用于诊断疾病的组合物的制作方法

本发明涉及一种能够诊断胰腺疾病的组合物，并且更具体地涉及一种能够诊断胰腺癌或类似疾病的组合物、一种包含所述组合物的诊断试剂盒以及一种使用所述组合物提供用于诊断的信息的方法。

背景技术：

对用于治疗和诊断现代人的重大疾病中的癌症的方法的研究一直在积极进行中，所述研究集中于具有高发病率的肺癌、肝癌和胃癌。然而，对具有相对较低发病率的食管癌、结直肠癌、胰腺癌等研究相对不足。特别地，胰腺癌在早期阶段几乎不展现症状，但通常在全身性转移后展现诸如疼痛和体重减轻的症状。因此，胰腺癌具有较低治愈率，所以针对胰腺癌的定期测试非常重要。大多数临床症状发展缓慢，并且食欲减退、虚弱和体重减轻是最常见的症状。胰腺癌是致死性癌症，其5年存活率为1％至4％，并且中位存活率为5个月，并且在人类癌症中显示最差的预后。另外，80％至90％的胰腺癌患者被诊断为处于不能进行实现完全治愈的治愈性切除的状况。因此，胰腺癌患者的预后较差，并且其治疗主要依赖于化学疗法。因此，与任何其他种类的人类癌症相比，更迫切需要开发用于早期诊断胰腺癌的方法。

目前已知有效抵抗胰腺癌的若干种抗癌药物(包括5-氟尿嘧啶、吉西他滨和tarceva)的治疗作用极差，并且对化学疗法的反应率仅约15％。这表明，迫切地需要更有效的早期诊断方法和治疗方法以改善胰腺癌患者的预后。

对胰腺癌的诊断是通过胃和十二指肠的x射线摄影术、经皮肤和肝的胆管造影术、内镜逆行胆管造影术或类似方法来进行，但最近几年，超声检查和计算机体层摄影已成为最常用方法。在使用这些方法中的任一种检测疾病的病灶时，可进行更精确的活检以获得更准确的检查结果。但是，这些诊断方法的准确度低或给患者带来不适和痛苦，并且因此患者不愿意参加此类诊断方法。因此，需要发展能简单快捷地诊断胰腺癌的检查方法。

就此而言，韩国专利第10-0819122号披露使用母系蛋白、转甲状腺素蛋白和分层蛋白作为胰腺癌标志物的技术，并且韩国专利申请公开案第2012-0082372号披露使用各种胰腺癌标志物的技术。另外，韩国专利申请公开案第2009-0003308号披露了通过检测来自受试者的血液样品中的reg4蛋白的表达水平来诊断胰腺癌的方法，并且韩国专利申请公开案第2012-0009781号披露了包括测量从受试者分离的癌症组织中的xistrna的表达水平以提供诊断胰腺癌所需的信息的测定方法。韩国专利申请公开案第2007-0119250号披露了一种与正常人的胰腺组织相比在人胰腺癌组织中差异表达的新型基因lbfl313家族，并且美国专利申请公开案第2011/0294136号披露了使用生物标志物诸如角蛋白8蛋白诊断胰腺癌的方法。然而，需要鉴别具有更佳效果的标志物，因为标志物的诊断效率和准确度之间差异极大。

因此，本发明人已经做出了广泛的努力以鉴定用于早期诊断胰腺疾病中的胰腺癌的有用标志物，并且因此已经发现白介素10受体(il-10r)、白介素22受体(il-22r)、白介素22(il-22)、白介素28a(il-28a)、白介素28b同种型1(il-28b同种型1)、白介素28b同种型2(il-28b同种型2)、白介素29(il-29)或干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)或其mrna在从胰腺癌患者分离的液体活检中的表达显著增加，从而完成了本发明。

技术实现要素：

本发明的目标是提供一种能够通过测量以下项来简单且准确地诊断疾病的组合物：白介素10受体(il-10r)、白介素22受体(il-22r)、白介素22(il-22)、白介素28a(il-28a)、白介素28b同种型1(il-28b同种型1)、白介素28b同种型2(il-28b同种型2)、白介素29(il-29)或干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平，所述疾病诸如胰腺疾病、自身免疫疾病、过敏症、格雷夫斯病(grave'sdisease)、桥本氏甲状腺炎(hashimoto'sthyroiditis)、自身免疫性淋巴细胞增生综合征(alps)、重症肌无力、川崎病(kawasakidisease)或银屑病，优选胰腺癌。

本发明的另一个目标是提供一种能够通过测量以下项来简单且准确地诊断上述疾病的试剂盒：白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平。

本发明的又一个目标是提供一种通过测量以下项来提供用于诊断上述疾病的信息的方法：白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平。

本发明的又另一个目标是提供一种通过测量以下项来提供用于诊断上述疾病的复发的信息的方法：白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平。

本发明的仍又一个目标是提供一种通过测量以下项来筛选用于治疗上述疾病的药物的方法：白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平。

为了实现以上目标，本发明提供了一种用于诊断胰腺疾病的组合物，所述组合物包含用于测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平的药剂：白介素10受体(il-10r)、白介素22受体(il-22r)、白介素22(il-22)、白介素28a(il-28a)、白介素28b同种型1(il-28b同种型1)、白介素28b同种型2(il-28b同种型2)、白介素29(il-29)和干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)。

本发明还提供了一种用于诊断胰腺疾病的试剂盒，其包含所述组合物。

本发明提供了一种提供用于诊断胰腺疾病的信息的方法，所述方法包括以下步骤：在从目的受试者分离的活检中测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平：白介素10受体(il-10r)、白介素22受体(il-22r)、白介素22(il-22)、白介素28a(il-28a)、白介素28b同种型1(il-28b同种型1)、白介素28b同种型2(il-28b同种型2)、白介素29(il-29)和干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)。

本发明还提供了一种预测疾病复发的可能性的方法，所述方法包括以下步骤：在从已接受治疗的胰腺疾病患者分离的活检中测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平：白介素10受体(il-10r)、白介素22受体(il-22r)、白介素22(il-22)、白介素28a(il-28a)、白介素28b同种型1(il-28b同种型1)、白介素28b同种型2(il-28b同种型2)、白介素29(il-29)和干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)。

本发明还提供了一种筛选用于疾病治疗的药物的方法，所述方法包括以下步骤：(a)在从胰腺疾病患者分离的活检中测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平：白介素10受体(il-10r)、白介素22受体(il-22r)、白介素22(il-22)、白介素28a(il-28a)、白介素28b同种型1(il-28b同种型1)、白介素28b同种型2(il-28b同种型2)、白介素29(il-29)和干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)；

(b)向所述患者施用候选药物；以及

(c)在施用候选药物之后从所述患者分离的活检中测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平：白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1。

本发明还提供了一种用于诊断胰腺疾病的组合物，所述组合物包含用于测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平的药剂：白介素10受体(il-10r)、白介素22受体(il-22r)、白介素22(il-22)、白介素28a(il-28a)、白介素28b同种型1(il-28b同种型1)、白介素28b同种型2(il-28b同种型2)、白介素29(il-29)和干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)。

本发明提供了一种用于诊断胰腺疾病的方法，所述方法包括以下步骤：在从目的受试者分离的活检中测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平：白介素10受体(il-10r)、白介素22受体(il-22r)、白介素22(il-22)、白介素28a(il-28a)、白介素28b同种型1(il-28b同种型1)、白介素28b同种型2(il-28b同种型2)、白介素29(il-29)和干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)。

本发明还提供了包含用于测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平的药剂的组合物用于诊断胰腺疾病的用途：白介素10受体(il-10r)、白介素22受体(il-22r)、白介素22(il-22)、白介素28a(il-28a)、白介素28b同种型1(il-28b同种型1)、白介素28b同种型2(il-28b同种型2)、白介素29(il-29)和干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)。

本发明还提供了包含用于测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平的药剂的组合物在制造用于诊断胰腺疾病的药物中的用途：白介素10受体(il-10r)、白介素22受体(il-22r)、白介素22(il-22)、白介素28a(il-28a)、白介素28b同种型1(il-28b同种型1)、白介素28b同种型2(il-28b同种型2)、白介素29(il-29)和干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)。

附图说明

图1显示了在实施例1中使用facs分析在从正常对照组、胰腺癌患者、胰腺炎患者、肺癌患者和结直肠癌患者收集的血液中测量的表达il-22的单核细胞的数量相对于单核细胞的总数的比例(％)。

图2显示了在实施例1中使用facs分析在从正常对照组、胰腺癌患者、胰腺炎患者、肺癌患者和结直肠癌患者收集的血液中测量的表达il-22r的单核细胞的数量相对于单核细胞的总数的比例(％)。

图3显示了在实施例1中使用facs分析在从正常对照组、胰腺癌患者、胰腺炎患者、肺癌患者和结直肠癌患者收集的血液中测量的表达il-10r的单核细胞的数量相对于单核细胞的总数的比例(％)。

图4是比较在实施例2中在从正常对照组、胰腺癌患者、胆管癌患者和胆囊癌患者收集的血液中测量的单核细胞中il-10rb的mrna表达水平的图表。

图5是比较在实施例2中在从正常对照组、胰腺癌患者、胆管癌患者和胆囊癌患者收集的血液中测量的单核细胞中il-22ra的mrna表达水平的图表。

图6是比较在实施例3中在从正常对照组、胰腺癌患者、胆管癌患者和胆囊癌患者收集的血液中测量的单核细胞中il-22的mrna表达水平的图表。

图7是比较在实施例3中在从正常对照组、胰腺癌患者、胆管癌患者和胆囊癌患者收集的血液中测量的单核细胞中il-29的mrna表达水平的图表。

图8是比较在实施例4中在从正常对照组、胰腺癌患者、胆管癌患者和胆囊癌患者收集的血液中测量的单核细胞中ifnlr1同种型1的mrna表达水平的图表。

图9是比较在实施例4中在从正常对照组、胰腺癌患者、胆管癌患者和胆囊癌患者收集的血液中测量的单核细胞中ifnlr1同种型3的mrna表达水平的图表。

图10显示了在实施例5中在手术之前和之后从胰腺癌患者收集的血液中测量的表达il-22的单核细胞的数量相对于单核细胞的总数的比例(％)。

图11显示了在实施例5中在手术之前和之后从胰腺癌患者收集的血液中测量的表达il-22r的单核细胞的数量相对于单核细胞的总数的比例(％)。

图12显示了在实施例5中在手术之前和之后从胰腺癌患者收集的血液中测量的表达il-10r的单核细胞的数量相对于单核细胞的总数的比例(％)。

图13是显示了比较在实施例6中在手术之前和手术之后3个月从胰腺癌患者收集的血液中测量表达il-10r的单核细胞的数量相对于单核细胞的总数的比例后通过配对t检验进行的分析的结果的图表。

图14是比较在实施例7中在从正常对照组、胰腺癌患者、胆管癌患者和胆囊癌患者收集的血液中测量的外来体中il-10rb的mrna表达水平的图表。

图15是比较在实施例7中在从正常对照组、胰腺癌患者、胆管癌患者和胆囊癌患者收集的血液中测量的外来体中il-22ra的mrna表达水平的图表。

图16是比较在实施例7中在从正常对照组、胰腺癌患者、胆管癌患者和胆囊癌患者收集的血液中测量的外来体中ifnlr1同种型1的mrna表达水平的图表。

图17是比较在实施例8中在从正常对照组、胰腺癌患者、胆管癌患者和胆囊癌患者收集的血液中测量的外来体中il-10rb(br)、il-22ra(ar)、ifnlr1同种型1(lr)和gpc-1(m)的mrna表达水平的图表。

图18显示了在实施例8中进行的用于预测胰腺癌患者的il-10rb(br)和ifnlr1同种型1(lr)生物标志物的组合的得分分析的结果。

图19是比较在实施例9中在从正常对照组、胰腺癌患者、胆管癌患者和胆囊癌患者收集的血液中测量的il-10rb(br)、il-22ra(ar)和il-22(a)的mrna表达水平的图表。

图20显示了在实施例9中进行的用于预测胰腺癌患者的il-10rb(br)、il-22ra(ar)和il-22(a)生物标志物的各种组合的得分分析的结果。

图21显示了在实施例9中进行的用于预测胰腺癌患者的il-10rb(br)、il-22ra(ar)和il-22(a)生物标志物的各种组合的得分分析的结果。

图22是比较在实施例10中在从正常对照组、胰腺癌患者、胆管癌患者和胆囊癌患者收集的血液中测量的单核细胞(pbmc)中ifnlr1同种型1(lr)和il-29(l)的mrna表达水平的图表。

图23显示了实施例11中通过facs分析来分析胰腺癌患者血液中表达ifnlr1同种型1的细胞的数量相对于单核细胞总数的比例的结果。

图24显示了实施例11中通过facs分析来分析慢性胰腺炎患者血液中表达ifnlr1同种型1的细胞的数量相对于单核细胞总数的比例的结果。

图25显示了在实施例12中在从正常对照组、胰腺癌患者、急性胰腺炎患者和慢性胰腺炎患者收集的血液中测量的表达il-10rb(br)、il-22ra(ar)或il-22(a)的单核细胞的数量相对于单核细胞的总数的比例(％)。

图26显示了在实施例12中通过facs分析对用于预测胰腺癌患者的il-10rb(br)和il-22(a)生物标志物进行的得分分析的结果。

图27以图形方式显示了在实施例13中测量从接受手术切除的胰腺癌患者进行手术之前和之后收集的血液分离的单核细胞中il-10rb、il-22ra、ifnlr1同种型1、il-22和gpc-1中每一种的mrna表达水平的结果。

图28显示了在实施例14中测量从接受手术切除的胰腺癌患者进行手术之前和之后收集的血液分离的单核细胞中il-10rb(br)、il-22ra(ar)、il-22(a)、cea和ca19-9中每一种的mrna表达水平的结果，并以图形方式显示了表达il-10rb(br)、il-22ra(ar)、il-22(a)和ca19-9的细胞的数量相对于单核细胞总数的比例。

图29显示了在实施例14中测量从接受手术切除的胰腺癌患者进行手术之前和之后收集的血液分离的单核细胞中il-10rb(br)、il-22ra(ar)、il-22(a)、cea和ca19-9中每一种的mrna表达水平的结果，并以图形方式显示了表达il-10rb(br)、il-22ra(ar)、il-22(a)和ca19-9的细胞的数量相对于单核细胞总数的比例。

图30显示了在实施例14中测量从接受手术切除的胰腺癌患者进行手术之前和之后收集的血液分离的单核细胞中il-10rb(br)、il-22ra(ar)、il-22(a)、cea和ca19-9中每一种的mrna表达水平的结果，并以图形方式显示了表达il-10rb(br)、il-22ra(ar)、il-22(a)和ca19-9的细胞的数量相对于单核细胞总数的比例。

图31显示了在实施例14中测量从接受手术切除的胰腺癌患者进行手术之前和之后收集的血液分离的单核细胞中il-10rb(br)、il-22ra(ar)、il-22(a)、cea和ca19-9中每一种的mrna表达水平的结果。

图32显示了在实施例14中测量从接受手术切除的胰腺癌患者进行手术之前和之后收集的血液分离的单核细胞中il-10rb(br)、il-22ra(ar)、il-22(a)、cea和ca19-9中每一种的mrna表达水平的结果。

图33显示了在实施例15中测量从接受抗癌化学疗法的胰腺癌患者进行治疗之前和之后收集的血液分离的单核细胞中il-10rb、il-22ra、ifnlr1同种型1、il-22、il-29和gpc-1中每一种的mrna表达水平的结果。

图34显示了在实施例16中使用facs分析来分析从接受抗癌化学疗法的胰腺癌患者进行治疗之前和之后收集的血液分离的表达il-10rb(br)和il-22ra(ar)的细胞的数量相对于单核细胞总数的比例的结果。

图35显示了在实施例17中对于从胰腺癌患者的血液分离的单核细胞使用对il-10rb(br)和il-22ra(ar)具有特异性的抗体进行facs分析和吉姆萨染色(giemsastaining)的结果。

图36显示了在实施例17中对于从急性胰腺炎患者的血液分离的单核细胞使用对il-10rb(br)和il-22ra(ar)具有特异性的抗体进行facs分析和吉姆萨染色的结果。

图37显示了在实施例18中对于从胰腺癌患者的血液分离的全血细胞使用对il-10rb(br)和il-22ra(ar)具有特异性的抗体进行facs分析和h&e染色的结果。

图38显示了在实施例19中对于从胰腺癌患者收集的血液分离的全血细胞通过转录组分析来分离表达il-10rb(br)、il-22ra(ar)和ifnlr1同种型1(lr)的细胞的结果。

图39显示了实施例20的实验设计。

图40显示了在实施例20中将panc-1细胞和apsc细胞注入小鼠后获得的胰腺和脾脏的图像。

图41显示了在实施例20中将panc-1细胞和apsc细胞注入小鼠后获得的胰腺组织的h&e染色图像。

图42显示了在实施例20中在将panc-1细胞和apsc细胞注入小鼠后对于浸润胰腺的免疫细胞(b细胞)使用对il-10rb(br)和il-22ra(ar)具有特异性的抗体进行facs分析的结果。

图43显示了在实施例20中在将panc-1细胞和apsc细胞注入小鼠后对于浸润胰腺的免疫细胞(树突细胞和巨噬细胞)使用对il-10rb(br)和il-22ra(ar)具有特异性的抗体进行facs分析的结果。

图44显示了在实施例20中在将panc-1细胞和apsc细胞注入小鼠后对于浸润胰腺的免疫细胞(嗜中性粒细胞)使用对il-10rb(br)和il-22ra(ar)具有特异性的抗体进行facs分析的结果。

图45以图形方式显示了在实施例21中测量从正常对照组和胰腺癌患者收集的血液分离的单核细胞中il-28a、il-28b同种型1和il-28b同种型2中每一种的mrna表达水平的结果。

具体实施方式

除非另有定义，否则本说明书中所用的所有技术和科学术语具有与本公开文本所属领域的技术人员通常理解相同的含义。通常，本说明书中所用的命名法是本领域熟知且常用的。

胰腺癌在早期阶段几乎不展现任何症状，但通常在其全身性转移后展现诸如疼痛和体重减轻的症状。因此，胰腺癌具有较低治愈率，因此针对所述病的定期诊断非常重要。大多数临床症状发展缓慢，并且食欲减退、虚弱和体重减轻是最常见的症状。胰腺癌是致死性癌症，其5年存活率为1％至4％，并且中位存活率为5个月，并且在人类癌症中显示最差的预后。另外，80％至90％的胰腺癌患者被诊断为处于不能进行实现完全治愈的治愈性切除的状况。因此，胰腺癌患者的预后较差，并且其治疗主要依赖于化学疗法。因此，与任何其他种类的人类癌症相比，更迫切需要开发用于早期诊断胰腺癌的方法。

本发明的发明人已经做出了广泛的努力以鉴定用于早期诊断胰腺疾病中的胰腺癌的有用标志物，并且因此已经发现白介素10受体(il-10r)、白介素22受体(il-22r)、白介素22(il-22)、白介素28a(il-28a)、白介素28b同种型1(il-28b同种型1)、白介素28b同种型2(il-28b同种型2)、白介素29(il-29)或干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)或其mrna在从胰腺癌患者分离的液体活检中的表达显著增加，从而完成了本发明。

因此，在一方面，本发明涉及一种用于诊断胰腺疾病的组合物，所述组合物包含用于测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平的药剂：白介素10受体(il-10r)、白介素22受体(il-22r)、白介素22(il-22)、白介素28a(il-28a)、白介素28b同种型1(il-28b同种型1)、白介素28b同种型2(il-28b同种型2)、白介素29(il-29)和干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)。

可以使用本发明的诊断组合物预测其发作或发作可能性的疾病的例子包括但不限于胰腺疾病、自身免疫疾病、过敏症、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、自身免疫性淋巴细胞增生综合征(alps)、重症肌无力、川崎病和银屑病。

特别地，在本发明中，所述诊断组合物可以用于诊断胰腺疾病，诸如胰腺癌或胰腺炎、优选胰腺癌。具体地，本发明的诊断组合物可以通过区分正常组与胰腺癌患者组来检测或诊断胰腺癌。另外，所述诊断组合物可以通过区分胰腺癌与其他类型的癌症(诸如肺癌或结直肠癌)来选择性地检测或诊断胰腺癌。

如本文所用，术语“胰腺癌”是指源自胰腺细胞的癌症。胰腺癌存在多种类型。由胰管细胞引起的胰管腺癌占胰腺癌病例的约90％，并且因此，胰腺癌通常是指胰管腺癌。另外，存在囊腺癌、内分泌肿瘤等。约5％至10％的胰腺癌患者具有对其的遗传易感性。具有胰腺癌家族史的胰腺癌患者的比例为约7.8％，其高于正常人中发作的胰腺癌的比例(0.6％)。胰腺癌具有极差预后，5年存活率小于5％。其原因在于，大多数病例是在癌症进展后才检测到，因此在检测时只在少于20％的病例中可能进行手术切除，并且即使通过目测检查确定已完全切除所述癌症，存活率的增加也因微转移而较低，并且对化学疗法和放射疗法的反应性较低。因此，最重要的提高存活率的方法是在症状不存在或非特异性时的早期检测和手术。

如本文所用，术语“胰腺炎”是指由胰腺炎症引起的疾病，并且包括急性胰腺炎和慢性胰腺炎。胰液含有消化酶，诸如淀粉酶(作用于碳水化合物水解)、胰蛋白酶(作用于蛋白质水解)和脂肪酶(作用于脂质水解)。胰腺炎源自多种病因，诸如代谢紊乱、药物和腹部损伤，以及由于可归因于酒精滥用、胆结石等的胰液缺陷性流动所致的酶诱导的胰腺自身降解。胰腺炎是胰腺的炎症性疾病，其诱导胰腺泡细胞的损伤、广泛性间质水肿以及嗜中性粒细胞迁移至出血和损伤位点。胰腺炎可以概括地分为两种类型：轻度胰腺炎类型，其中可检测到间质性水肿和胰周脂肪坏死；以及重度胰腺炎类型，其伴有广泛的胰周和胰内脂肪坏死、胰腺实质坏死和出血(bankpa.,am.j.gastroenterol.,89,第151-152页,1994.；bradleyel.,arch.surg.,128,第586-590页,1993)。

如本文所用，术语“自身免疫疾病”是指针对受试者自身组织生成和特化的非恶性疾病或障碍。在所有正常受试者中，最重要的特性之一是，它们不会对自身抗原物质产生负面反应，但它们可以识别并响应于非自身抗原并将其去除。活体对自身抗原的无反应性称为“免疫无反应性”或“耐受性”。然而，在自身耐受性的诱导或维持出现异常时，发生对自身抗原的免疫应答，并且因此发生攻击自身组织的现象。由前述过程引起的疾病称为“自身免疫疾病”。自身免疫疾病是炎症性疾病，其中产生针对患者自身器官组织或成分的抗体，并且通常可以指在多个组织和器官中引起慢性全身性炎症的疾病。

具体地，本发明中的自身免疫疾病的例子包括但不限于类风湿性关节炎(sle)、系统性红斑狼疮、克罗恩病、溃疡性结肠炎、多发性硬化、葡萄膜炎、自身免疫性脑膜炎、舍格伦综合征、硬皮病、韦格纳肉芽肿病、结节病、脓毒性休克、泪腺炎、中风、动脉硬化、血管再狭窄、i型糖尿病、ii型糖尿病、荨麻疹、结膜炎、干癣、系统性炎症综合征、多发性肌炎、皮肌炎、结节性多发性关节炎、混合性结缔组织病、痛风、帕金森病、肌萎缩侧索硬化、糖尿病视网膜病变、慢性甲状腺炎、乳糜泻、重症肌无力、膀胱天疱疮、病毒性疾病、细菌性疾病、动脉硬化、血管瘤、血管纤维瘤、再灌注损伤和心脏肥大。

如本文所用，术语“过敏症”可与“特应性障碍”互换使用，并且可指由生物化学现象引起的疾病，所述生物化学现象显示对外来物质(即，过敏原)的特异性和经修饰的应答。

在本发明中，所述过敏症可以是特应性皮炎、接触性皮炎、湿疹、哮喘、超敏反应、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、过敏性皮炎、荨麻疹、昆虫过敏、食物过敏或药物过敏，但不限于此。

在本发明中，术语“诊断”包括确定受试者对特定疾病或障碍的易感性，确定受试者目前是否患有特定疾病或障碍，确定患有特定疾病或障碍的受试者的预后(例如，鉴定转移前或转移癌性条件，确定癌症阶段或确定癌症对治疗的反应)，或治疗测定(例如，监测受试者状态以提供关于治疗效果的信息)。出于本发明的目的，诊断意指确定疾病的发作或发作的可能性(风险)。

本发明的诊断组合物优选地包含用于测量白介素10受体的表达水平或编码白介素10受体的基因的mrna表达水平的药剂。另外，本发明的诊断组合物还可以包含用于测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平的药剂以增加诊断所述疾病的准确性：白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1。

本发明的诊断组合物优选地包含用于测量白介素10受体蛋白和干扰素λ受体1同种型1蛋白中每一种的表达的药剂。

本发明的诊断组合物优选地包含用于测量编码白介素10受体蛋白和干扰素λ受体1同种型1蛋白中每一种的基因的mrna表达水平的药剂。

本发明的诊断组合物优选地包含用于测量白介素10受体蛋白和白介素22受体蛋白中每一种的表达水平的药剂。

本发明的诊断组合物优选地包含用于测量编码白介素10受体蛋白和白介素22受体蛋白中每一种的基因的mrna表达水平的药剂。

本发明的诊断组合物优选地包含用于测量白介素10受体蛋白和白介素22蛋白中每一种的表达水平的药剂。

本发明的诊断组合物优选地包含用于测量编码白介素10受体蛋白和白介素22蛋白中每一种的基因的mrna表达水平的药剂。

本发明的诊断组合物优选地包含用于测量白介素10受体蛋白、白介素22受体蛋白和白介素22蛋白中每一种的表达水平的药剂。

本发明的诊断组合物优选地包含用于测量编码白介素10受体蛋白、白介素22受体蛋白和白介素22蛋白中每一种的基因的mrna表达水平的药剂。

本发明的诊断组合物优选地包含用于测量白介素28a蛋白、白介素28b同种型1蛋白或白介素28b同种型2蛋白的表达水平的药剂。

本发明的诊断组合物优选地包含用于测量编码白介素28a、白介素28b同种型1或白介素28b同种型2的基因的mrna表达水平的药剂。

如本文所用，术语“白介素10受体(il-10r)”是指ii型细胞因子受体，其对应于由两个α亚基和两个β亚基组成的四聚体。α-亚基在诸如t细胞、b细胞、nk细胞、肥大细胞和树突细胞的造血细胞中表达，并且β-亚基以多种方式表达。在本发明中，白介素10受体优选地是由seqidno:1表示的白介素10受体β-亚基(il-10rb)。

如本文所用，术语“白介素22受体(il-22r)”是指ii型细胞因子受体，其对应于由α1亚基和β2亚基组成的异二聚体并与白介素22结合。在本发明中，白介素22受体优选地是由seqidno:2表示的白介素22受体α1亚基(il-22ra1)。

如本文所用，术语“白介素22(il-22)”是指属于称为“il-10家族”或“il-10超家族”(il-19、il-20、il-24和il-26)的细胞因子组的细胞因子，其介导细胞免疫应答。白介素22与由il-10r2和il-22r1亚基组成的异二聚体细胞表面受体结合。在本发明中，白介素22可以由氨基酸序列seqidno:3表示。

如本文所用，“白介素28a(il-28a)”也称为“干扰素-λ2”，并且对应于通过病毒感染上调的iii型干扰素。白介素28a可与上皮细胞中包含il-10rβ和il-28rα/ifn-λr1的受体复合物相互作用。在本发明中，白介素28a可以由氨基酸序列seqidno:4表示。

在本发明中，“白介素28b(il-28b)”也称为“干扰素λ3(ifnl3)”，并且对应于与i型干扰素和il-10家族相关的细胞因子。白介素28b、白介素28a和白介素29基因在映射到19q13的染色体区域上形成细胞因子基因簇。由这三个基因编码的细胞因子的表达是由病毒感染诱导的。这三种细胞因子与ii类细胞因子受体相互作用，后者是由白介素10受体β(il10rb)和白介素28受体α(il28ra)组成的异二聚体。在本发明中，白介素28b同种型1可以由氨基酸序列seqidno:5表示，并且白介素28b同种型2可以由氨基酸序列seqidno:6表示。

如本文所用，术语“白介素29(il-29)”也称为“干扰素λ-1”，其是指由位于19号染色体上的白介素29基因编码的蛋白质。白介素29属于螺旋细胞因子家族，并且对应于iii型干扰素。白介素29在抵抗微生物的宿主防御中具有关键作用，并且其表达水平在被病毒感染的细胞中显著增加。在本发明中，白介素29可以由氨基酸序列seqidno:7表示。

如本文所用，术语“干扰素λ受体1(ifnlr1)”是指由属于ii型细胞因子受体家族的基因编码的蛋白质。干扰素λ受体1与白介素10受体β亚基结合以形成受体复合物。此受体复合物可以与白介素28a、白介素28b和白介素29相互作用。在本发明中，干扰素λ受体1可以是由氨基酸序列seqidno:8表示的干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)。

在本发明中，可以由从目的受试者分离的活检、优选液体活检测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的表达水平：白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1，例如可以由从血液、血清或血浆分离的细胞或外来体测量，更优选地从液体活检分离的单核细胞、粒细胞或外来体测量。

在用于测量用于诊断各种疾病(特别是胰腺疾病)的生物标志物的表达水平的常规方法中，主要从胰腺组织分离细胞，随后测量所述细胞中生物标志物的表达水平。这些方法的不方便在于从胰腺组织分离细胞以诊断胰腺疾病、优选胰腺癌，并且其缺点是几乎不可能诊断出早期阶段的胰腺癌，因为胰腺癌的早期阶段没有主观症状。

然而，根据本发明，可以通过在液体活检(它是从目的受试者分离的血液、血清或血浆)或从中分离的单核细胞、粒细胞或外来体中测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna来快速、简单且非常准确地诊断包括胰腺癌的各种疾病的发作及其发作的可能性：白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1中。

具体地，当如上所述在从目的受试者分离的活检或液体活检或从所述液体活检分离的单核细胞、粒细胞或外来体中测量根据本发明的标志物的表达水平时，可以快速且简单地诊断疾病的发作或其发作的可能性，因为不需要侵入性程序(例如包括对患者进行剖腹术和从组织(例如，胰腺组织)分离组织细胞)，并且耗时约5分钟或更短时间来获得含有单核细胞、粒细胞或外来体的活检并且耗时约2小时或更短时间来测量来自所述单核细胞、粒细胞或外来体的根据本发明的各种疾病生物标志物的表达水平。

在本发明中，用于测量白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1的表达水平的药剂没有特别限制，但可以优选地包括至少一种选自抗体、寡肽、配体、pna(肽核酸)和适体的药剂，其与白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1蛋白中的每一种特异性地结合。

如本文所用，表述“测量蛋白质的表达水平”是指根据本发明在生物样品中检测作为用于诊断胰腺疾病的标志物的白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1蛋白的存在或表达水平以诊断包括胰腺癌在内的疾病的过程。用于测量或比较分析受体表达水平的方法包括但不限于蛋白质芯片分析、免疫测定、配体结合测定、maldi-tof(基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱)分析、seldi-tof(表面增强的激光解吸/电离飞行时间质谱)测定、放射免疫测定、放射免疫扩散、奥氏(ouchterlony)免疫扩散、火箭免疫电泳、组织免疫染色、补体结合测定、2d电泳测定、液相色谱-质谱(lc-ms)、液相色谱-质谱/质谱(lc-ms/ms)、蛋白质印迹和酶联免疫吸附测定(elisa)。

如本文所用，术语“抗体”是指与抗原特异性结合以诱导抗原-抗体反应的物质。出于本发明的目的，所述抗体是指与白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1特异性结合的抗体。本发明的抗体的例子包括所有多克隆抗体、单克隆抗体和重组抗体。可使用本领域中熟知的技术容易地产生所述抗体。例如，可以通过本领域熟知的方法产生多克隆抗体，所述方法包括向动物注射白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1蛋白以及从动物收集血液以获得含有抗体的血清。可以从任何动物(诸如山羊、兔子、绵羊、猴子、马、猪、牛和狗)产生此多克隆抗体。另外，可以使用本领域熟知的杂交瘤方法(参见kohler和milstein(1976)europeanjournalofimmunology6:511-519)或噬菌体抗体文库技术(参见clackson等人,nature,352:624-628,1991；marks等人,j.mol.biol.,222:58,1-597,1991)来产生所述单克隆抗体。可以通过诸如以下的方法来分离并纯化由上文所述的方法产生的抗体：凝胶电泳、透析、盐沉淀、离子交换色谱或亲和色谱。另外，本发明的抗体不仅包括具有两个全长轻链和两个全长重链的完整形式，还包括抗体分子的功能片段。所述抗体分子的功能片段是指至少具有抗原结合功能的片段并且其例子包括fab、f(ab′)、f(ab′)2和fv。

如本文所用，术语“pna(肽核酸)”是指人工合成的dna样或rna样聚合物，其是由哥本哈根大学(丹麦)的教授nielsen、egholm、berg和buchardt于1991年首次介绍。dna具有磷酸核糖糖骨架，但pna具有经由肽键连接的重复的n-(2-氨基乙基)-甘氨酸骨架，并且因此对dna或rna的结合亲和力显著提高并且稳定性增强。因此，pna被用于分子生物学、诊断测定和反义疗法。在文献中详细披露了pna[nielsenpe,egholmm,bergrh,buchardto(1991年12月).“sequence-selectiverecognitionofdnabystranddisplacementwithathymine-substitutedpolyamide”.science254(5037):1497-1500]。

如本文所用，术语“适体”是指寡核苷酸或肽分子，并且适体的一般内容详细披露于文献中[bocklc等人,nature355(6360):5646(1992)；hoppe-seylerf,butzk“peptideaptamers:powerfulnewtoolsformolecularmedicine”.jmolmed.78(8):42630(2000)；cohenba,colasp,brentr.“anartificialcell-cycleinhibitorisolatedfromacombinatoriallibrary”.procnatlacadsciusa.95(24):142727(1998)]。

在根据本发明的诊断组合物中，用于测量编码白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1的基因的mrna表达水平的药剂可以包括选自引物、探针和反义核苷酸的至少一种，其与编码白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1中每一种的基因的mrna特异性地结合。由于关于根据本发明的白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1的信息是已知的，因此本领域的任何技术人员可以基于这些信息来容易地设计与编码所述蛋白质的基因的mrna特异性结合的引物、探针或反义核苷酸。

如本文所用，表述“测量mrna表达水平”是指根据本发明通过测定生物样品中编码白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1的基因的mrna的存在或表达水平以诊断包括胰腺癌在内的疾病的过程来测量mrna的量。用于测量mrna表达水平的分析方法包括但不限于逆转录聚合酶链反应(rt-pcr)、竞争性逆转录聚合酶链反应(竞争性rt-pcr)、实时rt-pcr、rna酶保护测定(rpa)、northern印迹、dna芯片测定等。

如本文所用，术语“引物”是指识别靶基因序列的片段，并且包含正向和反向引物对，但是优选地是提供具有特异性和敏感性的分析结果的引物对。当引物的核酸序列是与样品中存在的非靶序列不一致的序列并且因此是仅扩增含有互补引物结合位点的靶基因序列而不引起非特异性扩增的引物时，可以赋予高特异性。

如本文所用，术语“探针”是指能与样品中待检测的靶物质特异性结合的物质，并且是指能通过所述结合而特异性检测样品中靶物质的存在的物质。探针的类型并无特别限制，只要其在本领域中常用即可。所述探针优选地是pna(肽核酸)、lna(锁核酸)、肽、多肽、蛋白质、rna或dna，最优选pna。更具体地，所述探针是源自生物或其类似物的生物分子或在体外产生。例如，所述探针包括酶、蛋白质、抗体、微生物、动物和/或植物细胞和器官、dna和rna。所述dna可以包括cdna、基因组dna或寡核苷酸，所述rna可以包括基因组rna、mrna或寡核苷酸，并且蛋白质的例子包括抗体、抗原、酶、肽等。

如本文所用，术语“lna(锁核酸)”意指含有2′-o或4′-c亚甲基桥的核酸类似物[jweiler,jhunziker和jhallgenetherapy(2006)13,496.502]。lna核苷包括dna和rna的常见碱基，并且可根据watson-crick碱基配对规则形成碱基对。然而，由于可归因于亚甲基桥的分子“锁定”，lna未能在watson-crick键中形成理想形状。在将lna并入dna或rna寡核苷酸时，它可以更快速地与互补核苷酸链配对，从而提高了双链的稳定性。

如本文所用，术语“反义”意指具有核苷酸序列和亚单元之间的骨架的寡聚物，其中反义寡聚物依照watson-crick碱基配对与rna中的靶序列杂交，以容许形成靶序列中的mrna和rna:寡聚物异二聚体。寡聚物可具有与靶序列互补的准确或近似序列。

在另一方面，本发明涉及一种用于诊断疾病的试剂盒，其包含根据本发明的诊断组合物。

可以使用本发明的诊断试剂盒预测其发作或发作可能性的疾病的例子包括但不限于胰腺疾病、自身免疫疾病、过敏症、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、自身免疫性淋巴细胞增生综合征、重症肌无力、川崎病和银屑病。

特别地，在本发明中，诊断试剂盒可用于诊断胰腺疾病，诸如胰腺癌或胰腺炎、更优选胰腺癌。具体地，当使用本发明的试剂盒时，它可以通过区分正常组和胰腺癌患者组来检测或诊断胰腺癌。另外，所述试剂盒可以通过与其他类型的癌症诸如肺癌或结直肠癌区分开选择性地检测或诊断胰腺癌。

在本发明中，所述试剂盒可以是rt-pcr试剂盒、dna芯片试剂盒、elisa试剂盒、蛋白质芯片试剂盒、快速试剂盒或多反应监测(mrm)试剂盒，但不限于此。

根据本发明的用于诊断疾病的试剂盒还可以包含适于分析方法的一种或多种其他组分组合物、溶液或装置。

例如，所述诊断试剂盒还可以包含进行逆转录聚合酶链反应所需的必要元件。所述rt-pcr试剂盒包含对编码标志物蛋白质的基因具有特异性的引物对。所述引物是具有对基因的核酸序列具有特异性的序列的寡核苷酸，并且可具有约7bp至50bp、更优选地约10bp至30bp的长度。试剂盒还可包括对控制基因的核酸序列具有特异性的引物。另外，rt-pcr试剂盒可以包含试管或其他适当容器、反应缓冲液(具有不同ph和镁浓度)、脱氧核苷酸(dntp)、酶(诸如taq聚合酶和逆转录酶)、dna酶和/或rna酶抑制剂、depc水、无菌水等。

另外，本发明的诊断试剂盒可以包含进行dna芯片测定所需的必要元件。所述dna芯片试剂盒可以包含对应于基因或其片段的cdna或寡核苷酸所附接的基底，以及用于产生荧光标记探针的试剂、药剂、酶等。所述基底还可以包含对应于控制基因或其片段的cdna或寡核苷酸。

另外，本发明的诊断试剂盒可以包含进行elisa所需的必要元件。所述elisa试剂盒包含对蛋白质具有特异性的抗体。所述抗体具有对标志物蛋白质的高特异性和亲和力，并且对其他蛋白质几乎没有交叉反应性，并且是单克隆抗体、多克隆抗体或重组抗体。所述elisa试剂盒还可以包含对对照蛋白具有特异性的抗体。另外，elisa试剂盒可以包含能够检测结合的抗体(诸如标记的第二抗体)的药剂、生色团、酶(例如，与抗体缀合)及其底物或可与抗体结合的其他物质。

在又一个方面，本发明涉及一种提供用于诊断疾病的信息的方法，所述方法包括在从目的受试者分离的活检中测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平：白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1。

可以在根据本发明提供信息的方法中预测其发作或发作可能性的疾病的例子包括但不限于胰腺疾病、自身免疫疾病、过敏症、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、自身免疫性淋巴细胞增生综合征、重症肌无力、川崎病和银屑病。

根据本发明，可以相对准确地诊断并预测前述疾病(特别是胰腺疾病，诸如胰腺癌或胰腺炎、更优选胰腺癌)的发作或发作的可能性。

按照根据本发明提供信息的方法，可以通过区分正常组与胰腺癌患者组来检测或诊断胰腺癌。另外，可以通过区分胰腺癌与其他类型的癌症诸如肺癌或结直肠癌来选择性地检测或诊断胰腺癌。

在本发明中，自身免疫疾病和过敏症的具体类型与本发明的诊断组合物中描述的那些重叠，并且因此将省略其描述。

如本文所用，术语“目的受试者”是指其上文列出的疾病的发作不确定并且具有高发作可能性的受试者。

如本文所用，术语从受试者分离的“活检”是指用于组织病理学检查的组织，其通过在无需切开具有高发作可能性的患者的皮肤的情况下将空心针等插入体内器官而收集。所述活检的例子包括患者的组织、细胞、血液、血清、血浆、唾液或痰。活检优选地是患者的血液、血清或血浆，更优选从液体活检分离的单核细胞、粒细胞或外来体。

在测量用于胰腺疾病诊断的生物标志物的表达水平的常规方法中，从其中预测将发展疾病的组织(例如，胰腺组织)分离细胞，并且测量所述细胞中生物标志物的表达水平。然而，根据本发明，可以通过测量在从目的受试者分离的血液、血清或血浆中所含的单核细胞、粒细胞或外来体中根据本发明的疾病生物标志物的表达水平来快速、简单地且非常准确地诊断各种疾病诸如胰腺癌的发作和其发作的可能性。

具体地，当如上所述在单核细胞、粒细胞或外来体中测量根据本发明的标志物的表达水平时，可以快速且简单地确定疾病的发作或其发作的可能性，因为不需要侵入性程序(例如包括对患者进行剖腹术和从组织(例如，胰腺组织)分离组织细胞)，并且需要约5分钟或更短时间来获得含有单核细胞、粒细胞或外来体的活检并且需要约2小时或更短时间来测量来自所述单核细胞、粒细胞或外来体的根据本发明的各种疾病生物标志物的表达水平。

根据本发明提供信息的方法可以优选地包括在如上所述分离的活检中测量作为生物标志物的白介素10受体的表达水平或编码白介素10受体的基因的mrna表达水平的步骤。另外，根据本发明提供信息的方法还可以包括以下步骤：从所述活检测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平的药剂以增加诊断所述疾病的准确性：白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1。

根据本发明提供信息的方法可以优选地包括从所述活检测量白介素10受体和干扰素λ受体1同种型1蛋白中每一种的表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法可以优选地包括从所述活检测量编码白介素10受体和干扰素λ受体1同种型1蛋白的基因的mrna表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法可以优选地包括从所述中每一种活检中测量白介素10受体和白介素22受体蛋白的表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法可以优选地包括从所述活检测量编码白介素10受体和白介素22受体蛋白中每一种的基因的mrtn表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法可以优选地包括从所述活检测量白介素10受体和白介素22蛋白中每一种的表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法可以优选地包括从所述活检测量编码白介素10受体和白介素22蛋白中每一种的基因的mrna表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法可以优选地包括从所述活检测量白介素10受体、白介素22受体和白介素22蛋白中每一种的表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量编码白介素10受体、白介素22受体和白介素22蛋白中每一种的基因的mrna表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量白介素28a、白介素28b同种型1或白介素28b同种型2蛋白的表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量编码白介素28a、白介素28b同种型1或白介素28b同种型2蛋白的基因的mrna表达水平的步骤。

在本发明中，用于测量白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1的表达水平的药剂没有特别限制，但优选地包括选自抗体、寡肽、配体、pna(肽核酸)和适体的至少一种，其与白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1中的每一种特异性地结合。

在本发明中，优选地可以使用与白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1特异性结合的抗体来测量和比较白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1的表达水平。这可以使用以下方法进行：使抗体和生物样品中的相应蛋白质形成抗原-抗体复合物并检测所述抗原-抗体复合物。

同时，用于测量或比较分析蛋白质表达水平的方法包括但不限于蛋白质芯片分析、免疫测定、配体结合测定、maldi-tof(基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱)分析、seldi-tof(表面增强的激光解吸/电离飞行时间质谱)测定、放射免疫测定、放射免疫扩散、奥氏(ouchterlony)免疫扩散、火箭免疫电泳、组织免疫染色、补体结合测定、2d电泳测定、液相色谱-质谱(lc-ms)、液相色谱-质谱/质谱(lc-ms/ms)、蛋白质印迹和酶联免疫吸附测定(elisa)。

另外，在本发明中，用于测量编码白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1的基因的mrna表达水平的药剂可以包括选自引物、探针和反义核苷酸的至少一种，其与编码白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1蛋白质中每一种的基因的mrna特异性地结合。由于关于根据本发明的白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1的信息是已知的，因此本领域的任何技术人员可以基于这些信息来容易地设计与编码所述蛋白质的基因的mrna特异性结合的引物、探针或反义核苷酸。

在本发明中，可以使用但不限于以下项来测量或比较编码白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1的基因的mrna表达水平：逆转录聚合酶链反应(rt-pcr)、竞争性逆转录聚合酶链反应(竞争性rt-pcr)、实时rt-pcr、rna酶保护测定(rpa)、northern印迹或dna芯片测定。通过这些测量方法，可以测定正常对照组中的mrna表达水平和需要关于疾病发作进行诊断的受试者中的mrna表达水平，并且可以通过比较这些表达水平来诊断或预测疾病诸如胰腺癌的发作可能性。

当由从目的受试者分离的活检测量的白介素10受体的表达水平或编码白介素10受体的基因的mrna表达水平高于正常对照组中的表达水平时，可以确定疾病(特别是胰腺疾病)的发作可能性高。更优选地，当从所述活检测量的表达水平是正常对照组中的表达水平的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍或至少9倍时，可以确定胰腺疾病的发作可能性高。

在本发明中，当由从目的受试者分离的活检测量的白介素10受体的表达水平(例如，表达白介素10受体的细胞数)是正常对照组中的表达水平的3至20倍、4至18倍、5至13倍、7至11倍或8至10倍时，可以确定胰腺疾病(特别是胰腺癌)的发作可能性高。优选地，当由从目的受试者分离的活检测量的白介素10受体的表达水平是正常对照组中的表达水平的8至10倍时，可以确定胰腺疾病(特别是胰腺癌)的发作可能性高。

另外，在本发明中，当由从目的受试者分离的活检测量的编码白介素10受体的基因的mrna表达水平是正常对照组中的表达水平的2至20倍、2至15倍、2.5至15倍、2至10倍或2.5至10倍时，可以确定胰腺疾病(特别是胰腺癌)的发作可能性高。优选地，当由从目的受试者分离的活检测量的编码白介素10受体的基因的mrna表达水平是正常对照组中的表达水平的2.5至10倍时，可以确定胰腺疾病(特别是胰腺癌)的发作可能性高。

另外，在本发明中，当由从目的受试者分离的活检测量的白介素22受体的表达水平或编码白介素22受体的基因的mrna表达水平高于正常对照组的表达水平时，可以确定疾病(特别是胰腺疾病)的发作可能性高。更优选地，当从所述活检测量的表达水平是正常对照组中的表达水平的至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍或至少6倍时，可以确定胰腺疾病的发作可能性高。

另外，在本发明中，当由从目的受试者分离的活检测量的白介素22受体的表达水平(例如，表达白介素22受体的细胞数)是正常对照组中的表达水平的2至10倍、3至9倍、4至8倍、5至7倍或6至7倍时，可以确定胰腺疾病(特别是胰腺癌)的发作可能性高。另外，在本发明中，当由从目的受试者分离的活检测量的编码白介素22受体的基因的mrna表达水平是正常对照组中的表达水平的1.5至10倍、1.5至9倍、1.5至8倍或2至7倍时，可以确定胰腺疾病(特别是胰腺癌)的发作可能性高。

在本发明中，当由从目的受试者分离的活检测量的白介素22的表达水平或编码白介素22的基因的mrna表达水平高于正常对照组中的表达水平时，可以确定疾病(特别是胰腺疾病)的发作可能性高。更优选地，当从所述活检测量的表达水平是正常对照组中的表达水平的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍或至少6倍时，可以确定胰腺疾病的发作可能性高。

另外，在本发明中，当由从目的受试者分离的活检测量的白介素22的表达水平(例如，表达白介素22的细胞数)是正常对照组中的表达水平的3至16倍、4至15倍、4至13倍、5至10倍、5至8倍、5至7倍或6至7倍时，可以确定胰腺疾病(特别是胰腺癌)的发作可能性高。

另外，在本发明中，当由从目的受试者分离的活检测量的编码白介素22的基因的mrna表达水平是正常对照组中的表达水平的2至15倍、2.5至15倍、3至13倍、3.5至13倍、4至13倍或4至10倍时，可以确定胰腺疾病(特别是胰腺癌)的发作可能性高。

在本发明中，当由从目的受试者分离的活检测量的白介素29的表达水平或编码白介素29的基因的mrna表达水平高于正常对照组中的表达水平时，可以确定疾病(特别是胰腺疾病)的发作可能性高。更优选地，当从所述活检测量的表达水平是正常对照组中的表达水平的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍或至少6倍时，可以确定胰腺疾病的发作可能性高。

另外，在本发明中，当由从目的受试者分离的活检测量的白介素29的表达水平(例如，表达白介素29的细胞数)是正常对照组中的表达水平的3至16倍、4至15倍、4至13倍、5至10倍、5至8倍、5至7倍或6至7倍时，可以确定胰腺疾病(特别是胰腺癌)的发作可能性高。

另外，在本发明中，当由从目的受试者分离的活检测量的编码白介素29的基因的mrna表达水平的表达水平是正常对照组中的表达水平的2至15倍、2.5至15倍、3至13倍、3.5至13倍、4至13倍或4至10倍时，可以确定胰腺疾病(特别是胰腺癌)的发作可能性高。

在本发明中，当由从目的受试者分离的活检测量的干扰素λ受体1同种型1的表达水平或编码干扰素λ受体1同种型1的基因的mrna表达水平高于正常对照组的表达水平时，可以确定疾病(特别是胰腺疾病)的发作可能性高。更优选地，当从所述活检测量的表达水平是正常对照组中的表达水平的至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍或至少6倍时，可以确定胰腺疾病的发作可能性高。

另外，在本发明中，当由从目的受试者分离的活检测量的干扰素λ受体1同种型1的表达水平(例如，表达干扰素λ受体1同种型1的细胞数)是正常对照组中的表达水平的3至16倍、4至15倍、4至13倍、5至10倍、5至8倍、5至7倍或6至7倍时，可以确定胰腺疾病(特别是胰腺癌)的发作可能性高。

另外，在本发明中，当由从目的受试者分离的活检测量的编码干扰素λ受体1同种型1的基因的mrna表达水平的表达水平是正常对照组中的表达水平的1.5至15倍、2至15倍、2.5至15倍、3至13倍、3.5至13倍、4至13倍或4至10倍时，可以确定胰腺疾病(特别是胰腺癌)的发作可能性高。

根据本发明，可以通过测量标志物白介素10受体、优选标志物白介素10受体和白介素22受体、更优选标志物白介素10受体、白介素22受体和选自如上所述的白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1的至少一种的表达水平来以高准确性诊断胰腺癌的发作可能性。

此外，本发明的方法还可以包括当通过由从目的受试者分离的活检测量至少一种选自白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平来预测或诊断疾病(特别是胰腺疾病、优选胰腺癌)的发作可能性高时，使目的受试者经历适当治疗，诸如施用用于疾病的药物(诸如用于胰腺癌的抗癌药)、基因疗法、放射疗法或免疫疗法。

在又一个方面，本发明涉及一种用于提供用于预测疾病复发可能性的信息的方法，所述方法包括在从接受过治疗的患者分离的活检中测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平的步骤：白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1。

可以在根据本发明提供信息的方法中预测其复发或复发可能性的疾病的例子包括胰腺疾病、自身免疫疾病、过敏症、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、自身免疫性淋巴细胞增生综合征、重症肌无力、川崎病和银屑病。

根据本发明，可以相对准确地诊断并预测前述疾病(特别是胰腺疾病，诸如胰腺癌或胰腺炎、更优选胰腺癌)的复发可能性。

按照根据本发明提供信息的方法，可以通过区分治疗后复发可能性高的患者组与复发可能性低的患者组来检测或诊断胰腺癌患者。

在本发明中，已接受治疗的患者是指由于以上所列疾病的发作或其发作可能性高而已经接受外科手术、化学疗法、基因疗法、放射疗法和免疫疗法中的一种或多种的患者，例如在至少2个月、至少3个月或至少6个月之前接受过治疗的患者。

以前，胰腺癌的早期诊断很困难，并且几乎不可能诊断出治疗后胰腺癌复发的可能性。然而，根据本发明，可以通过测量在作为从已经接受治疗的患者(目的受试者)分离的活检(优选液体活检)的血液、血清或血浆中所包含的单核细胞、粒细胞或外来体中的根据本发明的疾病生物标志物的表达水平来快速、简单且非常准确地预测胰腺癌复发的可能性。

根据本发明提供信息的方法可以包括从如上所述分离的活检测量编码白介素10受体的基因的mrna表达水平或作为生物标志物的白介素10受体的步骤。另外，根据本发明提供信息的方法还可以包括以下步骤：从所述活检测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平的药剂以进一步增加预测所述疾病复发可能性的准确性：白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量白介素10受体和干扰素λ受体1同种型1蛋白中每一种的表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量表达白介素10受体和干扰素λ受体1同种型1蛋白中每一种的基因的mrna表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量白介素10受体和白介素22受体蛋白中每一种的表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量编码白介素10受体和白介素22受体蛋白中每一种的基因的mrna表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量白介素10受体和白介素22蛋白中每一种的表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量编码白介素10受体和白介素22蛋白中每一种的基因的mrna表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量白介素10受体、白介素22受体和白介素22蛋白中每一种的表达的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量编码白介素10受体、白介素22受体和白介素22蛋白中每一种的基因的mrna表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量白介素28a、白介素28b同种型1或白介素28b同种型2蛋白的表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量编码白介素28a、白介素28b同种型1或白介素28b同种型2蛋白的基因的mrna表达水平的步骤。

在本发明中，用于测量白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1的表达水平的药剂没有特别限制，但优选地包括选自抗体、寡肽、配体、pna(肽核酸)和适体的至少一种，其与白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1中的每一种特异性地结合。

在本发明中，优选地可以使用与白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1特异性结合的抗体来测量和比较白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1的表达水平。这可以使用以下方法进行：使抗体和生物样品中的相应蛋白质形成抗原-抗体复合物并检测所述抗原-抗体复合物。

同时，在本发明中，用于测量或比较分析蛋白质表达水平的方法包括但不限于蛋白质芯片分析、免疫测定、配体结合测定、maldi-tof(基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱)分析、seldi-tof(表面增强的激光解吸/电离飞行时间质谱)测定、放射免疫测定、放射免疫扩散、奥氏(ouchterlony)免疫扩散、火箭免疫电泳、组织免疫染色、补体结合测定、2d电泳测定、液相色谱-质谱(lc-ms)、液相色谱-质谱/质谱(lc-ms/ms)、蛋白质印迹和酶联免疫吸附测定(elisa)。

另外，在本发明中，用于测量编码白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1的基因的mrna表达水平的药剂可以包括选自引物、探针和反义核苷酸的至少一种，其与编码白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1蛋白质中每一种的基因的mrna特异性地结合。由于关于根据本发明的白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1的信息是已知的，因此本领域的任何技术人员可以基于这些信息来容易地设计与编码所述蛋白质的基因的mrna特异性结合的引物、探针或反义核苷酸。

在本发明中，可以使用但不限于以下项来测量或比较编码白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1的基因的mrna表达水平：逆转录聚合酶链反应(rt-pcr)、竞争性逆转录聚合酶链反应(竞争性rt-pcr)、实时rt-pcr、rna酶保护测定(rpa)、northern印迹或dna芯片测定。通过这些测量方法，可以确定正常对照组中的mrna表达水平和需要诊断为疾病发作的受试者中的mrna表达水平，并且可以通过比较这些表达水平来诊断或预测疾病诸如胰腺癌的发作可能性。

另外，在本发明中，当由从已经接受治疗的患者分离的活检测量的至少一种选自白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平高于正常对照组中的表达水平时，可以确定疾病(特别是胰腺癌)的复发可能性高。

另外，在本发明中，当由从已经接受治疗的患者分离的活检测量的至少一种选自白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平高于同一患者中在治疗之前的表达水平时，可以确定疾病(特别是胰腺癌)的复发可能性高。

根据本发明，可以通过测量标志物白介素10受体、优选标志物白介素10受体和白介素22受体、更优选标志物白介素10受体、白介素22受体和选自如上所述的白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1的至少一种的表达水平来以高准确性预测胰腺癌的复发可能性。

此外，本发明的方法还可以包括当通过由从目的受试者分离的活检测量至少一种选自白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平来预测或诊断疾病(特别是胰腺癌)的复发可能性高时，使目的受试者经历适当治疗，诸如施用用于疾病的药物(诸如用于胰腺癌的抗癌药)、基因疗法、放射疗法或免疫疗法。

在又一个方面，本发明涉及一种筛选用于疾病治疗的药物的方法，所述方法包括以下步骤：(a)在从疾病患者分离的活检中测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平：白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1；

(b)向所述患者施用候选药物；以及

(c)在施用候选药物之后从所述患者分离的活检中测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平：白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1。

可以在本发明的药物筛选方法中预测药物对其的功效或敏感性的疾病的例子包括但不限于胰腺疾病、自身免疫疾病、过敏症、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、自身免疫性淋巴细胞增生综合征、重症肌无力、川崎病和银屑病。

根据本发明，可以相对准确地诊断并预测治疗药物对前述疾病(特别是胰腺疾病，诸如胰腺癌或胰腺炎、更优选胰腺癌)的功效或敏感性。

在本发明中，自身免疫疾病和过敏症的具体类型与本发明的诊断组合物中描述的那些重叠，并且因此下文将省略其描述。

另外，从疾病患者分离的活检是用于组织病理学检查的组织，其通过在无需切开具有疾病的高发作可能性的患者的皮肤的情况下将空心针等插入体内器官而收集。所述活检的例子包括患者的组织、细胞、血液、血清、血浆、唾液或痰。所述活检优选地是患者的血液、血清或血浆，更优选从血液、血清或血浆分离的单核细胞、粒细胞或外来体。

本发明的药物筛选方法优选地包括以下步骤：在步骤(a)和(c)的每一步骤中从患者分离的活检中测量作为生物标志物的白介素10受体的表达水平或编码白介素10受体的基因的mrna表达水平。另外，本发明的药物筛选方法还可以包括以下步骤：在步骤(a)和(c)的每一步骤中从患者分离的活检中测量至少一种选自白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平，以及测量白介素10受体的表达水平或编码白介素10受体的基因的mrna表达水平，以进一步增加预测治疗药物对疾病的敏感性的准确性。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量白介素10受体和干扰素λ受体1同种型1蛋白中每一种的表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述中每一种活检测量编码白介素10受体和干扰素λ受体1同种型1蛋白的基因的mrna表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量白介素10受体和白介素22受体蛋白中每一种的表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量编码白介素10受体和白介素22受体蛋白中每一种的基因的mrna表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量白介素10受体和白介素22蛋白中每一种的表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量编码白介素10受体和白介素22蛋白中每一种的基因的mrna表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量白介素10受体、白介素22受体和白介素22蛋白中每一种的表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量编码白介素10受体、白介素22受体和白介素22蛋白中每一种的基因的mrna表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量白介素28a、白介素28b同种型1或白介素28b同种型2蛋白的表达水平的步骤。

根据本发明提供信息的方法优选地包括从所述活检测量编码白介素28a、白介素28b同种型1或白介素28b同种型2蛋白的基因的mrna表达水平的步骤。

在本发明中，用于测量白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1的表达水平的药剂没有特别限制，但优选地包括选自抗体、寡肽、配体、pna(肽核酸)和适体的至少一种，其与白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1中的每一种特异性地结合。

在本发明中，优选地可以使用与白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1特异性结合的抗体来测量和比较白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1的表达水平。这可以使用以下方法进行：使抗体和生物样品中的相应蛋白质形成抗原-抗体复合物并检测所述抗原-抗体复合物。

同时，用于测量或比较分析蛋白质表达水平的方法包括但不限于蛋白质芯片测定、免疫测定、配体结合测定、maldi-tof(基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱)分析、seldi-tof(表面增强的激光解吸/电离飞行时间质谱)测定、放射免疫测定、放射免疫扩散、奥氏(ouchterlony)免疫扩散、火箭免疫电泳、组织免疫染色、补体结合测定、2d电泳测定、液相色谱-质谱(lc-ms)、液相色谱-质谱/质谱(lc-ms/ms)、蛋白质印迹和酶联免疫吸附测定(elisa)。

另外，在本发明中，用于测量编码白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29或干扰素λ受体1同种型1的基因的mrna表达水平的药剂可以包括选自引物、探针和反义核苷酸的至少一种，其与编码白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1蛋白质中每一种的基因的mrna特异性地结合。由于关于根据本发明的白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1的信息是已知的，因此本领域的任何技术人员可以基于这些信息来容易地设计与编码所述蛋白质的基因的mrna特异性结合的引物、探针或反义核苷酸。

在本发明中，可以使用但不限于以下项来测量或比较编码白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1的基因的mrna表达水平：逆转录聚合酶链反应(rt-pcr)、竞争性逆转录聚合酶链反应(竞争性rt-pcr)、实时rt-pcr、rna酶保护测定(rpa)、northern印迹或dna芯片测定。通过这些测量方法，可以确定正常对照组中的mrna表达水平和需要诊断为疾病发作的受试者中的mrna表达水平，并且可以通过比较这些表达水平来诊断或预测疾病诸如胰腺癌的发作可能性。

在本发明中，本发明的方法还可以包括当在步骤(c)中测量的至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平低于步骤(a)中测量的相同生物标志物的表达水平时，选择所述候选药物作为适合于治疗所述疾病的治疗药物的步骤：白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和干扰素λ受体1同种型1。

在另一方面，本发明涉及一种用于在诊断胰腺疾病中使用的组合物，所述组合物包含用于测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平的药剂：白介素10受体(il-10r)、白介素22受体(il-22r)、白介素22(il-22)、白介素28a(il-28a)、白介素28b同种型1(il-28b同种型1)、白介素28b同种型2(il-28b同种型2)、白介素29(il-29)和干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)。

在另一方面，本公开文本涉及一种用于诊断胰腺疾病的方法，所述方法包括以下步骤：在从目的受试者分离的活检中测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平：白介素10受体(il-10r)、白介素22受体(il-22r)、白介素22(il-22)、白介素28a(il-28a)、白介素28b同种型1(il-28b同种型1)、白介素28b同种型2(il-28b同种型2)、白介素29(il-29)和干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)。

在另一方面，本发明涉及包含用于测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平的药剂的组合物用于诊断胰腺疾病的用途：白介素10受体(il-10r)、白介素22受体(il-22r)、白介素22(il-22)、白介素28a(il-28a)、白介素28b同种型1(il-28b同种型1)、白介素28b同种型2(il-28b同种型2)、白介素29(il-29)和干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)。

在另一方面，本发明涉及包含用于测量至少一种选自以下的蛋白质的表达水平或编码所述蛋白质的基因的mrna表达水平的药剂的组合物在制造用于诊断胰腺疾病的药物中的用途：白介素10受体(il-10r)、白介素22受体(il-22r)、白介素22(il-22)、白介素28a(il-28a)、白介素28b同种型1(il-28b同种型1)、白介素28b同种型2(il-28b同种型2)、白介素29(il-29)和干扰素λ受体1同种型1(ifnlr1同种型1)。

在下文中，将参考实施例更详细地描述本发明。对于本领域技术人员而言将明显的是，这些实施例仅用于说明本发明，并且本发明的范围不受限于这些实施例。

[制备实施例1]

histopaq1077购自sigma并且brefeldina购自biolegend。作为抗体，alexa647抗il-22和pe抗小鼠il-10r购自biolegend，并且percp小鼠il-22r购自r&d。此外，将含有0.5％牛血清白蛋白(bsa)的磷酸盐缓冲盐水(pbs)用作facs缓冲液。细胞固定缓冲液和渗透化/洗涤缓冲液也购自biolegend。

[实施例1]

1.外周血单核细胞(pbmc)的分离

从3名胰腺癌患者、3名胰腺炎患者、3名正常对照受试者、3名肺癌患者和3名结直肠癌患者采集血液并在室温下储存。由于在血液粘度高时难以分离单核细胞，所以在1×pbs中以1:1稀释血样。以与血液相同的体积在15-ml锥形管中制备聚蔗糖(ficoll，histopaque1077,sigma)。将每个血样添加到聚蔗糖上，以免混合。将所得血样在400g下用最小加速度和减速度离心30分钟。在此过程期间，单独收集白细胞(单核细胞)层，随后向其添加pbs，接着通过在400g下离心3分钟进行洗涤。收集经洗涤的细胞，将其重悬于50μlfacs缓冲液中，随后与pe抗小鼠il-10r抗体和percp小鼠il-22r抗体一起在冰上孵育1小时。然后将细胞用facs缓冲液洗涤两次，并且重悬于500μlfacs缓冲液中。

2.用布雷非德菌素a处理

计数所收集的细胞，将其以1×10⁶个细胞/ml接种于含有2％青霉素和链霉素的rpmi1640培养基中，用1×布雷非德菌素a处理并孵育6小时。

3.固定、渗透化和染色

收集所孵育的细胞，将其用facs缓冲液(0.5％bsa，于pbs中)洗涤两次，并用500μl固定缓冲液在冰上固定30分钟。然后，将细胞用facs缓冲液洗涤两次，重悬于1ml渗透化缓冲液中，并随后两次离心，每次20分钟。然后，再次收集细胞，将其重悬于50μl渗透化缓冲液中，随后与alexa647抗il-22抗体一起在冰上孵育1小时。将细胞用facs洗涤两次，并且将其重悬于500μlfacs缓冲液中。

4.facs分析

使用facscalibur(bdbiosciences，圣何塞，加利福尼亚州)，将表达il-10r、il-22r或il-22的细胞的数量表示为相对于单核细胞总数的百分比。结果示于下表1和图1至图3中。在下表1中，数据表示为平均值±sd，并且通过kruskal-wallis检验使用dunn's事后分析进行统计分析。

[表1]

如上表1和图1至图3所示，可以确认的是，胰腺炎患者和胰腺癌患者中il-22的表达水平分别是正常对照组中il-22表达水平的约1.7倍和0.9倍，而胰腺炎患者中与il-22结合的il-10r的表达水平是正常对照组中与il-22结合的il-10r的表达水平的约14.8倍，并且胰腺癌患者中与il-22结合的il-10r的表达水平是正常对照组中与il-22结合的il-10r的表达水平的约9.0倍。然而，可以确认的是，肺癌患者中il-10r的表达水平是正常对照组中il-10r的表达水平的约2.75倍，并且结直肠癌中il-10r的表达水平是正常对照组中il-10r的表达水平的约0.78倍。

另外，可以确认的是，胰腺炎患者中il-22r的表达水平是正常对照组中il-22r的表达水平的约18.66倍，并且胰腺癌患者中il-22r的表达水平是正常对照组中il-22r的表达水平的约6.57倍。然而，可以确认的是，肺癌患者中il-22r的表达水平降低至正常对照组中il-22r的表达水平的约0.28倍，并且结直肠癌患者中il-22r的表达水平显著降低至0.17倍。

此外，关于il-22r相对于il-22的表达水平，可以确认的是，胰腺炎患者中il-22r的表达水平相对于il-22的表达水平为约9.93倍，并且胰腺癌患者中il-22r的表达水平相对于il-22的表达水平为约6.31倍，这表明即使il-22与il-22r结合，但il-22r的表达水平与il-22的表达水平相比仍显著增加。然而，在肺癌患者中il-22r的表达水平相对于il-22的表达水平为约1.18倍，并且在结直肠癌患者中il-22r的表达水平相对于il-22的表达水平为约1.76倍，这表明il-22的表达水平相当于il-22r的表达水平。

这些结果证明，在胰腺炎或胰腺癌患者中il-10r的表达模式与正常对照组或患有其他类型疾病的患者中il-10r的表达模式明显不同，并且在胰腺炎与胰腺癌之间il-10r的表达模式也不同。

因此，根据本发明的上述方法的使用使得不仅可以以高准确性检测并诊断胰腺炎和胰腺癌，而且可以区分并诊断胰腺炎和胰腺癌。

[实施例2]

从4名正常对照受试者、4名胰腺癌患者、2名胆管癌患者和2名胆囊癌患者采集血液，随后以与实施例1中相同的方式从中分离外周血单核细胞(pbmc)。测量单核细胞中il-10rβ亚基(il-10rb)和il-22rα亚基(il-22ra)的mrna表达水平与正常对照组中的所述mrna表达水平的比率，并且结果示于图4和图5中。

如图4和图5所示，可以确认的是，与正常对照组相比，从胰腺癌患者分离的单核细胞中il-10rbmrna表达水平和il-22ramrna表达水平分别增加至约3倍和约6倍，而胆管癌和胆囊癌患者中il-10rbmrna的表达水平增加至约1至2倍，并且胆管癌患者中il-22ramrna的表达水平降低。

这些结果表明，与其他类型的癌症相比，在胰腺癌中的单核细胞中的il-10rb和il-22ra的mrna表达水平显著增加。

[实施例3]

从4名正常对照受试者、4名胰腺癌患者、2名胆管癌患者和2名胆囊癌患者采集血液，并且以与实施例1中相同的方式从中分离外周血单核细胞(pbmc)。测量pbmc中il-22和il-29的mrna表达水平与正常对照组中的所述mrna表达水平的比率，并且结果示于图6和图7中。

如图6和图7所示，与正常对照组相比，从胰腺癌患者分离的单核细胞中il-22mrna和il-29mrna的表达水平增加至约4倍或更多倍，但是胆管癌患者中两种标志物的表达水平降低，并且胆囊癌患者中其表达水平仅增加至约2至3倍。

这些结果表明，与其他类型的癌症相比，在胰腺癌中的单核细胞中的il-22和il-29的mrna表达水平显著增加。

[实施例4]

从4名正常对照受试者、4名胰腺癌患者、2名胆管癌患者和2名胆囊癌患者采集血液，随后以与实施例1中相同的方式从中分离外周血单核细胞(pbmc)。测量单核细胞中与il-29结合的干扰素受体1同种型1(ifnlr1同种型1)和干扰素受体1同种型3(ifnlr1同种型3)的mrna表达水平与正常对照组中的所述mrna表达水平的比率，并且结果示于图8和图9中。

如图8和图9中所示，可以确认的是，与正常对照组相比，在从胰腺癌患者分离的单核细胞中与il-29结合的干扰素受体1同种型1的mrna表达水平增加至约3倍或更多倍，但在胆管癌和胆囊癌患者中仅增加至约1至2倍。

这些结果表明，与其他类型的癌症相比，在胰腺癌中的pbmc中的干扰素受体1同种型1的mrna表达水平显著增加。

[实施例5]

对于接受胰腺癌切除术(胰腺切除术)的胰腺癌患者，在手术之前和之后对患者采集血液，随后以与实施例1中相同的方式从中分离外周血单核细胞(pbmc)。使用facscalibur(bdbiosciences，圣何塞，加利福尼亚州)，将表达il-10r、il-22r或il-22的细胞的数量表示为相对于单核细胞总数的百分比。结果示于下表2和图10至图12中。

[表2]

如上表2和图10至图12所示，可以确认的是，当胰腺癌患者的胰腺癌组织总质量由于胰腺切除术而减小时，单核细胞中il-10r、il-22和il-22r的表达水平显著降低，并且特别是il-10r的表达水平显著降低。

[实施例6]

对于接受胰腺癌切除术(胰腺切除术)的患者，在手术之前和之后3个月对患者采集血液，随后以与实施例1中相同的方式从中分离外周血单核细胞(pbmc)。使用facscalibur(bdbiosciences，圣何塞，加利福尼亚州)测量表达il-10r(标志物c)的细胞的比例，随后通过配对t检验进行分析。结果示于图13中。

如图13所示，可以确认的是，当通过胰腺切除术从胰腺癌患者去除癌组织时，表达il-10r的单核细胞的比例与手术之前的所述比例相比显著降低。

[实施例7]

从4名正常对照受试者、4名胰腺癌患者、2名胆管癌患者和2名胆囊癌患者采集血液，并且从中分离血浆中循环的外来体。测量il-10rb、il-22ra和ifnlr1同种型1的表达水平与正常对照组中的所述表达水平的比率，并且结果示于图14至图16中。

如图14至图16所示，可以确认的是，从胰腺癌患者分离的外来体中il-10rb、il-22ra和ifnlr1同种型1的mrna表达水平与正常对照组中的那些相比分别增加至约4倍、约1.5倍和约2.5倍。然而，可以确认的是，从胆管癌患者分离的外来体中il-10rb和ifnlr1同种型1的mrna表达水平与正常对照组中的所述mrna表达水平相比分别增加至约1.5倍和约1.5倍，并且特别是il-22ra的mrna表达水平与正常对照组中il-22ra的mrna表达水平相比反而降低。此外，可以确认的是，从胆管癌患者分离的外来体中il-10rb的表达水平相当于正常对照组中的il-10rb的表达水平，并且外来体中il-22ra和ifnlr1同种型1的mrna表达水平与正常对照组中的那些相比增加至约1.5倍。

这些结果表明，从胰腺癌患者血浆分离的外来体中10rb、il-22ra和ifnlr1同种型1的mrna表达水平与正常对照组或其他类型的癌症中的那些相比显著增加。

[实施例8]

从11名正常对照受试者、10名胰腺癌患者、8名胰腺炎患者和9名胆管癌患者采集血液，并从中分离血浆中循环的外来体。使用qrt-pcr测量每个组中il-10rb(br)、il-22ra(ar)和ifnlr1同种型1(lr)中每一种的mrna表达水平，并且结果示于图17中。另外，作为用于比较的阳性对照，测量称为胰腺癌的生物标志物的gpc-1(m)的mrna表达水平，并且结果也示于图17中。另外，通过对il-10rb(br)和ifnlr1同种型1(lr)的组合进行得分分析以预测胰腺癌患者来测量auc、敏感性和特异性，并且结果示于图18中。

如图17所示，可以确认的是，从胰腺癌患者分离的外来体中il-10rbmrna、il-22ramrna和ifnlr1同种型1的mrna表达水平与正常对照组中的那些相比显著增加。然而，可以确认的是，从胰腺炎患者和胆管癌患者分离的外来体中il-10rbmrna、il-22ramrna和ifnlr1同种型1的mrna表达水平相当于正常对照组中的那些。

如图18所示，作为对胰腺癌患者组、正常对照组、胰腺炎患者组和胆管癌患者中il-10rb(br)和ifnlr1同种型1(lr)的组合的得分分析以预测胰腺癌的结果，可以看出，敏感性为1.00，特异性为0.741或0.818，并且auc为0.948或0.964，这表明使用此组合进行预测的准确性非常高。同时，在以前称为胰腺癌生物标志物的gpc-1的情况下，可以看出，总体p值和事后p值均不是统计上显著的。

[实施例9]

从24名正常对照受试者、42名胰腺癌患者、7名胰腺炎患者和18名胆管癌患者采集血液，并从中分离外周血单核细胞(pbmc)。使用qrt-pcr测量每个组中il-10rb(br)、il-22ra(ar)和il-22(a)中每一种的mrna表达水平，并且结果示于图19中。此外，通过对il-10rb(br)、il-22ra(ar)和il-22(a)的各种组合进行得分分析以预测胰腺癌患者来测量auc、敏感性和特异性，并且结果示于图20和图21中。

如图19所示，可以确认的是，从胰腺癌患者分离的单核细胞中il-10rbmrna、il-22ramrna和il-22的mrna表达水平与正常对照组中的那些相比显著增加。然而，可以确认的是，从胰腺炎患者和胆管癌患者分离的单核细胞中il-10rbmrna、il-22ramrna和il-22的mrna表达水平与正常对照组中的那些相比是相等的或增加的。

另外，如图20和图21所示，作为对胰腺癌患者组、胰腺炎患者组和胆管癌患者组中il-10rb(br)和il-22ra(ar)的组合、il-10rb(br)和il-22(a)的组合以及22ra(ar)和il-22(a)的组合进行得分分析以预测胰腺癌的结果，可以看出，所有这三种组合的敏感性、特异性和auc在胰腺癌患者中都非常高，这表明使用这些组合预测胰腺癌的准确性非常高。特别地，可以确认的是，以il-10rb(br)、il-22ra(ar)和il-22(a)的组合进行预测的准确性非常高。

[实施例10]

从4名正常对照受试者、2名胰腺癌患者、2名胆囊癌患者和2名胆管癌患者采集血液，随后从中分离外周血单核细胞(pbmc)。使用qrt-pcr测量每个组中ifnlr1同种型1(lr)和il-29(l)中每一种的mrna表达水平，并测量ifnlr1同种型1(lr)和il-29(l)的mrna表达水平与正常对照组中的所述mrna表达水平的比率。结果示于图22中。

如图22所示，可以确认的是，从胰腺癌患者分离的单核细胞中ifnlr1同种型1(lr)和il-29(l)的mrna表达水平与正常对照组中的那些相比显著增加，而从胆囊癌患者和胆管癌患者分离的单核细胞中ifnlr1同种型1(lr)和il-29(l)的mrna表达水平仅相当于正常对照组中的那些。

[实施例11]

从胰腺癌患者和慢性胰腺炎患者采集血液，随后从中分离外周血单核细胞(pbmc)，并使用对ifnlr1同种型1具有特异性的抗体进行facs分析。结果示于图23和图24中。

如图23和图24所示，可以确认的是，从胰腺癌患者分离的单核细胞中表达ifnlr1同种型1的细胞的比例与慢性胰腺炎患者的所述比例相比增加，这表明胰腺癌患者中ifnlr1同种型1蛋白的表达水平增加。

[实施例12]

从正常对照受试者、胰腺癌患者、急性胰腺炎患者和慢性胰腺炎患者采集血液，随后从中分离外周血单核细胞(pbmc)，并使用对il-10rb(br)、il-22ra(ar)和il-22(a)中的每一种具有特异性的抗体进行facs分析。然后，测量每个组中表达il-10rb(br)、il-22ra(ar)和il-22(a)中的每一种的细胞的比例，并且结果示于图25中。另外，对facs分析的结果进行统计学分析，并且结果示于图26中。

如图25所示，可以确认的是，从胰腺癌患者分离的单核细胞中表达il-10rb(br)、il-22ra(ar)和il-22(a)的细胞的比例与急性或慢性胰腺炎患者中的所述比例相比增加，这表明这些生物标志物在胰腺癌患者中的表达水平升高。

另外，如图26所示，可以看出的是，胰腺癌患者中对于il-10rb(br)和il-22(a)的敏感性、特异性和auc测量为高，这表明使用这些生物标志物预测胰腺癌的准确性非常高。

[实施例13]

对于11名接受手术切除的胰腺癌患者，在手术切除之前和之后从患者采集血液，并从中分离外周血单核细胞。然后，使用qrt-pcr测量在手术之前和之后在所述细胞中il-10rb、il-22ra、ifnlr1同种型1和il-22中每一种的mrna表达水平并且结果示于图27中。另外，作为用于比较的阳性对照，测量称为胰腺癌的生物标志物的gpc-1mrna的表达水平，并且结果示于图27中。

如图27所示，可以确认的是，通过手术切除去除胰腺癌之后il-10rb、il-22ra、ifnlr1同种型1和il-22的mrna表达水平与手术切除之前的那些相比全部都降低。然而，可以确认的是，gpc-1的mrna表达水平保持恒定或趋于增加。

[实施例14]

对于5名在进行手术切除之后复发的胰腺癌患者，在手术切除之前、手术切除之后2个月和6个月以及复发后采集血液。从血液样品分离外周血单核细胞。然后，使用qrt-pcr测量手术之前和之后细胞中il-10rb(br)、il-22ra(ar)和il-22(a)中每一种的mrna表达水平，并通过facs分析测量表达il-10rb(br)、il-22ra(ar)和il-22(a)的细胞的比例。作为用于比较的阳性对照，测量称为胰腺癌的生物标志物的cea和ca的mrna表达水平，并且特别是在ca19-9的情况下，测量其在每个时间点的表达水平的变化。每个患者的实验结果示于图28至图32中。

如图28至32所示，可以确认的是，当在手术切除之前、甚至在通过手术切除去除胰腺癌之后，il-10rb(br)、il-22ra(ar)和il-22(a)中任一种或多种的表达水平显著增加时，胰腺癌复发。然而，可以确认的是，在手术切除之后cea和ca19-9的表达水平仍保持降低，并且只有在手术切除之后10个月时ca19-9的表达水平才增加。

这些结果表明，使用根据本发明的il-10rb(br)、il-22ra(ar)和il-22(a)使得可以早期以高准确性预测胰腺癌的复发。

[实施例15]

对于12名接受抗癌化学疗法的胰腺癌患者，在化学疗法之前和之后从患者采集血液，并从中分离外周单核血细胞。然后，使用qrt-pcr测量在化学疗法之前和之后il-10rb、il-22ra、ifnlr1同种型1、il-22和il-29中每一种的mrna表达水平并且结果示于图33中。作为用于比较的阳性对照，测量称为胰腺癌的生物标志物的gpc-1的mrna表达水平，并且结果示于图33中。

如图33所示，可以确认的是，在胰腺癌患者接受抗癌化学疗法后il-10rb、il-22ra、ifnlr1同种型1、il-22和il-29的mrna表达水平与化学疗法之前的那些相比全部都降低。然而，可以确认的是，gpc-1的mrna表达水平保持恒定或趋于增加。

[实施例16]

对于接受抗癌化学疗法的胰腺癌患者，在化学疗法之前和化学疗法之后3个月采集血液，并从中分离外周血单核细胞。然后，通过facs分析来测量在化学疗法之前和之后单核细胞中表达il-10rb(br)和il-22ra(ar)的细胞的比例，并且结果示于图34中。

如图34所示，可以确认的是，表达il-10rb(br)的细胞的比例在化学疗法之前为12.9％，但在化学疗法之后降低为3.52％，并且表达il-22ra(ar)的细胞的比例在化学疗法之前为10.5％，但在化学疗法之后降低为1.05％。

[实施例17]

从胰腺癌患者和急性胰腺炎患者采集血液，随后从中分离外周血单核细胞(pbmc)，并使用对il-10rb(br)和il-22ra(ar)具有特异性的抗体进行facs染色。然后，分离表达il-10rb的细胞(br+)和表达il-22ra的细胞(ar+)并对其进行吉姆萨(giemsa)染色。胰腺癌患者和急性胰腺炎患者的结果示于图35和图36中。

如图35和图36所示，作为分析胰腺癌患者的表达il-10rb的细胞(br+)和表达il-22ra的细胞的形态的结果，可以确认的是，表达il-10rb的细胞(br+)是骨髓起源的并且表达il-22ra的细胞(ar+)是淋巴起源的，这表明这些细胞是不同起源的。此外，表达il-22ra的细胞(ar+)的异质性高于表达il-10rb的细胞(br+)。此时，可以确认的是，胰腺癌患者中表达il-22ra的细胞(ar+)和表达il-10rb的细胞(br+)的比例与急性胰腺炎患者中的那些相比非常高。

[实施例18]

从胰腺癌患者采集血液，将其储存在edta管中，随后在400g下离心5分钟。单独储存血浆，并且将血浆沉淀在室温下在rbc裂解缓冲液中孵育3分钟，随后用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤。使用对il-10rb(br)和il-22ra(ar)具有特异性的抗体对如上所述分离的全血细胞进行facs染色，随后分离表达il-22ra和il-10rb的细胞(ar+br+)和表达il-10rb的细胞(br+)并对其进行h&e染色。结果示于图37中。

如图37所示，作为比较表达il-22ra和il-10rb的细胞(ar+br+)和表达il-10rb的细胞(br+)的形态的结果，可以看出这些细胞是不同起源的。

[实施例19]

从胰腺癌患者采集血液，并从中分离全血细胞，随后使用对il-10rb(br)、il-22ra(ar)和ifnlr1同种型1(lr)具有特异性的抗体对其进行facs染色。然后，分离表达il-22ra的细胞(ar+)、表达il-10rb的细胞(br+)和表达ifnlr1同种型1的细胞(lr+)，随后对其进行转录组分析。结果示于图38中。

如图38所示，在从胰腺癌患者获得的全血细胞中可以观察到表达il-22ra、il-10rb和ifnlr1同种型1的细胞。

[实施例20]

1.胰腺癌原位小鼠模型的制备

切开小鼠腹部，并且将胰腺癌细胞、panc-1细胞和aspc细胞以2×10⁶个细胞/50μl的量注入胰腺尾部。2周后，切开腹部并检查胰腺癌是否生长。

2.胰腺细胞的分离

从小鼠中分离胰腺组织，随后在37℃下用0.5mg/ml胶原酶xi、0.25mg/ml分散酶1和0.25mg/ml分散酶2处理1小时。当胰腺组织变成糊状时，将其在过滤器中研磨，随后仅将细胞收集，洗涤，然后离心。将脂肪层与沉淀层分离，并且仅收集细胞并使用histopaque1083和1119(800g/25min)将其分离为单核细胞、粒细胞和rbc。在分离的层中，单独储存血浆，并且收集除rbc以外的其余两个细胞层并对其进行facs。

3.脾细胞的分离

从小鼠分离脾脏组织并将其在过滤器中研磨，随后仅收集细胞，并使用histopaque以与分离胰腺细胞相同的方式进行分离。

4.全血细胞的分离

将小鼠血液收集在含有2mmedta的pbs注射器中，随后在400g下离心5分钟。然后，单独储存血浆，并重悬浮下面的沉淀层，并使用histopaque以与分离胰腺细胞相同的方式进行分离。

图39示出了实验的设计，图40示出了在移植胰腺癌细胞后胰脏和脾脏的图像，并且图41示出了胰腺组织的h&e染色图像。另外，图42和图43示出了使用对il-10rb(br)和il-22ra(ar)具有特异性的抗体对浸润胰腺的免疫细胞进行facs分析的结果，并且图44示出了使用对il-10rb(br)和il-22ra(ar)具有特异性的抗体对全血细胞的单核细胞和粒细胞进行facs分析的结果。

如图40所示，可以确认的是，在直接注射panc-1细胞和aspc细胞的小鼠中，胰腺癌生长并且脾脏的大小也增加。如图41所示，可以确认的是，在正常对照组中，观察到正常的胰腺腺泡、胰管和胰岛，而在胰腺癌生长的组中，免疫细胞浸润癌组织并且形成结缔组织(结缔组织形成)。

如图42所示，作为对浸润胰腺癌的细胞进行facs分析的结果，可以确认的是，在通过直接注射panc-1细胞和aspc细胞导致胰腺癌生长的组中表达il-22ra的b细胞(ar+)和表达il-10rb的b细胞(br+)的比例与正常对照组中的那些相比增加。另外，如图43所示，可以确认的是，在通过直接注射panc-1细胞和aspc细胞导致胰腺癌生长的组中表达il-22ra和il-10rb或表达il-10rb的树突细胞(cd11b+cd11c+细胞)和表达il-22ra和il-10rb或表达il-10rb的巨噬细胞(cd11b+f4/80+细胞)的比例与正常对照组中的那些相比增加。另外，如图44所示，可以确认的是，在通过直接注射panc-1细胞和胰腺癌导致胰腺癌生长的组中表达il-22ra和il-10rb的嗜中性粒细胞(cd11b+f4/80-gr-1+细胞)的比例与正常对照组中的所述比例相比增加。

[实施例21]

从3名正常对照受试者和3名胰腺癌患者采集血液，并且从中分离外周血单核细胞。然后，使用qrt-pcr测量单核细胞中il-28a、il-28b同种型1和il-28b同种型2中每一种的mrna表达水平，并且结果示于图45中。

如图45所示，可以确认的是，从胰腺癌患者分离的单核细胞中il-28a、il-28b同种型1和il-28b同种型2的mrna表达水平与正常对照组中的那些相比全部都增加。

因此，可以看出，il-28a、il-28b同种型1和il-28b同种型2在单核细胞中的表达对应于用于诊断胰腺癌的有效生物标志物。

工业实用性

根据本发明，可以通过测量作为一种或多种生物标志物的白介素10受体、白介素22受体、白介素22、白介素28a、白介素28b同种型1、白介素28b同种型2、白介素29和/或干扰素λ受体1同种型1的表达水平来准确地预测或诊断多种疾病的发作或发作可能性，所述多种疾病包括胰腺疾病、自身免疫疾病、过敏症、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、银屑病、川崎病和自身免疫性淋巴细胞增生综合征，特别是胰腺癌。

另外，根据本发明，由于可以通过从受试者分离的液体活检测量生物标志物的表达水平来预测或诊断疾病的发作，因此与常规技术相比，可以通过非侵入性方法快速、简单且非常准确地诊断疾病，诸如胰腺癌。

尽管已经参考具体特征详细地描述了本发明，但是对于本领域技术人员而言将清楚的是，此描述仅是本发明的优选实施方案的描述，并不限制本发明的范围。因此，本发明的实质范围将由所附权利要求及其等同物限定。

序列表自由文本

附有电子文件。

序列表

<110>休伯特保健公司

<120>用于诊断疾病的组合物

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