1.本发明涉及的是中药复方提取工艺领域，具体的说是一种经典名方“开心散”以主要活性成分为指标的提取工艺及指纹图谱、化学成分的确定。
背景技术：
2.开心散为经典名方，最早记载于唐代孙思邈所著的《备急千金要方》中，由人参、远志、菖蒲、茯苓四味中药组成，具有益气养心、安神定志等功效。《医心方》、《孙真人之千金方》中亦有收载同名方“开心散”，药味与《备急千金要方》中开心散相同，剂量各有不同，但功效、主治相似。现代研究表明开心散具有多种药理活性。（1）抗抑郁的作用：抑郁症的发生可能与中枢神经系统中5-羟色胺（5-ht）、去甲肾上腺素（ne）和多巴胺（da）等单胺类神经递质释放异常，突触间隙含量下降，神经递质受体数量异常有关。开心散能够促进脑内5-ht合成释放，提高ne和多巴胺da含量水平。（2）抗痴呆，改善学习记忆的作用：开心散对d-半乳糖诱导、β-淀粉样蛋白（aβ）注射、东莨菪碱和及快速老化的samp8小鼠等多种拟阿尔茨海默症 (ad) 动物模型的学习记忆障碍有改善作用。（3）抗氧化、抗衰老的作用：超氧化物歧化酶 (sod) 可抑制脂质过氧化反应, 降低过氧化脂质及丙二醛（mda）含量, 而过氧化氢酶可清除sod歧化作用后而产生的过氧化氢，进而减慢机体氧化速度。开心散能明显减少老年大鼠肝组织和血浆中sod含量, 脑组织和血浆中mda含量；提高d-半乳糖诱导的亚急性衰老模型小鼠脑内、肝脏中sod活性，达到延缓衰老的作用。（4）抗疲劳的作用：开心散能增加小鼠体内糖原储备, 维持血糖水平延缓疲劳出现，也能降低肌肉中乳酸浓度，进一步缓解疲劳。（5）促进神经细胞分化和再生的作用：开心散可以促进胶质细胞神经营养因子ngf、bdnf和gdnf的mrna和蛋白的表达, 且有明显的剂量依赖性。
3.开心散具有诸多药理活性且其在临床上的应用也是极为广泛的，其发挥药效主要与复方中各味药中的主要活性成分有关，组方药味是开心散发挥药效作用的必要条件，而各味中药中的活性成分才是其真正的药效物质基础。开心散中的主要活性成分包括人参中的人参皂苷，远志中的皂苷类、糖酯类、酮类成分，石菖蒲中的α-细辛醚，β-细辛醚和γ-细辛醚等挥发性成分，茯苓中的三萜酸和多糖类成分。其中人参中的人参皂苷rb1、rg1、re，远志中的皂苷元、远志口山酮ⅲ、糖酯a（tfsa）、寡糖酯2,3,6
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二芥子酰基蔗糖、西伯利亚远志糖a5、西伯利亚远志糖a6，石菖蒲中的α-细辛醚、β-细辛醚等已被证实可作为开心散的质量控制成分。但目前其加工提取方式多以水煎液为主，并没有以主要活性成分为指标去考察，势必会影响其中有效活性成分的含量或水平，从而对药效产生影响。其沿用的传统提取工艺，限制了开心散的应用和发展。因此对开心散提取工艺的考察可以使这一传统中药复方焕发新的生命力，进一步扩大其在现代临床方面的应用。
技术实现要素：
4.本发明所要解决的问题在于确定经典名方“开心散”以主要活性成分为指标的提取工艺，主要是建立“开心散”的指纹图谱和化学成分，为进一步探讨其在药理方面的作用
提供一种依据。
5.为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：经典名方“开心散”主要成分的不同提取工艺方法，包括步骤：（1）以提取溶剂（a）、料液比（b）、提取时间（c）为影响因素，对其进行单因素考察；（2）开心散醇提样品和水提液样品的制备；（3）开心散供试品溶液制备；（4）开心散uplc色谱条件的确立；（5）开心散uplc指纹图谱的确立（6）开心散精密度、重复性、稳定性、线性及加样回收率等方法学考察；（7）采用uplc、gc或液质联用技术等测定开心散中个四味中药的主要活性成分含量；（8）以提取溶剂（a）、料液比（b）、提取时间（c）为影响因素，主要活性成分含量为评分，正交试验优化提取工艺，综合考虑时间、成本等各方面因素，选择理论最优工艺。
6.本发明具有如下有点：本发明以提取溶剂（a）、料液比（b）、提取时间（c）为影响因素、复方中各味药主要活性成分为评价指标，进行单因素考察和正交试验，最终选择理论的最优提取工艺，为进一步的研究开心散药效物质基础、推动其临床应用及中药现代化奠定一定的基础。
具体实施方式
7.下面结合实施例对本发明的上述发明内容作进一步的详细描述。 但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段，做出各种替换和变更，均应包括在本发明的范围内。
8.实施例1（1）对开心散中四味中药人参、远志、石菖蒲及茯苓进行收集；（2）按照单因素对开心散样品溶液进行制备，提取溶剂分为超纯水、50%乙醇和70%乙醇；料液比分为1：8、1：10、1：12；提取时间分为30min、60min、90min；（3）对uplc的条件，如色谱柱、流动相、梯度洗脱、最大吸收波长、柱温、样品室温度等条件进行考察；（4）开心散uplc色谱条件建立后，对不同来源四味中药进行组方，形成12批次开心散样品，建立开心散的uplc指纹图谱；（5）之后对其精密度、重复性、稳定性、线性及加样回收率等方法学考察；采用uplc测定不同提取工艺的开心散中人参的主要活性成分人参皂苷rg1、人参皂苷re及人参皂苷rb1、远志的主要活性成分远志口山酮ⅲ、3，6'-二芥子酰基蔗糖、石菖蒲的主要活性成分α-细辛醚和β-细辛醚、茯苓的主要活性成分去氢土莫酸、茯苓酸和去氢茯苓酸的含量；（6）最后，以以提取溶剂（a）、料液比（b）、提取时间（c）为影响因素，主要活性成分含量为评分，正交试验优化提取工艺，综合考虑时间、成本等各方面因素，选择理论最优工艺。
9.实施例2（1）对开心散中四味中药人参、远志、石菖蒲及茯苓按照其主要产地进行收集；（2）按照单因素对开心散样品溶液进行制备，提取溶剂分为超纯水、70%乙醇和85%乙醇；料液比分为1：8、1：10、1：12；提取时间分为30min、60min、90min；（3）对lc-gc的条件，如色谱柱、载气的种类及流速、进样速度、进样量、气化温度、柱温等条件进行考察；（4）开心散lc-gc条件建立后，建立开心散的lc-gc指纹图谱，并对其精密度、重复性、稳定性、线性及加样回收率等方法学考察；（5）采用lc-gc法测定不同提取工艺的开心散中人参的主要活性成分人参皂苷rg1、人参皂苷re及人参皂苷rb1、远志的主要活性成分远志口山酮ⅲ、3，6'-二芥子酰基蔗糖、石菖蒲的α-细辛醚和β-细辛醚等挥发性成分、茯苓的主要活性成分去氢土莫酸、茯苓酸和去氢茯苓酸的含量；（6）最后，以以提取溶剂（a）、料液比（b）、提取时间（c）为影响因素，主要活性成分含量为评分，正交试验优化提取工艺，综合考虑时间、成本等各方面因素，选择理论最优工艺。
10.实施例3（1）对开心散中四味中药人参、远志、石菖蒲及茯苓按照其主要产地进行收集；（2）按照单因素对开心散样品溶液进行制备，提取溶剂分为超纯水、70%乙醇和85%乙醇；料液比分为1：8、1：10、1：12；提取时间分为30min、60min、90min；（3）对lc-ms的条件，如色谱柱、流动相、梯度洗脱、最大吸收波长、柱温、样品室温度、毛细管温度、汽化温度、鞘气流速、辅助气流速等条件进行考察；（4）开心散lc-ms条件建立后，建立12批次开心散lc-ms的指纹图谱对其精密度、重复性、稳定性、线性及加样回收率等方法学考察；（5）采用lc-gc法测定不同提取工艺的开心散中人参的主要活性成分人参皂苷rg1、人参皂苷re及人参皂苷rb1、远志的主要活性成分远志口山酮ⅲ、3，6'-二芥子酰基蔗糖、石菖蒲的α-细辛醚和β-细辛醚等挥发性成分、茯苓的主要活性成分去氢土莫酸、茯苓酸和去氢茯苓酸的含量；（6）最后，以以提取溶剂（a）、料液比（b）、提取时间（c）为影响因素，主要活性成分含量为评分，正交试验优化提取工艺，综合考虑时间、成本等各方面因素，选择理论最优工艺。