意图。如图1所示，该纳米酶检测HIV的检测卡包括盖体10和底座20，所述盖体10覆盖在所述底座20上。

所述盖体10包括透明的第一观察窗11和第二观察窗12，第一观察窗11的附近设有第一滴管13，第二观察窗12的附件设有第二滴管14，第一滴管13滴入的检测物可以通过第一观察窗11观察检测结果，第二滴管14滴入的检测物可以通过第二观察窗12观察检测结果。此外，所述盖体10的侧面还包括一个或多个插口15。

图2是本实用新型所述一种含偶联纳米酶抗体、抗原检测HIV抗原和抗体检测卡的底座 20的结构示意图。如图2所示，该底座20设有第一检测条30、第二检测条40和若干安装槽 21。

所述安装槽21的长度方向沿所述底座20的长度方向延伸。所述底座20还包括若干卡座 22，所述卡座22设于所述安装槽21附近，用于卡持所述第一检测条30和第二检测条40。所述底座20还包括导向部23，设于所述安装槽21的端部，用于引导所述第一检测条30和第二检测条40移动至所述安装槽21内。

图3是本实用新型所述一种含偶联纳米酶抗体、抗原检测HIV抗原和抗体检测卡的第一检测条30的结构示意图。如图3所示，该第一检测条30设于所述安装槽21内，包括第一底片31、第一上样片32、第一纳米酶片34、第一硝酸纤维素膜35(NC膜)和第一吸水纸33。所述第一上样片32为采用玻璃纤维膜或者无纺布材料制作的第一上样片32。所述第一上样片32设于所述第一底片31的一端。所述第一纳米酶片34的一端与所述第一上样片32接触，另外一端与所述第一硝酸纤维素膜35的一端接触，其中，第一纳米酶片34具有纳米酶，纳米酶一类既有纳米材料的独特性能，又有催化功能的模拟酶。所述第一硝酸纤维素膜35的另外一端与所述第一吸水纸33接触，其中，所述第一纳米酶片34含偶联纳米酶HIV抗原gp41 和gp36，所述第一硝酸纤维素膜35包括沿长度方向分布并且相互分离的第一检测线351和第一质控线352。本实施方式中，第一检测线351为两条，包被在所述硝酸纤维素膜上的HIV 抗原gp41和gp36抗原(T线)，所述第一质控线352为包被在所述硝酸纤维素膜上的抗HIV 抗原的抗体(C线)。

图4是本实用新型所述一种含偶联纳米酶抗体、抗原检测HIV抗原和抗体检测卡的第二检测条40的结构示意图。第二检测条40设于所述安装槽21内，包括第二底片41、第二上样片42、第二纳米酶片44、第二硝酸纤维素膜45(NC膜)和第二吸水纸43。所述第二上样片42为采用玻璃纤维膜或者无纺布材料制作的第二上样片42。所述第二上样片42设于所述第二底片41的一端，所述第二纳米酶片44的一端与所述第二上样片42接触，另外一端与所述第二硝酸纤维素膜45的一端接触。其中，其中，第二纳米酶片44具有偶联纳米酶的抗HIV p24抗体，纳米酶一类既有纳米材料的独特性能，又有催化功能的模拟酶，在一些实施方式中，所述纳米酶颗粒为四氧化三铁颗粒。所述第二硝酸纤维素膜45的另外一端与所述第二吸水纸43接触，所述第二硝酸纤维素膜45包括沿长度方向分布并且相互分离的第二检测线4 (T线)51和第二质控线452(C线)，所述第二检测线451为包被在所述硝酸纤维素膜上的抗HIV p24抗体，所述第二质控线452为包被在所述硝酸纤维素膜上的抗鼠IgG抗体。

其中，第一检测条30和第二检测条40的抗原的包被方法为：以0.01M pH 9.0碳酸盐缓冲液(CBS)分别将gp41、gp36抗原配制成1mg/ml、0.5mg/ml的溶液，用喷膜仪在NC膜下部以1ul/cm的参数分别划线，包被T1，T2线，同时在NC膜上部包被抗HIV抗体作为C线。试纸B包被方法为：以0.01M pH 7.2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗p24抗体配制成1.5mg/ml的溶液，用喷膜仪在NC膜下部以1ul/cm的参数划线，包被T3线，同时在NC膜上部包被鼠IgG 抗体作为C线。划线后将NC膜在干燥间，温度20-25℃，湿度小于30％，干燥8-10小时，备用。

在检测时，所述第一观察窗11与所述第一检测条30对应，用于透过所述第一观察窗11 观察所述安装槽21内的第一检测条30的显色结果。所述第二观察窗12与所述第二检测条 40对应，用于透过所述第二观察窗12观察所述安装槽21内的第二检测条40的显色结果。所述第一检测条30和第二检测条40通过所述插口15进入所述安装槽21内。

此外，该含偶联纳米酶抗体、抗原检测HIV抗原和抗体检测卡还包括与所述第一检测条 30对应的第一滴管13，以及与所述第二检测条40对应的第二滴管14。所述第一滴管13安装于所述盖体10，下端位于所述第一检测条30的第一上样片32的上方；所述第二滴管14 与第一滴管13的结构相同，安装于所述盖体10，下端位于所述第二检测条40的第二上样片 42的上方。

图5是本实用新型所述一种含偶联纳米酶抗体、抗原检测HIV抗原和抗体检测卡的第一滴管13的结构示意图。以第一滴管13为例，所述第一滴管13和第二滴管14包括密封盖131 和管体132，所述密封盖131的底部嵌入所述管体132内，所述管体132的底部设有密封片 133，所述密封片133通过通孔线连接于所述管体132，在检测物滴入所述管体132后，所述密封盖131嵌入所述管体132内，使得所述检测物挤压所述密封片133使得所述密封片133 破裂，所述检测物以滴入所述第一检测条30或者第二检测条40上，以便于定量滴入检测物。

该含偶联纳米酶抗体、抗原检测HIV抗原和抗体检测卡的检测方法为：

将检测物(例如血、尿、液化后的精液、阴道分泌物、唾液)平衡至温室，将底座20和盖体10平放，向第一滴管13和第二滴管14滴入检测物；

当第一滴管13和第二滴管14内被检测物注满时(根据管体132的大小而定，优选为 50-100ul)，盖上密封盖131，使得检测物挤压密封片133而滴入第一上样片32和第二上样片 42。

检测物溶解纳米酶偶联的抗体或抗原并在第一硝酸纤维素膜35和第二硝酸纤维素膜45 上层析，然后用肉眼直接观察在30分钟内C、T线的出现情况，并判定检测结果。若第一检测条30出现T线，说明检测物中含有抗HIV抗体，若第二检测条40出现T线，说明检测物中含有HIV p24抗原。若T线不出现，说明检测物为阴性或含量低于试剂盒的最低检测限。

应该理解，本实用新型并不局限于上述实施方式，凡是对本实用新型的各种改动或变型不脱离本实用新型的精神和范围，倘若这些改动和变型属于本实用新型的权利要求和等同技术范围之内，则本实用新型也意味着包含这些改动和变型。