一种用于新冠及流感病毒咽拭子取样的微流控联测试剂盒的制作方法

1.本实用新型属于检测试剂盒领域，尤其是涉及一种用于新冠及流感病毒咽拭子取样的微流控联测试剂盒。


背景技术：

2.甲型流感与乙型流感二者都是由流感病毒引起的急性呼吸道感染，是一种传染性强、传播速度快的疾病。新型冠状病毒肺炎是由2019新型冠状病毒感染引起的急性呼吸道传染病，主要的传播途径是呼吸道飞沫传播，亦可通过接触传播。具有传染性强、传播速度快、潜伏期长等特点。甲型流感、乙型流感以及新冠肺炎的高发期均在秋冬季节，三者的发病初期的症状均为急起高热、全身疼痛、显著乏力和轻度呼吸道症状，但是新冠的传染性以及致死率均高于甲流、乙流，导致不必要的住院率升高，因此开发甲流、乙流以及新冠病原体快速检测试剂，对于疾病鉴别诊断，辅助临床的对症治疗，缓解医疗压力具有重要意义。
3.目前对于甲型流感、乙型流感以及新冠病毒病原体的检测广泛采用的是检测病原体的核酸序列，检测的灵敏度高，但现有的咽拭子取样、稀释、加样装置操作起来比较繁琐，速度较慢，且该方法对场地及检测人员的要求高。且有多次重复开盖的操作，这样的操作增加了形成病毒气溶胶的机率，加大了测试员被感染的风险。就此情况迫切的需要研发一种安全简便可操作性强的拭子取样稀释加样装置。
4.微流控免疫荧光技术是结合免疫学反应原理与微流控芯片结合的一项用于体外快速诊断试剂的新型技术，目前公开的微流控芯片以其灵敏度高、分析速度快、精密度高，抗干扰能力强等特点非常适用于即时、现场分析。利用微流控免疫荧光技术，开发甲型流感、乙型流感以及新冠病毒抗原联合检测试剂盒及一种安全简便可操作性强的拭子取样稀释加样装置，可安全、准确、快速地进行检测，提供辅助鉴别诊断的依据，在poct体外诊断领域具有广阔的应用前景。


技术实现要素：

5.有鉴于此，本实用新型旨在提出一种用于新冠及流感病毒咽拭子取样的微流控联测试剂盒，通过咽拭子采集加样装置，可以实现拭子棒在取样之后就能将拭子棒伸入稀释瓶中，后转动可旋转的盖帽将拭子棒轻松折断，可以有效防止折断拭子棒时稀释液溅出，可旋转的盖帽镶嵌在旋转插槽中，可以控制可旋转盖帽的旋转角度，方便人员操作，可适用于不同的人群，实用性强；将加样口的盖帽拧紧以防液体从加样口溅出污染环境；并且稀释液瓶的软管瓶体，在加样时方便操作，不需要太用力就可以将稀释好的样本挤出，加样孔的防漏胶圈可以防止加样时液体溢出污染环境，加样后将出样口的盖帽拧紧能有效地防止稀释的样本溶液泄露从而污染周围环境造成不必要的交叉污染。
6.为达到上述目的，本实用新型的技术方案是这样实现的：
7.一种用于新冠及流感病毒咽拭子取样的微流控联测试剂盒，包括咽拭子取样及加样一体装置和微流控试剂卡，咽拭子取样及加样一体装置包括加样瓶、旋转瓶盖和拭子棒，
旋转瓶盖设置在加样瓶上，且旋转瓶盖上设置有与加样瓶分别单独连通的进样口和出样口，加样瓶中盛有稀释液。加样瓶为软管。
8.进一步的，加样瓶包括加样瓶主体和半球形上盖，半球形上盖固定设置在加样瓶主体上面，且半球形上盖的中间设置有连通口，加样瓶主体上端的外壁的相对位置处设置有转动轴。
9.进一步的，旋转瓶盖包括圆形桶体和连通通道，圆形桶体包括左端盖、右端盖和圆桶壁，圆桶壁上设置有进样口和出样口，进样口和出样口分别向内侧延伸有进样通道和出样通道，进样通道和出样通道之间为弧形面，通过转动旋转瓶盖，进样通道和出样通道均能与连通口相通，弧形面与连通口相切。
10.进一步的，左端盖、右端盖上与转动轴相对应的位置处设置有转动轴通过孔，转动轴穿过转动轴通过孔实现旋转瓶盖在加样瓶上的转动。
11.进一步的，进样通道和出样通道均沿半径方向设置，且进样口和出样口的位置相对于转动轴对称设置。
12.进一步的，进样通道和出样通道的下端口上均设置有防水胶圈。
13.进一步的，出样口上设置有滤膜，出样口为尖嘴。
14.进一步的，进样口和出样口上设置有盖帽。
15.进一步的，旋转瓶盖的圆形桶体的圆桶壁的下部分为开口，这样可以使得旋转瓶盖转动。
16.进一步的，微流控试剂卡包括固定连接的底片和盖片，底片的上表面沿样本流动方向依次设有缓冲区、标记区、反应区和废液区，反应区依次包括t1检测区、t2检测区、t3检测区和c检测区，盖片下表面设有依次相连通的加样孔、微通道和废液槽，加样孔正对缓冲区且贯穿盖片，连通内部和外界，标记区和反应区均位于微通道内，废液槽正对废液区，废液槽上开设有与外界连通的通孔，底片与盖片键合后，样液从加样孔进入微流控试剂卡，沿着微通道依次经过标记区和反应区，最后到达废液槽，出样口为尖嘴，因此出样口可以与加样孔配合，将稀释后的溶液加入到加样孔中。
17.进一步的，反应区为依次固定包被在底片上的系列点阵区，包括有配对的t1即甲型流感抗体、t2即乙型流感抗体、t3即新型冠状病毒抗体、质控点c即参比线，呈规则圆斑于微通道内依次排列。
18.进一步的，底片和盖片可为亚克力、pmda、透明树脂中的一种。
19.进一步的，缓冲区，由磷酸盐缓冲液干燥固定于底片的一端，呈规则圆斑，加入样本后起到缓冲作用。
20.进一步的，标记区，是在底片上干燥固定有新型冠状病毒抗体、甲型流感病毒抗体、乙型流感病毒抗体的荧光偶联复合物，整体呈规则圆斑。荧光微球在与样本混合后，携目标抗体流动至检测区被特异性捕获并向前流动。
21.进一步的，样本从加样孔经微通道最终流入废液槽，完成免疫反应所需最长时间为4min。
22.使用方法：
23.使用拭子棒取样之后，将拭子棒从进样口伸入加样瓶主体，转动旋转瓶盖将拭子棒从折断处折断，同时使得连通口与出样通道和进样通道之间的弧形面相切，拭子棒掉入
加样瓶主体后盖上加样口的盖帽，拭子棒采样头浸入稀释液中，晃动加样瓶，然后将旋转瓶盖转动至与出样通道相通，打开出样口的盖帽，将稀释后的样本挤入加样孔，加样后盖上出样口的盖帽。
24.相对于现有技术，本实用新型所述的用于新冠及流感病毒咽拭子取样的微流控联测试剂盒具有以下优势：
25.(1)可实现快速取样、安全稀释、准确加样；同时利用微流控免疫荧光法，能够达到快速、准确、高精密性的获得检测结果；对检测人员及场所要求低，满足poct检测的需求，适用于大批量筛查，更适合我国国情；
26.(2)咽拭子取样及加样一体装置只需一次性取样，就能实现稀释加样一体化，同时样本采集加样装置的出样口与微流控试剂卡加样孔紧密结合，无需暴露样本，安全卫生；
27.(3)利用可旋转的旋转瓶盖，将拭子棒伸入加样瓶中后转动可旋转的旋转瓶盖将拭子棒轻松折断，代替手工折断拭子棒，可以有效防止折断拭子棒时稀释液溅出；
28.(4)加样瓶为软管加样瓶，在加样时方便操作，不需要太用力就可以将稀释好的样本挤出，出样通道的下端口上设置有防水胶圈，当出样通道和连通口相通时，可以防止液体溢出污染环境；
29.(5)免疫反应时间只需4min，试剂灵敏度高，特异性好，检测耗时短。
附图说明
30.构成本实用新型的一部分的附图用来提供对本实用新型的进一步理解，本实用新型的示意性实施例及其说明用于解释本实用新型，并不构成对本实用新型的不当限定。在附图中：
31.图1为本实用新型实施例所述的用于新冠及流感病毒咽拭子取样的微流控联测试剂盒的结构示意图；
32.图2为加样瓶的示意图；
33.图3为旋转瓶盖的结构示意图；
34.图4为旋转瓶盖的简单的右视图；
35.图5为本实用新型实施例所述的旋转瓶盖内部简单结构示意图；
36.图6为本实用新型实施例所述的盖片示意图；
37.图7为本实用新型实施例所述的底片示意图。
38.附图标记说明：
[0039]1‑
进样口；2
‑
出样口；3
‑
加样瓶主体；4
‑
半球形上盖；5
‑
连通口；6
‑
转动轴；7
‑
左端盖；8
‑
右端盖；9
‑
圆桶壁；10
‑
进样通道；11
‑
出样通道；12
‑
底片；13
‑
盖片；14
‑
缓冲区；15
‑
标记区；16
‑
反应区；17
‑
废液区；18
‑
加样孔；19
‑
微通道；20
‑
废液槽。
具体实施方式
[0040]
需要说明的是，在不冲突的情况下，本实用新型中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0041]
在本实用新型的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为
基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本实用新型和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本实用新型的限制。此外，术语“第一”、“第二”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”等的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本实用新型的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。
[0042]
在本实用新型的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以通过具体情况理解上述术语在本实用新型中的具体含义。
[0043]
下面将参考附图并结合实施例来详细说明本实用新型。
[0044]
一种用于新冠及流感病毒咽拭子取样的微流控联测试剂盒，包括咽拭子取样及加样一体装置和微流控试剂卡，咽拭子取样及加样一体装置包括加样瓶、旋转瓶盖和拭子棒，旋转瓶盖设置在加样瓶上，且旋转瓶盖上设置有与加样瓶分别单独连通的进样口1和出样口2，加样瓶中盛有稀释液。加样瓶为软管。
[0045]
上述，加样瓶包括加样瓶主体3和半球形上盖4，半球形上盖4固定设置在加样瓶主体3上面，且半球形上盖4的中间设置有连通口5，加样瓶主体3上端的外壁的相对位置处设置有转动轴6。
[0046]
上述，旋转瓶盖包括圆形桶体和连通通道，圆形桶体包括左端盖7、右端盖8和圆桶壁9，圆桶壁9上设置有进样口1和出样口2，进样口1和出样口2分别向内侧延伸有进样通道10和出样通道11，进样通道10和出样通道11之间为弧形面，通过转动旋转瓶盖，进样通道10和出样通道11均能与连通口5相通，弧形面与连通口5相切。
[0047]
上述，左端盖7、右端盖8上与转动轴6相对应的位置处设置有转动轴通过孔，转动轴6穿过转动轴通过孔实现旋转瓶盖在加样瓶上的转动。
[0048]
上述，进样通道10和出样通道11均沿半径方向设置，且进样口1和出样口2的位置相对于转动轴6对称设置。
[0049]
上述，进样通道10和出样通道11的下端口上均设置有防水胶圈。
[0050]
上述，出样口2上设置有滤膜，出样口为尖嘴。
[0051]
上述，进样口1和出样口2上设置有盖帽。
[0052]
上述，旋转瓶盖的圆形桶体的圆桶壁9的下部分为开口，这样可以使得旋转瓶盖转动。
[0053]
上述，微流控试剂卡包括固定连接的底片12和盖片13，底片12的上表面沿样本流动方向依次设有缓冲区14、标记区15、反应区16和废液区17，反应区16依次包括t1检测区、t2检测区、t3检测区和c检测区，盖片13下表面设有依次相连通的加样孔18、微通道19和废液槽20，加样孔18正对缓冲区14且贯穿盖片13，连通内部和外界，标记区15和反应区16均位于微通道19内，废液槽20正对废液区17，废液槽20上开设有与外界连通的通孔，底片12与盖片13键合后，样液从加样孔18进入微流控试剂卡，沿着微通道19依次经过标记区15和反应区16，最后到达废液槽20，出样口2为尖嘴，因此出样口2可以与加样孔18配合，将稀释后的
溶液加入到加样孔18中。
[0054]
上述，反应区16为依次固定包被在底片12上的系列点阵区，包括有配对的t1即甲型流感抗体、t2即乙型流感抗体、t3即新型冠状病毒抗体、质控点c即参比线，呈规则圆斑于微通道19内依次排列。
[0055]
上述，底片12和盖片13可为亚克力、pmda、透明树脂中的一种。
[0056]
上述，缓冲区14，由磷酸盐缓冲液干燥固定于底片12的一端，呈规则圆斑，加入样本后起到缓冲作用。
[0057]
上述，标记区15，是在底片12上干燥固定有新型冠状病毒抗体、甲型流感病毒抗体、乙型流感病毒抗体的荧光偶联复合物，整体呈规则圆斑。荧光微球在与样本混合后，携目标抗体流动至检测区被特异性捕获并向前流动。
[0058]
上述，样本从加样孔18经微通道19最终流入废液槽20，完成免疫反应所需最长时间为4min。
[0059]
使用方法：
[0060]
使用拭子棒取样之后，将拭子棒从进样口1伸入加样瓶主体3，转动旋转瓶盖将拭子棒从折断处折断，同时使得连通口5与出样通道11和进样通道10之间的弧形面相切，拭子棒掉入加样瓶主体3后盖上加样口的盖帽，拭子棒采样头浸入稀释液中，晃动加样瓶，然后将旋转瓶盖转动至与出样通道11相通，打开出样口2的盖帽，将稀释后的样本挤入加样孔18，加样后盖上出样口的盖帽。
[0061]
1.材料
[0062]
采用本实用新型咽拭子取样及加样一体装置用于新冠及流感病毒联测试剂盒；
[0063]
甲型流感病毒单克隆抗体及配对抗体、乙型流感病毒单克隆抗体及配对抗体、新型冠状病毒单克隆抗体及配对抗体均购自深圳市菲鹏生物股份有限公司；
[0064]
20份阴性咽拭子样本，由公司在相关医院获得；
[0065]
阳性企业参考品：p1
‑
p5；
[0066]
荧光免疫分析仪(frend system)，韩国nanoentek公司生产并提供。
[0067]
2.方法
[0068]
利用上述咽拭子取样及加样一体装置取样阴性咽拭子样本并在加样瓶稀释，定量加样至微流控试剂卡中，4min后于荧光免疫分析仪上读取结果。分别检测20份阴性咽拭子样本(1
‑
20)及5份含不同浓度阳性企业参考品(浓度分别为：p1甲型流感1ng/ml、乙型流感1ng/ml、新型冠状病毒0.1ng/ml；p2甲型流感5ng/ml、乙型流感5ng/ml、新型冠状病毒1ng/ml；p3甲型流感10ng/ml、乙型流感10ng/ml、新型冠状病毒10ng/ml；p4甲型流感100ng/ml、乙型流感100ng/ml、新型冠状病毒100ng/ml；p5甲型流感500ng/ml、乙型流感500ng/ml、新型冠状病毒500ng/ml；
[0069]
以上步骤各进行3个重复，验证结果的准确性及灵敏度。
[0070]
3.结果
[0071]
实验结果如表1显示，20份临床阴性样本检测结果均为阴性。5份不同浓度抗原样本结果显示p1
‑
p5均为阳性，符合本试剂盒要求。本试剂盒甲型流感在1ng/ml
‑
500ng/ml、乙型流感在1ng/ml
‑
500ng/ml、新型冠状病毒在0.1ng/ml
‑
500ng/ml均能够检出，且重复性好。
[0072]
因此本实用新型所述的用于新冠及流感病毒咽拭子取样的微流控联测试剂盒可
作为新冠及流感病毒咽拭子样本的检测装置。
[0073]
表1检测结果数据表
[0074][0075]
注：
‘‑’
为阴性、
‘
+’为弱阳性、
‘
++’为中阳性、
‘
+++’为强阳性。
[0076]
以上所述仅为本实用新型的较佳实施例而已，并不用以限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。