辅酶Q10直压控释剂及分析方法与流程

本发明属于药物分析领域，具体涉及辅酶q10直压缓释控释剂及分析方法。
背景技术：
：辅酶q10，英文名称是coenzymeq10，别名泛醌，是一种黄色或浅黄色结晶粉末。在光照下，酸性，碱性，高温，氧化性的环境中都不稳定，在弱极性溶剂和脂类物质中溶解度较大。辅酶q10主要用于轻中度心力衰竭的辅助治疗，也用于肝炎、癌症的辅助治疗。辅酶q10在酸性，碱性等液体条件下不稳定，因此辅酶q10固体制剂比较稳定。辅酶q10通常是以片剂、胶囊等固体剂型被患者服用，在胃部进行崩解、分散。胃里正常的辅酶q10水平和浓度可以帮助身体快速修复受伤的组织。辅酶q10在胃部扩散溶解不均匀，辅酶q10在胃部局部浓度过高，这些现象会引起胃部不适，包括食欲减退、恶心、胃部不适或腹泻等不良反应。分散后的辅酶q10在胃部局部浓度过低，难以进入血液进行吸收，利用。辅酶q10控释剂主要应用于糖尿病，高血压，心脑血管疾病治疗。我国心脑血管疾病患者已经超过2.7亿人。脑血管病，是指由于各种原因导致的脑血管的堵塞或破裂，致使脑血管功能障碍，引起相关症状。它是一种危害人民健康，威胁生命，影响劳动力的常见病和多发病。心脑血管疾病主要是指的是循环系统的疾病，范围比较大，常见的有冠状动脉粥样硬化性心脏病、脑溢血、脑梗塞，动脉粥样硬化等。辅酶q10能加强心肌和脑细胞的新陈代谢，保护心脑血管细胞生物膜结构的完整性，提高心脏的速率及节律的稳定性。临床将辅酶q10可作为冠心病、心绞痛，心肌梗死、心律失常及心力衰竭和脑血管疾病的辅助用药，从而减轻心绞痛、缩小心梗面积、缓解心律失常，使心功能正常化。为了防止心血管疾病的发作，特别是夜间睡眠期间10小时，较长一段时间内发作，研制各种心血管药物的缓控释制剂，在较长一段时间内释放，起效，成为必然趋势。缓释控释剂型针对心脑血管疾病，能达到24小时的稳定治疗效果，逐步释放，稳定药效，24小时发挥作用，阶段时间内，辅酶q10释放量保持一致，释放速度稳定，克服了传统剂型药物代谢快，不能持续发挥药效，患者耐受性差，全身不良反应大等缺点。大量研究表明缓控释剂型，缓控释剂型作为心脑血管药物载体越来越受重视，为心血管疾病靶向缓控释治疗开辟了新途径。目前辅酶q10控释剂研究较少。控释剂多采用混合、制粒，过筛、包埋，涂层等工艺步骤制成，工艺复杂，所需设备多，本发明简化工艺，通过混合、过筛、直压方式直接制成控释产品，节约能源，简化操作步骤，优化控释剂工艺。技术实现要素：为解决上述问题，本发明提供如下技术方案。一种辅酶q10控释产品的分析方法，其特征在于：控释球脂中辅酶q10，按照重量比1：10的比例，溶解在100％乙醇中，室温条件下萃取30分钟，振荡3分钟，静止2分钟，重复6次，得到待测液，辅酶q10控释产品照高效液相检测法，检测波长为275nm，流动相是100％乙醇，柱温：室温，流动相流速是1.0ml/min，色谱柱是c18，色谱柱参数0.45μmx250mm，5μm，进样体积20μl。一种辅酶q10控释产品的组合物，其特征在于：按照如下制备方法制成：一种辅酶q10控释产品，包括控释球脂、控释载体两部分，控释球脂包含辅酶q10、塑性脂肪、表面活性剂。控释球脂、控释载体两部分重量比为6-8:1-3，控释球脂中辅酶q10、塑性脂肪、表面活性剂三部分重量比为1-3:1-3:1-2。塑性脂肪包括蜂蜡，黄油、可可油，猪油等塑性脂肪；表面活性剂包括离子表面活性剂、两性表面活性剂等。表面活性剂包括吐温80，聚氧乙烯蓖麻油，普罗沙姆188。优选地，所述控释球脂的直径约为0.4-1.3mm，进一步，优选为0.5-1mm，最优选为0.8mm。控释载体包括胶类、纤维素和高分子聚合物。控释载体中胶类、纤维素和高分子聚合物三部分重量比为1-2:3-6:1-3。胶类包括明胶、果胶等。纤维素包括羟丙甲基纤维素、甲基纤维素。高分子聚合物类包括聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮系列。优选地，所述控释载体的直径约为0.4-1.3mm，进一步，优选为0.5-1mm，最优选为0.8mm。控释球脂、控释载体两部分重量比为6-8:1-3。控释球脂和控释载体分别混合，过筛后，总混，过筛得到直压控释剂。优选地，直压控释直径约为0.4-1.3mm，进一步，优选为0.5-1mm，最优选为0.8mm。本发明辅酶q10口服给药的剂量为：人的给药剂量为6mg/kg/日，显然，本发明的组合物比单独使用辅酶q10或辅酶q10制剂用量要少，人体吸收利用效果优于其他同类产品。本发明提供了一种能够在有效期内始终保持稳定的释放性辅酶q10固体制剂方案。使辅酶q10均匀的在胃内控制速度释放，减少辅酶q10副作用。创建了辅酶q10控释剂进行检测方法，分析其释放速度和浓度，把控辅酶q10控释剂的质量。辅酶q10控释产品辅酶q10均匀在胃液中分散，溶解，被身体利用吸收，保证药物均匀释放的同时还能有效减少药物对胃肠道的刺激。辅酶q10控释产品的优势在于减少辅酶q10的副反应，有效血药浓度持续时间长、血药浓度波动小、副作用小、个体差异小、患者依从性好，利于疾病预防和治疗目的。实验例1：控释球脂的优选过程将辅酶q10和吐温80、蜂蜡按比例溶解，得到混合物1，蜂蜡加热后，加入混合物1，搅拌，过筛，得到控释球脂。将辅酶q10和吐温按比例1:1称量，混合，得到混合物1。将蜂蜡：辅酶按比例1:1称量，蜂蜡60℃水浴加热0.5小时，得到澄清透明的蜂蜡液。混合物1加入60℃保温的蜂蜡液，搅拌，室温放置，过筛，得到控释球脂。实验例2：控释载体的优选过程将果胶、羟丙甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮按比例称量，混合，得到混合物，搅拌0.5小时，等待混合物颜色均匀一致后，过筛，直压，得到控释载体。将果胶、羟丙甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮按比例1:1:1称量，混合，得到混合物，搅拌0.5小时，等待混合物颜色均匀一致后，过筛，干燥，直压，得到控释载体。控释载体颗粒大小适中，均匀。实验例3：控释球脂中样品的前处理方法的优选过程辅酶q10大多采用高效液相法进行检测，在实际生产制备过程中，高效液相法不能对加工过程中的产品进行实时监控质量。采用平板扫描法，可以对辅酶q10直压缓释控释进行快速检测，检测时间短，对产品进行定性定量检测，对辅酶控制球脂产品进行半成品(中间品)质量控制。取少量辅酶q10产品按照如下方法进行前处理，以排除其中辅料等干扰，再进行分析。辅酶q10产品采用有机溶剂萃取和滤纸过滤分离方法，进行前处理，排除其中辅料等的干扰。辅酶q10在有机溶剂丙酮，乙醇的溶解性好。有机溶剂采用乙醇，丙酮等作为萃取剂，按照物料/溶剂重量比1：5；1：10；1:15，进行辅酶q10产品前处理提取，萃取30分钟，室温条件下，振荡3分钟，静止2分钟，重复6次，萃取结束后，将萃取液用滤纸过滤，得到澄清透明的辅酶q10产品的前处理产物。萃取溶剂物料/溶剂重量比测量值/真实值前处理产品性状前处理1乙醇1：590％澄清透明前处理2乙醇1：1096％澄清透明前处理3乙醇1：1597％澄清透明前处理4丙酮1：591％浑浊，有颗粒前处理5丙酮1：1093％浑浊，有颗粒前处理6丙酮1：1595％浑浊，有颗粒采用乙醇作为萃取溶剂，物料/溶剂重量比为1:10，室温条件下，萃取30分钟，振荡3分钟，静止2分钟，重复6次，萃取液用滤纸过滤，得到辅酶q10前处理产物，检测萃取液中的辅酶q10含量，测量值和真实值接近，前处理产品性状澄清透明，表明去除辅料效果好，有利于分析检测。实验例4：控释球脂中辅酶q10的分析方法的优选过程取少量去掉辅料后的辅酶q10前处理产物，通过乙醇萃取，得到澄清透明的辅酶q10前处理产物，溶解于展开剂中，硅胶板一端浸泡在展开剂中，10分钟后，对展开板进行紫外波长扫描，激发波长260nm,扫描波长285nm，扫描速度20mm/min,利用薄层扫描仪进行原位扫描，得到吸收光谱曲线，进行快速、准确定性分析和定量分析。考察辅料对薄层扫描的干扰：取少量辅酶q10控释球脂，溶解于展开剂(甲醇100％)中，硅胶板一端浸泡在展开剂中，10分钟后，对展开板进行紫外波长扫描，激发波长260nm,扫描波长285nm，扫描速度20mm/min,利用薄层扫描仪进行原位扫描，得到读数，并且进行定量分析。展开剂(甲醇100％)时，斑点模糊，形状不规则。辅料对于辅酶q10控释球脂采用薄层扫描方法检测，造成干扰。辅酶q10产物去掉辅料后，进行薄层扫描分析，斑点清晰，形状规则，分析结果准确和快速。实施例5胃液分散实验辅酶q10控释产品中，辅酶q10均匀在胃液中分散，溶解，被身体利用吸收，保证药物均匀释放的同时还能有效减少药物对胃肠道的刺激。辅酶q10控释产品的优势在于减少辅酶q10的副反应，有效血药浓度持续时间长、血药浓度波动小、副作用小、个体差异小、患者依从性好，利于疾病预防和治疗目的。制人工胃液，按照药典上的标准，即“人工胃液：取稀盐酸16.4ml，加水约800ml与胃蛋白酶10g，摇匀后，加水称释成1000ml即得。”一种体外消化系统模拟装置，包括下磁力玻璃搅拌罐和蠕动泵，下磁力玻璃搅拌罐采用玻璃制成，便于观察,调节下磁力玻璃搅拌罐内的各种参数如温度、湿度、ph等来实现胃肠道消化过程中各个环节微生物的生长，利用本装置可以进行药物在胃肠道内的作用机理的分析，药物对胃肠道内的微生物生长的影响，也可以进行生物体的消化过程分析等。将辅酶q10控释产品放入人工胃液中，通过模拟胃肠道消化系统装置，经2小时，取消化液，照高效液相检测法，检测波长为275nm，检测消化液中辅酶q10浓度。将消化2小时后的辅酶q10控释产品继续放入新配置好的人工胃液1000ml，继续在模拟胃肠道消化系统消化4小时，取4小时消化液。照高效液相检测法，检测波长为275nm，检测消化液中辅酶q10浓度。如此重复，分别取已经完成消化2小时，6小时，12小时，24小时的消化液。消化液的高效液相检测结果显示，辅酶q10的释放浓度应分别为20％～30％、20％～30％、20％～30％和20％～30％、说明辅酶q10控释产品可以均匀的进行释放，辅酶q10在人工胃液中24小时内，依据时间均速释放。实验例6控释降解实验取本品，照溶出度与释放度测定法(通则0931第二法)，以盐酸溶液(9→1000)900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作。经2小时、6小时、12小时和16小时，分别取溶液10ml，滤过，并即时补充相同温度、相同体积的溶出介质，分别精密量取续滤液3.0ml、1.0ml、1.0ml、1.0ml，置25ml量瓶中，加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度，摇匀，照高效液相检测法，检测波长为275nm，分别计算在不同时间的溶出量。本品在2小时、6小时、12时和16小时时的溶出量应分别为标示量的10％-30％、30％-55％、50％-85％和75％以上，符合规定。实验例7安全性实验供试品：取实施例1产品，作为供试验测试样品，以体重180-220克雌雄各半的sd健康大鼠为试验动物各20只，每组5只，分别灌胃不同浓度的药物，具体实施例给药量分别为0.1g/ml，0.5g/ml，0.75g/ml，1g/ml；累积给药体积50ml/kg，给大鼠一日内灌胃给药3次，观察7日，未见明显毒性反应和胃肠道反应，解剖后经肉眼观察，主要脏器也无明显异常。观察急性毒性试验，表明药物无明显毒性。以同样的试验药液浓度为0.1g/ml，0.5g/ml，0.75g/ml，1g/ml的混悬液，作为大、小剂量组试验药物，对sd健康雌雄各半的大鼠各20只连续灌服3个月，进行长期毒性试验，以等溶剂的蒸馏水为对照。长期毒性试验结果显示，试验动物的一般行为活动与体重增长正常，对血液学指标，肝肾功能及主要脏器的脏器系数均无明显影响，主要脏器无明显病理损伤，表明药物无明显毒性。实施例8本发明组合物的治疗心脑血管实验选60例病毒性心肌炎患者。纳入标准：1)所有患者符合病毒性心肌炎诊断标准；2)既往没有接受相关药物治疗。排除标准：1)患者不是初次发病；2)既往接受过相关抗病毒性心肌炎药物治疗；3)对本药物过敏患者。患者服用辅酶q10胶囊。入选者均行心电图、心脏超声、心肌酶谱、凝血酶谱,肝、肾功能检查,符合要求予以治疗。辅酶q10组治疗期间停用其他溶栓、抗凝、降纤药物,对病情伴发的脑水肿、高血压、糖尿病、各种感染进行相应的处理。每例患者在用药期间的缺血性脑卒中的发生次数、死亡例数,不良反应包括胃肠道反应、牙龈、鼻出血、皮疹、脑出血的发生情况。在正常饮食情况下,测定治疗前和治疗后6个月空腹静脉血脂水平。总胆固醇(tc)采用酶试剂法测定,三酰甘油(tg)采用gpo-pap法测定,高密度脂蛋白(hdl-c)和低密度脂蛋白(ldl-c)采用直接测定法,试剂盒均由博士德公司提供。随访2年。所有参数均采用均数±标准差表示(x±s),两组比较采用t检验,数据分析采用spss13.0统计分析软件,p<0.05为差异有统计学意义。入选对象均获随访2年,随访率100％。给药组的脑卒中的复发率和死亡率显著低于空白组(p<0.05)。附图说明图1：辅酶q10高效液相图谱图2：辅酶q10薄层扫描图谱具体实施方式下面结合具体实施例对本发明最进一步的说明：实验例1：控释球脂的制备实验将辅酶q10和吐温80、蜂蜡按照重量比例1:1：1进行称量混合均匀后，50℃超声10分钟混合，得到混合物，观察混合物颜色均匀一致，无明显色差，停止搅拌，室温放置，过筛，制成直径约为0.8mm的球脂，得到控释球脂。控释球脂颗粒大小适中，均匀。实验例2：控释载体的制备实验将果胶、羟丙甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮按重量比例1:1:1称量，混合，得到混合物，搅拌0.5小时，等待混合物颜色均匀一致后，过筛，干燥，得到控释载体，制成直径约为0.8mm的控释载体。控释载体颗粒大小适中，均匀。实施例3直压控释剂的制备实验控释球脂、控释载体两部分重量比为6:1。控释球脂和控释载体分别混合，过筛后，总混，过筛得到直压控释剂。优选地，直压控释直径约为0.4-1.3mm，进一步，优选为0.5-1mm，最优选为0.8mm。实验例4：控释球脂中样品的前处理方法的优选过程取少量辅酶q10产品按照如下方法进行前处理，以排除其中辅料等干扰，再进行分析：取少量辅酶q10产品，按照样品溶剂重量比1：10，放置于容器中，采用乙醇作为有机溶剂萃取，萃取时间30分钟，振荡3分钟，静止2分钟，重复6次，室温条件下，萃取后，萃取液用滤纸过滤，得到辅酶q10产品的前处理产物。实验例5：控释球脂的前处理产物的辅酶q10的分析方法的优选过程取少量辅酶q10前处理产物，溶解于展开剂(甲醇100％)中，硅胶板一端浸泡在展开剂中，10分钟后，对展开板进行紫外波长扫描，激发波长260nm,扫描波长285nm，扫描速度20mm/min,利用薄层扫描仪进行原位扫描，得到读数，并且进行定量分析，展开剂(甲醇100％)时，斑点清晰，形状规则，不拖尾。实施例6：控释球脂中辅酶q10的分析方法取控释球脂，按照重量比1：10的比例，溶解在100％乙醇中，室温条件下萃取30分钟，振荡3分钟，静止2分钟，重复6次，得到待测液。辅酶q10控释产品照高效液相检测法，检测波长为275nm，流动相是100％乙醇，柱温：室温，流动相流速是1.0ml/min，色谱柱是c18，色谱柱参数0.45μmx250mm，5μm，进样体积20μl。实验例7：直压控释剂的辅酶q10的分析方法的优选过程取少量直压控释剂，溶解于展开剂(甲醇100％)中，硅胶板一端浸泡在展开剂中，10分钟后，对展开板进行紫外波长扫描，激发波长260nm,扫描波长285nm，扫描速度20mm/min,利用薄层扫描仪进行原位扫描，得到读数，并且进行定量分析，展开剂(甲醇100％)时，斑点清晰，形状规则，不拖尾。实施例8：直压控释剂中辅酶q10的分析方法取直压控释剂，按照重量比1：10的比例，溶解在100％乙醇中，室温条件下萃取30分钟，振荡3分钟，静止2分钟，重复6次，得到待测液。辅酶q10控释产品照高效液相检测法，检测波长为275nm，流动相是100％乙醇，柱温：室温，流动相流速是1.0ml/min，色谱柱是c18，色谱柱参数0.45μmx250mm，5μm，进样体积20μl。当前第1页12