癌症检测、预后和治疗监测的试剂和方法与流程

癌症检测、预后和治疗监测的试剂和方法
1.交叉引用
2.本技术要求2019年6月10日提交的美国临时专利申请no.62/859264的优先权，通过引用将其全部纳入本技术。
3.联邦资助声明：
4.本发明是在国家卫生研究院授予的p20gm103548号政府资助和国家癌症研究所授予的#1r44ca217447-01政府资助下完成的。政府对本发明拥有一定的权利。
5.关于序列表的声明
6.本技术包含于2020年6月4日创建的以电子文本文件“17-689-pct_sequence-listing_st25.txt”形式提交的序列表，其大小(字节)为152kb。根据37cfr
§
1.52(e)(5)，本电子文件中包含的全部信息通过引用并入。


背景技术：

7.被诊断患有局部乳腺癌(bca)的妇女5年生存率为98.6％。局部分期存活率下降到83.8％，远期下降到23.3％。只有5％的美国女性在首次诊断时出现转移性基底细胞癌；然而，大多数bca相关死亡是由于无法治愈的转移性疾病，而不是最初的诊断。不幸的是，bca复发常见于当患者出现症状，如呼吸急促、慢性咳嗽、体重减轻或骨痛时。


技术实现要素：

8.在一个方面，本发明提供了用于诊断癌症、预测癌症发生或复发和/或监测癌症治疗的方法，包括接触具有癌症或癌症复发风险的受试者的体液样本或接触接受以下癌症治疗的受试者的体液样本；
9.(a)一种或多种第一抗体检测标志物分子，所述第一抗体检测标志物分子结合抗至少一种肿瘤相关抗原(taa)的人类自身抗体；和
10.(b)一种或多种第二抗体检测标志物分子，所述第二抗体检测标志物分子结合抗至少一种可提取核抗原(ena)的人类自身抗体；
11.其中，抗一种或多种taa和一种或多种ena的自身抗体的存在表明受试者具有癌症或癌症复发的可能性，和/或表明癌症治疗的有效性。
12.在一个实施方案中，所述至少一种ena选自cenpa、jo-1、u1 snrnp亚单位70kd、u1 snrnp亚单位a、u1 snrnp亚单位c、sm亚单位b、sm亚单位b’、sm亚单位d、sm亚单位e、sm亚单位f、sm亚单位g、scl70、sm、ss-a/ro(52kda)、ss-b/la、cenpb、u1 snrnp、pm/scl100、ss-a/ro(60kda)、ku和pm/scl75。在另一个实施方案中，所述至少一种taa包括至少一种乳腺癌taa。在另一个实施方案中，所述至少一种taa选自angptl4、cald1、cd147、cd320、cdh3、cst2、dkk1、epha2、gal1、gfra1、grn、her2、igfbp2、lamc2、lrp10、lrrc15、muc1、spint2、ssr2、susd2、xage-1b、a1at、birc5、gal3、capc、grn和grp78。在一个实施方案中，所述第二抗体检测标志物分子结合抗至少2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多ena的人类自身抗体。在另一个实施方案中，所述第一抗体检测标志物分子结合抗至少2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多
taa的人类自身抗体。在各种进一步的实施方案中，所述一种或多种ena包括ss-a/ro(52kda)、ss-b/la、cenpb和ku中的1、2、3或全部4种；所述一种或多种taa包括angptl4、cald1、cd320、cdh3、dkk1、lrrc15、muc1、spint2、spon2、ssr2和grp78中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或全部11种；所述一种或多种taa包括dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at和grn中的1、2、3、4、5、6或全部7种；或者所述一种或多种ena包括ss-a/ro、ss-b/la和ku中的1种、2种或全部3种。
13.在一个实施方案中，所述受试者具有患乳腺癌或乳腺癌复发的风险。在另一个实施方案中，所述受试者正在接受乳腺癌治疗。在另一个实施方案中，已通过包括但不限于乳房x光摄影的其他技术将受试者诊断为患有乳腺癌，其中所述方法用于识别假阳性乳腺癌诊断。在另一个实施方案中，所述一种或多种第一抗体检测标志物分子包含taa、其抗原片段、或taa或其抗原片段的天然胞外结构域和/或天然分泌形式，或由它们组成；并且所述一种或多种第二抗体检测标志物分子包含所述ena或其抗原片段，或所述ena或其抗原片段的天然胞外结构域和/或天然分泌形式，或由其组成。在各种其他实施方案中，所述抗体检测标志物分子被可检测地标记；所述抗体检测标志物分子固定在表面上；所述接触包括使用纵向分析筛选，其中所有目标生物标志物可在一次试验和稀释中检测和定量；所述体液样本包括来自受试者的血样或血清样本；所述方法将受试者识别为可能患有癌症或癌症复发，其中所述方法进一步包括用足以治疗癌症或癌症复发的治疗剂量治疗所述受试者；所述治疗包括化疗、激素治疗、放射治疗和/或移除肿瘤的手术中的一种或多种。
14.在另一方面中，本发明提供抗体检测标志物组合物，所述组合物包含：
15.(a)一种或多种第一抗体检测标志物分子，所述第一抗体检测标志物分子结合抗至少一种肿瘤相关抗原(taa)的人类自身抗体；和
16.(b)一种或多种第二抗体检测标志物分子，所述第二抗体检测标志物分子结合抗至少一种可提取核抗原(ena)的人类自身抗体。在一个实施方案中，所述一种或多种ena选自cenpa、jo-1、u1 snrnp亚单位70kd、u1 snrnp亚单位a、u1 snrnp亚单位c、sm亚单位b、sm亚单位b’、sm亚单位d、sm亚单位e、sm亚单位f、sm亚单位g、scl70、sm、ss-a/ro(52kda)、ss-b/la、cenpb、u1 snrnp、pm/scl100、ss-a/ro(60kda)、ku和pm/scl75。在另一个实施方案中，所述至少一种taa包括至少一种乳腺癌taa。在另一个实施方案中，所述至少一种taa选自angptl4、cald1、cd147、cd320、cdh3、cst2、dkk1、epha2、gal1、gfra1、grn、her2、igfbp2、lamc2、lrp10、lrrc15、muc1、spint2、ssr2、susd2、xage-1b、a1at、birc5、gal3、capc和grp78。在一个实施方案中，所述第二抗体检测标志物分子结合至少2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多ena的人类自身抗体。在另一个实施方案中，所述第一抗体检测标志物分子结合抗至少2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多taa的人类自身抗体。在各种进一步的实施方案中，所述至少一种ena包括ss-a/ro(52kda)、ss-b/la、cenpb和ku中的1、2、3或全部4种；和/或所述至少一种taa包括angptl4、cald1、cd320、cdh3、dkk1、lrrc15、muc1、spint2、spon2、ssr2和grp78中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10种或全部11种。在一个实施方案中，所述一种或多种第一抗体检测标志物分子包括taa、其抗原片段、或taa或其抗原片段的天然胞外结构域和/或天然分泌形式；并且所述一种或多种第二抗体检测标志物分子包含或所述ena或其抗原片段，或所述ena或其抗原片段的天然胞外结构域和/或天然分泌形式，或由其组成。在另一个实施方案中，所述组合物由总共2～10000个抗体检测标志物分子组成。在另一个实施方案中，所述
组合物总共由2到1000个抗体检测标志物分子组成。
附图说明
17.图1(a-d).乳腺癌患者血清ana染色分析。使用6名患者的1:40稀释血清对hep-2细胞进行ana染色模式的代表性照片。a.着丝粒型；b.均质型；c.核仁型；d.线粒体型；e.颗粒型；f.癌症患者的阴性染色血清样本。
18.图2.ena阳性乳腺癌患者。使用luminex多重分析法对200名癌症患者的血清进行ena分析。ena生物标志物阳性患者的数量被示出并分为两类，诊断为自身免疫性疾病(左)或无自身免疫性疾病(右)。
19.图3.点质量控制。所有点直径相同，没有形状变形或彗星拖尾。结果很容易通过我们的目标打印/阵列质量控制指标，即小于10％的点尺寸变化。
20.图4.带重复和对照的bio-id盒上40路(plex)面板的最终布局。所有乳腺癌抗原和rfc对照的打印浓度均为0.4mg/ml，但lamc2除外，其打印浓度为0.3mg/ml。所有ena抗原的打印浓度均为0.25mg/ml，所有其他对照品的打印浓度均为0.2mg/ml。
21.图5(a-c).(a)jo-1的amli一致性参比面板样品(能够包含高浓度的jo-1)。jo-1是一种特异性自身抗体，标记炎症性肌病，不标记其他系统性自身免疫性疾病。jo-1在一般健康人群中的出现率《5％，滴度通常较低。参比血清在1:8000稀释时显示出高度特异性和显著信号。稀释线性也得到了清楚的展示。(b)jo-1上的稀释数据，显示为bio-id点的原始信号强度图。信号强度随时间(循环次数)以浓度依赖的方式增加(稀释线性)。(c)适合的血清cenpa、cenpb、jo-1、pm/scl75、ssa(ro52)、ssa(ro60)、ssb(la)、scl70和sm在混合稀释液中合并，并在一次运行中处理。在bio id上的5个循环内，所有标志物都很容易检测到(14个循环用于患者样本处理，进一步扩大了可检测范围，以在所需检测范围上构建显著冗余)。
22.图6.说明了生物标志物数据集的多变量条件logistic回归分析得出的roc曲线和曲线下面积(auc)。这表明auc为0.82，特异性为81％，敏感性为72％。表4列出了在使用该模型的单一测试中被确定为具有最高预测值的生物标志物，用于区分健康样本和癌症样本。
具体实施方式
23.第一方面，本发明提供了用于诊断癌症、预测癌症发生或复发和/或监测癌症治疗的方法，包括接触具有癌症或癌症复发风险的受试者的体液样本，或接触接受以下癌症治疗的受试者的体液样本；
24.(a)一种或多种第一抗体检测标志物分子，所述第一抗体检测标志物分子结合抗至少一种肿瘤相关抗原(taa)的人类自身抗体；和
25.(b)一种或多种第二抗体检测标志物分子，所述第二抗体检测标志物分子结合抗至少一种可提取核抗原(ena)的人类自身抗体；
26.其中，存在抗一种或多种taa和一种或多种ena的自身抗体表明受试者具有癌症或癌症复发的可能性，和/或表明癌症治疗的有效性。
27.如实施例中所述，发明人惊奇地发现，本发明的方法在诊断癌症、预测癌症发生或复发和/或监测癌症治疗方面提供了比先前方法显著的改进。
28.可使用结合抗至少一种ena的人类自身抗体的任何合适抗体来检测标志物分子。
在一个具体的实施方案中，所述至少一种ena选自cenpa、jo-1、u1 snrnp亚单位70kd、u1 snrnp亚单位a、u1 snrnp亚单位c、sm亚单位b、sm亚单位b’、sm亚单位d、sm亚单位e、sm亚单位f、sm亚单位g(在此累积称为“sm”)、scl70、sm、ss-a/ro(52kda；60kda；或两者)、ss-b/la、，cenpb、u1 snrnp、pm/scl100、ku和pm/scl75。各ena的全称如下：
29.cenpa(着丝粒蛋白a)
30.jo-1(组氨酸trna合成酶)
31.u1 snrnp亚单位70kd，a和c
32.scl70(dna拓扑异构酶i)
33.sm
–
亚单位b、b'、d、e、f和g
34.ss-a/ro，52kda(三分模体包含蛋白质21)
35.ss-b/la(小rna结合的外切酶保护因子la)
36.cenpb(着丝粒蛋白b)
37.pm/scl100(外切体组分10)
38.ss-a/ro，60kda(y rna结合蛋白)
39.ku由两个亚单位组成，名称和序列分别列出：
40.ku70(x射线修复交叉互补蛋白6)
41.ku80(x射线修复交叉互补蛋白5)
42.pm/scl75(外切体组分9)
43.每个ena的全长氨基酸序列如下；这些是实施例中使用的ena抗体检测分子。本领域技术人员应理解，可使用全长蛋白质靶标或蛋白质的其他截短形式，以及任何其他合适的ena抗体检测分子：
44.cenpa序列
45.mgprrrsrkpeaprrrspsptptpgpsrrgpslgasshqhsrrrqgwlkeirklqksthllirklpfsrlareicvkftrgvdfnwqaqallalqeaaeaflvhlfedaylltlhagrvtlfpkdvqlarrirgleeglg(seq id no:1)
46.jo-1序列
47.maeraaleelvklqgervrglkqqkasaelieeevakllklkaqlgpdeskqkfvlktpkgtrdysprqmavrekvfdviircfkrhgaevidtpvfelketlmgkygedskliydlkdqggellslrydltvpfarylamnkltnikryhiakvyrrdnpamtrgryrefyqcdfdiagnfdpmipdaeclkimceilsslqigdflvkvndrrildgmfaicgvsdskfrticssvdkldkvsweevknemvgekglapevadrigdyvqqhggvslveqllqdpklsqnkqaleglgdlkllfeyltlfgiddkisfdlslargldyytgviyeavllqtpaqageeplgvgsvaaggrydglvgmfdpkgrkvpcvglsigverifsiveqrlealeekirttetqvlvasaqkklleerlklvselwdagikaellykknpkllnqlqyceeagiplvaiigeqelkdgviklrsvtsreevdvrredlveeikrrtgqplcic(seq id no:2)
48.rnp亚单位
49.u1 snrnp 70k序列
50.mtqflppnllalfaprdpipylppleklphekhhnqpycgiapyirefedprdappptraetreermerkrrekierrqqevetelkmwdphndpnaqgdafktlfvarvnydttesklrrefevygpikrihmvyskrsgkprgyafieyeherdmhsaykhadgkkidgrrvlvdvergrtvkgwrprrlggglggtrrggadvnirhsgrddtsryderpgpsplphrdrdrdrererrersrerdkererrrsrsrdrrrrsrsrdkeerrrsrerskdkdrdrkrrssrsr
erarrererkeelrggggdmaepseagdappddgppgelgpdgpdgpeekgrdrdrerrrshrsererrrdrdrdrdrdrehkrgergsergrdeargggggqdngleglgndsrdmymeseggdgylapengylmeaape(seq id no:3)
51.snrpa-亚单位a
52.mavpetrpnhtiyinnlnekikkdelkkslyaifsqfgqildilvsrslkmrgqafvifkevssatnalrsmqgfpfydkpmriqyaktdsdiiakmkgtfverdrkrekrkpksqetpatkkavqgggatpvvgavqgpvpgmppmtqaprimhhmpgqppympppgmipppglapgqippgamppqqlmpgqmppaqplsenppnhilfltnlpeetnelmlsmlfnqfpgfkevrlvpgrhdiafvefdnevqagaardalqgfkitqnnamkisfakk(seq id no:4)
53.snrpc-亚单位c
54.mpkfycdycdtylthdspsvrkthcsgrkhkenvkdyyqkwmeeqaqslidkttaafqqgkipptpfsapppagamippppslpgpprpgmmpaphmggppmmpmmgppppgmmpvgpapgmrppmgghmpmmpgppmmrpparpmmvptrpgmtrpdr(seq id no:5)
55.scl70序列
56.msgdhlhndsqieadfrlndshkhkdkhkdrehrhkehkkekdrekskhsnsehkdsekkhkekektkhkdgssekhkdkhkdrdkekrkeekvrasgdakikkekengfssppqikdepeddgyfvppkedikplkrprdeddadykpkkiktedtkkekkrkleeeedgklkkpknkdkdkkvpepdnkkkkpkkeeeqkwkwweeerypegikwkflehkgpvfappyeplpenvkfyydgkvmklspkaeevatffakmldheyttkeifrknffkdwrkemtneekniitnlskcdftqmsqyfkaqtearkqmskeeklkikeenekllkeygfcimdnhkerianfkieppglfrgrgnhpkmgmlkrrimpediiincskdakvpspppghkwkevrhdnkvtwlvswteniqgsikyimlnpssrikgekdwqkyetarrlkkcvdkirnqyredwkskemkvrqravalyfidklalragnekeegetadtvgccslrvehinlhpeldgqeyvvefdflgkdsiryynkvpvekrvfknlqlfmenkqpeddlfdrlntgilnkhlqdlmegltakvfrtynasitlqqqlkeltapdenipakilsynranravailcnhqrappktfeksmmnlqtkidakkeqladarrdlksakadakvmkdaktkkvveskkkavqrleeqlmklevqatdreenkqialgtsklnyldpritvawckkwgvpiekiynktqrekfawaidmadedyef(seq id no:6)
57.史密斯抗原亚单位
58.snrpb-b亚单位
59.mtvgksskmlqhidyrmrcilqdgrifigtfkafdkhmnlilcdcdefrkikpknskqaereekrvlglvllrgenlvsmtvegpppkdtgiarvplagaaggpgigraagrgipagvpmpqapaglagpvrgvggpsqqvmtpqgrgtvaaaaaaatasiagaptqyppgrggppppmgrgapppgmmgpppgmrppmgppmgippgrgtpmgmpppgmrppppgmrgll(seq id no:7)
60.snrpb1
–
亚单位b'
61.mtvgksskmlqhidyrmrcilqdgrifigtfkafdkhmnlilcdcdefrkikpknskqaereekrvlglvllrgenlvsmtvegpppkdtgiarvplagaaggpgigraagrgipagvpmpqapaglagpvrgvggpsqqvmtpqgrgtvaaaaaaatasiagaptqyppgrggppppmgrgapppgmmgpppgmrppmgppmgippgrgtpmgmpppgmrppppgmrgppppgmrpprp(seq id no:8)
62.snrpd1
–
亚单位d
63.mklvrflmklshetvtielkngtqvhgtitgvdvsmnthlkavkmtlknrepvqletlsirgnniryfilpdslpldtllvdvepkvkskkreavagrgrgrgrgrgrgrgrgrggprr(seq id no:9)
64.snrpe-亚单位e
65.mayrgqgqkvqkvmvqpinlifrylqnrsriqvwlyeqvnmriegciigfdeymnlvlddaeeihsktksrkqlgrimlkgdnitllqsvsn(seq id no:10)
66.snrpf-亚单位f
67.mslplnpkpflngltgkpvmvklkwgmeykgylvsvdgymnmqlanteeyidgalsghlgevlircnnvlyirgveeeeedgemre(seq id no:11)
68.snrpg
–
亚单位g
69.mskahppelkkfmdkklslklnggrhvqgilrgfdpfmnlvidecvematsgqqnnigmvvirgnsiimlealerv(seq id no:12)
70.ss-a/ro52kda序列
71.masaarltmmweevtcpicldpfvepvsiecghsfcqecisqvgkgggsvcpvcrqrfllknlrpnrqlanmvnnlkeisqearegtqgercavhgerlhlfcekdgkalcwvcaqsrkhrdhamvpleeaaqeyqeklqvalgelrrkqelaekleveiaikradwkktvetqksrihaefvqqknflveeeqrqlqelekdereqlrilgekeaklaqqsqalqeliseldrrchssalellqeviivlerseswnlkdlditspelrsvchvpglkkmlrtcavhitldpdtanpwlilsedrrqvrlgdtqqsipgneerfdsypmvlgaqhfhsgkhywevdvtgkeawdlgvcrdsvrrkghfllssksgfwtiwlwnkqkyeagtypqtplhlqvppcqvgifldyeagmvsfynitdhgsliysfsecaftgplrpffspgfndggkntapltlcplnigsqgstdy(seq id no:13)
72.ss-b/la序列
73.maengdnekmaaleakichqieyyfgdfnlprdkflkeqikldegwvpleimikfnrlnrlttdfnvivealskskaelmeisedktkirrspskplpevtdeykndvknrsvyikgfptdatlddikewledkgqvlniqmrrtlhkafkgsifvvfdsiesakkfvetpgqkyketdllilfkddyfakkneerkqnkveaklrakqeqeakqkleedaemksleekigcllkfsgdlddqtcredlhilfsnhgeikwidfvrgakegiilfkekakealgkakdanngnlqlrnkevtwevlegevekealkkiiedqqeslnkwkskgrrfkgkgkgnkaaqpgsgkgkvqfqgkktkfasddehdehdengatgpvkrareetdkeepaskqqktengagdq(seq id no:14)
74.cenpb序列
75.mgpkrrqltfreksriiqeveenpdlrkgeiarrfnippstlstilknkrailaserkygvastcrktnklspydkleglliawfqqiraaglpvkgiilkekalriaeelgmddftasngwldrfrrrhgvvscsgvarararnaaprtpaapaspaavpsegsggsttgwrareeqppsvaegyasqdvfsatetslwydflpdqaaglcggdgrprqatqrlsvllcanadgseklpplvagksakpragqaglpcdytanskggvttqalakylkaldtrmaaesrrvlllagrlaaqsldtsglrhvqlaffppgtvhplergvvqqvkghyrqamllkamaalegqdpsglqlgltealhfvaaawqavepsdiaacfreagfgggpnatittslksegeeeeeeeeeeeeeegegeeeeeegeeeeeeggegeelgeeeeveeegdvdsdeeeeedeesssegleaedwaqgvveaggsfgaygaqeeaqcptlhfleggedsdsdseeeddeeeddededddddeedgdevpvpsfgeamayfamvkryltsfpiddrvqshilhlehdlvhvtrknharqagvrglghqs(seq id no:15)
76.pm/scl100序列
77.mappstreprvlsatsatksdgemvlpgfpdadsfvkfalgsvvavtkasgglpqfgdeydfyrsfpgfqafcetqgdrllqcmsrvmqyhgcrsnikdrskvteledkfdllvdandvilervgilldeasgvnknqqpvlpaglqvpktvvsswnrkaaeygkkaksetfrllhakniirpqlkfrekidnsntpflpkifikpnaqkplpqalskerrerpqdrpedldvppaladfihqqrtqqveqdmfahpyqyelnhftpadavlqkpqpqlyrpieetpchfissldelvelnekllncqefavdlehhsyrsflgltclmqistrtedfiidtlelrsdmyilnesltdpaivkvfhgadsdi
ewlqkdfglyvvnmfdthqaarllnlgrhsldhllklycnvdsnkqyqladwrirplpeemlsyarddthyllyiydkmrlemwergngqpvqlqvvwqrsrdiclkkfikpiftdesylelyrkqkkhlntqqltafqllfawrdktarredesygyvlpnhmmlkiaeelpkepqgiiaccnpvpplvrqqinemhlliqqarempllksevaagvkksgplpsaerlenvlfgphdcshappdgypiiptsgsvpvqkqaslfpdekednllgttcliatavitlfnepsaedskkgpltvaqkkaqnimesfenpfrmflpslghrapvsqaakfdpstkiyeisnrwklaqvqvqkdskeavkkkaaeqtaareqakeackaaaeqaisvrqqvvlenaakkreratsdprtteqkqekkrlkiskkpkdpeppekeftpydysqsdfkafagnskskvssqfdpnkqtpsgkkciaakkikqsvgnksmsfptgksdrgfrynwpqr(seq id no:16)
78.ss-a/ro 60kda序列
79.meesvnqmqplnekqiansqdgyvwqvtdmnrlhrflcfgseggtyyikeqklglenaealirliedgrgceviqeiksfsqegrttkqepmlfalaicsqcsdistkqaafkavsevcripthlftfiqfkkdlkesmkcgmwgralrkaiadwynekggmalalavtkykqrngwshkdllrlshlkpsseglaivtkyitkgwkevhelykekalsvetekllkyleavekvkrtrdelevihlieehrlvrehlltnhlkskevwkallqempltallrnlgkmtansvlepgnsevslvceklcnekllkkarihpfhilialetyktghglrgklkwrpdeeilkaldaafyktfktveptgkrfllavdvsasmnqrvlgsilnastvaaamcmvvtrtekdsyvvafsdemvpcpvttdmtlqqvlmamsqipaggtdcslpmiwaqktntpadvfivftdnetfaggvhpaialreyrkkmdipaklivcgmtsngftiadpddralqntllnksf(seq id no:17)
80.ku70序列
81.msgwesyyktegdeeaeeeqeenleasgdykysgrdsliflvdaskamfesqsedeltpfdmsiqciqsvyiskiissdrdllavvfygtekdknsvnfkniyvlqeldnpgakrileldqfkgqqgqkrfqdmmghgsdyslsevlwvcanlfsdvqfkmshkrimlftnednphgndsakasrartkagdlrdtgifldlmhlkkpggfdislfyrdiisiaededlrvhfeesskledllrkvraketrkralsrlklklnkdivisvgiynlvqkalkpppiklyretnepvktktrtfntstgglllpsdtkrsqiygsrqiilekeeteelkrfddpglmlmgfkplvllkkhhylrpslfvypeeslvigsstlfsallikclekevaalcrytprrnippyfvalvpqeeelddqkiqvtppgfqlvflpfaddkrkmpftekimatpeqvgkmkaiveklrftyrsdsfenpvlqqhfrnlealaldlmepeqavdltlpkveamnkrlgslvdefkelvyppdynpegkvtkrkhdnegsgskrpkveyseeelkthiskgtlgkftvpmlkeacrayglksglkkqellealtkhfqd(seq id no:18)
82.ku80序列
83.mvrsgnkaavvlcmdvgftmsnsipgiespfeqakkvitmfvqrqvfaenkdeialvlfgtdgtdnplsggdqyqnitvhrhlmlpdfdlledieskiqpgsqqadfldalivsmdviqhetigkkfekrhieiftdlssrfsksqldiiihslkkcdislqfflpfslgkedgsgdrgdgpfrlgghgpsfplkgiteqqkegleivkmvmislegedgldeiysfseslrklcvfkkierhsihwpcrltigsnlsiriaayksilqervkktwtvvdaktlkkediqketvyclndddetevlkediiqgfrygsdivpfskvdeeqmkyksegkcfsvlgfckssqvqrrffmgnqvlkvfaarddeaaavalsslihalddldmvaivryaydkranpqvgvafphikhnyeclvyvqlpfmedlrqymfsslknskkyapteaqlnavdalidsmslakkdektdtledlfpttkipnprfqrlfqcllhralhpreplppiqqhiwnmlnppaevttksqiplskiktlfplieakkkdqvtaqeifqdnhedgptakklkteqggahfsvsslaegsvtsvgsvnpaenfrvlvkqkkasfeeasnqlinhieqfldtnetpyfmksidcirafreeaikfseeqrfnnflkalqekveikqlnhfweivvqdgitlitkeeasgssvtaeeakkflapkdkpsgdtaavfeeggdvddlldmi(seq id no:19)
84.pm/scl75序列
85.mketplsncerrfllraieekkrldgrqtydyrnirisfgtdygccivelgktrvlgqvscelvspkl
nrategilffnlelsqmaapafepgrqsdllvklnrlmerclrnskcidteslcvvagekvwqirvdlhllnhdgniidaasiaaivalchfrrpdvsvqgdevtlytpeerdpvplsihhmpicvsfaffqqgtyllvdpnereervmdgllviamnkhreictiqssggimllkdqvlrcskiagvkvaeitelilkalendqkvrkeggkfgfaesianqritafkmekapidtsdveekaeeiiaeaeppsevvstpvlwtpgtaqigegvenswgdledsekeddegggdqaiildgikmdtgvevsdigsqelgfhhvgqtglefltsdapiilsdseeeemiilepdknpkkirtqttsakqekapskkpvkrrkkkraan(seq id no:20)
86.可使用结合抗至少一种taa的人类自身抗体的任何合适抗体检测标志物分子。所述taa可能与肿瘤类型相关，包括但不限于乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、肺癌或任何其他上皮癌。在一个具体实施方案中，所述至少一种taa包括至少一种乳腺癌taa。
87.在另一具体实施方案中，至少一种taa选自angptl4、cald1、cd147、cd320、cdh3、cst2、dkk1、epha2、gal1、gfra1、grn、her2、igfbp2、lamc2、lrp10、lrrc15、muc1、spint2、ssr2、susd2、xage-1b、a1at、birc5、gal3、capc、grn和grp78。各taa的全称如下所示：
88.a1at(α-1抗胰蛋白酶)
89.angptl4(血管生成素样蛋白4)
90.lrp10(ldl受体相关蛋白10)
91.gfra1(gdnf家族受体α1)
92.dkk1(dickkopf-wnt信号通路抑制剂1)
93.grp78(78kda葡萄糖调节蛋白)
94.grn(颗粒体蛋白)
95.cald1(caldesmon 1)
96.cd147(碱性蛋白)
97.cd320(cd320分子
98.cdh3(钙粘蛋白3)
99.cst2(半胱氨酸蛋白酶抑制剂sa)
100.epha2(eph受体a2)
101.lgals1(半乳糖凝集素1)
102.grn(颗粒体蛋白前体)
103.erbb2(erb-b2受体酪氨酸激酶2)
104.igfbp2(胰岛素样生长因子结合蛋白2)
105.lamc2(层粘连蛋白亚基γ2)
106.lrrc15(富亮氨酸重复序列包含蛋白15)
107.muc1(粘蛋白1)
108.spint2(丝氨酸肽酶抑制剂，kunitz 2型)
109.spon2(海绵蛋白2)
110.ssr2(信号序列受体亚单位2)
111.susd2(sushi结构域2)
112.xage1b(x抗原家族成员1b)
113.birc5(杆状病毒iap重复序列包含蛋白5)
114.lgals3(半乳糖凝集素3)
115.capc/lrrc26(富亮氨酸重复序列26)
116.下文提供了每个taa的示例性氨基酸序列；这些是实施例中使用的taa抗体检测分子。如本领域技术人员理解的，可以使用全长蛋白质靶标或蛋白质的其他截短形式，以及任何其他合适的taa抗体检测分子：
117.angptl4
118.ksprfaswdemnvlahgllqlgqglrehaertrsqlsalerrlsacgsacqgtegstdlplapesrvdpevlhslqtqlkaqnsriqqlfhkvaqqqrhlekqhlriqhlqsqfglldhkhldhevakparrkrlpemaqpvdpahnvsrlhrlprdcqelfqvgerqsglfeiqpqgsppflvnckmtsdggwtviqrrhdgsvdfnrpweaykagfgdphgefwlglekvhsitgdrnsrlavqlrdwdgnaellqfsvhlggedtayslqltapvagqlgattvppsglsvpfstwdqdhdlrrdkncakslsggwwfgtcshsnlngqyfrsipqqrqklkkgifwktwrgryyplqattmliqpmaaeaas(seq id no:21)
119.dkk1
120.vsatlnsvlnsnaiknlppplggaaghpgsavsaapgilypggnkyqtidnyqpypcaedeecgtdeycasptrggdagvqiclacrkrrkrcmrhamccpgnyckngicvssdqnhfrgeieetitesfgndhstldgysrrttlsskmyhtkgqegsvclrssdcasglccarhfwskickpvlkegqvctkhrrkgshgleifqrcycgeglscriqkdhhqasnssrlhtcqrh(seq id no:22)
121.gfra1
122.drldcvkasdqclkeqscstkyrtlrqcvagketnfslasgleakdecrsamealkqkslyncrckrgmkkeknclriywsmyqslqgndlledspyepvnsrlsdifrvvpfisdvfqqvehipkgnncldaakacnlddickkyrsayitpcttsvsndvcnrrkchkalrqffdkvpakhsygmlfcscrdiacterrrqtivpvcsyeerekpnclnlqdscktnyicrsrladfftncqpesrsvssclkenyadcllaysgligtvmtpnyidssslsvapwcdcsnsgndleeclkflnffkdntclknaiqafgngsdvtvwqpafpvqtttattttalrvknkplgpagseneipthvlppcanlqaqklksnvsgnthlcisngnyekeglgasshittksmaappscglspllvlvvtalstllsltets(seq id no:23)
123.grn
124.trcpdgqfcpvaccldpggasysccrplldkwpttlsrhlggpcqvdahcsaghsciftvsgtssccpfpeavacgdghhccprgfhcsadgrscfqrsgnnsvgaiqcpdsqfecpdfstccvmvdgswgccpmpqasccedrvhccphgafcdlvhtrcitptgthplakklpaqrtnravalsssvmcpdarsrcpdgstccelpsgkygccpmpnatccsdhlhccpqdtvcdliqskclskenattdlltklpahtvgdvkcdmevscpdgytccrlqsgawgccpftqavccedhihccpagftcdtqkgtceqgphqvpwmekapahlslpdpqalkrdvpcdnvsscpssdtccqltsgewgccpipeavccsdhqhccpqgytcvaegqcqrgseivaglekmparraslshprdigcdqhtscpvgqtccpslggswaccqlphavccedrqhccpagytcnvkarscekevvsaqpatflarsphvgvkdvecgeghfchdnqtccrdnrqgwaccpyrqgvccadrrhccpagfrcaargtkclrreaprwdaplrdpalrqll(seq id no:24)
125.lrp10
126.hpdriifpnhacedppavllevqgtlqrplvrdsrtspanctwlilgskeqtvtirfqklhlacgserltlrsplqplislceappsplqlpggnvtitysyagarapmgqgfllsysqdwlmclqeefqclnhrcvsavqrcdgvdacgdgsdeagcssdpfpgltprpvpslpcnvtledfygvfsspgythlasvshpqschwlldphdgrrlavrftaldlgfgdavhvydgpgppessrllrslthfsngkavtvetlsgqavvsyhtvawsngrgfnatyhvrgyclpwdrpcglgsglgageglgercyseaqrcdgswdcadgtdeedcpgcppghfpcgaagtsgatacylpadrcnyqtfca
dgaderrcrhcqpgnfrcrdekcvyetwvcdgqpdcadgsdewdcsyvlprk(seq id no:25)
127.cst2
128.wspqeedriieggiydadlndervqralhfviseynkatedeyyrrllrvlrareqivggvnyffdievgrtictksqpnldtcafheqpelqkkqlcsfqiyevpwedrmslvnsrcqea(seq id no:26)
129.a1at
130.edpqgdaaqktdtshhdqdhptfnkitpnlaefafslyrqlahqsnstniffspvsiatafamlslgtkadthdeileglnfnlteipeaqihegfqellrtlnqpdsqlqlttgnglflseglklvdkfledvkklyhseaftvnfgdteeakkqindyvekgtqgkivdlvkeldrdtvfalvnyiffkgkwerpfevkdteeedfhvdqvttvkvpmmkrlgmfniqhckklsswvllmkylgnataifflpdegklqhlenelthdiitkflenedrrsaslhlpklsitgtydlksvlgqlgitkvfsngadlsgvteeaplklskavhkavltidekgteaagamfleaipmsippevkfnkpfvflmieqntksplfmgkvvnptqk(seq id no:27)
131.gal1
132.lrvrgevapdaksfvlnlgkdsnnlclhfnprfnahgdantivcnskdggawgteqreavfpfqpgsvaevcitfdqanltvklpdgyefkfpnrlnleainymaadgdfkikcvafd(seq id no:28)
133.muc1
134.apkpatvvtgsghasstpggeketsatqrssvpssteknafnssledpstdyyqelqrdisemflqiykqggflglsnikfrpgsvvvqltlafregtinvhdvetqfnqykteaasrynltisdvsvsdvpfpfsaqsgagvpg(seq id no:29)
135.grp78
136.eeedkkedvgtvvgidlgttyscvgvfkngrveiiandqgnritpsyvaftpegerligdaaknqltsnpentvfdakrligrtwndpsvqqdikflpfkvvekktkpyiqvdigggqtktfapeeisamvltkmketaeaylgkkvthavvtvpayfndaqrqatkdagtiaglnvmriineptaaaiaygldkregeknilvfdlgggtfdvslltidngvfevvatngdthlggedfdqrvmehfiklykkktgkdvrkdnravqklrrevekakralssqhqarieiesfyegedfsetltrakfeelnmdlfrstmkpvqkvledsdlkksdideivlvggstripkiqqlvkeffngkepsrginpdeavaygaavqagvlsgdqdtgdlvlldvcpltlgietvggvmtkliprntvvptkksqifstasdnqptvtikvyegerpltkdnhllgtfdltgippaprgvpqievtfeidvngilrvtaedkgtgnknkititndqnrltpeeiermvndaekfaeedkklkeridtrnelesyayslknqigdkeklggklssedketmekaveekiewleshqdadiedfkakkkeleeivqpiisklygsagppptgeedtaekdel(seq id no:30)
137.epha2
138.kevvlldfaaaggelgwlthpygkgwdlmqnimndmpiymysvcnvmsgdqdnwlrtnwvyrgeaerifielkftvrdcnsfpggasscketfnlyyaesdldygtnfqkrlftkidtiapdeitvssdfearhvklnveersvgpltrkgfylafqdigacvallsvrvyykkcpellqglahfpetiagsdapslatvagtcvdhavvppggeeprmhcavdgewlvpigqclcqagyekvedacqacspgffkfeasespclecpehtlpspegatsceceegffrapqdpasmpctrppsaphyltavgmgakvelrwtppqdsggredivysvtceqcwpesgecgpceasvrysepphgltrtsvtvsdlephmnytftvearngvsglvtsrsfrtasvsinqteppkvrlegrsttslsvswsipppqqsrvwkyevtyrkkgdsnsynvrrtegfsvtlddlapdttylvqvqaltqegqgagskvhefqtlspegsgnl(seq id no:31)
139.lamc2
140.tsrrevcdcngksrqcifdrelhrqtgngfrclncndntdgihcekckngfyrhrerdrclpcncnskgslsarcdnsgrcsckpgvtgarcdrclpgfhmltdagctqdqrlldskcdcdpagiagpcdagrcvckpavtger
cdrcrsgyynldggnpegctqcfcyghsascrssaeysvhkitstfhqdvdgwkavqrngspaklqwsqrhqdvfssaqrldpvyfvapakflgnqqvsygqslsfdyrvdrggrhpsahdvilegaglritaplmplgktlpcgltktytfrlnehpsnnwspqlsyfeyrrllrnltalriratygeystgyidnvtlisarpvsgapapwveqcicpvgykgqfcqdcasgykrdsarlgpfgtcipcncqgggacdpdtgdcysgdenpdiecadcpigfyndphdprsckpcpchngfscsvmpeteevvcnncppgvtgarcelcadgyfgdpfgehgpvrpcqpcqcnnnvdpsasgncdrltgrclkcihntagiycdqckagyfgdplapnpadkcracncnpmgsepvgcrsdgtcvckpgfggpncehgafscpacynqvkiqmdqfmqqlqrmealiskaqggdgvvpdtelegrmqqaeqalqdilrdaqisegasrslglqlakvrsqensyqsrlddlkmtvervralgsqyqnrvrdthrlitqmqlslaeseaslgntnipasdhyvgpngfkslaqeatrlaeshvesasnmeqltretedyskqalslvrkalhegvgsgsgspdgavvqglveklektkslaqqltreatqaeieadrsyqhslrlldsvsrlqgvsdqsfqveeakrikqkadslsslvtrhmdefkrtqknlgnwkeeaqqllqngksgreksdqllsranlaksraqealsmgnatfyevesilknlrefdlqvdnrkaeaeeamkrlsyisqkvsdasdktqqaeralgsaaadaqrakngagealeisseieqeigslnleanvtadgalamekglaslksemrevegelerkelefdtnmdavqmviteaqkvdtraknagvtiqdtlntldgllhlmgm(seq id no:32)
141.spon2
142.qplggesicsarapakysitftgkwsqtafpkqyplfrppaqwssllgaahssdysmwrknqyvsnglrdfaergeawalmkeieaagealqsvhevfsapavpsgtgqtsaelevqrrhslvsfvvrivpspdwfvgvdsldlcdgdrwreqaaldlypydagtdsgftfsspnfatipqdtvteitssspshpansfyyprlkalppiarvtllrlrqsprafippapvlpsrdneivdsasvpetpldcevslwsswglcgghcgrlgtksrtryvrvqpanngspcpeleeeaecvpdncv(seq id no:33)
143.ssr2
144.eegarllasksllnryavegrdltlqyniynvgssaaldvelsddsfppedfgivsgmlnvkwdriapasnvshtvvlrplkagyfnftsatitylaqedgpvvigstsapgqggilaqrefdrrfsph(seq id no:34)
145.lrrc15
146.yhgcpsectcsrasqvectgarivavptplpwnamslqilnthitelnespflnisalialrieknelsritpgafrnlgslrylslannklqvlpiglfqgldsleslllssnqllqiqpahfsqcsnlkelqlhgnhleyipdgafdhlvgltklnlgknslthisprvfqhlgnlqvlrlyenrltdipmgtfdglvnlqelalqqnqigllspglfhnnhnlqrlylsnnhisqlppsvfmqlpqlnrltlfgnslkelspgifgpmpnlrelwlydnhisslpdnvfsnlrqlqvlilsrnqisfispgafngltelrelslhtnalqdldgnvfrmlanlqnislqnnrlrqlpgnifanvnglmaiqlqnnqlenlplgifdhlgklcelrlydnpwrcdsdilplrnwlllnqprlgtdtvpvcfspanvrgqsliiinvnvavpsvhvpevpsypetpwypdtpsypdttsvsstteltspvedytdlttiqvtddrsvwgmtqaqsg(seq id no:35)
147.muc1
148.apkpatvvtgsghasstpggeketsatqrssvpssteknafnssledpstdyyqelqrdisemflqiykqggflglsnikfrpgsvvvqltlafregtinvhdvetqfnqykteaasrynltisdvsvsdvpfpfsaqsgagvpg(seq id no:36)
149.cd147
150.aagtvfttvedlgskilltcslndsatevtghrwlkggvvlkedalpgqktefkvdsddqwgeyscvflpepmgtaniqlhgpprvkavkssehinegetamlvcksesvppvtdwawykitdsedkalmngsesrffvss(seq id no:37)
151.cd320
152.agpssgscpptkfqcrtsglcvpltwrcdrdldcsdgsdeeecriepctqkgqcppppglpcpctgvsdcsggtdkklrncsrlaclagelrctlsddcipltwrcdghpdcpdssdelgcgtneilpegdattmgppvtlesvtslrnattmgppvtlesvpsvgnatsssagdqsgsptayg(seq id no:38)
153.cdh3
154.epcravfreaevtleaggaeqepgqalgkvfmgcpgqepalfstdnddftvrngetvqerrslkernplkifpskrilrrhkrdwvvapisvpengkgpfpqrlnqlksnkdrdtkifysitgpgadsppegvfaveketgwlllnkpldreeiakyelfghavsengasvedpmnisiivtdqndhkpkftqdtfrgsvlegvlpgtsvmqmtatdeddaiytyngvvaysihsqepkdphdlmftihrstgtisvissgldrekvpeytltiqatdmdgdgstttavavveildandnapmfdpqkyeahvpenavghevqrltvtdldapnspawratylimggddgdhftitthpesnqgilttrkgldfeaknqhtlyvevtneapfvlklptstativvhvedvneapvfvppskvvevqegiptgepvcvytaedpdkenqkisyrilrdpagwlamdpdsgqvtavgtldredeqfvrnniyevmvlamdngsppttgtgtllltlidvndhgpvpeprqiticnqspvrqvlnitdkdlsphtspfqaqltddsdiywtaevneegdtvvlslkkflkqdtydvhlslsdhgnkeqltviratvcdchghvetcpgpwkgg(seq id no:39)
155.her2
156.tqvctgtdmklrlpaspethldmlrhlyqgcqvvqgnleltylptnaslsflqdiqevqgyvliahnqvrqvplqrlrivrgtqlfednyalavldngdplnnttpvtgaspgglrelqlrslteilkggvliqrnpqlcyqdtilwkdifhknnqlaltlidtnrsrachpcspmckgsrcwgessedcqsltrtvcaggcarckgplptdccheqcaagctgpkhsdclaclhfnhsgicelhcpalvtyntdtfesmpnpegrytfgascvtacpynylstdvgsctlvcplhnqevtaedgtqrcekcskpcarvcyglgmehlrevravtsaniqefagckkifgslaflpesfdgdpasntaplqpeqlqvfetleeitgylyisawpdslpdlsvfqnlqvirgrilhngaysltlqglgiswlglrslrelgsglalihhnthlcfvhtvpwdqlfrnphqallhtanrpedecvgeglachqlcarghcwgpgptqcvncsqflrgqecveecrvlqglpreyvnarhclpchpecqpqngsvtcfgpeadqcvacahykdppfcvarcpsgvkpdlsympiwkfpdeegacqpcpincthscvdlddkgcpaeqrasplt(seq id no:40)
157.igfbp2
158.evlfrcppctperlaacgpppvappaavaavaggarmpcaelvrepgcgccsvcarlegeacgvytprcgqglrcyphpgselplqalvmgegtcekrrdaeygaspeqvadngddhsegglvenhvdstmnmlggggsagrkplksgmkelavfrekvteqhrqmgkggkhhlgleepkklrpppartpcqqeldqvleristmrlpdergplehlyslhipncdkhglynlkqckmslngqrgecwcvnpntgkliqgaptirgdpechlfyneqqeargvhtqrmq(seq id no:41)
159.spint2
160.adrersihdfclvskvvgrcrasmprwwynvtdgscqlfvyggcdgnsnnyltkeeclkkcatvtenatgdlatsrnaadssvpsaprrqdsedhssdmfnyeeyctanavtgpcrasfprwyfdvernscnnfiyggcrgnknsyrseeacmlrcfrqqenpplplgskv(seq id no:42)
161.susd2
162.qescsmrcgaldgpcschptcsglgtccldfrdfcleilpysgsmmggkdfvvrhfkmssptdasvicrfkdsiqtlghvdssgqvhcvspllyesgripftvsldnghsfpragtwlavhpnkvsmmekselvnetrwqyygtantsgnlsltwhvkslptqtitielwgyeetgmpysqewtakwsylyplathipnsgsftftpkpappsyqrwrvgalriidsknyagqkdvqalwtndhalawhlsddfredpvawartqcqaweeledqlpnfleelpdcpctltqarad
sgrfftdygcdmeqgsvctyhpgavhcvrsvqaslrygsgqqccytadgtqlltadssggstpdrghdwgappfrtpprvpsmshwlydvlsfyycclwapdcprymqrrpsndcrnyrpprlasafgdphfvtfdgtnftfngrgeyvlleaaltdlrvqaraqpgtmsngtetrgtgltavavqegnsdvvevrlanrtgglevllnqevlsfteqswmdlkgmflsvaagdrvsimlasgaglevsvqgpflsvsvllpekflththgllgtlnndptddftlhsgrvlppgtspqelflfganwtvhnasslltydswflvhnflyqpkhdptfeplfpsettlnpslaqeaaklcgddhfcnfdvaatgslstgtatrvahqlhqrrmqslqpvvscgwlapppngqkegnrylagstiyfhcdngyslagaetstcqadgtwssptpkcqpgrsya(seq id no:43)
163.cald1序列
164.mlggsgshgrrslaalsqiayqrndddeeeaarerrrrarqerlrqkqeeeslgqvtdqvevnaqnsvpdeeakttttntqvegddeaaflerlarreerrqkrlqealerqkefdptitdaslslpsrrmqndtaenettekeeksesrqeryeieetetvtksyqkndwrdaeenkkedkekeeeeeekpkrgsigenqgeekgtkvqakreklqedkptfkkeeikdekikkdkepkeevksfmdrkkgftevksqngefmthklkhtentfsrpggrasvdtkeaegapqveagkrleelrrrrgeteseefeklkqkqqeaaleleelkkkreerrkvleeeeqrrkqeeadrklreeeekrrlkeeierrraeaaekrqkmpedglsddkkpfkcftpkgsslkieeraeflnksvqkssgvksthqaaivskidsrleqytsaiegtksakptkpaasdlpvpaegvrniksmwekgnvfssptaagtpnketaglkvgvssrinewltktpdgnkspapkpsdlrpgdvsskrnlwekqsvdkvtsptkv(seq id no:44)
165.xage1b序列
166.mespkkknqqlkvgilhlgsrqkkiriqlrsqcatwkvickscisqtpginldlgsgvkvkiipkeehckmpeageeqpqv(seq id no:45)
167.birc5序列
168.mgaptlppawqpflkdhristfknwpflegcactpermaeagfihcptenepdlaqcffcfkelegwepdddpieehkkhssgcaflsvkkqfeeltlgeflkldreraknkiaketnnkkkefeetaekvrraieqlaamd(seq id no:46)
169.lgals3序列
170.madnfslhdalsgsgnpnpqgwpgawgnqpagaggypgasypgaypgqappgaypgqappgaypgapgaypgapapgvypgppsgpgaypssgqpsatgaypatgpygapagplivpynlplpggvvprmlitilgtvkpnanrialdfqrgndvafhfnprfnennrrvivcntkldnnwgreerqsvfpfesgkpfkiqvlvepdhfkvavndahllqynhrvkklneisklgisgdidltsasytmi(seq id no:47)
171.在各种实施方案中，所述一种或多种第一抗体检测标志物结合抗至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18种或更多种ena的人类自身抗体，所述ena选自cenpa、jo-1、u1 snrnp亚单位70kd、u1 snrnp亚单位a、u1 snrnp亚单位c、sm亚单位b、sm亚单位b’，sm亚单位d、sm亚单位e、sm亚单位f、sm亚单位g(在本文中累积称为“sm”)、scl70、ss-a/ro(52kda、60kda或两者)、ss-b/la、cenpb、u1 snrnp、pm/scl100、ku和pm/scl75。在一些实施方案中，所述抗体检测标志物可以结合抗sm或u1 snrnp的人类自身抗体(即：不区分不同亚单位)。在其他实施方案中，所述抗体检测标志物可以结合抗特定或sm或u1 snrnp亚单位的人类自身抗体。
172.在其他实施方案中，所述一种或多种第二抗体检测标志物结合抗至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26种或所有27种taa的人类自身抗体，所述taa选自angptl4、cald1、cd147、cd320、cdh3、cst2、dkk1、epha2、gal1、
gfra1、grn、her2、igfbp2、，lamc2、lrp10、lrrc15、muc1、spint2、spon2、ssr2、susd2、xage-1b、a1at、birc5、gal3、capc和grp78。
173.在一个实施方案中，所述一种或多种ena包括ss-a/ro(52kda)、ss-b/la、cenpb和ku中的1、2、3种或全部4种。在另一个实施方案中，所述一种或多种ena包括ss-a/ro、ss-b/la和ku中的1种、2种或全部3种。
174.在一个实施方案中，所述一种或多种taa包括angptl4、cald1、cd320、cdh3、dkk1、lrrc15、muc1、spint2、spon2、ssr2和grp78中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10种或全部11种。在另一个实施方案中，所述一种或多种taa包括dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at和grn中的1、2、3、4、5、6种或全部7种。
175.在各种其他实施方案中，所述一种或多种taa和一种或多种ena的组合包括选自以下的一个集合：
176.a1at和sm；
177.a1at和igfbp2；
178.a1at和grn；
179.a1at和cenpa；
180.a1at、sm和igfpb2；
181.a1at、sm和grn；
182.a1at、sm和cenpa；
183.a1at、sm、igfbp2和grn；
184.a1at、sm、igfbp2和cenpa
185.a1at、sm、igfbp2、grn、cenpa；
186.a1at、igfbp2和grn；
187.a1at、igfbp2和cenpa；
188.a1at、igfbp2、grn和cenpa；
189.sm和igfpb2；
190.sm和grn；
191.sm和cenpa；
192.sm、igfpb2和grn；
193.sm、igfpb2和cenpa；
194.sm、igfpb2、grn、cenpa；
195.igfpb2和grn；
196.igfpb2和cenpa；
197.igfpb2、grn和cenpa；
198.grn和cenpa；
199.dkk1和ss-a/ro；
200.dkki和ss-b/la；
201.dkki和ku；
202.dkki、ss-a/ro和ss-b/la；
203.dkk1、ss-a/ro和ku；
204.dkk1、ss-b/la和ku；
205.dkk1、angptl4和ss-a/ro；
206.dkki、angptl4和ss-b/la；
207.dkki、angptl4和ku；
208.dkki、angptl4、ss-a/ro和ss-b/la；
209.dkk1、angptl4、ss-a/ro和ku；
210.dkk1、angptl4、ss-b/la和ku；
211.dkk1、muc1和ss-a/ro；
212.dkki、muc1和ss-b/la；
213.dkki、muc1和ku；
214.dkki、muc1、ss-a/ro和ss-b/la；
215.dkk1、muc1、ss-a/ro和ku；
216.dkk1、muc1、ss-b/la和ku；
217.dkk1、angptl4、muc1、ss-a/ro；
218.dkki、angptl4、muc1和ss-b/la；
219.dkki、angptl4、muc1和ku；
220.dkki、angptl4、muc1、ss-a/ro、ss-b/la；
221.dkk1、angptl4、muc1、ss-a/ro和ku；
222.dkk1、angptl4、muc1、ss-b/la和ku；
223.dkk1、grp78和ss-a/ro；
224.dkki、grp78和ss-b/la；
225.dkki、grp78和ku；
226.dkki、grp78、ss-a/ro和ss-b/la；
227.dkk1、grp78、ss-a/ro和ku；
228.dkk1、grp78、ss-b/la和ku；
229.dkk1、angptl4、grp78、ss-a/ro；
230.dkki、angptl4、grp78和ss-b/la；
231.dkki、angptl4、grp78和ku；
232.dkki、angptl4、grp78、ss-a/ro和ss-b/la；
233.dkk1、angptl4、grp78、ss-a/ro和ku；
234.dkk1、angptl4、grp78、ss-b/la和ku；
235.dkk1、muc1、grp78、ss-a/ro；
236.dkki、muc1、grp78、ss-b/la；
237.dkki、muc1、grp78和ku；
238.dkki、muc1、grp78、ss-a/ro、ss-b/la；
239.dkk1、muc1、grp78、ss-a/ro和ku；
240.dkk1、muc1、grp78、ss-b/la和ku；
241.dkk1、angptl4、muc1、grp78、ss-a/ro；
242.dkki、angptl4、muc1、grp78、ss-b/la；
243.dkki、angptl4、muc1、grp78和ku；
244.dkki、angptl4、muc1、grp78、ss-a/ro和ss-b/la；
245.dkk1、angptl4、muc1、grp78、ss-a/ro和ku；
246.dkk1、angptl4、muc1、grp78、ss-b/la和ku；
247.dkk1、gfra1和ss-a/ro；
248.dkki、gfra1和ss-b/la；
249.dkki、gfra1和ku；
250.dkki、gfra1、ss-a/ro和ss-b/la；
251.dkk1、gfra1、ss-a/ro和ku；
252.dkk1、gfra1、ss-b/la和ku；
253.dkk1、angptl4、gfra1和ss-a/ro；
254.dkki、angptl4、gfra1和ss-b/la；
255.dkki、angptl4、gfra1和ku；
256.dkki、angptl4、gfra1、ss-a/ro和ss-b/la；
257.dkk1、angptl4、gfra1、ss-a/ro和ku；
258.dkk1、angptl4、gfra1、ss-b/la和ku；
259.dkk1、muc1、gfra1和ss-a/ro；
260.dkki、muc1、gfra1和ss-b/la；
261.dkki、muc1、gfra1和ku；
262.dkki、muc1、gfra1、ss-a/ro、ss-b/la；
263.dkk1、muc1、gfra1、ss-a/ro和ku；
264.dkk1、muc1、gfra1、ss-b/la和ku；
265.dkk1、angptl4、muc1、gfra1和ss-a/ro；
266.dkki、angptl4、muc1、gfra1和ss-b/la；
267.dkki、angptl4、muc1、gfra1和ku；
268.dkki、angptl4、muc1、gfra1、ss-a/ro和ss-b/la；
269.dkk1、angptl4、muc1、gfra1、ss-a/ro和ku；
270.dkk1、angptl4、muc1、gfra1、ss-b/la和ku；
271.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1和ss-a/ro；
272.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1和ss-b/la；
273.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1和ku；
274.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、ss-a/ro、ss-b/la；
275.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、ss-a/ro和ku；
276.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、ss-b/la和ku；
277.dkk1、a1at和ss-a/ro；
278.dkki、a1at和ss-b/la；
279.dkki，a1at和ku；
280.dkki、a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
281.dkk1、a1at、ss-a/ro和ku；
282.dkk1、a1at、ss-b/la和ku；
283.dkk1、angptl4、a1at、ss-a/ro；
284.dkki、angptl4、a1at和ss-b/la；
285.dkki、angptl4、a1at和ku；
286.dkki、angptl4、a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
287.dkk1、angptl4、a1at、ss-a/ro和ku；
288.dkk1、angptl4、a1at、ss-b/la和ku；
289.dkk1、muc1、a1at、ss-a/ro；
290.dkki、muc1、a1at和ss-b/la；
291.dkki、muc1、a1at和ku；
292.dkki、muc1、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
293.dkk1、muc1、a1at、ss-a/ro和ku；
294.dkk1、muc1、a1at、ss-b/la和ku；
295.dkk1、angptl4、muc1、a1at、ss-a/ro；
296.dkki、angptl4、muc1、a1at、ss-b/la；
297.dkki、angptl4、muc1、a1at和ku；
298.dkki、angptl4、muc1、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
299.dkk1、angptl4、muc1、a1at、ss-a/ro和ku；
300.dkk1、angptl4、muc1、a1at、ss-b/la和ku；
301.dkk1、angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-a/ro；
302.dkki、angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-b/la；
303.dkki、angptl4、muc1、grp78、a1at和ku；
304.dkki、angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
305.dkk1、angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-a/ro和ku；
306.dkk1、angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-b/la和ku；
307.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro；
308.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-b/la；
309.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at和ku；
310.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
311.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro和ku；
312.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-b/la和ku；
313.dkk1、grn和ss-a/ro；
314.dkki、grn和ss-b/la；
315.dkki、grn和ku；
316.dkki、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
317.dkk1、grn、ss-a/ro和ku；
318.dkk1、grn、ss-b/la和ku；
319.dkk1、angptl4、grn和ss-a/ro；
320.dkki、angptl4、grn和ss-b/la；
321.dkki、angptl4、grn和ku；
322.dkki、angptl4、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
323.dkk1、angptl4、grn、ss-a/ro和ku；
324.dkk1、angptl4、grn、ss-b/la和ku；
325.dkk1、muc1、grn和ss-a/ro；
326.dkki、muc1、grn和ss-b/la；
327.dkki、muc1、grn和ku；
328.dkki、muc1、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
329.dkk1、muc1、grn、ss-a/ro和ku；
330.dkk1、muc1、grn、ss-b/la和ku；
331.dkk1、angptl4、muc1、grn、ss-a/ro；
332.dkki、angptl4、muc1、grn、ss-b/la；
333.dkki、angptl4、muc1、grn和ku；
334.dkki、angptl4、muc1、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
335.dkk1、angptl4、muc1、grn、ss-a/ro和ku；
336.dkk1、angptl4、muc1、grn、ss-b/la和ku；
337.dkk1、angptl4、muc1、grp78、grn、ss-a/ro；
338.dkki、angptl4、muc1、grp78、grn和ss-b/la；
339.dkki、angptl4、muc1、grp78、grn和ku；
340.dkki、angptl4、muc1、grp78、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
341.dkk1、angptl4、muc1、grp78、grn、ss-a/ro和ku；
342.dkk1、angptl4、muc1、grp78、grn、ss-b/la和ku；
343.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn、ss-a/ro；
344.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn、ss-b/la；
345.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn和ku；
346.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
347.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn、ss-a/ro和ku；
348.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn、ss-b/la和ku；
349.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro；
350.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-b/la；
351.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn和ku；
352.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
353.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro和ku；
354.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-b/la和ku；
355.angptl4和ss-a/ro；
356.angptl4和ss-b/la；
357.angptl4和ku；
358.angptl4、ss-a/ro、ss-b/la；
359.angptl4、ss-a/ro和ku；
360.angptl4、ss-b/la和ku；
361.angptl4、muc1和ss-a/ro；
362.angptl4、muc1和ss-b/la；
363.angptl4、muc1和ku；
364.angptl4、muc1、ss-a/ro和ss-b/la；
365.angptl4、muc1、ss-a/ro和ku；
366.angptl4、muc1、ss-b/la和ku；
367.angptl4、grp78和ss-a/ro；
368.angptl4、grp78和ss-b/la；
369.angptl4、grp78和ku；
370.angptl4、grp78、ss-a/ro和ss-b/la；
371.angptl4、grp78、ss-a/ro和ku；
372.angptl4、grp78、ss-b/la和ku；
373.angptl4、muc1、grp78、ss-a/ro；
374.angptl4、muc1、grp78、ss-b/la；
375.angptl4、muc1、grp78和ku；
376.angptl4、muc1、grp78、ss-a/ro、ss-b/la；
377.angptl4、muc1、grp78、ss-a/ro和ku；
378.angptl4、muc1、grp78、ss-b/la和ku；
379.angptl4、gfra1和ss-a/ro；
380.angptl4、gfra1和ss-b/la；
381.angptl4、gfra1和ku；
382.angptl4、gfra1、ss-a/ro和ss-b/la；
383.angptl4、gfra1、ss-a/ro和ku；
384.angptl4、gfra1、ss-b/la和ku；
385.angptl4、muc1、gfra1和ss-a/ro；
386.angptl4、muc1、gfra1和ss-b/la；
387.angptl4、muc1、gfra1和ku；
388.angptl4、muc1、gfra1、ss-a/ro、ss-b/la；
389.angptl4、muc1、gfra1、ss-a/ro和ku；
390.angptl4、muc1、gfra1、ss-b/la和ku；
391.angptl4、muc1、grp78、gfra1和ss-a/ro；
392.angptl4、muc1、grp78、gfra1和ss-b/la；
393.angptl4、muc1、grp78、gfra1和ku；
394.angptl4、muc1、grp78、gfra1、ss-a/ro和ss-b/la；
395.angptl4、muc1、grp78、gfra1、ss-a/ro和ku；
396.angptl4、muc1、grp78、gfra1、ss-b/la和ku；
397.angptl4、a1at和ss-a/ro；
398.angptl4、a1at和ss-b/la；
399.angptl4、a1at和ku；
400.angptl4、a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
401.angptl4、a1at、ss-a/ro和ku；
402.angptl4、a1at、ss-b/la和ku；
403.angptl4、muc1、a1at和ss-a/ro；
404.angptl4、muc1、a1at、ss-b/la；
405.angptl4、muc1、a1at和ku；
406.angptl4、muc1、a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
407.angptl4、muc1、a1at、ss-a/ro和ku；
408.angptl4、muc1、a1at、ss-b/la和ku；
409.angptl4、muc1、grp78、a1at和ss-a/ro；
410.angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-b/la；
411.angptl4、muc1、grp78、a1at和ku；
412.angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
413.angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-a/ro和ku；
414.angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-b/la和ku；
415.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro；
416.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-b/la；
417.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at和ku；
418.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
419.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro和ku；
420.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-b/la和ku；
421.angptl4、grn和ss-a/ro；
422.angptl4、grn和ss-b/la；
423.angptl4、grn和ku；
424.angptl4、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
425.angptl4、grn、ss-a/ro和ku；
426.angptl4、grn、ss-b/la和ku；
427.angptl4、muc1、grn和ss-a/ro；
428.angptl4、muc1、grn和ss-b/la；
429.angptl4、muc1、grn和ku；
430.angptl4、muc1、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
431.angptl4、muc1、grn、ss-a/ro和ku；
432.angptl4、muc1、grn、ss-b/la和ku；
433.angptl4、muc1、grp78、grn和ss-a/ro；
434.angptl4、muc1、grp78、grn和ss-b/la；
435.angptl4、muc1、grp78、grn和ku；
436.angptl4、muc1、grp78、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
437.angptl4、muc1、grp78、grn、ss-a/ro和ku；
438.angptl4、muc1、grp78、grn、ss-b/la和ku；
439.angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn和ss-a/ro；
440.angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn和ss-b/la；
441.angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn和ku；
442.angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
443.angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn、ss-a/ro和ku；
444.angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn、ss-b/la和ku；
445.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn和ss-a/ro；
446.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn和ss-b/la；
447.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn和ku；
448.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
449.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro和ku；
450.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-b/la和ku；
451.muc1和ss-a/ro；
452.muc1和ss-b/la；
453.muc1和ku；
454.muc1、ss-a/ro、ss-b/la；
455.muc1、ss-a/ro和ku；
456.muc1、ss-b/la和ku；
457.muc1、grp78和ss-a/ro；
458.muc1、grp78和ss-b/la；
459.muc1、grp78和ku；
460.muc1、grp78、ss-a/ro和ss-b/la；
461.muc1、grp78、ss-a/ro和ku；
462.muc1、grp78、ss-b/la和ku；
463.muc1、gfra1和ss-a/ro；
464.muc1、gfra1和ss-b/la；
465.muc1、gfra1和ku；
466.muc1、gfra1、ss-a/ro、ss-b/la；
467.muc1、gfra1、ss-a/ro和ku；
468.muc1、gfra1、ss-b/la和ku；
469.muc1、grp78、gfra1和ss-a/ro；
470.muc1、grp78、gfra1和ss-b/la；
471.muc1、grp78、gfra1和ku；
472.muc1、grp78、gfra1、ss-a/ro、ss-b/la；
473.muc1、grp78、gfra1、ss-a/ro和ku；
474.muc1、grp78、gfra1、ss-b/la和ku；
475.muc1、a1at和ss-a/ro；
476.muc1、a1at和ss-b/la；
477.muc1、a1at和ku；
478.muc1、a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
479.muc1、a1at、ss-a/ro和ku；
480.muc1、a1at、ss-b/la和ku；
481.muc1、grp78、a1at和ss-a/ro；
482.muc1、grp78、a1at、ss-b/la；
483.muc1、grp78、a1at和ku；
484.muc1、grp78、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
485.muc1、grp78、a1at、ss-a/ro和ku；
486.muc1、grp78、a1at、ss-b/la和ku；
487.muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro；
488.muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-b/la；
489.muc1、grp78、gfra1、a1at和ku；
490.muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
491.muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro和ku；
492.muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-b/la和ku；
493.muc1、grn和ss-a/ro；
494.muc1、grn和ss-b/la；
495.muc1、grn和ku；
496.muc1、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
497.muc1、grn、ss-a/ro和ku；
498.muc1、grn、ss-b/la和ku；
499.muc1、grp78、grn和ss-a/ro；
500.muc1、grp78、grn、ss-b/la；
501.muc1、grp78、grn和ku；
502.muc1、grp78、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
503.muc1、grp78、grn、ss-a/ro和ku；
504.muc1、grp78、grn、ss-b/la和ku；
505.muc1、grp78、gfra1、grn和ss-a/ro；
506.muc1、grp78、gfra1、grn和ss-b/la；
507.muc1、grp78、gfra1、grn和ku；
508.muc1、grp78、gfra1、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
509.muc1、grp78、gfra1、grn、ss-a/ro和ku；
510.muc1、grp78、gfra1、grn、ss-b/la和ku；
511.muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro；
512.muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-b/la；
513.muc1、grp78、gfra1、a1at、grn和ku；
514.muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
515.muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro和ku；
516.muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-b/la和ku；
517.grp78和ss-a/ro；
518.grp78和ss-b/la；
519.grp78和ku；
520.grp78、ss-a/ro、ss-b/la；
521.grp78、ss-a/ro和ku；
522.grp78、ss-b/la和ku；
523.grp78、gfra1和ss-a/ro；
524.grp78、gfra1和ss-b/la；
525.grp78、gfra1和ku；
526.grp78、gfra1、ss-a/ro和ss-b/la；
527.grp78、gfra1、ss-a/ro和ku；
528.grp78、gfra1、ss-b/la和ku；
529.grp78、a1at和ss-a/ro；
530.grp78、a1at和ss-b/la；
531.grp78、a1at和ku；
532.grp78、a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
533.grp78、a1at、ss-a/ro和ku；
534.grp78、a1at、ss-b/la和ku；
535.grp78、gfra1、a1at和ss-a/ro；
536.grp78、gfra1、a1at和ss-b/la；
537.grp78、gfra1、a1at和ku；
538.grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
539.grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro和ku；
540.grp78、gfra1、a1at、ss-b/la和ku；
541.grp78、grn和ss-a/ro；
542.grp78、grn和ss-b/la；
543.grp78、grn和ku；
544.grp78、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
545.grp78、grn、ss-a/ro和ku；
546.grp78、grn、ss-b/la和ku；
547.grp78、gfra1、grn和ss-a/ro；
548.grp78、gfra1、grn和ss-b/la；
549.grp78、gfra1、grn和ku；
550.grp78、gfra1、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
551.grp78、gfra1、grn、ss-a/ro和ku；
552.grp78、gfra1、grn、ss-b/la和ku；
553.grp78、gfra1、a1at、grn和ss-a/ro；
554.grp78、gfra1、a1at、grn和ss-b/la；
555.grp78、gfra1、a1at、grn和ku；
556.grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
557.grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro和ku；
558.grp78、gfra1、a1at、grn、ss-b/la和ku；
559.gfra1和ss-a/ro；
560.gfra1和ss-b/la；
561.gfra1和ku；
562.gfra1、ss-a/ro、ss-b/la；
563.gfra1、ss-a/ro和ku；
564.gfra1、ss-b/la和ku；
565.gfra1、a1at和ss-a/ro；
566.gfra1、a1at和ss-b/la；
567.gfra1、a1at和ku；
568.gfra1、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
569.gfra1、a1at、ss-a/ro和ku；
570.gfra1、a1at、ss-b/la和ku；
571.gfra1、grn和ss-a/ro；
572.gfra1、grn和ss-b/la；
573.gfra1、grn和ku；
574.gfra1、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
575.gfra1、grn、ss-a/ro和ku；
576.gfra1、grn、ss-b/la和ku；
577.gfra1、a1at、grn和ss-a/ro；
578.gfra1、a1at、grn和ss-b/la；
579.gfra1、a1at、grn和ku；
580.gfra1、a1at、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
581.gfra1、a1at、grn、ss-a/ro和ku；
582.gfra1、a1at、grn、ss-b/la和ku；
583.a1at和ss-a/ro；
584.a1at和ss-b/la；
585.a1at和ku；
586.a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
587.a1at、ss-a/ro和ku；
588.a1at、ss-b/la和ku；
589.a1at、grn和ss-a/ro；
590.a1at、grn和ss-b/la；
591.a1at、grn和ku；
592.a1at、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
593.a1at、grn、ss-a/ro和ku；和
594.a1at、grn、ss-b/la和ku。
595.所述方法可用于诊断癌症、预测癌症的发生或复发，和/或监测癌症治疗。在一个实施方案中，所述方法可用于诊断癌症，并且所述受试者是具有癌症风险的受试者。在另一个实施方案中，所述受试者有患乳腺癌的风险。在本实施方案中，所述受试者可以是具有乳腺癌风险的任何受试者，包括但不限于具有乳腺癌家族史或其他癌症遗传易感性的受试者(例如人类受试者)，或具有一种或多种乳腺癌症状的受试者。
596.在另一个实施方案中，所述受试者(例如人类受试者)先前接受过癌症(例如乳腺癌)治疗，因此有乳腺癌复发的风险。
597.在另一个实施方案中，所述受试者(例如人类受试者)正在接受癌症(例如乳腺癌)治疗，并且所述方法可用于监测治疗的疗效，包括但不限于化疗、激素治疗、放射治疗、抗体治疗或其他靶向治疗，和/或移除肿瘤的手术。
598.在另一个实施方案中，所述受试者(例如人类受试者)通过其他技术被诊断为患有癌症(例如乳腺癌)，包括但不限于乳房x光摄影、超声、活检、mri或其他成像模式，其中所述方法用于识别假阳性癌症诊断。
599.在所有这些实施方案中，本发明的方法可以实施一次，或者可以由医护人员按照认为合适的间隔实施。作为非限制性示例，可以首次实施所述方法以建立抗一种或多种ena和taa的人类自身抗体的基线，随后所述方法的重复实施以评估自身抗体水平的变化，作为监测治疗效果的方法。
600.在所有这些实施方案中，本发明的方法可以与一种或多种其他测试相结合，包括但不限于乳房x线摄影、体检、ct扫描、pet扫描、循环dna检测或其他成像或血液测试，提高检测和/或诊断和/或预测和/或监测癌症发生或复发的准确性和/或可靠性和/或敏感性和/或特异性。
601.在本发明的所有实施方案和实施方案的组合中，所述抗体检测标记物可以是用于检测抗所述蛋白质的抗体的任何合适试剂，包括但不限于所述蛋白质、蛋白质的分泌形式(例如蛋白质的天然分泌形式)，或蛋白质的细胞外结构域。分泌蛋白更容易从肿瘤细胞输送到淋巴结，在淋巴结中免疫细胞相互作用产生大量高亲和力抗体。膜表面蛋白通常通过依赖于金属蛋白酶的裂解从肿瘤细胞中以可溶性形式释放。脱落蛋白比细胞内蛋白更容易转移到淋巴结。因此，在一个实施方案中，所述抗体检测标记物是所述蛋白质的分泌部分或膜部分。
602.在上述所有实施方案中，所述抗体检测标记物可以用可检测的标签进行标记。在一个实施方案中，用于检测抗一种ena或taa的自身抗体的试剂的可检测标签可与用于检测抗其他ena或taa的自身抗体的可检测标签区分。检测标签的方法包括但不限于光谱、光化学、生化、免疫化学、物理或化学技术。可以使用任何合适的可检测标签。
603.在一个实施方案中，所述抗体检测标记物固定在表面上，包括但不限于珠子、纳米颗粒、微阵列、玻片、膜、微孔板等。
604.在另一个实施方案中，所述抗体检测标志物分子包含如本发明所述的组合物。
605.在本文的所有实施方案和实施方案组合中，可在任何适当条件下进行接触，以促进体液样本中的自身抗体与所述抗体检测标志物分子之间的结合，形成可检测的结合复合物。本领域技术人员可以根据本发明的教导，基于预期的分析来确定适当的此类条件。类似
地，可在所述方法中使用任何合适的附加步骤，例如一种或多种洗涤步骤或移除未结合试剂的其他步骤。
606.可以使用任何合适的检测技术，包括但不限于酶联免疫吸附试验(elisa)、基于珠子的试验平台(如luminex系统)、基于二维阵列的试验平台(如)，以及“纵向分析筛选”平台，该平台可在一次试验和稀释中，以临床相关浓度对患者样本中所有列出的ena和taa的人类自身抗体进行定量。在一个实施方案中，所述组合物可放置在固体载体上，例如微阵列、玻片、膜、微孔板形式或微珠。该实施方案有助于组合物的使用。实施例中提供了示例性的此类分析。
607.类似地，可以使用任何合适的体液，包括但不限于来自受试者的血清样本、血浆样本或血液样本。
608.在一个实施方案中，所述方法将受试者识别为可能患有癌症或癌症复发，并且所述方法还包括用足以治疗癌症或癌症复发的治疗剂量治疗所述受试者。在一个如下的实施方案中，治疗包括化疗、激素治疗、放射治疗和/或移除肿瘤的手术中的一种或多种。
609.另一方面，本发明提供了抗体检测标志物组合物，所述组合物包括：
610.(a)一种或多种第一抗体检测标志物分子，所述第一抗体检测标志物分子结合抗至少一种肿瘤相关抗原(taa)的人类自身抗体；和
611.(b)一种或多种第二抗体检测标志物分子，所述第二抗体检测标志物分子结合抗至少一种可提取核抗原(ena)的人类自身抗体。
612.在第一方面中公开的第一抗体检测标志物分子、第二抗体检测标志物分子、ena和taa的所有实施方案均适合在本发明的这一方面中使用。
613.因此，在一个实施方案中，所述至少一种ena选自cenpa、jo-1、u1 snrnp亚单位70kd、u1 snrnp亚单位a、u1 snrnp亚单位c、sm亚单位b、sm亚单位b’、sm亚单位d、sm亚单位e、sm亚单位f、sm亚单位g(在本文中累积称为“sm”)、scl70、sm、ss-a/ro(52kda、60kda或两者)，ss-b/la、cenpb、u1 snrnp、pm/scl100、ku和pm/scl75。在另一个实施方案中，所述taa可与包括但不限于乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、肺癌或任何其他上皮癌的肿瘤类型相关。在一种具体实施方案中，所述至少一种taa包括至少一种乳腺癌taa。
614.在另一个具体的实施方案中，所述至少一种taa选自angptl4、cald1、cd147、cd320、cdh3、cst2、dkk1、epha2、gal1、gfra1、grn、her2、igfbp2、lamc2、lrp10、lrrc15、muc1、spint2、ssr2、susd2、xage-1b、a1at、birc5、gal3、capc、grn和grp78。
615.在各种实施方案中，所述一种或多种第一抗体检测标志物结合抗至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18种或更多ena的人类自身抗体，这些ena选自cenpa、jo-1、u1 snrnp亚单位70kd、u1 snrnp亚单位a、u1 snrnp亚单位c、sm亚单位b、sm亚单位b’，sm亚单位d、sm亚单位e、sm亚单位f、sm亚单位g(在本文中累积称为“sm”)、scl70、ss-a/ro(52kda、60kda或两者)、ss-b/la、cenpb、u1 snrnp、pm/scl100、ku和pm/scl75。在一些实施方案中，所述抗体检测标志物可结合抗sm或u1 snrnp的人类自身抗体(即：不区分不同亚单位)。在其他实施方案中，所述抗体检测标志物可结合抗特定或sm或u1 snrnp亚单位的人类自身抗体。
616.在其他实施方案中，所述一种或多种第二抗体检测标志物结合抗至少2、3、4、5、6、
7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26种或所有27种taa的人类自身抗体，所述taa选自angptl4、cald1、cd147、cd320、cdh3、cst2、dkk1、epha2、gal1、gfra1、grn、her2、，igfbp2、lamc2、lrp10、lrrc15、muc1、spint2、spon2、ssr2、susd2、xage-1b、a1at、birc5、gal3、capc和grp78。
617.在一个实施方案中，所述一种或多种ena包括ss-a/ro(52kda)、ss-b/la、cenpb和ku中的1、2、3或全部4种。在另一个实施方案中，所述一种或多种ena包括ss-a/ro、ss-b/la和ku中的1种、2种或全部3种。
618.在一个实施方案中，所述一种或多种taa包括angptl4、cald1、cd320、cdh3、dkk1、lrrc15、muc1、spint2、spon2、ssr2和grp78中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10种或全部11种。在另一个实施方案中，所述一种或多种taa包括dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at和grn中的1、2、3、4、5、6种或全部7种。
619.在各种进一步的实施方案中，所述一种或多种taa和一种或多种ena的组合包括选自以下的一个集合：
620.a1at和sm；
621.a1at和igfbp2；
622.a1at和grn；
623.a1at和cenpa；
624.a1at、sm和igfpb2；
625.a1at、sm和grn；
626.a1at、sm和cenpa；
627.a1at、sm、igfbp2和grn；
628.a1at、sm、igfbp2和cenpa
629.a1at、sm、igfbp2、grn、cenpa；
630.a1at、igfbp2和grn；
631.a1at、igfbp2和cenpa；
632.a1at、igfbp2、grn和cenpa；
633.sm和igfpb2；
634.sm和grn；
635.sm和cenpa；
636.sm、igfpb2和grn；
637.sm、igfpb2和cenpa；
638.sm、igfpb2、grn、cenpa；
639.igfpb2和grn；
640.igfpb2和cenpa；
641.igfpb2、grn和cenpa；
642.grn和cenpa；
643.dkk1和ss-a/ro；
644.dkki和ss-b/la；
645.dkki和ku；
646.dkki、ss-a/ro和ss-b/la；
647.dkk1、ss-a/ro和ku；
648.dkk1、ss-b/la和ku；
649.dkk1、angptl4和ss-a/ro；
650.dkki、angptl4和ss-b/la；
651.dkki、angptl4和ku；
652.dkki、angptl4、ss-a/ro和ss-b/la；
653.dkk1、angptl4、ss-a/ro和ku；
654.dkk1、angptl4、ss-b/la和ku；
655.dkk1、muc1和ss-a/ro；
656.dkki、muc1和ss-b/la；
657.dkki、muc1和ku；
658.dkki、muc1、ss-a/ro和ss-b/la；
659.dkk1、muc1、ss-a/ro和ku；
660.dkk1、muc1、ss-b/la和ku；
661.dkk1、angptl4、muc1、ss-a/ro；
662.dkki、angptl4、muc1和ss-b/la；
663.dkki、angptl4、muc1和ku；
664.dkki、angptl4、muc1、ss-a/ro、ss-b/la；
665.dkk1、angptl4、muc1、ss-a/ro和ku；
666.dkk1、angptl4、muc1、ss-b/la和ku；
667.dkk1、grp78和ss-a/ro；
668.dkki、grp78和ss-b/la；
669.dkki、grp78和ku；
670.dkki、grp78、ss-a/ro和ss-b/la；
671.dkk1、grp78、ss-a/ro和ku；
672.dkk1、grp78、ss-b/la和ku；
673.dkk1、angptl4、grp78、ss-a/ro；
674.dkki、angptl4、grp78和ss-b/la；
675.dkki、angptl4、grp78和ku；
676.dkki、angptl4、grp78、ss-a/ro和ss-b/la；
677.dkk1、angptl4、grp78、ss-a/ro和ku；
678.dkk1、angptl4、grp78、ss-b/la和ku；
679.dkk1、muc1、grp78、ss-a/ro；
680.dkki、muc1、grp78、ss-b/la；
681.dkki、muc1、grp78和ku；
682.dkki、muc1、grp78、ss-a/ro、ss-b/la；
683.dkk1、muc1、grp78、ss-a/ro和ku；
684.dkk1、muc1、grp78、ss-b/la和ku；
685.dkk1、angptl4、muc1、grp78、ss-a/ro；
686.dkki、angptl4、muc1、grp78、ss-b/la；
687.dkki、angptl4、muc1、grp78和ku；
688.dkki、angptl4、muc1、grp78、ss-a/ro和ss-b/la；
689.dkk1、angptl4、muc1、grp78、ss-a/ro和ku；
690.dkk1、angptl4、muc1、grp78、ss-b/la和ku；
691.dkk1、gfra1和ss-a/ro；
692.dkki、gfra1和ss-b/la；
693.dkki、gfra1和ku；
694.dkki、gfra1、ss-a/ro和ss-b/la；
695.dkk1、gfra1、ss-a/ro和ku；
696.dkk1、gfra1、ss-b/la和ku；
697.dkk1、angptl4、gfra1和ss-a/ro；
698.dkki、angptl4、gfra1和ss-b/la；
699.dkki、angptl4、gfra1和ku；
700.dkki、angptl4、gfra1、ss-a/ro和ss-b/la；
701.dkk1、angptl4、gfra1、ss-a/ro和ku；
702.dkk1、angptl4、gfra1、ss-b/la和ku；
703.dkk1、muc1、gfra1和ss-a/ro；
704.dkki、muc1、gfra1和ss-b/la；
705.dkki、muc1、gfra1和ku；
706.dkki、muc1、gfra1、ss-a/ro、ss-b/la；
707.dkk1、muc1、gfra1、ss-a/ro和ku；
708.dkk1、muc1、gfra1、ss-b/la和ku；
709.dkk1、angptl4、muc1、gfra1和ss-a/ro；
710.dkki、angptl4、muc1、gfra1和ss-b/la；
711.dkki、angptl4、muc1、gfra1和ku；
712.dkki、angptl4、muc1、gfra1、ss-a/ro和ss-b/la；
713.dkk1、angptl4、muc1、gfra1、ss-a/ro和ku；
714.dkk1、angptl4、muc1、gfra1、ss-b/la和ku；
715.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1和ss-a/ro；
716.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1和ss-b/la；
717.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1和ku；
718.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、ss-a/ro、ss-b/la；
719.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、ss-a/ro和ku；
720.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、ss-b/la和ku；
721.dkk1、a1at和ss-a/ro；
722.dkki、a1at和ss-b/la；
723.dkki，a1at和ku；
724.dkki、a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
725.dkk1、a1at、ss-a/ro和ku；
726.dkk1、a1at、ss-b/la和ku；
727.dkk1、angptl4、a1at、ss-a/ro；
728.dkki、angptl4、a1at和ss-b/la；
729.dkki、angptl4、a1at和ku；
730.dkki、angptl4、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
731.dkk1、angptl4、a1at、ss-a/ro和ku；
732.dkk1、angptl4、a1at、ss-b/la和ku；
733.dkk1、muc1、a1at、ss-a/ro；
734.dkki、muc1、a1at和ss-b/la；
735.dkki、muc1、a1at和ku；
736.dkki、muc1、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
737.dkk1、muc1、a1at、ss-a/ro和ku；
738.dkk1、muc1、a1at、ss-b/la和ku；
739.dkk1、angptl4、muc1、a1at、ss-a/ro；
740.dkki、angptl4、muc1、a1at、ss-b/la；
741.dkki、angptl4、muc1、a1at和ku；
742.dkki、angptl4、muc1、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
743.dkk1、angptl4、muc1、a1at、ss-a/ro和ku；
744.dkk1、angptl4、muc1、a1at、ss-b/la和ku；
745.dkk1、angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-a/ro；
746.dkki、angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-b/la；
747.dkki、angptl4、muc1、grp78、a1at和ku；
748.dkki、angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
749.dkk1、angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-a/ro和ku；
750.dkk1、angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-b/la和ku；
751.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro；
752.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-b/la；
753.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at和ku；
754.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
755.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro和ku；
756.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-b/la和ku；
757.dkk1、grn和ss-a/ro；
758.dkki、grn和ss-b/la；
759.dkki、grn和ku；
760.dkki、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
761.dkk1、grn、ss-a/ro和ku；
762.dkk1、grn、ss-b/la和ku；
763.dkk1、angptl4、grn和ss-a/ro；
764.dkki、angptl4、grn和ss-b/la；
765.dkki、angptl4、grn和ku；
766.dkki、angptl4、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
767.dkk1、angptl4、grn、ss-a/ro和ku；
768.dkk1、angptl4、grn、ss-b/la和ku；
769.dkk1、muc1、grn和ss-a/ro；
770.dkki、muc1、grn和ss-b/la；
771.dkki、muc1、grn和ku；
772.dkki、muc1、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
773.dkk1、muc1、grn、ss-a/ro和ku；
774.dkk1、muc1、grn、ss-b/la和ku；
775.dkk1、angptl4、muc1、grn、ss-a/ro；
776.dkki、angptl4、muc1、grn、ss-b/la；
777.dkki、angptl4、muc1、grn和ku；
778.dkki、angptl4、muc1、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
779.dkk1、angptl4、muc1、grn、ss-a/ro和ku；
780.dkk1、angptl4、muc1、grn、ss-b/la和ku；
781.dkk1、angptl4、muc1、grp78、grn、ss-a/ro；
782.dkki、angptl4、muc1、grp78、grn和ss-b/la；
783.dkki、angptl4、muc1、grp78、grn和ku；
784.dkki、angptl4、muc1、grp78、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
785.dkk1、angptl4、muc1、grp78、grn、ss-a/ro和ku；
786.dkk1、angptl4、muc1、grp78、grn、ss-b/la和ku；
787.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn、ss-a/ro；
788.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn、ss-b/la；
789.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn和ku；
790.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
791.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn、ss-a/ro和ku；
792.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn、ss-b/la和ku；
793.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro；
794.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-b/la；
795.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn和ku；
796.dkki、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
797.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro和ku；
798.dkk1、angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-b/la和ku；
799.angptl4和ss-a/ro；
800.angptl4和ss-b/la；
801.angptl4和ku；
802.angptl4、ss-a/ro、ss-b/la；
803.angptl4、ss-a/ro和ku；
804.angptl4、ss-b/la和ku；
805.angptl4、muc1和ss-a/ro；
806.angptl4、muc1和ss-b/la；
807.angptl4、muc1和ku；
808.angptl4、muc1、ss-a/ro和ss-b/la；
809.angptl4、muc1、ss-a/ro和ku；
810.angptl4、muc1、ss-b/la和ku；
811.angptl4、grp78和ss-a/ro；
812.angptl4、grp78和ss-b/la；
813.angptl4、grp78和ku；
814.angptl4、grp78、ss-a/ro和ss-b/la；
815.angptl4、grp78、ss-a/ro和ku；
816.angptl4、grp78、ss-b/la和ku；
817.angptl4、muc1、grp78、ss-a/ro；
818.angptl4、muc1、grp78、ss-b/la；
819.angptl4、muc1、grp78和ku；
820.angptl4、muc1、grp78、ss-a/ro、ss-b/la；
821.angptl4、muc1、grp78、ss-a/ro和ku；
822.angptl4、muc1、grp78、ss-b/la和ku；
823.angptl4、gfra1和ss-a/ro；
824.angptl4、gfra1和ss-b/la；
825.angptl4、gfra1和ku；
826.angptl4、gfra1、ss-a/ro和ss-b/la；
827.angptl4、gfra1、ss-a/ro和ku；
828.angptl4、gfra1、ss-b/la和ku；
829.angptl4、muc1、gfra1和ss-a/ro；
830.angptl4、muc1、gfra1和ss-b/la；
831.angptl4、muc1、gfra1和ku；
832.angptl4、muc1、gfra1、ss-a/ro、ss-b/la；
833.angptl4、muc1、gfra1、ss-a/ro和ku；
834.angptl4、muc1、gfra1、ss-b/la和ku；
835.angptl4、muc1、grp78、gfra1和ss-a/ro；
836.angptl4、muc1、grp78、gfra1和ss-b/la；
837.angptl4、muc1、grp78、gfra1和ku；
838.angptl4、muc1、grp78、gfra1、ss-a/ro和ss-b/la；
839.angptl4、muc1、grp78、gfra1、ss-a/ro和ku；
840.angptl4、muc1、grp78、gfra1、ss-b/la和ku；
841.angptl4、a1at和ss-a/ro；
842.angptl4、a1at和ss-b/la；
843.angptl4、a1at和ku；
844.angptl4、a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
845.angptl4、a1at、ss-a/ro和ku；
846.angptl4、a1at、ss-b/la和ku；
847.angptl4、muc1、a1at和ss-a/ro；
848.angptl4、muc1、a1at、ss-b/la；
849.angptl4、muc1、a1at和ku；
850.angptl4、muc1、a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
851.angptl4、muc1、a1at、ss-a/ro和ku；
852.angptl4、muc1、a1at、ss-b/la和ku；
853.angptl4、muc1、grp78、a1at和ss-a/ro；
854.angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-b/la；
855.angptl4、muc1、grp78、a1at和ku；
856.angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
857.angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-a/ro和ku；
858.angptl4、muc1、grp78、a1at、ss-b/la和ku；
859.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro；
860.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-b/la；
861.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at和ku；
862.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
863.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro和ku；
864.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-b/la和ku；
865.angptl4、grn和ss-a/ro；
866.angptl4、grn和ss-b/la；
867.angptl4、grn和ku；
868.angptl4、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
869.angptl4、grn、ss-a/ro和ku；
870.angptl4、grn、ss-b/la和ku；
871.angptl4、muc1、grn和ss-a/ro；
872.angptl4、muc1、grn和ss-b/la；
873.angptl4、muc1、grn和ku；
874.angptl4、muc1、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
875.angptl4、muc1、grn、ss-a/ro和ku；
876.angptl4、muc1、grn、ss-b/la和ku；
877.angptl4、muc1、grp78、grn和ss-a/ro；
878.angptl4、muc1、grp78、grn和ss-b/la；
879.angptl4、muc1、grp78、grn和ku；
880.angptl4、muc1、grp78、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
881.angptl4、muc1、grp78、grn、ss-a/ro和ku；
882.angptl4、muc1、grp78、grn、ss-b/la和ku；
883.angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn和ss-a/ro；
884.angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn和ss-b/la；
885.angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn和ku；
886.angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
887.angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn、ss-a/ro和ku；
888.angptl4、muc1、grp78、gfra1、grn、ss-b/la和ku；
889.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn和ss-a/ro；
890.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn和ss-b/la；
891.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn和ku；
892.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
893.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro和ku；
894.angptl4、muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-b/la和ku；
895.muc1和ss-a/ro；
896.muc1和ss-b/la；
897.muc1和ku；
898.muc1、ss-a/ro、ss-b/la；
899.muc1、ss-a/ro和ku；
900.muc1、ss-b/la和ku；
901.muc1、grp78和ss-a/ro；
902.muc1、grp78和ss-b/la；
903.muc1、grp78和ku；
904.muc1、grp78、ss-a/ro和ss-b/la；
905.muc1、grp78、ss-a/ro和ku；
906.muc1、grp78、ss-b/la和ku；
907.muc1、gfra1和ss-a/ro；
908.muc1、gfra1和ss-b/la；
909.muc1、gfra1和ku；
910.muc1、gfra1、ss-a/ro和ss-b/la；
911.muc1、gfra1、ss-a/ro和ku；
912.muc1、gfra1、ss-b/la和ku；
913.muc1、grp78、gfra1和ss-a/ro；
914.muc1、grp78、gfra1和ss-b/la；
915.muc1、grp78、gfra1和ku；
916.muc1、grp78、gfra1、ss-a/ro、ss-b/la；
917.muc1、grp78、gfra1、ss-a/ro和ku；
918.muc1、grp78、gfra1、ss-b/la和ku；
919.muc1、a1at和ss-a/ro；
920.muc1、a1at和ss-b/la；
921.muc1、a1at和ku；
922.muc1、a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
923.muc1、a1at、ss-a/ro和ku；
924.muc1、a1at、ss-b/la和ku；
925.muc1、grp78、a1at和ss-a/ro；
926.muc1、grp78、a1at、ss-b/la；
927.muc1、grp78、a1at和ku；
928.muc1、grp78、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
929.muc1、grp78、a1at、ss-a/ro和ku；
930.muc1、grp78、a1at、ss-b/la和ku；
931.muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro；
932.muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-b/la；
933.muc1、grp78、gfra1、a1at和ku；
934.muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
935.muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro和ku；
936.muc1、grp78、gfra1、a1at、ss-b/la和ku；
937.muc1、grn和ss-a/ro；
938.muc1、grn和ss-b/la；
939.muc1、grn和ku；
940.muc1、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
941.muc1、grn、ss-a/ro和ku；
942.muc1、grn、ss-b/la和ku；
943.muc1、grp78、grn和ss-a/ro；
944.muc1、grp78、grn、ss-b/la；
945.muc1、grp78、grn和ku；
946.muc1、grp78、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
947.muc1、grp78、grn、ss-a/ro和ku；
948.muc1、grp78、grn、ss-b/la和ku；
949.muc1、grp78、gfra1、grn和ss-a/ro；
950.muc1、grp78、gfra1、grn、ss-b/la；
951.muc1、grp78、gfra1、grn和ku；
952.muc1、grp78、gfra1、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
953.muc1、grp78、gfra1、grn、ss-a/ro和ku；
954.muc1、grp78、gfra1、grn、ss-b/la和ku；
955.muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro；
956.muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-b/la；
957.muc1、grp78、gfra1、a1at、grn和ku；
958.muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
959.muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro和ku；
960.muc1、grp78、gfra1、a1at、grn、ss-b/la和ku；
961.grp78和ss-a/ro；
962.grp78和ss-b/la；
963.grp78和ku；
964.grp78、ss-a/ro、ss-b/la；
965.grp78、ss-a/ro和ku；
966.grp78、ss-b/la和ku；
967.grp78、gfra1和ss-a/ro；
968.grp78、gfra1和ss-b/la；
969.grp78、gfra1和ku；
970.grp78、gfra1、ss-a/ro和ss-b/la；
971.grp78、gfra1、ss-a/ro和ku；
972.grp78、gfra1、ss-b/la和ku；
973.grp78、a1at和ss-a/ro；
974.grp78、a1at和ss-b/la；
975.grp78、a1at和ku；
976.grp78、a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
977.grp78、a1at、ss-a/ro和ku；
978.grp78、a1at、ss-b/la和ku；
979.grp78、gfra1、a1at和ss-a/ro；
980.grp78、gfra1、a1at、ss-b/la；
981.grp78、gfra1、a1at和ku；
982.grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
983.grp78、gfra1、a1at、ss-a/ro和ku；
984.grp78、gfra1、a1at、ss-b/la和ku；
985.grp78、grn和ss-a/ro；
986.grp78、grn和ss-b/la；
987.grp78、grn和ku；
988.grp78、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
989.grp78、grn、ss-a/ro和ku；
990.grp78、grn、ss-b/la和ku；
991.grp78、gfra1、grn和ss-a/ro；
992.grp78、gfra1、grn和ss-b/la；
993.grp78、gfra1、grn和ku；
994.grp78、gfra1、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
995.grp78、gfra1、grn、ss-a/ro和ku；
996.grp78、gfra1、grn、ss-b/la和ku；
997.grp78、gfra1、a1at、grn和ss-a/ro；
998.grp78、gfra1、a1at、grn和ss-b/la；
999.grp78、gfra1、a1at、grn和ku；
1000.grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
1001.grp78、gfra1、a1at、grn、ss-a/ro和ku；
1002.grp78、gfra1、a1at、grn、ss-b/la和ku；
1003.gfra1和ss-a/ro；
1004.gfra1和ss-b/la；
1005.gfra1和ku；
1006.gfra1、ss-a/ro、ss-b/la；
1007.gfra1、ss-a/ro和ku；
1008.gfra1、ss-b/la和ku；
1009.gfra1、a1at和ss-a/ro；
1010.gfra1、a1at和ss-b/la；
1011.gfra1、a1at和ku；
1012.gfra1、a1at、ss-a/ro、ss-b/la；
1013.gfra1、a1at、ss-a/ro和ku；
1014.gfra1、a1at、ss-b/la和ku；
1015.gfra1、grn和ss-a/ro；
1016.gfra1、grn和ss-b/la；
1017.gfra1、grn和ku；
1018.gfra1、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
1019.gfra1、grn、ss-a/ro和ku；
1020.gfra1、grn、ss-b/la和ku；
1021.gfra1、a1at、grn和ss-a/ro；
1022.gfra1、a1at、grn和ss-b/la；
1023.gfra1、a1at、grn和ku；
1024.gfra1、a1at、grn、ss-a/ro、ss-b/la；
1025.gfra1、a1at、grn、ss-a/ro和ku；
1026.gfra1、a1at、grn、ss-b/la和ku；
1027.a1at和ss-a/ro；
1028.a1at和ss-b/la；
1029.a1at和ku；
1030.a1at、ss-a/ro和ss-b/la；
1031.a1at、ss-a/ro和ku；
1032.a1at、ss-b/la和ku；
1033.a1at、grn和ss-a/ro；
1034.a1at、grn和ss-b/la；
1035.a1at、grn和ku；
1036.a1at、grn、ss-a/ro和ss-b/la；
1037.a1at、grn、ss-a/ro和ku；和
1038.a1at、grn、ss-b/la和ku。
1039.在另一个实施方案中，所述一种或多种第一抗体检测标志物分子包含taa、其抗原片段、或taa的天然胞外结构域和/或天然分泌形式或其抗原片段，或由其组成；并且所述一种或多种第二抗体检测标志物分子包含所述ena或其抗原片段，或所述ena或其抗原片段的天然胞外结构域和/或天然分泌形式，或由其组成。
1040.在另一个实施方案中，所述组合物总共由2～10,000个抗体检测标志物分子组成。在另一个实施方案中，所述组合物总共由2到1000个抗体检测标志物分子组成。
1041.实施例
1042.实施例/案例研究1
1043.在开始任何处理之前，对200名新诊断乳腺癌患者的血清样本进行ana染色。该患者群体代表了疾病的异质性，包括74％的浸润性、26％的原位、87％的导管性、11％的小叶性、24％的淋巴结受累、86％的er阳性、17％的her-2阳性和12％的三阴性乳腺癌。hep-2细胞接种于96孔组织培养板中。将细胞固定、渗透，并与血清样品以1:40的初始稀释度孵育。添加二级抗体alexatm 488山羊抗人igg用于模式检测。使用cellinsight cx7tm仪器对细胞进行成像。用1:40、1:80、1:160和1:320的1:2系列稀释液进一步筛选1:40稀释的阳性样品。两位科学家分别对染色模式进行评分，以确保模式测定的准确性和可重复性。每种染色模式的参比血清均从加利福尼亚州卡尔斯巴德的slr研究公司获得。
1044.对于ana阳性试验，报告了确定的染色模式和稀释度。图1示出了不同阳性染色模式产生的示例：均质型、颗粒型、着丝粒型、线粒体型和核仁型。这些分析中使用的血清来自研究人群中未诊断出自身免疫性疾病的癌症患者。对于ana分析，1:160稀释度的染色被视为阳性。血清滴定对于ana检测至关重要，因为在1:40的血清稀释度下，32％的健康个体呈阳性。然而，在1:80时，13.3％的个体呈阳性，在1:160时为5.0％，在1:320时仅为3.3％[9]。结果表明，36.5％的患者在1:160稀释度下ana染色呈阳性。此外，乳腺癌亚型与特定的染色模式无关。表1示出了具有着丝粒型、均质型、核仁型、线粒体型和颗粒型阳性染色模式的乳腺癌患者的数量，证实了癌症患者具有自身免疫抗体。
[1045]
表1.200例乳腺癌患者的ana染色模式
[1046][1047][1048]
·
200例乳腺癌患者在稀释1:160时ana染色阳性百分比
[1049]
进一步确定了上述队列中200名乳腺癌患者中有多少没有诊断出自身免疫性疾病，但仍有抗ena自身抗体。在开始处理前，从200名乳腺癌患者收集的血清对一组ena自身
免疫生物标志物进行了反应性调查：jo-1、ku、ss-a(ro-60kda)、ss-a(ro-52kda)、ss-b(la)、scl-70、sm、smd1肽、rnp、u1 snrnp、pm/scl75、dsdna、，cenp-a和cenp-b。使用基于luminex珠的多重试验检测抗ena蛋白质的自身抗体反应性(表2和图2)。luminex xmaptm微球技术(luminex，austin，tx)基于彩色编码的5.6微米微球，称为微球，用不同的荧光团染色，并用作构建分析的固体表面。每个ena蛋白都与不同颜色的luminex珠结合。将等量的ena抗原包被珠组混合物置于单管中，并与血清一起孵育。利用与pe结合的抗人igg抗体作为二抗。考虑到统计效能，对于每个单独的珠子，luminex系统测定内部染料的荧光，以识别珠子和pe，确定自身抗体反应，直到分析了至少100种珠子颜色。从疾病控制中心(cdc)获得抗ena标记物的参比抗血清，并用作阳性对照。
[1050]
作为所生成数据的代表，表2示出了7种ena生物标志物的结果。阳性抗ena抗体反应定义为比背景反应性高10倍。数据证实，有一组患者具有抗ena自身免疫蛋白的自身抗体，即使他们在癌症诊断之前没有诊断出自身免疫疾病。例如，200名患者中有57名对jo-1自身抗体呈阳性(表3)。在57例jo-1阳性患者中，20例患有自身免疫性疾病。然而，37名患者血清型呈阳性，但自身免疫性疾病无症状(图2所示)。这一结果清楚地表明，癌症患者具有抗ena自身免疫蛋白的自身抗体，即使他们没有被临床诊断为完全的自身免疫性疾病。
[1051]
表2.对ena生物标志物反应的患者自身免疫状况分类。
[1052][1053][1054]
实施例/案例研究2
[1055]
概览
[1056]
bio-id
tm
药盒由内部生产，包含以下候选生物标志物的多重捕获抗原阵列。
[1057]
taa's:angptl4、cald1、cd147、cd320、cdh3、cst2、dkk1、epha2、gal1、gfra1、grn、her2、igfbp2、lamc2、lrp10、lrrc15、muc1、spint2、spon2、ssr2、susd2、xage-1b、aiat、birc5、gal3、capc、grp78。
[1058]
ena's:cenpa、jo-1、rnp/sm、scl70、sm、ss-a/ro(52kda)、ss-b/la、cenpb、u1 snrnp、pm/scl100、ss-a/ro(60kda)、ku、pm/scl75。
[1059]
使用外购微阵列打印设备(应用微阵列(ami))将所有抗原、对照品和标准品一式两份打印到bio-id
tm
盒上。对几个分析参数进行了优化，以最大限度地减少分析间的差异，并最大限度地提高生物芯片的性能。这包括：优化抗原点浓度、每个点的液滴数量、干燥条件、检测抗体浓度和抗体培养时间。使用标准稀释液评估试剂兼容性，使用信号对照技术重复评估分析间的差异，并从slr研究购买参比样品，以验证稀释线性和检测范围。
[1060]
实验方法和结果
[1061]
分析开发工作的起点是使用ami优化排列/打印过程。点质量(点形态和点大小变化)用于评估和优化初始排列条件。bio-id
tm
载玻片由内部制备，并运至ami，与一组对照物(带有rfc标签的bc生物标志物)一起排列。ami继续打印小批量的测试载玻片，这些载玻片被运回我们位于苏福尔斯的实验室，在实验室里，将打印的载玻片与bio-id
tm pdms帽(使其与bio-id
tm
分析仪兼容)粘合。使用已知与rfc标签相互作用的结合山羊抗兔igg dyelighttm 550检测试剂处理试剂盒。所有rfc标记的抗原都接收到该信号，以提供对点形态和大小的清晰洞察。
[1062]
通过反复的“打印、运行、评估过程”，改变打印条件(打印浓度、打印缓冲液、每个点的滴数、干燥条件)，以优化点形状和大小。检测抗体浓度和孵育时间也不同，以优化信号质量/强度。然后将得到的优化打印和处理条件应用到全上下文多路复用阵列处理。图3了示出通过此过程获得的优秀点形态和点大小变化的示例图像。
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在这项初步的开发工作之后，ami继续使用完整的43路复合物生物标志物分析打印进一步的载玻片。与打印优化过程一样，这些载玻片与pdms盖粘合，并储存起来，以供分析验证和样品试验使用。图4提供了43路盒的最终布局以及优化的打印和工艺条件概要。
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在进入样本运行之前，完成额外的分析验证实验，以确保分析满足分析间cv《15％和半定量浓度依赖信号(稀释线性)的目标性能指标。这是通过加工从slr研究所购买的amli一致性参比血清样本完成的(使用优化的打印和处理条件)。这些血清样本是包含43路分析中包含特定水平的一种或多种ena自身免疫生物标志物的、具有良好特征的参比样本。对参比血清进行单独和组合试验。这项工作和数据证明了所有受试参比血清的生物标志物浓度(稀释线性)的精确剂量比例反应(适合ena标记物cenpa、cenpb、jo-1、pm/scl75、ssa(ro52)、ssa(ro60)、ssb(la)、scl70和sm的参比血清在多重试验中单独或组合进行试验)。图5a和图5示出了示例数据。为了进一步验证bio-id在临床相关范围内检测我们的多路通道(multiplex)的能力，运行了所有参比血清的组合，包括低滴度的jo-1和ss-b(高浓度)和高滴度的cenpa和scl75(低浓度)。所有参比血清在一次运行中均检测到阳性(见图5c)。通过患者样本研究进一步验证了bio id的检测范围，其中所有生物标志物均使用单一样本稀释法检测。
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分析验证的最后一个组成部分是评估分析间的变异系数(cv)。这是通过在26个单独的分析中处理相同的参比血清样本来测定的(我们使用ssa参比样本，并在我们的43路面板中测定ssa生物标志物的反应)。在所有分析中计算每个信号的平均值和标准偏差(用bio id生成的时程信号图斜率的梯度衡量)(n＝26)。然后用标准偏差除以平均值乘以100，计算cv。此图表示从一种测试到另一种测试的系统再现性测定。结果测定的变异系数为8.06％
(见表3)。
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表3在bio id 40路上完成的各试验间变异系数(cv)研究的数据
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乳腺癌样本研究
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在完成分析开发和优化后，对200个bc样本和200个年龄匹配的健康对照进行了43路乳腺癌多重分析，并对该分析区分bc和健康样本的性能进行了评估。
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在开始分析程序之前，使用过滤的pbs缓冲液对bio-idtm系统进行预处理。测试盒(包括43路分析)进行初始水合步骤，其中专有缓冲液流经多路通道，以水合捕获试剂点，使盒为样品处理做好准备。然后，用1:50稀释度(奇数通道)的患者样本和二级检测抗体(偶数通道)加载bio-id
tm
输入孔。将1％bsa、5％seablock
tm
和0.1％吐温-20在pbs缓冲液中混合制备样品稀释剂。所使用的二级检测抗体是以2μg/ml标记的抗人igg(h&l)(山羊)抗体dy550。抗体稀释剂是使用50％seablock和0.1％吐温-20在pbs缓冲液中制备的。然后，将样品和二级检测抗体在多路通道中反复流动，并在每个循环后测量每个分析点的荧光强度。在整个分析过程中，总共进行了14个循环，生成了14个数据点曲线。
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所有400次分析的结果数据上传至分析包(jmp)进行统计处理。在进行更多定量分析之前，还通过将单个样本与其年龄匹配的健康对照进行比较，并评估bc样本与对照之间是否存在一种或多种生物标志物的明显差异，对数据进行了初步定性评估。
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这一初步的定性评估表明，43路面板中，在一种重要的生物标志物范围内存在明显的差异。通过对所有bc样本与迄今为止处理的所有正常对照进行定性元分析，进一步补充了该初步分析。该数据(未示出)突出了迄今为止处理的所有bc样本中呈现一致升高的生物标志物。虽然在评估自身免疫反应的测试中，个体患者的差异是可以预期的，但这16个生物标志物在bc样本队列中持续升高是一种具有较高群体预测价值的明确指标。此外，16个“高区分度标志物”包括ena和taa标志物的混合，进一步证明了这种新型检测方法在癌症检测(包括诊断、预后和/或监测)中的重要作用。
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定量分析和结果
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为了量化扩展的多路通道的鉴别能力，使用逻辑回归模型测试每个生物标志物对c-统计的贡献(即roc曲线下的面积)，多变量条件logistic回归分析被用来确定哪些生物标志物在一次测试中对区分健康和癌症样本具有最高的预测价值。该分析结果的auc为0.82。图6总结了roc曲线数据和定量分析的结果。表4列出了在使用该模型的单一测试中被确定为具有最高预测值的生物标志物，用于区分健康样本和癌症样本。
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表4：在单一测试中具有最高预测值的生物标志物用于区分健康样本和癌症样本。该数据运行的高预测集包括4个ena标记，支持当与一组taa结合时，标准自身免疫标记可用于增强诊断测试的整体预测能力的论点。
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