一种银杏叶的检测方法与流程

本发明涉及检测方法，特别涉及一种采用液相色谱串联三重四极杆质谱法测定银杏叶的方法。

背景技术：

银杏叶为银杏科植物银杏(ginkgobilobal.)的干燥叶。性甘、苦、涩、平，归心、肺经，具有活血化瘀、通经活络、敛肺平喘、化浊降脂等作用。银杏叶作为中药材，已广泛地运用到各类制剂产品中，主要用于冠状动脉性心脏病、心绞痛、高血脂等疾病的治疗。

银杏内酯是银杏叶(ginkgoleaf)中主要的有效成分之一，其结构主要为二萜和倍半萜类结构，是目前为止发现的唯一拥有叔丁基官能团的天然物质。研究表明，该类成分可特异性拮抗血小板活化因子(paf)受体。银杏叶中常见的银杏内酯有银杏内酯a、银杏内酯b、银杏内酯c、白果内酯、银杏内酯j。银杏内酯类化合物的含量，对银杏叶制剂的疗效和内在质量起着关键的作用，而且是银杏叶及其提取物和植物药质量控制的重要依据。

银杏酸(ginkgolicacids，ga)是银杏叶中主要的毒性物质，具有致敏性、胚胎毒性、细胞毒性及免疫毒性。也是引起临床不良反应的主要物质，具致敏性和致突变毒性。其中，银杏叶中具有多种银杏酸，而银杏酸的限量是评价银杏叶制剂质量的关键指标之一。

目前已有银杏叶中银杏内酯类成分、银杏酸类成分的检测方法。对于银杏内酯类成分，因其紫外吸收较差，在检测时易受干扰，目前多采用高效液相色谱与蒸发光散射检测器(elsd)联用法检测，但蒸发光散射检测器灵敏度低，目前多用于银杏叶提取物及制剂中银杏内酯类成分的检测。对于银杏酸类成分，目前主要采用高效液相色谱与二极管阵列检测器(dad)联用法检测，多以白果新酸及银杏总酸作为对照，以此计算银杏叶及其制剂中银杏酸的含量，并不能反映出各类银杏酸在银杏叶及其制剂中的实际存在情况。并且分别检测两类成分需要进行不同的前处理，过程繁琐耗时，因此有必要采用灵敏度高的检测手段，建立一种可以同时测定银杏叶及其制剂中银杏内酯、银杏酸含量的快速、简便的方法。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明的目的是针对现有的技术存在的上述问题，提供一种通过hplc-ms/ms法同时测定银杏叶中多指标成分含量的检测方法，本发明所要解决的技术问题是如何简便、快速、灵敏的测定银杏叶中多指标成分的含量。

本发明的目的可通过下列技术方案来实现：一种银杏叶的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：取银杏叶供试品进行检测，该检测的色谱条件包括：

色谱柱：agilenteclipseplusc183.0×50mm，1.8μm；流动相：0.1％甲酸-甲醇(a)：0.1％甲酸-水(b)，所述检测的洗脱梯度为0-3min：25％-95％a；3-6min：95％a；6-7min：95％-25％a；7-8min：25％a。

进一步地，所述色谱条件还包括：柱温25～40℃，流速0.4～0.6ml/min。

具体地，所述色谱条件包括：柱温40℃，流速0.6ml/min，进样量：1μl。

进一步地，所述检测方法还包括对对照品溶液进行检测，该检测的色谱条件包括：

色谱柱：agilenteclipseplusc183.0×50mm，1.8μm；流动相：0.1％甲酸-甲醇(a)：0.1％甲酸-水(b)，所述检测的洗脱梯度为0-3min：25％-95％a；3-6min：95％a；6-7min：95％-25％a；7-8min：25％a；

所述对照品可以选自银杏内酯a、银杏内酯b、银杏内酯c、银杏内酯j、白果内酯、银杏酸c13:0、银杏酸c15:0、银杏酸c15:1、银杏酸c17:1、银杏酸c17:2中的一种或多种。

根据以上对供试品或对照品的检测结果，可以获得银杏叶的成分信息，或成分及其含量信息。

进一步地，所述检测方法中可选用的内标为甲苯磺丁脲。

具体地，所述银杏叶供试品的制备可采用醇溶液进行提取处理；具体方法可包括：

使用75％甲醇作为提取溶剂，银杏叶与所述75％甲醇溶液按0.2g:25ml的比例，超声提取，离心后取上清液，用纯甲醇溶液稀释，过0.22μm滤膜。

更具体地，供试品的制备包括：

银杏叶与75％-100％甲醇提取溶剂，按1：125～1：25的料液比，超声提取20～40min，离心后取上清液，用纯甲醇溶液稀释100倍，过0.22μm滤膜；

优选地，称取0.2g银杏叶粉末，加入75％甲醇溶液25ml，称重后，超声提取30min，冷却至室温后，用75％的甲醇溶液补足减失的重量，离心后取上清液1ml，用纯甲醇溶液稀释100倍，过0.22μm滤膜，即得到银杏叶供试品溶液。

具体地，所述对照品溶液制备方法包括：

取对照品10mg，置20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成0.5mg/ml的对照品储备液。

本发明还提出了一种快速测定银杏叶中多指标成分的方法，该方法采用超高效液相色谱-质谱联用技术对银杏叶进行检测；其中，

所述超高液相-串联质谱的色谱条件包括：

色谱柱：agilenteclipseplusc183.0×50mm，1.8μm；流动相：0.1％甲酸-甲醇(a)：0.1％甲酸-水(b)，所述检测的洗脱梯度为0-3min：25％-95％a；3-6min：95％a；6-7min：95％-25％a；7-8min：25％a；

所述超高效液相-串联质谱中的质谱为三重四极杆质谱。

进一步地，所述色谱条件还包括：柱温25～40℃，流速0.3～0.45ml/min。

具体地，所述色谱条件包括：柱温40℃，流速0.4ml/min，进样量：1μl。

具体地，所述超高液相-串联质谱的质谱条件包括：负离子esi电离源，三重四极杆检测器，离子源温度500℃，雾化气和辅助气为氮气，扫描方式为多反应监测模式(mrm)。

进一步地，所述方法中可选用的内标为甲苯磺丁脲。

具体地，所述多指标成分可包括银杏内酯a、银杏内酯b、银杏内酯c、银杏内酯j、白果内酯、银杏酸。

具体地，所述银杏酸可包括银杏酸c13:0、银杏酸c15:0、银杏酸c15:1、银杏酸c17:1或银杏酸c17:2。

进一步地，所述多指标成分以及内标的质谱参数包括：

本发明中的方法学考察可包括：

线性关系考察：按前述方法制备对照品储备液适量，混合，再用甲醇溶液依次精密稀释，制备成系列对照品溶液，并在每个浓度对照品溶液中加入一定量的内标溶液，使内标液的浓度保持在20ng/ml；用前述的lc-ms/ms检测方法(超高效液相色谱-质谱联用技术)进行检测；以待测物的浓度(c，ng/ml)为横坐标，目标分析物与内标峰面积比(y)为纵坐标，采用最小二乘法，进行回归运算，得其线性回归方程；

精密度考察：取同一混合对照品溶液，进行lc-ms/ms分析，连续重复进样6次，记录目标分析物与内标峰面积，计算其比值(a分析物/ais)的rsd值；

稳定性考察：按前述方法制备供试品溶液，分别于0h、2h、4h、6h、8h、12h、24h进行lc-ms/ms分析，记录各目标分析物与内标峰面积，计算其比值(a分析物/ais)的rsd值；

重复性考察：按前述方法制备供试品溶液，平行制备6份，测定目标分析物与内标峰面积，计算其含量的rsd值；

加样回收率考察：取干燥的银杏叶粉末约0.1g，精密称定，随机分为3组，分别加入一种或含多种(如多指标成分中的10种成分)成分的混合对照品溶液(低、中、高三个浓度，各3份)，其余按按照前述超高效液相色谱-质谱联用方法进行分析，记录a分析物/ais的值，分别计算10种指标成分的平均回收率和rsd值。

本发明样品中指标成分的含量测定中：不同来源的银杏叶均可按前述相应的方法制备供试品溶液，前述超高效液相色谱-质谱联用的条件下进行测定。其中，银杏叶的前置处理过程可包括：新鲜的银杏叶样品使用60℃热风干燥至恒重，再粉碎，获得干燥的银杏叶中粉。

本发明所建立的检测方法可以对不同来源的银杏叶样品中存在的多达10种主要指标性成分进行定性或定量，因此特别适用于药材和制剂的质量控制。该发明首次使用hplc-ms/ms方法研究银杏叶中银杏内酯类和银杏酸类化合物的含量测定，总分析时间为8分钟，可实现短时间内10种指标性成分的快速分析。与传统的hplc-elsd、hplc-uv方法相比，本发明的灵敏度和选择性更高，可检测含量为ng/ml级别的成分。

综上，本发明建立hplc-ms/ms法，同时测定银杏叶中银杏内酯a、银杏内酯b、银杏内酯c、银杏内酯j、白果内酯、银杏酸(如银杏酸c13：0、银杏酸c15：0、银杏酸c15：1、银杏酸c17：1、银杏酸c17：2)的含量，该方法简便快捷、灵敏度高，对银杏叶资源的开发利用和品质评价具有重要的科学意义。

附图说明

图1为混和标准品的mrm色谱图。

图2为银杏叶的mrm色谱图。

图3为银杏内酯a的二级质谱图。

图4为银杏内酯b的二级质谱图。

图5为银杏内酯c的二级质谱图。

图6为银杏内酯j的二级质谱图。

图7为白果内酯的二级质谱图。

图8为银杏酸c13：0的二级质谱图。

图9为银杏酸c15：0的二级质谱图。

图10为银杏酸c15：1的二级质谱图。

图11为银杏酸c17：1的二级质谱图。

图12为银杏酸c17：2的二级质谱图。

图13为甲苯磺丁脲的二级质谱图。

图14为不同提取方法对银杏内酯、银杏酸的提取效率的影响图。

图15为五种不同提取溶剂种对银杏内酯、银杏酸的提取效率的影响图。

图16为提取时间对银杏内酯、银杏酸的提取效率的影响图。

图17提取溶剂比例对银杏内酯、银杏酸提取效率的影响图。

图18料液比(g:ml)对银杏内酯、银杏酸提取效率的影响图。

图19为银杏叶在不同时间段银杏内酯类成分含量变化图。

图20为不同树龄银杏叶银杏内酯类成分含量图。

图21为大树龄银杏叶在不同时间段银杏内酯类成分含量变化图。

具体实施方式

本发明公开了一种银杏中多指标成分同时测定的检测方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。

在本发明的银杏叶中多指标成分含量测定的方法中，其中甲醇为merck公司的质谱级试剂；甲酸来自于美国roe公司；超纯水为实验室用赛默飞公司pacifictⅱ7超纯水仪自制；对照品纯度(银杏内酯c纯度94.0％，银杏酸c17：2纯度96.85％，其余均大于98％)，其中银杏酸类化合物及银杏内酯j购自上海源叶生物科技有限公司，其余成分均购自中国食品药品检定研究院。

在本发明的银杏叶中多指标成分的含量测定的方法中，所使用的仪器为：超高效液相色谱仪(lc-30ad，日本岛津公司)；三重四级杆质谱仪(api6500⁺，absciex公司)；万分之一电子分析天平(me204e，梅特勒-托利多上海仪器有限公司)；十万分之一电子天平(mettlerxs205，梅特勒-托利多上海有限公司)；dhg-9023a电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏仪器设备有限公司)；超声波清洗器(kh300db，昆山禾创超声仪器有限公司)。

除特别指出，本发明提供的技术方案中所用药品、试剂、仪器均可由常规渠道或市场购得。

银杏叶中多指标成分的检测方法

1仪器与试药

超高效液相色谱仪(lc-30ad，日本岛津公司)；质谱仪(api6500⁺，absciex公司)；万分之一电子分析天平(me204e，梅特勒-托利多上海仪器有限公司)；十万分之一电子天平(mettlerxs205，梅特勒-托利多上海有限公司)；超声波清洗器(kh300db，昆山禾创超声仪器有限公司)；pacifictⅱ7超纯水仪(美国赛默飞公司)；eppendorfcentrifuge5424r离心机(德国艾本德)；旋转蒸发仪(buchir-3型)。

银杏内酯a对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110862-201612)；银杏内酯b对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110863-201611)；银杏内酯c对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110864-201508)；银杏内酯j对照品(上海源叶生物科技有限公司，批号：d11j9g63336)；白果内酯对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110865-201507)；银杏酸c13:0对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111690-201604)；银杏酸c15:0对照品(中国药品生物制品检定所，批号：d27m9c56540)；银杏酸c15:1对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111762-200601)；银杏酸c17:1对照品(上海源叶生物科技有限公司，批号：y23m9h62018)；银杏酸c17:2对照品(上海源叶生物科技有限公司，批号：y04j9h64929)；甲醇(色谱纯，德国merck公司，lot：10934235805)；甲酸(hplc，美国roe公司，lot：6f2914)；超纯水由pacifictⅱ7超纯水仪纯水系统制得(thermofisherscientific，usa)。

药品来源：银杏叶采样时间为2018年4月至9月，地点江苏邳州，经江苏康缘药业股份有限公司执业药师吴舟鉴定均为银杏科植物银杏ginkgobilobal.的干燥叶。

2实验方法与结果

2.1溶液的配制

对照品溶液配制：分别称取银杏内酯a、银杏内酯b、银杏内酯c、银杏内酯j、白果内酯、银杏酸c13:0、银杏酸c15:0、银杏酸c15:1、银杏酸c17:1、银杏酸c17:2对照品约10mg，精密称定，置20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成0.5mg/ml的对照品储备液，于4℃冰箱内保存备用。

另取甲苯磺丁脲(内标is)对照品约10mg，精密称定，置20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为0.5mg/ml的储备液；精密吸取100μl至50ml量瓶，配制成浓度为1μg/ml的内标溶液。

2.2lc-ms/ms检测条件

2.2.1质谱条件的优化

(1)按“2.2”项下方法配制混和对照品及内标储备液，并用50％甲醇水溶液稀释，使待优化的化合物浓度约为10ng/ml；

(2)在analyst工作站上激活massonly，双击运行manualtuning；

(3)将待优化的混合对照品溶液吸入针泵中，手动将质谱连接到注射泵上，采用恒流方式进样，并将流速设置为10μl/min；

(4)使用q1scan确定各化合物母离子的质荷比；

(5)使用productionscan确定各化合物子离子的质荷比；

(6)根据步骤(4)(5)选出的母、子离子，组建mrm离子对，用“ramp”优化ce值、dp值，优化结果见表1。

(7)离子源为esi源；离子源温度(tem)500℃；雾化气(gs1)和辅助气(gs2)为氮气；扫描方式为多反应监测(mrm)，负离子模式；用于定量分析检测的离子对见表110个待测成分以及内标化合物的质谱参数表1。

表110个待测成分以及内标化合物的质谱参数

2.2.2色谱条件

色谱柱型号：agilenteclipseplusc18色谱柱(3.0*50mm，1.8μm)，柱温：40℃。流动相为0.1％甲酸甲醇(a)-0.1％甲酸水(b)，流速：0.6ml/min，梯度洗脱：0-3min：25％-95％a；3-6min：95％a；6-7min：95％-25％a；7-8min：25％-25％a，进样量：1μl。

采用上述方法所检测的结果如图1-13所示。

2.3供试品制备方法

2.3.1提取方式考察

(1)取干燥的银杏叶中粉1g，精密称定，置圆底烧瓶中，加纯水50ml加热回流提取1h，冷却，抽滤，续滤液用石油醚(30℃-60℃)振摇萃取多次，每次20ml，直至弃去的石油醚层为无色，水层用乙酸乙酯振荡提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液并加热浓缩至干，残渣加50％甲醇溶解并定容至25ml，摇匀滤过，稀释后，进样检测。

(2)取干燥的银杏叶中粉1g，精密称定，置圆底烧瓶中，加纯水50ml加热回流提取1h，冷却，抽滤，续滤液用乙酸乙酯振荡提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液并加热浓缩至干，残渣加50％甲醇溶解并定容至25ml，摇匀滤过，稀释后，进样检测。

(3)取干燥的银杏叶中粉1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加纯水50ml超声提取1h，冷却，抽滤，续滤液用石油醚(30℃-60℃)振摇萃取多次，每次20ml，直至弃去的石油醚层为无色，水层用乙酸乙酯振荡提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液并加热浓缩至干，残渣加50％甲醇溶解并定容至25ml，摇匀滤过，稀释后，进样检测。

(4)取干燥的银杏叶中粉1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加纯水50ml超声提取1h，冷却，抽滤，续滤液用乙酸乙酯振荡提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液并加热浓缩至干，残渣加50％甲醇溶解并定容至25ml，摇匀滤过，稀释后，进样检测。

(5)取干燥的银杏叶粉末0.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30min，取出放冷，用相应的溶剂补足减失的重量，摇匀滤过，稀释后，进样检测。

(6)取干燥的银杏叶粉末0.2g，精密称定，置于50ml锥形瓶中，锥形瓶中精密加入纯水溶解的的半纤维素酶溶液(80u/ml)10ml，置于50℃中水浴3h酶解，后向锥形瓶中加入30ml甲醇，超声处理30min，取出放冷，用相应的溶剂补足减失重量，摇匀滤过，稀释后，进样检测。

结果如图14所示，采用方法5的超声提取法可获得最高的提取率，且操作简单方便，故后续采用甲醇超声法作为提取方式进行后续研究。

2.3.2提取溶剂的考察

取干燥的银杏叶粉末5份，每份约0.5g，精密称定，分别置于5个50ml锥形瓶中，锥形瓶中分别精密加入甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯25ml，称定重量，超声处理1h，取出放冷，再用相应的溶剂补足减失的重量，摇匀滤过，减压蒸干，使用甲醇复溶并定容至25ml，稀释后进样检测。

结果如图15所示，使用氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇作为提取溶剂均可获得较好的提取效果，其中甲醇作为提取溶剂时可获得最佳提取效果，故后续采用甲醇作为提取溶剂进行后续研究。

2.3.3提取时间的考察

取干燥的银杏叶粉末4份，每份约0.2g，精密称定，分别置于4个50ml锥形瓶中，分别精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理20min、30min、40min、60min，取出放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，稀释后进样检测。

结果如图16所示，超声处理20～40min可获得较好提取效果，其中超声处理30min可获得最佳提取效果，故后续采用30min作为超声时间进行后续研究。

2.3.4提取溶剂比例的考察

取干燥的银杏叶粉末4份，每份约0.2g，精密称定，分别置于4个50ml锥形瓶中，分别精密加入25％、50％、75％、100％甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，取出放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，稀释后进样检测。

结果如图17所示，当使用75％及100％甲醇时，银杏内酯与银杏酸总提取率较高，针对于银杏内酯类成分，75％甲醇具有较好的提取效果，为了兼顾微量成分的含量测定，提取溶剂优先选用75％甲醇，进行后续研究。

2.3.5料液比的考察

取干燥的银杏叶粉末4份，每份约0.2g，精密称定，分别置于4个50ml锥形瓶中，锥形瓶中分别精密加入甲醇5ml、10ml、25ml、50ml，称定重量，超声处理30min，取出放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，分别稀释后，进样检测。

结果如图18所示，当料液比为1：125、1：50、1：25时可获得较好提取效果，当料液比为1：125时提取率最高，故采用1：125(0.2g:25ml)作为料液比进行后续研究。

综上，确定供试品溶液配制方法：取干燥的银杏叶粉末0.2g，精密称定，置于50ml锥形瓶中，精密加入75％甲醇25ml，称定重量，超声处理30min，取出放冷，再用相应的溶剂补足减失的重量，离心后取上清液，用甲醇稀释100倍后进样检测。

2.4方法学验证

2.4.1线性关系

取“2.1”项下方法制备的对照品储备液适量，混合，再用甲醇稀释，配制成6个系列梯度浓度的混合对照品溶液，在拟定的lc-ms/ms条件下测定。以待测物的浓度(c，ng/ml)为横坐标，目标分析物与内标峰面积比(y)为纵坐标，采用最小二乘法，进行回归运算，得其线性回归方程，各待测物的标准曲线方程及相关系数均由absciexmultiquant2.1数据处理软件自动计算获得。具体结果见表2，可知10个成分在选择的范围内线性关系良好。

表210种待测成分在系列对照品溶液中的浓度

2.4.2定量限和检测限

取标准曲线最低浓度的对照品溶液，用甲醇依次稀释成系列浓度标准溶液，分别进样分析。计算对照品色谱峰的信噪比(s/n)，s/n＝3时的对照品浓度即为最低检测限(lod)，s/n＝10时的对照品浓度即为最低定量限(loq)。结果如表3所示。

表3标准曲线范围、定量限和检测限

2.4.3精密度

取同一混合对照品溶液，进行lc-ms/ms分析，连续进样6次，记录目标分析物与内标峰面积，计算其比值(a分析物/ais)的rsd值，由表4结果可知，待测成分的rsd均小于4％，表明仪器的精密度良好。

表4精密度试验结果

2.4.4稳定性

按供试品制备方法项下方法制备供试品溶液，分别于0h、2h、4h、6h、8h进行lc-ms/ms分析，记录各目标分析物与内标峰面积，计算其比值(a分析物/ais)的rsd值，由表5结果可知，待测成分的rsd均小于4％，表明对照品溶液和供试品溶液在8h内稳定。

表5稳定性试验结果

2.4.5重复性

按供试品制备方法项下方法制备供试品溶液，平行6份，测定目标分析物与内标峰面积比值，计算含量及rsd值。由试验结果可知，待测成分的rsd均小于6％，符合2015年版《中华人民共和国药典》关于重复性考察的相关规定，表明本方法重复性较好。

表6重复性试验结果

2.4.6加样回收率

取干燥的银杏叶中粉约0.1g，精密称定，平行制备9份，随机分为3组，分别加入含10种成分的混合对照品溶液(低、中、高三个浓度，各3份)，其余按供试品溶液制备方法项下供试品溶液制备方法进行，按照上述检测条件进行分析，并将a分析物/ais的值带入标准曲线，由absciexmultiquant2.1数据处理软件计算，得到各待测物浓度，计算对照品的回收率及rsd值，结果见下表。实验结果显示，银杏内酯a、银杏内酯b、银杏内酯c、银杏内酯j、白果内酯、银杏酸c13:0、银杏酸c15:0、银杏酸c15:1、银杏酸c17:1、银杏酸c17:2的平均回收率分别为99.17％、95.59％、97.55％、93.46％、94.30％、97.39％、92.53％、106.41％、98.89％、101.33％，符合2015年版《中国药典》关于加样回收率限度的规定，表明该方法准确度良好。

表7加样回收率试验结果

2.5检测方法的应用

应用本方法对邳州地区采集的银杏叶样品进行了检测分析，结果如下表所示。

表8供试品银杏内酯类成分含量测定结果

同时参见图19，结果显示邳州地区的银杏叶在一年中，银杏内酯类成分含量变化整体呈先上升，后下降的趋势，一般在七至八月份达到最高值，随后下降。

表9供试品银杏内酯类成分含量测定结果

如表9所示以及同时参见图20，结果显示不同树龄的银杏叶，内酯类化合物含量不同，其中以两年生的银杏内酯类成分的含量最高。随着树龄升高，银杏内酯类成分的含量随之下降。

表10供试品银杏酸类化合物含量测定结果

此外，本发明对大树龄银杏叶在不同时间段银杏内酯类成分含量变化进行了研究，如图21所示，大树龄的银杏叶样品在一年当中，银杏酸类化合物含量变化呈现先升高，后降低的趋势，在七月份其含量达到最高值。

本发明开发出的方法能快速地对银杏叶进行检测，特别适用于药材和制剂的质量控制。利用该方法对银杏叶在不同时间段银杏内酯类成分含量变化、不同树龄银杏叶银杏内酯类成分含量、以及大树龄银杏叶在不同时间段银杏内酯类成分含量变化进行了研究，发现高价值的银杏叶药材，为银杏叶的种植和开发提供了依据。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。