IgA肾病发病可能性的判断方法及试剂盒

13.专利文献4：国际公开第2018/181292号小册子
14.非专利文献
15.非专利文献1：yasutake j,suzuki y,suzuki h,et al.novel lectin
‑
independent approach to detect galactose
‑
deficient iga1 in iga nephropathy.nephrol dial transplant.2015；30:1315
‑
1321。
16.非专利文献2：nakayama k,ohsawa i,maeda
‑
ohtani a,et al.prediction of diagnosis of immunoglobulin a nephropathy prior to renal biopsy and correlation with urinary sediment findings and prognostic grading.j clin lab anal.2008；22(2):114
‑
118。


技术实现要素：

17.发明所要解决的课题
18.然而，在上述现有技术中，iga肾病的诊断准确度仍有改进的空间。即，对于非专利文献1中记载的诊断方法，尚未研究iga肾病的实际诊断准确度，并且其可用性未知。另外，非专利文献2中记载的诊断方法在灵敏度和特异性方面不足，也不存在研究该诊断方法的有效性的报告。
19.本发明的一个方面旨在提供一种用于判断iga肾病发病可能性的、准确度更高的方法。
20.用于解决问题的手段
21.本发明包括以下构成:
22.<1>
23.一种判断受试者中iga肾病发病可能性的方法，
24.所述方法包括在从所述受试者采集的样品中确定与凝集素结合的糖链的水平的工序，所述凝集素选自由aca、mah、aba、stl、lel、wga、mpa、木菠萝素(jacalin)、mal_i、pna、acg、gsl_i_a4、cona、ssa、aol和gsl_ii组成的组中的至少一种。
25.<2>
26.一种判断受试者中iga肾病发病可能性的方法，
27.所述方法包括：在从所述受试者采集的第一样品中确定与凝集素结合的糖链的水平的工序，所述凝集素选自由aca、mah、aba、mpa、木菠萝素(jacalin)、lel、acg、stl、gsl_i_a4、wga、ssa、pna、cona、calsepa、aol、sna、uda、lca、gsl_ii、uea_i、ltl、mal_i、tja_i、eca、pwm、psa、aal、dsa、bpl、tja_ii、npa、pha_e、rca120、eel、sba、hpa、gna、hhl、ptl_i、txlc_i、pha_l、gsl_i_b4、dba、wfa和vva组成的组中的至少一种；以及
28.在从所述受试者采集的第二样品中测定所述糖链的水平以外的生物标志物的工序。
29.<3>
30.一种判断患有原发性肾小球疾病的受试者或被怀疑患有原发性肾小球疾病的受试者中iga肾病发病可能性的方法，
31.所述方法包括：在从所述受试者采集的样品中确定与凝集素结合的糖链的水平的工序，所述凝集素选自由aca、mah、aba、mpa、木菠萝素(jacalin)、lel、acg、stl、gsl_i_a4、
wga、ssa、pna、cona、calsepa、aol、sna、uda、lca、gsl_ii、uea_i、ltl、mal_i、tja_i、eca、pwm、psa、aal、dsa、bpl、tja_ii、npa、pha_e、rca120、sba、gna、hhl、ptl_i、txlc_i、pha_l、dba、wfa和vva组成的组中的至少一种。
32.<4>
33.一种判断患有原发性肾小球疾病的受试者或被怀疑患有原发性肾小球疾病的受试者中iga肾病发病可能性的方法，
34.所述方法包括：确定从所述受试者采集的第一样品中与凝集素结合的糖链的水平的工序，所述凝集素选自由aca、mah、aba、mpa、木菠萝素(jacalin)、lel、acg、stl、gsl_i_a4、wga、ssa、pna、cona、calsepa、aol、sna、uda、lca、gsl_ii、uea_i、ltl、mal_i、tja_i、eca、pwm、psa、aal、dsa、bpl、tja_ii、npa、pha_e、rca120、eel、sba、hpa、gna、hhl、ptl_i、txlc_i、pha_l、gsl_i_b4、dba、wfa和vva组成的组中的至少一种；以及
35.在从所述受试者采集的第二样品中测定所述糖链的水平以外的生物标志物的工序。
36.<5>
37.(i)一种判断受试者中iga肾病发病可能性的方法，或(ii)判断患有原发性肾小球疾病的受试者或被怀疑患有原发性肾小球疾病的受试者中iga肾病发病可能性的方法，
38.所述方法包括在从所述受试者采集的样品中确定由选自以下糖链组成的组中的一种以上糖链的水平的工序：
39.(galβ1
‑
4glcnac)
n
、
40.(glcnacβ1
‑
4)
n
、
41.(glcnacβ4murnac)
n
、
42.半乳糖基化的三/四触角聚糖(agalactosylated tri/tetra antennary glycans)、
43.fucα1
‑
2galβ1
‑
4glcnac、
44.fucα1
‑
6glcnac、
45.galnac、
46.galβ1
‑
3galnac、
47.glcnac、
48.包括manα1
‑
6(manα1
‑
3)man在内的high
‑
man(high
‑
man including manα1
‑
6(manα1
‑
3)man)、
49.siaα2
‑
3galβ1
‑
3(siaα2
‑
6)galnac、
50.siaα2
‑
3galβ1
‑
4glcnac、
51.siaα2
‑
6gal/galnac和
52.α
‑
galnac。
53.<6>
54.根据<2>或<4>所述的方法，其中所述糖链的水平以外的生物标志物是选自尿潜血、尿蛋白、血清iga和血清iga/c3比中的一种以上。
55.<7>
56.根据<1>至<6>中任一项所述的方法，其中在确定所述糖链的水平的工序中使用的
样品是尿液样品。
57.<8>
58.(i)一种用于判断受试者中iga肾病发病可能性的试剂盒，或(ii)用于判断患有原发性肾小球疾病的受试者或被怀疑患有原发性肾小球疾病的受试者中iga肾病发病可能性的试剂盒，
59.所述试剂盒具备分别选自以下a～c各组中的一种以上的凝集素，
60.并且不含任何其他类型的凝集素：
61.a组：aca、mah和aba
62.b组：gsl_i_a4
63.c组：gsl_ii、mal_i、aol、pna、sna和hpa。
64.<9>
65.(i)一种用于判断受试者中iga肾病发病可能性的试剂盒，或(ii)用于判断患有原发性肾小球疾病的受试者或被怀疑患有原发性肾小球疾病的受试者中iga肾病发病可能性的试剂盒，
66.所述试剂盒具备与分别选自以下a～c各组中的一种以上的糖链结合的凝集素，
67.并且不含其他类型的凝集素：
68.a组：galβ1
‑
3galnac和siaα2
‑
3galβ1
‑
3(siaα2
‑
6)galnac
69.b组：α
‑
galnac
70.c组：半乳糖基化的三/四触角聚糖、fucα1
‑
2galβ1
‑
4glcnac、fucα1
‑
6glcnac、glcnac、galβ1
‑
3galnac、siaα2
‑
3galβ1
‑
4glcnac、siaα2
‑
6gal/galnac和α
‑
galnac。
71.发明效果
72.根据本发明的一个方面，提供了一种用于判断iga肾病发病可能性的、准确度更高的方法。
具体实施方式
73.下面将对本发明实施方式的一个示例进行详细说明，但是本发明不限于此。只要本说明书中没有特别记载，表示数值范围的“a～b”表示“a以上且b以下”。
74.[1、与凝集素结合的糖链的水平]
[0075]
在第一方面，本发明的方法包括在从受试者采集的的样品中确定与特定凝集素结合的糖链的水平的工序。
[0076]
(确定与凝集素结合的糖链的水平的方法)
[0077]
发明人发现，基于使用某种凝集素的试验(以下称为“凝集素试验”)结果(即，基于凝集素信号的强度)，可以判断iga肾病的发病。通常，已知特定的糖链与特定的凝集素特异性结合。因此，发明人的发现可以理解为“可以基于与某些凝集素结合的糖链的水平来判断iga肾病的发病”。
[0078]
因此，只要“确定与凝集素x结合的糖链的水平的工序”是“确定具有与凝集素x结合的特定结构的糖链的水平的工序”，该方法就不受限制。即，“确定与凝集素x结合的糖链的水平的工序”不限于凝集素试验。作为凝集素试验以外的方法，可以列举出，例如液相色谱法、质谱分析、elisa、二维电泳、蛋白质阵列、珠测定法、流式细胞术、bioplex(注册商标)
等。
[0079]
然而，通过凝集素试验确定糖链的水平是优选的，因为这样易于样品的预处理。特别地，当将尿液样品用作样品时，由于不需要尿液样品的浓缩、样品中含有的大量蛋白质(白蛋白、igg等)的去除等工序，所以是更优选的。
[0080]
在一种实施方式中，“确定糖链的水平”可以伴随定量样品中所含的该糖链的存在量。作为其具体示例，可以列举出测定样品中所含的糖链的浓度。
[0081]
在其他的实施方式中，“确定糖链的水平”可以是将样品中所含的该糖链的存在量与预定基准值进行比较。作为其具体示例，可以列举出判断样品中所含的糖链的浓度是高于或低于预定基准值(截止值)。此时，可以通过医学方法、统计学方法等适当地确定预定基准值。另外，也可以设置多个基准值作为预定基准值。
[0082]
与凝集素结合的糖链的水平的高低与iga肾病发病之间的关系，例如通过统计学方法来确定(作为其一个示例，参见本申请的实施例)。即，例如，通过统计方法，可以判断是“糖链水平高与iga肾病发病有关”，还是“糖链水平低与iga肾病发病有关”。
[0083]
在一个示例中，在本申请实施例中的1种糖链模型(模型(1))和/或1种糖链+临床因素模型(模型(2))中，关于所研究的45种凝集素，与该凝集素结合的糖链的低水平值与iga肾症的发病相关。
[0084]
另外，在本申请实施例中的多种糖链+临床因素模型(模型3)中，关于aca、gsl_i_a4、mah和aba，与这些凝集素结合的糖链的低水平值与iga肾症的发病相关。与此相对地，关于gsl_ii、mal_i、pna、sna和aol，与这些凝集素结合的糖链的高水平值与iga肾病发病相关。
[0085]
因此，糖链水平的高低与iga肾病发病之间的关系可能会根据所采用的模型而不同。然而，本领域技术人员可以通过参照本说明书的记载进行常规操作来确定各个模型中糖链水平的高低与iga肾病发病之间的关系。
[0086]
(受试者)
[0087]
在本说明书中，“受试者”不限于人类。根据本发明的一种实施方式的方法也可以应用于非人类哺乳动物。作为非人类哺乳动物，可以列举出偶蹄类动物(牛、野猪、猪、绵羊、山羊等)、奇蹄类动物(马等)、啮齿类动物(小鼠、大鼠、仓鼠、松鼠等)、兔形目(兔子等)、食肉类动物(狗、猫、鼬等)。除了牲畜或伴侣动物(宠物)以外，所述非人类哺乳动物还包括野生动物。
[0088]
本发明试图通过样品中糖链的水平来判断iga肾病的发病。糖链与蛋白质及核酸相比，物种间的结构差异较小。因此，若是在上述非人类哺乳动物中，根据本发明的一种实施方式的方法被认为是充分有效的。
[0089]
(样品)
[0090]
在本说明书中，“样品”指的是从受试者采集的的全部样品，具体地没有特别限制。对于这里所说的样品，除了血液、脑脊液、淋巴液、母乳、唾液、鼻涕、汗液、尿液、粪便和呼气外，还包括来源于病理标本的组织可溶物、活组织可溶物、细胞可溶物等。
[0091]
在本发明的一种实施方式中，将尿液作为样品。尿液样品是合适的，因为尿液通常作为活检材料，可以同时调查与肾功能相关的其他指标，并且易于收集(特别是在人类受试者的情况下)。
[0092]
在本发明的一种实施方式中，将血液作为样品。血液样品是优选的，因为血液通常作为活检材料，可以同时调查与肾功能相关的其他指标，并且易于收集(即使在非人类受试者中)。对于这里所说的“血液”，除了全血之外，还包括构成全血的部分(血清、血浆、血凝块等)。
[0093]
(凝集素)
[0094]
将描述在下述各实施方式中列出的凝集素，如下所示：
[0095]
aca：amaranthus caudatus agglutinin(尾穗苋凝集素)
[0096]
mah：maackia amurensis hemagglutitnin(朝鲜槐凝集素ii)
[0097]
aba：amaranthus caudatus agglutinin(尾穗苋凝集素)
[0098]
mpa：maclura pomifera agglutinin(桑橙凝集素)
[0099]
jacalin：jackfruit lectin(木菠萝凝集素)
[0100]
lel：lycopersicon esculentum lectin(番茄凝集素)
[0101]
acg：agrocybe cylindracea galectin(茶树菇凝集素)
[0102]
stl：solanum tuberosum lectin(马铃薯凝集素)
[0103]
gsl_i_a4：griffonia simplicifolia lectin i a4(加纳籽凝集素i a4)
[0104]
wga：triticum unlgaris agglutinin(麦胚凝集素)
[0105]
ssa：sambucus sieboldiana lectin(无梗接骨木凝集素)
[0106]
pna：peanut agglutinin(花生凝集素)
[0107]
cona：canavalia ensiformis agglutinin(刀豆凝集素)
[0108]
calsepa：calystega sepiem lectin(田旋花凝集素)
[0109]
aol：aspergillus oryzae lectin(米曲霉凝集素)
[0110]
sna：sambucus nigra agglutinin(黑接骨木凝集素)
[0111]
uda：urtica dioica agglutinin(荨麻凝集素)
[0112]
lca：lens culinaris agglutinin(小扁豆凝集素)
[0113]
gsl_ii：griffonia simplicifolia lectin ii(加纳籽凝集素ii)
[0114]
uea_i：ulex europaeus agglutinin i(荆豆凝集素i)
[0115]
ltl：lotus tetragonolobus lectin(莲花豆凝集素)
[0116]
mal_i：maackia amurensis lectin i(朝鲜槐凝集素i)
[0117]
tja_i：trichosanthes japonica agglutinin i lectin(栝蒌凝集素i)eca：erythrina cristagalli agglutinin(刺桐凝集素)
[0118]
pwm：phytolacca americana agglutinin(美商陆凝集素)
[0119]
psa：pisum sativum agglutinin(豌豆凝集素)
[0120]
aal：aleuria aurantia lectin(橙黄网胞盘菌凝集素)
[0121]
dsa：datura stramonium agglutinin(蔓陀罗凝集素)
[0122]
bpl：bauhinia purpurea lectin(紫荆花菊凝集素)
[0123]
tja_ii：trichosanthes aponica agglutinin
‑
ii(栝蒌凝集素ii)
[0124]
npa：narcissus pseudonarcissus agglutinin(黄水仙凝集素)
[0125]
pha_e：phaseolus vulgaris erythroagglutinin(红腰豆凝集素e)
[0126]
rca120：ricinus communis agglutinin i(蓖麻凝集素i)
[0127]
eel：euonymus europaeus lectin(欧洲卫矛凝集素)
[0128]
sba：glycine max agglutinin(大豆凝集素)
[0129]
hpa：helix pomatia agglutinin(盖罩大蜗牛凝集素)
[0130]
gna：galanthus nivalis agglutinin(雪花莲凝集素)
[0131]
hhl：hippeastrum hybrid lectin(朱顶红凝集素)
[0132]
ptl_i：psophocarpus tetragonolobus lectin
‑
i(四棱豆凝集素)
[0133]
txlc_i：tulipa gesneriana lectin
‑
i(郁金香凝集素)
[0134]
pha_l：phaseolus vulgaris leucoagglutin(红腰豆凝集素l)
[0135]
gsl_i_b4：griffonia simplicifolia lectin i b4(加纳籽凝集素i b4)
[0136]
dba：dolichos biflorus agglutinin(双花扁豆凝集素)
[0137]
wfa：wisteria floribunda agglutinin(紫藤凝集素)
[0138]
vva：vicia villosa lectin(毛苕子凝集素)
[0139]
这些凝集素是常规已知的凝集素，并且其氨基酸序列信息可以从各种数据库获得。与这些凝集素结合的糖链水平的高低与iga肾病发病之间的关系如项目“确定与凝集素结合的糖链的水平的方法”中所述。
[0140]
此外，在根据本发明的一种实施方式的方法中，当确定两种以上的糖链的水平时，优选该两种以上的糖链彼此之间结构不同(这也适用于后面描述的其他实施方式)。即，在根据本发明的一种实施方式的方法中，当确定与凝集素x结合的糖链x和与凝集素y结合的糖链y的水平时，优选糖链x和糖链y的结构彼此不同。这是为了避免在创建诊断模型时的多重共线性问题。
[0141]
[1
‑
1、对非特定人群的判断]
[0142]
本发明的一种实施方式是一种判断受试者中iga肾病发病可能性的方法；所述方法包括：在从所述受试者采集的样品中确定与凝集素结合的糖链的水平的工序，所述凝集素选自由aca、mah、aba、stl、lel、wga、mpa、木菠萝素(jacalin)、mal_i、pna、acg、gsl_i_a4、cona、ssa、aol和gsl_ii组成的组中的至少一种。
[0143]
根据本实施方式的方法是判断属于非特定群体的受试者的iga肾病发病可能性的方法。即，是在不清楚受试者是否患有某种肾脏疾病的情况下，判断该受试者的iga肾病发病可能性的方法。
[0144]
[1
‑
2、对原发性肾小球疾病的患者群体的判断]
[0145]
本发明的其他实施方式是一种判断患有原发性肾小球疾病的受试者或被怀疑患有原发性肾小球疾病的受试者中iga肾病发病可能性的方法；所述方法包括：在从所述受试者采集的的样品中确定与凝集素结合的糖链的水平的工序，所述凝集素选自由aca、mah、aba、mpa、木菠萝素(jacalin)、lel、acg、stl、gsl_i_a4、wga、ssa、pna、cona、calsepa、aol、sna、uda、lca、gsl_ii、uea_i、ltl、mal_i、tja_i、eca、pwm、psa、aal、dsa、bpl、tja_ii、npa、pha_e、rca120、sba、gna、hhl、ptl_i、txlc_i、pha_l、dba、wfa和vva组成的组中的至少一种。
[0146]
根据本实施方式的方法是判断属于患有(被怀疑患有)原发性肾小球疾病的受试者群体的受试者的iga肾病发病可能性的方法。即，在明确受试者患有(或被怀疑患有)原发性肾脏疾病的情况下，判断该受试者的iga肾病发病可能性的方法。与[1
‑
1]中描述的诊断方法相比，该方法的总群体更为有限。
[0147]
根据已知的医学技术可以知道“受试者患有原发性肾小球疾病”和“受试者可能患有原发性肾小球疾病”。
[0148]
根据本实施方式的方法只要能够判断受试者iga的肾病发病可能性就足够了。然而，当通过根据本实施方式的方法可以判断患有原发性肾小球疾病的受试者或被怀疑患有原发性肾小球疾病的受试者不会发病(发病可能性低)的情况下，可以判断该受试者出现iga肾病以外的原发性肾小球疾病(发病的可能性高)。
[0149]
这里，在日本，iga肾病通常被包括在原发性肾小球疾病的类别中，但是根据who的分类，iga肾病被包括在继发性肾小球疾病的类别中。本说明书的描述遵循日本的分类，应将iga肾病视为原发性肾小球疾病的一种。
[0150]
顺便提及，当采用who分类时，“判断患有原发性肾小球疾病的受试者或被怀疑患有原发性肾小球疾病的受试者中iga肾病发病可能性的方法”可以理解为“判断患有原发性肾小球疾病或iga肾病的受试者、或被怀疑患有原发性肾小球疾病或iga肾病的受试者中iga肾病发病可能性的方法”。即使以这种方式理解，本实施方式提高iga肾病和其他原发性肾小球疾病之间的鉴别准确度的效果也保持不变。
[0151]
[2、与凝集素结合的糖链的水平与其他生物标志物的组合]
[0152]
在第二方面，本发明的方法包括：(i)在从受试者采集的第一样品中确定与特定凝集素结合的糖链的水平的工序，和(ii)在从该受试者采集的的第二样品中测定生物标志物的工序。此时，在第二样品中测定的生物标志物不同于在第一个样品中确定水平的、与特定凝集素结合的糖链。
[0153]
根据本实施方式的方法，能够以更高的准确度判断受试者中iga肾病发病的可能性。特别地，当与以前用于iga肾病诊断的生物标志物组合时，很容易期待诊断准确度增加的效果。
[0154]
关于用于确定与特定凝集素结合的糖链的水平的方法、受试者、样品和凝集素，如第[1]节所述。
[0155]
(测定第二样品中生物标志物的方法)
[0156]
测定第二样品中生物标志物的方法可以根据样品的种类和生物标志物的种类适当地设定。关于样品的种类和测定方法的种类，请参见[1]的记载。
[0157]
第二样品可以与第一样品相同，也可以不同。另外，当从第二样品测定多个生物标志物时，可以从不同样品中测定各生物标志物。例如，在本申请的实施例中，从第一样品(尿液)测定糖链的水平，从第二样品(血清和尿液)测定血清iga、尿潜血和尿蛋白。
[0158]
另外，从第二样品测定的生物标志物可以是糖链。即，本实施方式还包括在第一样品中确定与特定凝集素结合的糖链a的水平，在第二样品中确定与糖链a不同的糖链b的水平。
[0159]
作为从第二个样品中测定的生物标志物的示例，可以列举出年龄、性别、bmi、平均动脉压、hba1c、估算的肾小球滤过率量(egfr：estimated glomerular filtration rate)、尿蛋白量、尿潜血、血清iga、补体c3、血清iga/c3比等。其中，尿蛋白量、尿潜血、血清iga和血清iga/c3比被视为指示iga肾病发病的生物标志物(参见非专利文献2)，通过与糖链水平组合，容易期待效果增加。
[0160]
[2
‑
1、对普通群体的判断]
[0161]
本发明的一种实施方式是一种判断受试者中iga肾病发病可能性的方法；所述方法包括：在从所述受试者采集的第一样品中确定与凝集素结合的糖链的水平的工序，所述凝集素选自由aca、mah、aba、mpa、木菠萝素(jacalin)、lel、acg、stl、gsl_i_a4、wga、ssa、pna、cona、calsepa、aol、sna、uda、lca、gsl_ii、uea_i、ltl、mal_i、tja_i、eca、pwm、psa、aal、dsa、bpl、tja_ii、npa、pha_e、rca120、eel、sba、hpa、gna、hhl、ptl_i、txlc_i、pha_l、gsl_i_b4、dba、wfa和vva组成的组中的至少一种；以及在从所述受试者采集的第二样品中测定所述糖链的水平以外的生物标志物的工序。
[0162]
根据本实施方式的方法与[1
‑
1]节中描述的方法相同，是判断属于非特定群体的受试者的iga肾病发病可能性的方法。
[0163]
在确定与凝集素结合的糖链的水平的工序中，可以确定两种以上的糖链的水平。例如，
[0164]
(1)可以确定与aca、gsl_i_a4和gsl_ii各凝集素结合的糖链的水平；
[0165]
(2)可以确定与mah、gsl_i_a4和mal_i各凝集素结合的糖链的水平；
[0166]
(3)可以确定与aba、gsl_i_a4和aol各凝集素结合的糖链的水平；
[0167]
(4)可以确定与mah、gsl_i_a4和pna各凝集素结合的糖链的水平；
[0168]
(5)可以确定与mah、gsl_i_a4和sna各凝集素结合的糖链的水平；
[0169]
(6)可以确定与aba、gsl_i_a4和mal_i各凝集素结合的糖链的水平；
[0170]
(7)可以确定与aba+gsl_i_a4+gsl_ii各凝集素结合的糖链的水平。
[0171]
对于根据本实施方式的方法，在确定与凝集素结合的糖链的水平的工序中，可以确定包含所述组合的糖链的水平，也可以仅确定所述组合的糖链的水平。例如，(i)除了与aca、gsl_i_a4和gsl_ii各凝集素结合的糖链的水平外，还可以确定与其他凝集素结合的糖链的水平，(ii)也可以仅确定与aca、gsl_i_a4和gsl_ii各凝集素结合的糖链的水平。
[0172]
[2
‑
2、对原发性肾小球疾病的患者群体的判断]
[0173]
本发明的其他实施方式是一种判断患有原发性肾小球疾病的受试者或被怀疑患有原发性肾小球疾病的受试者中iga肾病发病可能性的方法；所述方法包括：在从所述受试者采集的第一样品中确定与凝集素结合的糖链的水平的工序，所述凝集素选自由aca、mah、aba、mpa、木菠萝素(jacalin)、lel、acg、stl、gsl_i_a4、wga、ssa、pna、cona、calsepa、aol、sna、uda、lca、gsl_ii、uea_i、ltl、mal_i、tja_i、eca、pwm、psa、aal、dsa、bpl、tja_ii、npa、pha_e、rca120、eel、sba、hpa、gna、hhl、ptl_i、txlc_i、pha_l、gsl_i_b4、dba、wfa和vva组成的组中的至少一种；以及在从所述受试者采集的第二样品中测定所述糖链的水平以外的生物标志物的工序。
[0174]
根据本实施方式的方法与[1
‑
2]节中描述的方法相同，是判断属于患有(被怀疑患有)原发性肾小球疾病的受试者群体的受试者的iga肾病发病可能性的方法。此外，关于本实施方式的描述引用[1
‑
2]节的记载。
[0175]
在确定与凝集素结合的糖链的水平的工序中，可以确定两种以上的糖链的水平。例如，可以确定与mah、gsl_i_a4和hpa各凝集素结合的糖链的水平。
[0176]
对于根据本实施方式的方法，在确定与凝集素结合的糖链的水平的工序中，可以确定包含所述组合的糖链的水平，也可以仅确定所述组合的糖链的水平。例如，(i)除了与mah、gsl_i_a4和hpa各凝集素结合的糖链的水平外，还可以确定与其他凝集素结合的糖链
的水平，(ii)也可以仅确定与mah、gsl_i_a4和hpa各凝集素结合的糖链的水平。
[0177]
[3、特定糖链水平的确定]
[0178]
如上所述，凝集素具有与具有特定结构的糖链特异性结合的性质。因此，在本说明书中，“与凝集素x结合的糖链”也可以通过结构来确定。下表1示出了本说明书中出现的凝集素和与该凝集素特异性结合的糖链的示例。
[0179]
[表1]
[0180]
表1
[0181]
[0182][0183]
基于表1，在[1
‑
1]节中，“在从所述受试者采集的样品中确定与凝集素结合的糖链的水平的工序，所述凝集素选自由aca、mah、aba、stl、lel、wga、mpa、木菠萝素(jacalin)、mal_i、pna、acg、gsl_i_a4、cona、ssa、aol和gsl_ii组成的组中的至少一种”，可以改写为“在从所述受试者采集的样品中确定选自由以下糖链组成的组中的一种以上的糖链的水平的工序：
[0184]
(galβ1
‑
4glcnac)
n
、
[0185]
(glcnacβ1
‑
4)
n
、
[0186]
(glcnacβ4murnac)
n
、
[0187]
半乳糖基化的三/四触角聚糖(agalactosylated tri/tetra antennary glycans)、
[0188]
fucα1
‑
2galβ1
‑
4glcnac、
[0189]
fucα1
‑
6glcnac、
[0190]
galnac、
[0191]
galβ1
‑
3galnac、
[0192]
glcnac、
[0193]
包括manα1
‑
6(manα1
‑
3)man在内的high
‑
man(high
‑
man including manα1
‑
6(manα1
‑
3)man)、
[0194]
siaα2
‑
3galβ1
‑
3(siaα2
‑
6)galnac、
[0195]
siaα2
‑
3galβ1
‑
4glcnac、
[0196]
siaα2
‑
6gal/galnac、和
[0197]
α
‑
galnac”。
[0198]
同样地，基于表1，在[1
‑
2]节中，“在从所述受试者采集的样品中确定与凝集素结合的糖链的水平的工序，所述凝集素选自由aca、mah、aba、mpa、木菠萝素(jacalin)、lel、acg、stl、gsl_i_a4、wga、ssa、pna、cona、calsepa、aol、sna、uda、lca、gsl_ii、uea_i、ltl、mal_i、tja_i、eca、pwm、psa、aal、dsa、bpl、tja_ii、npa、pha_e、rca120、sba、gna、hhl、ptl_i、txlc_i、pha_l、dba、wfa和vva组成的组中的至少一种”，可以改写为“在从所述受试者采集的样品中确定选自由以下糖链组成的组中的一种以上的糖链的水平的工序：
[0199]
(galβ1
‑
4glcnac)
n
、
[0200]
(glcnacβ1
‑
4)
n
、
[0201]
(glcnacβ4)
n
、
[0202]
(glcnacβ4murnac)
n
、
[0203]
半乳糖基化的三/四触角聚糖(agalactosylated tri/tetra antennary glycans)、
[0204]
双触角n
‑
聚糖和三触角n
‑
聚糖(bi
‑
and tri
‑
antennary n
‑
glycans)、
[0205]
a型血抗原(blood group a antigen)、
[0206]
fucα1
‑
2galβ1
‑
4glcnac、
[0207]
fucα1
‑
6glcnac、
[0208]
fucα2(galα3)galβ1
‑
4glcnac、
[0209]
fucα2galβ1、
[0210]
fucα2galβ4glcnac(h
‑
2型)
[0211]
fucα3(galb4)glcnac(lex)、
[0212]
fucα3(galβ4)glcnac(lex)、
[0213]
fucα6glcnac(核心fuc)、
[0214]
fucα6glcnac、
[0215]
galnac、
[0216]
galnacα1
‑
3gal、
[0217]
galnacα1
‑
3galnac、
[0218]
galnacβ1、
[0219]
galnacβ1
‑
4glcnac、
[0220]
galα1
‑
3galβ1
‑
4glcnac、
[0221]
galβ1
‑
3galnac、
[0222]
galβ1
‑
4glcnac、
[0223]
galβ3(
‑
6)galnac、
[0224]
galβ4glcnac、
[0225]
glcnac、
[0226]
glcnacβ4glcnac、
[0227]
high
‑
man、
[0228]
high
‑
man(man2
‑
6)、
[0229]
包括manα1
‑
6(manα1
‑
3)man在内的high
‑
man(high
‑
man including manα1
‑
6(manα
1
‑
3)man)、
[0230]
包括manα3man的high
‑
man(high
‑
man including manα3man)、
[0231]
包括manα6man的high
‑
man(high
‑
man including manα6man)、
[0232]
man3核心、
[0233]
man5～man9、
[0234]
包括平分型glcnac的n
‑
聚糖(n
‑
glycans including bisecting glcnac)、
[0235]
具有外部gal和平分型glcnac的n
‑
聚糖(n
‑
glycans with outer gal and bisecting glcnac)、
[0236]
siaα2
‑
3galβ1
‑
3(siaα2
‑
6)galnac、
[0237]
siaα2
‑
3galβ1
‑
4glcnac、
[0238]
siaα2
‑
6gal/galnac、
[0239]
四触角n
‑
聚糖(tetraantennary n
‑
glycans)、
[0240]
三/四触角复合型n
‑
聚糖(tri/tetra
‑
antennary complex
‑
type n
‑
glycan)、
[0241]
三触角的(triantennary)、
[0242]
αgal、
[0243]
α
‑
galnac”。
[0244]
另外，基于表1，在[2
‑
1]节和[2
‑
2]节中，“在从所述受试者采集的第一样品中，确定与凝集素结合的糖链的水平的工序，所述凝集素选自由aca、mah、aba、mpa、木菠萝素(jacalin)、lel、acg、stl、gsl_i_a4、wga、ssa、pna、cona、calsepa、aol、sna、uda、lca、gsl_ii、uea_i、ltl、mal_i、tja_i、eca、pwm、psa、aal、dsa、bpl、tja_ii、npa、pha_e、rca120、eel、sba、hpa、gna、hhl、ptl_i、txlc_i、pha_l、gsl_i_b4、dba、wfa和vva组成的组中的至少一种”，可以改写为“在从所述受试者采集的样品中确定选自由以下糖链组成的组中的一种以上的糖链的水平的工序：
[0245]
(galβ1
‑
4glcnac)
n
、
[0246]
(glcnacβ1
‑
4)
n
、
[0247]
(glcnacβ4)
n
、
[0248]
(glcnacβ4murnac)
n
、
[0249]
半乳糖基化的三/四触角聚糖、
[0250]
双触角n
‑
聚糖和三触角n
‑
聚糖、
[0251]
a型血抗原、
[0252]
fucα1
‑
2galβ1
‑
4glcnac、
[0253]
fucα1
‑
6glcnac、
[0254]
fucα2galβ1、
[0255]
fucα2galβ4glcnac(h
‑
2型)
[0256]
fucα3(gal4)glcnac(lex)、
[0257]
fucα6glcnac(核心fuc)、
[0258]
fucα6glcnac、
[0259]
galnac、
[0260]
galnacα1
‑
3gal、
[0261]
galnacα1
‑
3galnac、
[0262]
galnacβ1、
[0263]
galnacβ1
‑
4glcnac、
[0264]
galβ1
‑
3galnac、
[0265]
galβ1
‑
4glcnac、
[0266]
galβ3(
‑
6)galnac、
[0267]
galβ4glcnac、
[0268]
glcnac、
[0269]
glcnacβ4glcnac、
[0270]
high
‑
man、
[0271]
high
‑
man(man2
‑
6)、
[0272]
包括manα1
‑
6(manα1
‑
3)man在内的high
‑
man、
[0273]
包括manα3man在内的high
‑
man、
[0274]
包括manα6man在内的high
‑
man、
[0275]
man3核心、
[0276]
man5～man9、
[0277]
包括平分型glcnac的n
‑
聚糖、
[0278]
具有外部gal和平分型glcnac的n
‑
聚糖、
[0279]
siaα2
‑
3galβ1
‑
3(siaα2
‑
6)galnac、
[0280]
siaα2
‑
3galβ1
‑
4glcnac、
[0281]
siaα2
‑
6gal/galnac、
[0282]
四触角n
‑
聚糖、
[0283]
三/四触角复合型n
‑
聚糖、
[0284]
三触角的、
[0285]
α
‑
galnac”。
[0286]
进一步地，基于表1，在[2
‑
1]节和[2
‑
2]节中，
[0287]
(1)“与aca、gsl_i_a4和gsl_ii各凝集素结合的糖链”可以改写为“galβ1
‑
3galnac、α
‑
galnac和半乳糖基化的三/四触角聚糖或glcnac”；
[0288]
(2)“与mah、gsl_i_a4和mal_i各凝集素结合的糖链”可以改写为“siaα2
‑
3galβ1
‑
3(siaα2
‑
6)galnac、α
‑
galnac和siaα2
‑
3galβ1
‑
4glcnac”；
[0289]
(3)“与aba、gsl_i_a4和aol各凝集素结合的糖链”可以改写为“galβ1
‑
3galnac、α
‑
galnac和fucα1
‑
6glcnac或fucα1
‑
2galβ1
‑
4glcnac”；
[0290]
(4)“与mah、gsl_i_a4和pna各凝集素结合的糖链”可以改写为“siaα2
‑
3galβ1
‑
3(siaα2
‑
6)galnac、α
‑
galnac和galβ1
‑
3galnac”；
[0291]
(5)“与mah、gsl_i_a4和sna各凝集素结合的糖链”可以改写为“siaα2
‑
3galβ1
‑
3(siaα2
‑
6)galnac、α
‑
galnac和siaα2
‑
6gal/galnac”；
[0292]
(6)“与aba、gsl_i_a4和mal_i各凝集素结合的糖链”可以改写为“galβ1
‑
3galnac、α
‑
galnac和siaα2
‑
3galβ1
‑
4glcnac”；
[0293]
(7)“与aba+gsl_i_a4+gsl_ii各凝集素结合的糖链”可以改写为“galβ1
‑
3galnac、
α
‑
galnac和半乳糖基化的三/四触角聚糖或glcnac”；
[0294]
(8)“与mah、gsl_i_a4和hpa各凝集素结合的糖链”可以改写为“siaα2
‑
3galβ1
‑
3(siaα2
‑
6)galnac和α
‑
galnac”；
[0295]
(推测的生物化学机制)
[0296]
在后述的实施例中，对于将分别与aca、gsl_i_a4和gsl_ii的凝集素结合的糖链添加至三种临床因素中的诊断模型，auc最大。如上所述，这些糖链的组合是(i)galβ1
‑
3galnac、(ii)α
‑
galnac和(iii)半乳糖基化的三/四触角聚糖或glcnac的组合。
[0297]
这个事实与关于iga肾病的已知事实是一致的。即，在iga肾病中，已经指出了iga分子的o型糖链的半乳糖化不良，并且galβ1
‑
3galnac具有半乳糖化的o型糖链结构。因此，即使将galβ1
‑
3galnac水平的下降解释为iga肾病相关，也有其有效性。
[0298]
进一步地，从上述事实可以认为，由于在iga肾病中α2,3唾液酸转移酶的活性上升，因此α
‑
galnac被转化为siaα2
‑
3galnac，从而α
‑
galnac的水平降低。另外，由于半乳糖基化的三/四触角聚糖具有半乳糖化不完全的n型糖链结构，因此提示半乳糖化不完全也存在于n型糖链结构中。
[0299]
然而，以上描述是用于帮助理解本发明的推测机制，不限制本发明的范围。
[0300]
[4、试剂盒]
[0301]
[4
‑
1、试剂盒中具备的凝集素]
[0302]
根据本发明的一种实施方式的试剂盒具备凝集素，所述凝集素与从受试者采集的样品中所包含的特定糖链结合。关于此类糖链和与糖链结合的凝集素，请参见第[1]～[3]节中的说明。
[0303]
根据本发明的一种实施方式的试剂盒是(i)用于判断受试者中iga肾病发病可能性的试剂盒，或(ii)用于判断患有原发性肾小球疾病的受试者或被怀疑患有原发性肾小球疾病的受试者中iga肾病发病可能性的试剂盒；具备分别选自以下a～c各组中的一种以上的凝集素；并且不具备其他类型的凝集素：
[0304]
a组：aca、mah和aba
[0305]
b组：gsl_i_a4
[0306]
c组：gsl_ii、mal_i、aol、pna、sna和hpa。
[0307]
这里，从a～c的各组中分别选择一种以上的凝集素。也就是说，从a组中选择1种、2种或3种凝集素。从b组中选择1种凝集素。从c组中选择1种、2种、3种、4种、5种或6种凝集素。
[0308]
在一种实施方式中，选自a～c各组的凝集素不是(i)选自a组的aca和/或aba，(ii)选自b的gsl_i_a4，和(iii)选自c组的pna和/或hpa。
[0309]
在一种实施方式中，选自a～c的各组的凝集素不是(i)选自a组的aca和/或aba，(ii)选自b的gsl_i_a4，和(iii)选自c组的pna、sna和/或hpa。
[0310]
根据本发明的其他实施方式的试剂盒是(i)用于判断受试者中iga肾病发病可能性的试剂盒，或(ii)用于判断患有原发性肾小球疾病的受试者或被怀疑患有原发性肾小球疾病的受试者中iga肾病发病可能性的试剂盒；具备与分别选自以下a～c各组中的一种以上的糖链结合的凝集素；并且不具备其他类型的凝集素：
[0311]
a组：galβ1
‑
3galnac和siaα2
‑
3galβ1
‑
3(siaα2
‑
6)galnac
[0312]
b组：α
‑
galnac
[0313]
c组：半乳糖基化的三/四触角聚糖、fucα1
‑
2galβ1
‑
4glcnac、fucα1
‑
6glcnac、glcnac、galβ1
‑
3galnac、siaα2
‑
3galβ1
‑
4glcnac、siaα2
‑
6gal/galnac和α
‑
galnac。
[0314]
这里，从a～c的各组中分别选择一种以上的糖链。也就是说，从a组中选择1种或2种糖链。从b组中选择1种糖链。从c组中选择1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种或8种糖链。
[0315]
此外，与各糖链结合的凝集素的类型可以是一种，也可以是两种以上。例如，当从c组中选择半乳糖基化的三/四触角聚糖时，根据本发明的一种实施方式的试剂盒可以仅具备与半乳糖基化的三/四触角聚糖结合的一种凝集素，也可以具备与半乳糖基化的三/四触角聚糖结合的两种以上的凝集素。
[0316]
另外，也可以从两个以上的组中选择相同的糖链。例如，可以从b组和c组中选择α
‑
galnac。在这种情况下，根据本发明的一种实施方式的试剂盒可以仅具备与α
‑
galnac结合的一种凝集素，也可以具备与α
‑
galnac结合的两种以上的凝集素。
[0317]
在一种实施方式中，选自a～c各组的糖链不是(i)选自a组的galβ1
‑
3galnac，(ii)选自b组的α
‑
galnac，和(iii)选自c组的galβ1
‑
3galnac、siaα2
‑
6gal/galnac和/或α
‑
galnac。
[0318]
在一种实施方式中，与选自a～c各组的糖链结合的凝集素不是分别选自以下1、2各组中的一种以上的凝集素的组合：
[0319]
组1：bpl、aba、木菠萝素、pna、aca、mpa
[0320]
组2：hpa、vva、ptl_i、gsl_i_a4
[0321]
如果利用具备上述凝集素组合的试剂盒，则可以以比现有技术更高的准确度判断受试者中iga肾病发病的可能性。该受试者可以是属于非特定群体的受试者，也可以是患有原发性肾小球疾病或被怀疑患有原发性肾小球疾病的受试者。
[0322]
上述凝集素可以通过已知方法制备。或者，可以适当使用市售的凝集素。
[0323]
[4
‑
2、其他构成要素]
[0324]
在根据本发明的一种实施方式的试剂盒中，凝集素可以固定在任何基材上。举例来说，凝集素可以固定在微阵列、elisa板、乳胶珠或磁珠等基材上。
[0325]
在上述描述中，优选将凝集素固定在微阵列上的方式。在这种方式中，当将尿液用作样品时，具有以下优点：(i)不需要浓缩样品，(ii)不需要去除样品中的主要蛋白质(白蛋白、igg等)。作为将凝集素固定在基材上的方法，可以使用将蛋白质固定在基材上的已知方法。
[0326]
另外，根据本发明的一个实施方式的试剂盒还可以具备使用该试剂盒所需的药剂、器具、容器、说明书等。另外，所述药品、器具、容器、说明书等可以通过市场或通信线路让使用者另外获得。
[0327]
[5、其他方面]
[0328]
根据本发明的用于判断受试者中iga肾病发病可能性的方法不是由医生执行的iga肾病的诊断方法，只是用于诊断受试者中iga肾病的辅助方法。
[0329]
然而，根据本发明的用于判断受试者中iga肾病发病可能性的方法也可以应用于iga肾病的诊断方法。因此，本发明还包括“iga肾病的诊断方法”。此外，关于“iga肾病的诊断方法”的描述，可以引用本说明书中关于“iga肾病发病可能性的判断方法”的描述。此时，词句“iga肾病发病可能性的判断方法”可以理解为“iga肾病的诊断方法”。
[0330]
上述各项目中记载的内容可以适当地并入其他项目。本发明不限于上述各种实施方式，并且在权利要求所示的范围内可以进行各种修改。因此，通过适当地组合在不同实施方式中公开的各种技术手段而获得的实施方式也包括在本发明的技术范围内。
[0331]
本说明书中描述的所有学术文献和专利文献均通过引用并入本说明书。
[0332]
下文将通过实施例对本发明进行更详细的说明，但是本发明不限于以下实施例。
[0333]
实施例
[0334]
根据本发明的一个实施方式的方法，研究了以下问题：(i)从包含健康者的群体中鉴别出iga肾病患者的诊断的诊断准确度，以及(ii)鉴别出患有原发性肾小球疾病的患者和iga肾病患者的诊断的诊断准确度。
[0335]
[方法]
[0336]
[患者的选择]
[0337]
将从510名肾病患者和15名健康者共525名中除去19名同时患有iga肾病和其他肾脏疾病的患者的506名作为分析对象。此外，已经通过规定的程序获得了所有参与者的事前同意。慢性肾脏病患者都是在2010年12月～2017年9月在冈山大学医院进行了肾脏活检，并确定了肾脏病理诊断的患者。
[0338]
[通过凝集素阵列分析测定糖链水平]
[0339]
使用凝集素阵列(glycostation(注册商标。以下相同)和lecchip(注册商标。以下相同)，glycotechnica公司制造)，根据以下方案，定量与45种凝集素结合的尿液中糖链的信号强度。测定所使用的尿液样品是在肾脏活检之前或在体检时采集并保管的。
[0340]
1、将20μl的10倍稀释尿液样品和100μg的cy3单活性染料标记(由ge healthcare life science制造)混合，并在室温下在黑暗处反应1小时。
[0341]
2、将脱盐柱在4℃的条件下以1,500
×
g离心1分钟。
[0342]
3、使300μl tbs通过脱盐柱。然后将脱盐柱在4℃的条件下以1,500
×
g离心1分钟并洗涤。该工序共重复三次。
[0343]
4、使全部尿液样品和25μl的tbs通过脱盐柱。然后在4℃的条件下以1,500
×
g离心2分钟，除去未反应的cy3。
[0344]
5、向在4中获得的尿液样品中添加450μl的探测溶液(probing solution)(由glycotechnica制造)，然后量取500μl。
[0345]
6、用探测溶液将lecchip洗涤3次(每次100ml/孔)。然后，将在5中制备的尿液样品溶液注入孔中(100μl/孔)。
[0346]
7、使lecchip在20℃下反应16个小时以上。
[0347]
8、用glycostation reader 1200测定lecchip。测定是在使尿液样品反应的液相状态下进行的。测定的累计次数为4次，曝光时间为299毫秒，相机增益为85、95、105、115和125。
[0348]
9、测定值由glycostaion toolspro suite 1.5量化。
[0349]
10、从各凝集素对应的信号强度中减去背景的信号值而获得的值被定义为各凝集素的糖链信号，并用于分析。
[0350]
[临床因子]
[0351]
测定了以下项目作为临床因素：肾脏活检的年龄、性别、bmi、血压、血清cr、血清
iga、补体c3、是否存在糖尿病并发症、hba1c(ngsp值)、是否存在尿潜血、每日尿液中的蛋白量(g/天)。
[0352]
其中，根据血尿诊断指南2013(日本临床检验医学会)(血尿診断
ガイドライン
2013年(日本臨床検査医学会))来确定是否存在尿潜血。具体而言，在肾脏活检前的清晨进行多次尿沉淀检查时，(i)两次以上观察到尿液中红细胞数为5/hpf以上，并且(ii)从尿液中红细胞的形态判断为肾小球性尿潜血，从而被判断为“患有尿潜血”。
[0353]
egfr(ml/min/1.73m2)通过ckd
‑
epi公式由血清cr值计算得出。
[0354]
各个糖链信号的值根据其分布和值进行1/1000倍、1/10000倍或对数变换后用于分析。同样地，每日尿蛋白量在自然对数转换之后用于分析。
[0355]
[终点]
[0356]
以iga肾病和非iga肾病之间的鉴别诊断作为主要终点(但是，iga肾病与其他肾脏疾病同时存在的病例除外)。即，进行诊断，以鉴别受试者是(i)仅患有iga肾病的受试者，还是(ii)患有除iga肾病以外的肾脏疾病的受试者或健康者。
[0357]
另外，将iga肾病和原发性肾小球疾病之间的鉴别诊断作为次要终点。即，进行诊断，以鉴别患有原发性肾小球疾病的受试者是(i)仅患有iga肾病的受试者，还是(ii)患有除iga肾病以外的原发性肾小球疾病的受试者。
[0358]
[分析]
[0359]
通过单变量逻辑回归分析或多变量逻辑回归分析，比较了以下四种模型的roc
‑
auc，并研究了其有效性。
[0360]
·
模型(1)：通过由血清iga(315mg/dl以上vs不足315mg/dl)、是否存在尿潜血以及每日尿蛋白量(0.3g/天以上vs不足0.3g/天)构成多变量逻辑回归分析进行的roc
‑
auc。另外，该模型相当于现有技术。
[0361]
·
模型(2)：通过单变量逻辑回归模型对45种凝集素信号分别进行的roc
‑
auc。
[0362]
·
模型(3)：通过由一种凝集素信号和模型(1)中的三种临床因素构成的复杂多变量逻辑回归模型进行的roc
‑
auc。
[0363]
·
模型(4)：通过由多种凝集素信号和模型(1)中的三种临床因素构成的复杂多变量逻辑回归模型进行的roc
‑
auc。
[0364]
关于模型(1)，在日本的《iga肾病指南2017(iga腎症
ガイドライン
2017年)》中，作为诊断的预测模型，除上述三种临床因素外，还提出了血清iga/补体c3(≥3.01vs<3.01)。但是，在本研究中使用的群体中，血清iga和血清iga/补体c3之间的相关性非常强。因此，考虑到多重共线性问题，将血清iga/补体c3从模型(1)的变量中排除。此外，在上述指南中，还指出血清iga比血清iga/补体c3更重要，并认为血清iga是更能反映iga肾病病理的因素。因此，可以推断，作为临床因素模型的模型(1)也具有一定程度的有效性。
[0365]
关于模型(3)和模型(4)，将血清iga和每日尿蛋白量视为连续变量，而不是设有截止值的类别变量。这是因为目前还没有实证和报告关于常规采用的截止值(参照模型(1))是否也能在日本的iga肾病患者中推广的研究。
[0366]
关于模型(4)，当将多种凝集素信号输入到模型中时，研究各个凝集素信号与临床因素之间的相关性，并且选择并输入了彼此相关性不强的。这是为了避免多重共线性的问题。最终输入模型的因素是通过变量增减法确定的。变量增减法的p值水平设为0.1。
[0367]
关于最终被认为有用的模型，通过约登指数(youden index)和最佳距离(optimum distance)计算出敏感度、特异性和匹配率。本项目中描述的分析全部使用sas(版本9.3、9.4)进行。
[0368]
结果
[0369]
[结果1：分析对象的分布]
[0370]
表2、3显示了分析对象中肾脏疾病的分布情况。表2是以全体分析对象为对象，表3是以患有iga肾病以外的原发性肾小球疾病的全体患者为对象。
[0371]
[表2]
[0372]
表2：506名分析对象中肾脏疾病的分布和健康人的比例
[0373][0374]
任一种单独病例的数量。
[0375]
但是，对于分析对象，在同时存在两种以上的疾病的病例中包含同时存在不含iga肾病的疾病的病例。
[0376]
[表3]
[0377]
表3：原发性肾小球疾病的分布和比例
[0378]
[0379][0380]
任一种单独病例的数量。
[0381]
根据表2，关于主要终点，在506名分析对象中，只有iga肾病的病例数为157例(31％)，与非iga肾病相对应的病例数为349例(69％)。
[0382]
根据表3，关于次要终点，在246名分析对象中，只有iga肾病的病例数为157例(31％)，与iga肾病以外的原发性肾小球疾病相对应的病例数为89例(36％)。在后者中，膜性肾病最多(31例)，其次是微小病变型肾病综合征较多(29例)。
[0383]
表4显示了肾脏活检时的主要临床因素。
[0384]
[表4]
[0385]
表4：肾脏活检时的主要临床因素
[0386]
[0387][0388]
缩写：bmi＝身体质量指数(body mass index)
[0389]
*中间值(4分位数范围内)
[0390]
**定义为(
ⅰ
)正在内服至少一种降压剂的患者，以及(
ⅱ
)基线的收缩压＞140或舒张压＞90的患者。
[0391]
p值是iga肾病组(n＝157)和非iga肾病组(n＝349)的比较研究的显著率。
[0392]
类别变量的比较中使用χ2检测，在连续变量的比较中，根据变数的分布，使用t
‑
检测或mann
‑
whitney的检测。
[0393]
根据表4，全部分析对象中男性的比例为51％，肾脏活检时的平均年龄为51岁，平均bmi为22.6(kg/m2)。另外，收缩压、舒张压、平均动脉压的平均值分别为126.8mmhg、78.5mmhg和94.6mmhg，患有高血压的比例为44％。作为与肾脏功能相关的临床因素，egfr的平均值为61.9ml/min/1.73m2，每日尿蛋白量的中位数为0.92(g/天，四分位：0.35～3.00)，在分析对象中有62％观察到尿潜血阳性，血清iga值的平均值为283.6mg/dl。
[0394]
比较iga肾病组和非iga肾病组的临床因素，iga肾病组在统计学上显著年轻，高血压患者比例较低，egfr较高，尿蛋白含量较低，尿潜血阳性患者所占比例较大，血清iga值较高。该结果证实了使用血清iga、是否存在尿潜血以及每日尿蛋白量的常规iga肾病预测模型的有效性。
[0395]
[结果2：对非特异性群体进行iga肾病患者的鉴别]
[0396]
表5显示了在主要终点中模型(2)和模型(3)的分析结果。此外，主要终点中模型(1)的auc为0.617。也就是说，在从还包含健康者的群体中鉴别出仅患有iga肾病的患者的情况下，与现有技术相对应的诊断方法的auc为0.617。
[0397]
[表5]
[0398]
表5：1种糖链模型以及1种糖链+临床因素模型的逻辑回归分析结果
[0399]
[0400][0401]
*：比临床因素模型的auc(0.617)更高的1种糖链模型
[0402]
根据表5，在模型(2)中，关于16种凝集素，输入该凝集素信号的模型的auc超过0.617。具体来说，在其中输入与aca、mah、aba、stl、lel、wga、mpa、木菠萝素、mal_i、pna、acg、gsl_i_a4、cona、ssa、aol或gsl_ii结合的糖链信号的模型中，auc超越了常规技术。其中，auc最大的是输入aca结合糖链信号的模型。然后，在输入与mah、aba或stl结合的糖链的糖链信号的模型中，auc超过0.660。接下来，在输入lel、wga、mpa或木菠萝素结合糖链信号的模型中，auc超过了0.640。
[0403]
同样根据表5，在模型(3)中，关于45种凝集素，输入该凝集素信号的模型的auc超过0.617。换句话说，关于研究中使用的所有45种凝集素，都观察到了相对于常规诊断方法的额外效果。其中，auc最大的是向临床因素中输入aca结合糖链信号的模型(0.801)。在向临床因素中输入aca、mah或aba结合糖链信号的模型中，auc超过0.790。接下来，在向临床因素中输入mpa、木菠萝素、lel、acg、stl、gsl_i_a4、wga、ssa、pna或cona结合糖链信号的模型中，auc超过0.790(此外，表5按照模型(3)中的auc从高到低的顺序进行了排序)。
[0404]
表6显示了在主要终点中模型(4)的分析结果。
[0405]
[表6]
[0406]
表6：根据多种糖链+临床因素模型的auc以及诊断准确度
[0407][0408]
[0409]
对模型(4)进行分析时，发现在超过了模型(3)中的最高auc(0.801)的模型中存在以下七个类型：
[0410]
aca+gsl_i_a4+gsl_ii；
[0411]
mah+gsl_i_a4+mal_i；
[0412]
aba+gsl_i_a4+aol；
[0413]
mah+gsl_i_a4+pna；
[0414]
mah+gsl_i_a4+sna；
[0415]
aba+gsl_i_a4+mal_i；
[0416]
aba+gsl_i_a4+gsl_ii。
[0417]
其中，auc最高的是向临床因素中输入aca、gsl_i_a4和gsl_ii结合糖链模型的，auc为0.807。该模型的灵敏度为0.764，特异性为0.754，匹配率为0.758，这与约登指数和最佳距离的结果相同。
[0418]
在以上七种组合中，对于aca、mah、aba和gsl_i_a4的凝集素信号，信号强度低与iga肾病发病有关。另一方面，对于gsl_ii、mal_i、aol、pna和sna的凝集素信号，信号强度高与iga肾病发病有关。
[0419]
[结果3：对原发性肾小球疾病患者进行iga肾病患者的鉴别]
[0420]
表7显示了次要终点中模型(2)和模型(3)的分析结果。此外，次要终点中模型(1)的auc为0.620。也就是说，在从患有原发性肾小球疾病的群体中鉴别出仅患有iga肾病的患者的情况下，与现有技术相对应的诊断方法的auc为0.620。
[0421]
[表7]
[0422]
表7：1种糖链的模型以及1种糖链+临床因素模型的逻辑回归分析结果
[0423]
[0424]
[0425][0426]
*：比临床因素模型的auc(0.620)更高的1种糖链模型
[0427]
根据表7，在模型(2)中，关于42种凝集素，输入该凝集素信号的模型的auc超过0.617。具体来说，在输入与hpa、eel或gsl_i_b4以外的凝集素结合的糖链信号的模型中，auc超越了常规技术。其中，auc最大的是输入cona结合糖链信号的模型。
[0428]
同样根据表7，在模型(3)中，关于45种凝集素，输入该凝集素信号的模型的auc超过0.620。即，关于研究中使用的所有45种凝集素，都观察到了相对于常规诊断方法的额外效果。其中，auc最大的是向临床因素中输入aba结合糖链信号的模型(0.884)。在表7中，向临床因素中输入aba结合糖链信号～pha_l结合糖链信号的30种凝集素信号中的任一种的模型中，auc超过0.873。(另外，表7按照模型(3)中的auc由高到低的顺序进行了排列。)
[0429]
表8显示了在次要终点中模型(4)的分析结果。
[0430]
[表8]
[0431]
表8：根据多种糖链+临床因素模型的auc以及诊断准确度
[0432][0433]
对模型(4)进行分析时，在超过模型(3)中最高auc(0.884)的模型中，存在向临床因素输入mah、gsl_i_a4和hpa结合糖链模型的模型，auc为0.889。该模型的灵敏度为0.860，特异性为0.841，匹配率为0.853，这与约登指数和最佳距离的结果相同。
[0434]
在上述组合中，对于mah和gsl_i_a4的凝集素信号，信号强度低与iga肾病发病有关。另一方面，对于hpa的凝集素信号，信号强度高与iga肾病发病有关。
[0435]
工业适用性
[0436]
本发明例如可以用于iga肾病的诊断。