1.本发明涉及药物分析领域，具体涉及一种桉柠蒎肠溶软胶囊溶出的测定方法。
背景技术：
2.桉柠蒎肠溶软胶囊是一种黄色的肠溶软胶囊，内容物为浅黄色透明油状液体，由桃金娘科桉属和芸香科桔属植物的提取物组成，主要成分为桉油精，柠檬烯与α-蒎烯。囊壳主要由明胶组成，在囊壳外面包裹一层肠溶包衣。
3.桉柠蒎肠溶软胶囊为粘液溶解性祛痰药，适用于急慢性鼻窦炎、急慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张、肺脓肿、慢性阻塞性肺部疾患、肺部真菌感染、肺结核和矽肺等呼吸道疾病，亦可用于支气管造影术后，促进造影剂的排出。
4.口服固体制剂的质量受到处方设计、制剂工艺、贮存条件等多方面因素的影响，溶出和吸收过程决定其有效性。溶出度与崩解时限均是固体制剂控制的重要指标。崩解系指口服固体制剂在规定条件下全部崩解溶散或成碎粒，除不溶性包衣材料或破碎的胶囊壳外，应全部通过筛网，仅限于现象观察，故崩解时限检测无法具体反映药物体外的溶出行为。目前桉柠蒎肠溶软胶囊在现有标准中，有崩解时限的检查，尚无溶出度检测，不能很好的反映桉柠蒎肠溶软胶囊在体内外的溶出情况。
5.因此，目前亟待需要开发一种桉柠蒎肠溶软胶囊检测溶出度的方法。
技术实现要素：
6.本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本发明提出了含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的胶囊的溶出度检测方法和含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的胶囊的质量控制方法，利用该溶出度检测方法可以快速、充分地使胶囊中的内容物溶出，提高溶出度，具有准确性强、灵敏度高、重复性好、操作简便、快捷等优点，可以利用该方法有效地把控胶囊的质量，应用前景好。
7.在本发明的一个方面，本发明提出了一种含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的胶囊的溶出度检测方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将溶出介质和含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的胶囊置于溶出仪中，使所述沉降篮在往复筒中上下往复运动，以便使所述胶囊的囊壳破裂，内容物溶出至溶出介质中，得到溶出液；分别将所述溶出液和含有桉油精标准品、柠檬烯标准品和α-蒎烯标准品的对照品溶液进行气相色谱检测，并基于检测结果确定所述胶囊的溶出度；所述溶出介质选自含有非离子型表面活性剂的磷酸盐缓冲液。
8.根据本发明实施例的方法中，胶囊与溶出介质位于溶出仪中，通过操作溶出仪使胶囊的囊壳破裂，内容物溶出至溶出介质中。通过对该内容物进行气相色谱检测，以便确定溶出度。发明人经过多次检测发现，每次所测溶出度偏差较大，且稳定性低，重复性差。基于此，发明人经深入研究发现，由于胶囊的内容物为油性基质，囊壳破裂后内容物进入溶出介质中，会漂浮在溶出介质的表面，聚集成大小不一的油滴，即使增大机械搅拌的力度来提高油滴的分散，样品之间的溶出度偏差仍很大。由于每次无法对所有溶出液都进行检测，而是
仅收集部分用于检测，因溶出液不均匀，导致针对同一溶出液每次收集的组成存在差异，进而导致检测结果不准确，偏差大，稳定性和重复性低。为此，发明人以磷酸盐缓冲液作为溶出介质，在其中添加非离子型表面活性剂，可以使内容物均匀分散于溶出介质中，形成均一体系。当收集一定量的溶出液进行后续检测时，每次收集的溶出液组成均一，由此，提高了检测结果的准确性、稳定性和重复性。
9.根据本发明的实施例，上述含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的胶囊的溶出度检测方法还可以具有下列附加技术特征：
10.根据本发明的实施例，所述溶出仪选自往复筒溶出仪，所述溶出介质置于所述往复筒溶出仪的溶出杯中，所述胶囊置于沉降篮中，使所述沉降篮以进行上下往复运动，以便使所述胶囊的囊壳破裂，其中，所述磷酸盐缓冲液中非离子型表面活性剂的含量为0.5w/w％～5w/w％。发明人经过大量实验得到上述较佳非离子型表面活性剂的含量，由此，使内容物均匀分散于溶出介质中，形成均一体系，进一步提高检测结果的准确性、稳定性和重复性。若非离子型表面活性剂的添加量过多，不利于胶囊囊壳吸水溶胀破裂；若添加量过少，内容物与溶出介质分散性偏低。在一些优选实施例中，磷酸盐缓冲液中非离子型表面活性剂的含量为0.8w/w％～3w/w％。
11.根据本发明的实施例，所述磷酸盐缓冲液的离子强度为0.01～0.1mol/l。发明人发现，磷酸盐缓冲液的离子强度会影响内容物的溶出，采用上述离子强度，可以提高内容物的溶出度。在一些实施例中，磷酸盐缓冲液的离子强度为0.03～0.07mol/l。
12.根据本发明的实施例，所述非离子型表面活性剂选自辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、聚氧乙烯(35)蓖麻油、脂肪醇聚氧乙烯醚葡糖苷的至少之一。由此，以便于使内容物均匀分散于溶出介质中，形成均一体系。
13.根据本发明的实施例，所述磷酸盐缓冲液的ph值为6.5～7.4。由于目前的胶囊为肠溶制剂，而人体肠道的ph值约4.8～8.2，因此，为了模拟胶囊在肠道内的溶出特性，选择接近肠道的ph值。在一些优选实施例中，磷酸盐缓冲液的ph值为6.6～7.0。
14.根据本发明的实施例，所述磷酸盐缓冲液中进一步含有消泡剂。若不添加消泡剂，则体系中起泡严重，延长胶囊囊壳溶胀破裂的时间，影响取样均匀性，导致主成分测定的准确性。需要说明的是，本发明对于消泡剂的添加顺序不做严格限定，消泡剂可以与溶出介质中的其他组分混合一起，然后添加到往复筒中；也可以先将溶出介质中的其他物质加入到往复筒中，再向往复筒中加入消泡剂。
15.根据本发明的实施例，所述消泡剂选自二甲基硅油或正辛醇。
16.根据本发明的实施例，所述消泡剂的含量为0.004v/v％～0.1v/v％。发明人经过大量实验得到上述较优含量，由此，可缩短胶囊囊壳溶胀破裂时间，增加溶出液中主成分的均匀性；若消泡剂的添加量过多，影响表面活性剂对主成分的乳化效果，导致主成分不能均匀分散，影响溶出结果的平行性。在一些优选实施例中，消泡剂的含量为0.006v/v％～0.04v/v％。
17.根据本发明的实施例，所述沉降篮的网孔目数为20目～30目。囊壳在溶出介质中发生交联，吸水胀大后表现为橡胶质胀大的水不溶膜，由于油性内容物的密度小，导致胶囊从沉降篮的通孔中漏出，上浮到溶出介质顶部，导致囊壳难以破裂，从而延长或阻止药物的释放。为此，发明人对沉降篮目数研究，当沉降篮的网孔目数为20目～30目，其网孔小于目
前所公开的胶囊粒径，可以避免胶囊从通孔漏出，以充分接触溶出介质，从而提高溶出度。若通孔孔径过大，容易导致胶囊漏出；若通孔孔径过小，不利于溶出介质通过通孔进与胶囊充分接触，溶出度偏低。
18.根据本发明的实施例，所述上下往复运动的频率为20～40dmp。由此，可以快速、充分地使胶囊破裂、内容物溶出。
19.根据本发明的实施例，将所述溶出液进行所述气相色谱检测之前，进行如下处理：将所述溶出液、破乳剂和稀释剂进行混合，将所得混合液进行离心，收集上清液，再将所述上清液进行过滤，收集滤液进行所述气相色谱检测。溶出介质中添加的非离子表面活性剂使油性的内容物乳化，从而与溶出介质形成乳液。采用破乳剂对其进行破乳，以便使乳液中的桉油精、柠檬烯和α-蒎烯充分释放，有助于后续对其进行检测。
20.根据本发明的实施例，所述破乳剂选自异丙醇，基于1ml所述溶出液，所述破乳剂的用量为2ml～9ml。由此，以便将乳液完全破乳，使得桉油精、柠檬烯和α-蒎烯充分释放，有助于后续对其进行检测，提高检测结果的准确性。在一些优选实施例中，基于1ml所述溶出液，所述破乳剂的用量为2ml～5ml。
21.根据本发明的实施例，所述离心的转速为10000rpm～15000rpm，时间为10～20min。由此，以便分离桉油精、柠檬烯和α-蒎烯。
22.在本发明的另一方面，本发明提出了一种含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的胶囊的质量控制方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：按照前面所述方法确定所述胶囊的溶出度；将测得的溶出度与阈值进行比较，并基于比较结果确定所述胶囊质量是否达标。如前所述，采用前述检测方法可以准确测定含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的胶囊的溶出度，从而可以判断该胶囊的质量是否符合要求。具体地，阈值大小不作严格限定，可以根据实际需要灵活选择。
23.需要说明的是，前面针对含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的胶囊的溶出度检测方法所描述的特征和优点，同样适用于该含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的胶囊的质量控制方法，在此不再赘述。
具体实施方式
24.通过下面的实施例对本发明进行进一步的描述。下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。
25.实施例1
26.在该实施例中，按照下列方法测定溶出度：
27.(1)溶出介质的配制：称取磷酸二氢钾1.7g和无水磷酸氢二钠1.775g，加水适量使溶解后，定容至1000ml，得到ph6.8缓冲溶液。称取labrasol 12.73g与聚氧乙烯(35)蓖麻油7.27g，置烧杯中，加1000ml ph6.8缓冲溶液溶解，搅拌均匀，得表面活性剂为2％的溶出介质，离子强度为0.05mol/l。
28.(2)对照品溶液：精密称取工作对照品桉油精50mg、柠檬烯35mg、α-蒎烯12mg，置同一20ml容量瓶中，加异丙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取贮备液1ml，置20ml容量瓶中，加异丙醇稀释，定容，摇匀，即得。
29.(3)供试品溶液的制备：使用往复筒溶出仪，温度为37℃
±
0.5℃，往复频率30dmp，往复筒顶部与底部筛网目数均为30目，加入250ml步骤(1)所得溶出介质和50μl消泡剂二甲基硅油。取1粒桉柠蒎肠溶胶囊放入20目的沉降篮中，再放入往复筒中，分别在15、30、45、60、90min取样2ml。精密量取1ml溶出液置于5ml容量瓶中，加异丙醇破乳、稀释、定容。摇匀后，取部分溶液12000rpm，离心15min，取上清液用0.45μm滤膜过滤，即得供试品溶液。
30.(4)溶出度测定：对照品溶液、供试品溶液各取1μl，注入气相色谱仪检测。色谱条件：ov-17 30m*0.53mm，1μm色谱柱；柱温为95℃，保持10min；压力4.0psi；进样量:1μl。按外标法计算三种主成分的含量，根据溶出度的计算公式计算三主成分的溶出度。30min时桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的溶出度分别为89％、87％、88％。
31.溶出度的计算公式：
32.校正因子(f)＝ar/cr
33.式中：ar为对照品中主成分的峰面积
34.cr为对照品中主成分的浓度
35.溶出度(％)＝f
×
100％
×ax
×v1
/m
标
36.式中：a
x
为供试品溶液中主成分的峰面积
37.f为校正因子
38.m
标
为样品标示量
39.累积溶出度(％)＝xn+(x1+x2+
……
+x
n-1
)
×v2
/v140.式中：xn为第n次测得的溶出度，％
41.x1为第1次测得的溶出度，％
42.x2为第2次测得的溶出度，％
43.x
n-1
为第n-1次测得的溶出度，％
[0044]v1
为溶出介质的体积，ml
[0045]v2
为每次取样后需补充的体积，ml
[0046]
实施例2
[0047]
在该实施例中，按照下列方法测定溶出度：
[0048]
(1)溶出介质的配制：称取磷酸二氢钾1.7g和无水磷酸氢二钠1.775g，加水适量使溶解后，定容至1000ml，得到ph6.8缓冲溶液。称取labrasol 6.36g与聚氧乙烯(35)蓖麻油3.64g，置烧杯中，加1000ml ph6.8缓冲溶液溶解，搅拌均匀，得表面活性剂为1％的溶出介质，离子强度为0.05mol/l。
[0049]
(2)对照品溶液的制备：精密称取工作对照品桉油精50mg、柠檬烯35mg、α-蒎烯12mg，置同一20ml容量瓶中，加异丙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取贮备液1ml，置20ml容量瓶中，加异丙醇稀释，定容，摇匀，即得。平行配制2份。
[0050]
(3)供试品溶液的制备：使用往复筒溶出仪，温度为37℃
±
0.5℃，往复频率30dmp，往复筒顶部与底部筛网目数均为30目，加入250ml步骤(1)所得溶出介质和20μl消泡剂二甲基硅油。取1粒桉柠蒎肠溶胶囊放入20目的沉降篮中，再放入往复筒中，分别在15、30、45、60、90分钟取样2ml。精密量取1ml溶出液置于5ml容量瓶中，加异丙醇破乳、稀释、定容。摇匀后，取部分溶液10000rpm，离心20min，取上清液用0.45μm滤膜过滤，即得供试品溶液。
[0051]
(4)溶出度测定：对照品溶液、供试品溶液各取1μl，注入气相色谱仪检测。色谱条
件：ov-17 30m*0.53mm，1μm色谱柱；柱温为95℃，保持10min；压力4.0psi；进样量:1μl。按外标法计算三种主成分的含量，根据溶出度的计算公式计算三主成分的溶出度。30min时桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的溶出度分别为86％、88％、87％。
[0052]
实施例3
[0053]
在该实施例中，按照下列方法测定溶出度：
[0054]
(1)溶出介质的配制：称取磷酸二氢钾1.7g和无水磷酸氢二钠1.775g，加水适量使溶解后，定容至1000ml，得到ph6.8缓冲溶液。称取labrasol 12.73g与聚氧乙烯(35)蓖麻油7.27g，置烧杯中，加1000ml ph6.8缓冲溶液(jp)溶解，搅拌均匀，得表面活性剂为2％的溶出介质，离子强度为0.05mol/l。
[0055]
(2)对照品溶液的制备：精密称取工作对照品桉油精50mg、柠檬烯35mg、α-蒎烯12mg，置同一20ml容量瓶中，加异丙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取贮备液1ml，置20ml容量瓶中，加异丙醇稀释，定容，摇匀，即得。平行配制2份。
[0056]
(3)供试品溶液的制备：使用往复筒溶出仪，温度为37℃
±
0.5℃，往复频率20dmp，往复筒顶部与底部筛网目数均为30目，加入250ml步骤(1)所得溶出介质和50μl消泡剂二甲基硅油。取1粒桉柠蒎肠溶胶囊放入20目的沉降篮中，再放入往复筒中，分别在15、30、45、60、90分钟取样2ml。精密量取1ml溶出液置于5ml容量瓶中，加异丙醇破乳、稀释、定容。摇匀后，取部分溶液12000rpm，离心15min，取上清液用0.45μm滤膜过滤，即得供试品溶液。
[0057]
(4)溶出度测定：对照品溶液、供试品溶液各取1μl，注入气相色谱仪检测。色谱条件：ov-17 30m*0.53mm，1μm色谱柱；柱温为95℃，保持10min；压力4.0psi；进样量:1μl。按外标法计算三种主成分的含量，根据溶出度的计算公式计算三主成分的溶出度。30min时三主成分桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的溶出度分别为85％、85％、86％。
[0058]
实施例4
[0059]
在该实施例中，按照下列方法测定溶出度：
[0060]
(1)溶出介质的配制：称取磷酸二氢钾1.7g和无水磷酸氢二钠1.775g，加水适量使溶解后，定容至1000ml，得到ph6.8缓冲溶液。称取脂肪醇聚氧乙烯醚葡糖苷20g，置烧杯中，加1000ml ph6.8缓冲溶液(jp)溶解，搅拌均匀，得表面活性剂为2％的溶出介质，离子强度为0.05mol/l。
[0061]
(2)对照品溶液的制备：精密称取工作对照品桉油精50mg、柠檬烯35mg、α-蒎烯12mg，置同一20ml容量瓶中，加异丙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取贮备液1ml，置20ml容量瓶中，加异丙醇稀释，定容，摇匀，即得。平行配制2份。
[0062]
(3)供试品溶液的制备：使用往复筒溶出仪，温度为37℃
±
0.5℃，往复频率20dmp，往复筒顶部与底部筛网目数均为30目，加入250ml步骤(1)所得溶出介质和50μl消泡剂二甲基硅油。取1粒桉柠蒎肠溶胶囊放入20目的沉降篮中，再放入往复筒中，分别在15、30、45、60、90分钟取样2ml。精密量取1ml溶出液置于5ml容量瓶中，加异丙醇破乳、稀释、定容。摇匀后，取部分溶液12000rpm，离心15min，取上清液用0.45μm滤膜过滤，即得供试品溶液。
[0063]
(4)溶出度测定：对照品溶液、供试品溶液各取1μl，注入气相色谱仪检测。色谱条件：ov-17 30m*0.53mm，1μm色谱柱；柱温为95℃，保持10min；压力4.0psi；进样量:1μl。按外标法计算三种主成分的含量，根据溶出度的计算公式计算三主成分的溶出度。30min时三主成分桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的溶出度分别为82％、85％、81％。
[0064]
对比例1
[0065]
在该对比例中，按照下列方法测定溶出度：
[0066]
(1)溶出介质的配制：称取磷酸二氢钾1.7g和无水磷酸氢二钠1.775g，加水适量使溶解后，定容至1000ml，得到ph6.8缓冲溶液。
[0067]
(2)对照品溶液：精密称取工作对照品桉油精50mg、柠檬烯35mg、α-蒎烯12mg，置同一20ml容量瓶中，加异丙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取贮备液1ml，置20ml容量瓶中，加异丙醇稀释，定容，摇匀，即得。
[0068]
(3)供试品溶液的制备：使用往复筒溶出仪，温度为37℃
±
0.5℃，往复频率30dmp，往复筒顶部与底部筛网目数均为30目，加入250ml步骤(1)所得溶出介质。取1粒桉柠蒎肠溶胶囊放入20目的沉降篮中，再放入往复筒中，分别在15、30、45、60、90min取样2ml。精密量取1ml溶出液置于5ml容量瓶中，加异丙醇稀释、定容。摇匀后，取部分溶液12000rpm，离心15min，取上清液用0.45μm滤膜过滤，即得供试品溶液。
[0069]
(4)溶出度测定：对照品溶液、供试品溶液各取1μl，注入气相色谱仪检测。色谱条件：ov-17 30m*0.53mm，1μm色谱柱；柱温为95℃，保持10min；压力4.0psi；进样量：1μl。按外标法计算三种主成分的含量，根据溶出度的计算公式计算三主成分的溶出度。30min时三主成分桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的溶出度均低于20％。
[0070]
该对比例中，由于未添加非离子表面活性剂，导致囊壳不能完全破裂，内容物无法溶出，测定溶出度较低。
[0071]
对比例2
[0072]
在该对比例中，按照下列方法测定溶出度：
[0073]
(1)溶出介质的配制：
①
0.2mol/l磷酸二氢钾溶液：准确称取磷酸二氢钾27.22g，用水溶解并稀释至1000ml，备用；
②
0.2mol/l氢氧化钠溶液：准确称取氢氧化钠4.00g，加水溶解并稀释至500ml，备用；
③
量取250ml 0.2mol/l磷酸二氢钾溶液与112ml 0.2mol/l氢氧化钠溶液，搅拌均匀，加水稀释至1000ml，摇匀，用ph计测定溶液的ph值，若未达到目标值，用磷酸二氢钾或氢氧化钠溶液调节ph值为6.8过滤，即得(ph
±
0.02)。称取labrasol 12.73g与聚氧乙烯(35)蓖麻油7.27g，置烧杯中，加1000ml ph6.8缓冲溶液(cp)溶解，搅拌均匀，得表面活性剂为2％的溶出介质，离子强度为0.1362mol/l。
[0074]
(2)对照品溶液：精密称取工作对照品桉油精50mg、柠檬烯35mg、α-蒎烯12mg，置同一20ml容量瓶中，加异丙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取贮备液1ml，置20ml容量瓶中，加异丙醇稀释，定容，摇匀，即得。
[0075]
(3)供试品溶液的制备：使用往复筒溶出仪，温度为37℃
±
0.5℃，往复频率30dmp，往复筒顶部与底部筛网目数均为30目，加入250ml步骤(1)所得溶出介质和50μl消泡剂二甲基硅油。取1粒桉柠蒎肠溶胶囊放入20目的沉降篮中，再放入往复筒中，分别在15、30、45、60、90min取样2ml。精密量取1ml溶出液置于5ml容量瓶中，加异丙醇破乳、稀释、定容。摇匀后，取部分溶液12000rpm，离心15min，取上清液用0.45μm滤膜过滤，即得供试品溶液。
[0076]
(4)溶出度测定：对照品溶液、供试品溶液各取1μl，注入气相色谱仪检测。色谱条件：ov-17 30m*0.53mm，1μm色谱柱；柱温为95℃，保持10min；压力4.0psi；进样量：1μl。按外标法计算三种主成分的含量，根据溶出度的计算公式计算三主成分的溶出度。
[0077]
30min时桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的溶出度均为0(30min时囊壳未破裂)，60min时三
主成分的溶出度均小于20％。
[0078]
在该对比例中，溶出介质的离子强度偏大，该条件下，囊壳在30min时均未破裂，60min时主成分的溶出度均小于20％。而实施例1中采用离子强度为0.05mol/l的溶出介质进行溶出试验，结果显示，30min时主成分溶出度大于80％。由此，表明采用低离子强度的溶出介质，利于囊壳的快速溶胀，有利于内容物的有效溶出。
[0079]
对比例3
[0080]
在该对比例中，按照下列方法测定溶出度：
[0081]
(1)溶出介质的配制：称取磷酸二氢钾1.7g和无水磷酸氢二钠1.775g，加水适量使溶解后，定容至1000ml，得到ph6.8缓冲溶液。称取labrasol 12.73g与聚氧乙烯(35)蓖麻油7.27g，置烧杯中，加1000ml ph6.8缓冲溶液溶解，搅拌均匀，得表面活性剂为2％的溶出介质。
[0082]
(2)对照品溶液：精密称取工作对照品桉油精50mg、柠檬烯35mg、α-蒎烯12mg，置同一20ml容量瓶中，加异丙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取贮备液1ml，置20ml容量瓶中，加异丙醇稀释，定容，摇匀，即得。
[0083]
(3)供试品溶液的制备：使用往复筒溶出仪，温度为37℃
±
0.5℃，往复频率30dmp，往复筒顶部与底部筛网目数均为30目，加入250ml步骤(1)所得溶出介质和50μl消泡剂二甲基硅油。取1粒桉柠蒎肠溶胶囊放入10目的沉降篮中，再放入往复筒中，分别在15、30、45、60、90min取样2ml。精密量取1ml溶出液置于5ml容量瓶中，加异丙醇破乳、稀释、定容。摇匀后，取部分溶液12000rpm，离心15min，取上清液用0.45μm滤膜过滤，即得供试品溶液。
[0084]
(4)溶出度测定：对照品溶液、供试品溶液各取1μl，注入气相色谱仪检测。色谱条件：ov-17 30m*0.53mm，1μm色谱柱；柱温为95℃，保持10min；压力4.0psi；进样量：1μl。按外标法计算三种主成分的含量，根据溶出度的计算公式计算三主成分的溶出度。
[0085]
30min时桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的溶出度均为0，90min时三主成分的溶出度均小于20％。囊壳溶胀后从沉降篮孔隙中钻出，漂浮到溶出介质表面，60min时囊壳未破裂。在该对比例中，使用10目沉降篮，目的是把有效固定软胶囊在往复筒底部，但是由于10目沉降篮孔径过大，软胶囊囊壳在溶胀破裂前从沉降篮孔隙中钻出，漂浮在溶出介质表面，溶出60min时，囊壳未破裂。而使用20目沉降篮，沉降篮篮孔比10目小，但是可以使软胶囊与溶出介质充分接触，在往复筒上下往复的动力作用下，囊壳快速溶胀破裂，实现内容物的有效溶出。
[0086]
对比例4
[0087]
在该对比例中，按照下列方法测定溶出度：
[0088]
(1)溶出介质的配制：称取磷酸二氢钾1.7g和无水磷酸氢二钠1.775g，加水适量使溶解后，定容至1000ml，得到ph6.8缓冲溶液。称取labrasol 12.73g与聚氧乙烯(35)蓖麻油7.27g，置烧杯中，加1000ml ph6.8缓冲溶液溶解，搅拌均匀，得表面活性剂为2％的溶出介质。
[0089]
(2)对照品溶液：精密称取工作对照品桉油精50mg、柠檬烯35mg、α-蒎烯12mg，置同一20ml容量瓶中，加异丙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取贮备液1ml，置20ml容量瓶中，加异丙醇稀释，定容，摇匀，即得。
[0090]
(3)供试品溶液的制备：使用往复筒溶出仪，温度为37℃
±
0.5℃，往复频率30dmp，
往复筒顶部与底部筛网目数均为30目，加入250ml步骤(1)所得溶出介质和100μl消泡剂二甲基硅油。取1粒桉柠蒎肠溶胶囊放入20目的沉降蓝中，再放入往复筒中，分别在15、30、45、60、90min取样2ml。精密量取1ml溶出液置于5ml容量瓶中，加溶出介质稀释、定容，摇匀后，取适量溶液用0.45μm滤膜过滤，即得供试品溶液。
[0091]
(4)溶出度测定：对照品溶液、供试品溶液各取1μl，注入气相色谱仪检测。色谱条件：ov-17 30m*0.53mm，1μm色谱柱；柱温为95℃，保持10min；压力4.0psi；进样量：1μl。按外标法计算三种主成分的含量，根据溶出度的计算公式计算三主成分的溶出度。30min时三主成分桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的溶出度分别为30％、28％、37％。
[0092]
当溶出液未采取任何破乳方式处理时，其主成分的检出情况较差，说明溶出液进行破乳处理是非常必要的。
[0093]
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
[0094]
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。