基于C-C基序趋化因子配体14测量而评估和治疗肾损伤的方法与流程

of medicine 2014；371(1):58-66.)。因此，有akd风险的个体的早期鉴定将有助于适当实施这些提出的干预措施，但也可以鉴定其中可以靶向减轻aki的新疗法的个体。
8.aki的持续性不仅与长期结果相关，而且临床决策也受到医生对肾脏恢复的期望以及何时开始肾脏替代治疗(rrt)的决定的严重影响。目前，这几乎完全取决于对恢复可能性的临床预期，而没有商业上可用的诊断方法来帮助这个决策过程。因此，关于rrt的时间存在重大争议，研究表明，一些患者可以从rrt的早期开始中受益，而其他研究表明，一些接受rrt的个体可能不需要这种治疗，因为他们很快就会恢复肾功能。(bagshaw sm,lamontagne f,joannidis m,wald r.critical care 2016；20(1):245；forni lg,joannidis m.nat rev nephrol 2019；15(1):5-6.)。因此，将恢复肾功能的个体的早期和可靠鉴定可以使治疗能够被分层并避免体外治疗的现有风险。
9.这些挑战强调了需要更好的方法来检测和评估aki，尤其是在早期和亚临床阶段，以及在其中可以发生肾脏的恢复和修复的后期阶段。此外，需要更好地鉴定有aki风险的患者。
10.发明概述
11.提供了用于评估受试者的肾功能的方法和组合物。如本文所述，c-c基序趋化因子14(ccl14)的测量可用于在患有肾功能损伤、肾功能减退、急性肾衰竭(也称为急性肾损伤)和/或持续性急性肾损伤或处于患有肾功能损伤、肾功能减退、急性肾衰竭(也称为急性肾损伤)和/或持续性急性肾损伤的风险的受试者中诊断、预后、风险分层、分期、监测、分类和确定进一步的诊断和治疗方案。
12.在各个方面，c-c基序趋化因子14单独地或在包含多个肾损伤标志物的组中用于评估受试者的肾脏状态。除了胱抑素c、肌酐(例如，或血浆水平)和/或尿排出量中的一种或多种之外，这些组还可以包括例如c-c基序趋化因子14。在一些方面，将这些肾损伤标志物中的一种或多种组合成单个复合值以用于评估受试者的肾脏状态。例如，可以通过乘法、除法和/或逻辑回归来组合这些标志物的测量。这些方法可以包括进行被配置为检测从受试者获得的体液样品(例如尿液)中的c-c基序趋化因子14的测定。这些方法可以包括进行被配置为检测从受试者获得的体液样品例如血浆中的胱抑素c的测定。这些测定方法可以包括进行被配置为检测肌酐(例如，血清或血浆水平)的测定。这些测定方法可以包括执行测量尿排出量的方法。尿排出量可根据体重进行调整。测定结果(例如c-c基序趋化因子14的测量浓度和胱抑素c、肌酐(例如，血清或血浆水平)和/或尿排出量的一个或多个测量值的复合结果)可能与持续性急性肾损伤的可能性相关。受试者可能正在经历当前的急性肾损伤。除非另有说明，本文所用的“当前急性肾损伤”可以指将受试者分类为处于rifle i期或f期，例如rifle f，或kdigo 2期或3期，例如3期的特征。
13.这些测定结果可用于风险分层(即，识别有未来肾功能损伤、未来进展为肾功能减退、未来进展为arf、未来肾功能改善等的风险的受试者)；用于诊断现有疾病(即识别已经患有肾功能受损、已进展为肾功能减退、已进展为arf等的受试者)；用于监测肾功能的恶化或改善；和用于预测未来的医疗结果，例如肾功能改善或恶化、死亡风险降低或增加、受试者将需要肾脏替代疗法(即血液透析、腹膜透析、血液滤过和/或肾移植)的风险降低或增加，受试者将从肾功能损伤中恢复的风险降低或增加，受试者将从arf中恢复的风险降低或增加，受试者将进展为终末期肾病的风险降低或增加，受试者将进展为慢性肾衰竭的风险
降低或增加，受试者将遭受移植肾排斥的风险降低或增加等。
14.本文公开了用于评估受试者的肾脏状态的方法。这些方法包括进行测定方法，该测定方法被配置为检测从受试者获得的体液样品中的本发明的肾损伤标志物。然后将测定结果例如与胱抑素c、肌酐(例如，血清或血浆)和/或尿排出量中的一种或多种组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与受试者的肾脏状态关联。这种与肾脏状态的关联可以包括将测定结果与本文所述的受试者的风险分层、诊断、预后、分期、分类和监测中的一种或多种关联。因此，本文公开的肾损伤标志物可用于评估肾损伤。
15.在某些方面，本文所述的评估肾脏状态的方法是对受试者进行风险分层的方法；即，将肾脏状态的一个或多个未来变化的可能性分配给受试者。在这些方面，测定结果与一个或多个这样的未来变化关联。以下是优选的风险分层方面。
16.在优选的风险分层方面，这些方法包括确定受试者的未来肾功能损伤的风险，以及将测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与这种未来肾功能损伤的可能性关联。例如，测量的浓度可以各自与阈值进行比较。对于“正向”肾损伤标志物，当测量浓度高于阈值时，将未来遭受肾功能损伤的相对于当测量浓度低于阈值时分配的可能性增加的可能性分配给受试者。对于“负向”肾损伤标志物，当测量的浓度低于阈值时，将未来遭受肾功能损伤的相对于当测量的浓度高于阈值时分配的可能性增加的可能性分配给受试者。
17.在其他优选的风险分层方面，这些方法包括确定受试者未来肾功能减退的风险，将测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与这种肾功能减退的可能性关联。例如，测量的浓度可以各自与阈值进行比较。对于“正向”肾损伤标志物，当测量浓度高于阈值时，将遭受未来肾功能减退的与当测量浓度低于阈值时分配的可能性相比增加的可能性分配给受试者。对于“负向”肾损伤标志物，当测量浓度低于阈值时，将未来肾功能减退的与当测量浓度高于阈值时分配的可能性相比增加的可能性分配给受试者。
18.在其他优选的风险分层方面，这些方法包括确定受试者未来肾功能改善的可能性，以及将测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与这种未来肾功能损伤改善的可能性关联。例如，测量的浓度可以各自与阈值进行比较。对于“正向”肾损伤标志物，当测量的浓度低于阈值时，将未来肾功能改善的与当测量的浓度高于阈值时分配的可能性相比增加的可能性分配给受试者。对于“负向”肾损伤标志物，当测量浓度高于阈值时，将未来肾功能改善的与当测量的浓度低于阈值时分配的可能性相比增加的可能性分配给受试者。
19.在其他优选的风险分层方面，这些方法包括确定受试者的进展为arf的风险，以及结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平。例如，测量的浓度可以各自与阈值进行比较。对于“正向”肾损伤标志物，当测量浓度高于阈值时，将进展为arf的相对于测量浓度低于阈值时分配的可能性增加的可能性分配给受试者。对于“负向”肾损伤标志物，当测量浓度低于阈值时，将进展为arf的相对于测量浓度高于阈值时分配的可能性增加的可能性分配给受试者。
20.并且在其他优选的风险分层方面，这些方法包括确定受试者的结果风险，以及将
测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与与受试者遭受的肾损伤相关的临床结果的发生的可能性关联。例如，测量的浓度可以各自与阈值进行比较。对于“正向”肾损伤标志物，当测量的浓度高于阈值时，将急性肾损伤、进展为aki的恶化阶段、死亡、需要肾脏替代治疗、需要停用肾毒素、终末期肾病、心力衰竭、中风、心肌梗塞、进展为慢性肾病等中的一种或多种的相对于当测量的浓度低于阈值时分配的可能性的增加的可能性分配给受试者。对于“负向”肾损伤标志物，当测量的浓度低于阈值时，将急性肾损伤、进展为aki的恶化阶段、死亡、需要肾脏替代治疗、需要停用肾毒素、终末期肾病、心力衰竭、中风、心肌梗塞、进展为慢性肾病等中的一种或多种的相对于当测量的浓度高于阈值时分配的可能性的增加的可能性分配给受试者。
21.在这样的风险分层方面，优选地，分配的可能性或风险是感兴趣的事件或多或少可能在从受试者获得体液样品的时间的180天内发生。在特别优选的方面，分配的可能性或风险涉及在较短时间段(例如18个月、120天、90天、60天、45天、30天、21天、14天、7天、5天、96小时、72小时、48小时、36小时、24小时、12小时或更短)内发生的感兴趣的事件。从受试者获得体液样品的时间的0小时处的风险等同于当前病况的诊断。
22.在优选的风险分层方面，基于受试者中肾前性、肾内在性或肾后性arf的一种或多种已知风险因素的预先存在来选择受试者用于风险分层。例如，正在接受或已经接受大血管手术、冠状动脉搭桥术或其他心脏手术的受试者；患有预先存在的充血性心力衰竭、先兆子痫、子痫、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肾功能不全、低于正常范围的肾小球过滤、肝硬化、高于正常范围的血清肌酐或败血症的受试者；或暴露于nsaid、环孢菌素、他克莫司、氨基糖苷类、膦甲酸、乙二醇、血红蛋白、肌红蛋白、异环磷酰胺、重金属、甲氨蝶呤、不透射线造影剂或链脲佐菌素的受试者都是用于根据本文所述的方法监测风险的优选受试者。该列表并不意味着限制。在此上下文中，“预先存在”是指风险因素在从受试者获得体液样品时就存在。在特别优选的方面，基于肾功能损伤、肾功能减退或arf的现有诊断选择受试者用于风险分层。
23.在其他方面，本文描述的评估肾脏状态的方法是诊断受试者中的肾损伤的方法；即，评估受试者是否患有肾功能损伤、肾功能减退或arf。在这些方面，测定结果与肾状态的变化的发生或不发生关联。以下是优选的诊断方面。
24.在优选的诊断方面，这些方法包括诊断肾功能损伤的发生或不发生，以及将测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与这种损伤的发生或不发生关联。例如，测量的浓度可以各自与阈值进行比较。对于正向标志物，当测量的浓度高于阈值时，将发生肾功能损伤的增加的可能性(相对于当测量的浓度低于阈值时分配的可能性)分配给受试者；或者，当测量的浓度低于阈值时，可以将不发生肾功能损伤的增加的可能性(相对于当测量的浓度高于阈值时分配的可能性)分配给受试者。对于负向标志物，当测量的浓度低于阈值时，将发生肾功能损伤的增加的可能性(相对于当测量的浓度高于阈值时分配的可能性)分配给受试者；或者，当测量浓度高于阈值时，可以将不发生肾功能损伤的增加的可能性(相对于当测量浓度低于阈值时分配的可能性)分配给受试者。
25.在其他优选的诊断方面，这些方法包括诊断肾功能减退的发生或不发生，以及将
测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与损伤导致的肾功能减退的发生或不发生关联。例如，测量的浓度可以各自与阈值进行比较。对于正向标志物，当测量的浓度高于阈值时，将发生损伤导致的肾功能减退的增加的可能性(相对于当测量的浓度低于阈值时分配的可能性)分配给受试者；或者，当测量的浓度低于阈值时，可以将不发生损伤导致的肾功能减退的增加的可能性(相对于当测量的浓度高于阈值时分配的可能性)分配给受试者。对于负向标志物，当测量浓度低于阈值时，将发生损伤导致的肾功能减退的增加的可能性(相对于当测量浓度高于阈值时分配的可能性)分配给受试者；或者，当测量的浓度高于阈值时，可以将不发生损伤导致的肾功能减退的增加的可能性(相对于当测量的浓度低于阈值时分配的可能性)分配给受试者。
26.在其他优选的诊断方面，这些方法包括诊断arf的发生或不发生，以及将测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与损伤引起的arf的发生或不发生关联，例如，测量的浓度可以各自与阈值进行比较。对于正向标志物，当测量的浓度高于阈值时，将发生arf的增加的可能性(相对于当测量的浓度低于阈值时分配的可能性)分配给受试者；或者，当测量的浓度低于阈值时，可以将不发生arf的增加的可能性(相对于当测量的浓度高于阈值时分配的可能性)分配给受试者。对于负向标志物，当测量的浓度低于阈值时，将发生arf的增加的可能性(相对于当测量的浓度高于阈值时分配的可能性)分配给受试者；或者，当测量浓度高于阈值时，可以将不发生arf的增加的可能性(相对于测量浓度低于阈值时分配的可能性)分配给受试者。
27.在其他优选的诊断方面，这些方法包括将受试者诊断为需要肾脏替代疗法，以及将测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与肾脏替代疗法的需要关联。例如，测量的浓度可以各自与阈值进行比较。对于正向标志物，当测量的浓度高于阈值时，将产生肾脏替代疗法需求的损伤的发生的增加的可能性(相对于当测量的浓度低于阈值时分配的可能性)分配给受试者；或者，当测量的浓度低于阈值时，可以将产生肾脏替代疗法需求的损伤的不发生的增加的可能性(相对于当测量的浓度高于阈值时分配的可能性)分配给受试者。对于负向标志物，当测量的浓度低于阈值时，将产生肾脏替代疗法需求的损伤的发生的增加的可能性(相对于当测量的浓度高于阈值时分配的可能性)分配给受试者；或者，当测量的浓度高于阈值时，可以将产生肾脏替代疗法需求的损伤的不发生的增加的可能性(相对于当测量的浓度低于阈值时分配的可能性)分配给受试者。
28.在其他优选的诊断方面，这些方法包括将受试者诊断为需要肾移植，以及将测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与肾移植的需要关联。例如，测量的浓度可以各自与阈值进行比较。对于正向标志物，当测量的浓度高于阈值时，将损伤产生肾移植需求的发生的增加的可能性(相对于当测量的浓度低于阈值时分配的可能性)分配给受试者；或者，当测量的浓度低于阈值时，可以将损伤产生肾移植需求的不发生的增加的可能性(相对于当测量的浓度高于阈值时分配的可能性)分配给受试者。对于负向标志物，当测量浓度低于阈值时，将损伤产生肾移植需求的发生的增加的可能性(相对于测量浓度高于阈值时分配
的可能性)分配给受试者；或者，当测量的浓度高于阈值时，可将损伤产生肾移植需求的不发生的增加的可能性(相对于当测量的浓度低于阈值时分配的可能性)分配给受试者。
29.在其他方面，本文描述的评估肾脏状态的方法是监测受试者中的肾损伤的方法；即，评估患有肾功能损伤、肾功能减退或arf的受试者的肾功能是否正在改善或恶化。在这些方面，将测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与肾脏状态变化的发生或不发生关联。以下是优选的监测方面。
30.在优选的监测方面，这些方法包括监测患有肾功能损伤的受试者的肾脏状态，以及将测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与受试者的肾脏状态变化的发生或不发生关联。例如，测量的浓度可以与阈值进行比较。对于正向标志物，当测量的浓度高于阈值时，可以将肾功能的恶化分配给受试者；或者，当测量的浓度低于阈值时，可以将肾功能的改善分配给受试者。对于负向标志物，当测量的浓度低于阈值时，可以将肾功能的恶化分配给受试者；或者，当测量的浓度高于阈值时，可以将肾功能的改善分配给受试者。
31.在其他优选的监测方面，这些方法包括监测患有肾功能减退的受试者的肾状态，以及将测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与受试者的肾脏状态变化的发生或不发生关联。例如，测量的浓度可以与阈值进行比较。对于正向标志物，当测量的浓度高于阈值时，可以将肾功能的恶化分配给受试者；或者，当测量的浓度低于阈值时，可以将肾功能的改善分配给受试者。对于负向标志物，当测量的浓度低于阈值时，可以将肾功能的恶化分配给受试者；或者，当测量的浓度高于阈值时，可以将肾功能的改善分配给受试者。
32.在其他优选的监测方面，这些方法包括监测患有急性肾衰竭的受试者的肾脏状态，以及将测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与受试者的肾脏状态变化的发生或不发生关联。例如，测量的浓度可以与阈值进行比较。对于正向标志物，当测量的浓度高于阈值时，可以将肾功能的恶化分配给受试者；或者，当测量的浓度低于阈值时，可以将肾功能的改善分配给受试者。对于负向标志物，当测量的浓度低于阈值时，可以将肾功能的恶化分配给受试者；或者，当测量的浓度高于阈值时，可以将肾功能的改善分配给受试者。
33.在其他额外的优选监测方面，这些方法包括监测由于肾前性、肾内在性或肾后性arf的一种或多种已知风险因素的预先存在而处于肾功能损伤风险的受试者的肾脏状态，以及将测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与受试者的肾脏状态变化的发生或不发生关联。例如，测量的浓度可以与阈值进行比较。对于正向标志物，当测量的浓度高于阈值时，可以将肾功能的恶化分配给受试者；或者，当测量的浓度低于阈值时，可以将肾功能的改善分配给受试者。对于负向标志物，当测量的浓度低于阈值时，可以将肾功能的恶化分配给受试者；或者，当测量的浓度高于阈值时，可以将肾功能的改善分配给受试者。
34.在其他优选的监测方面，这些方法包括针对急性肾损伤的未来持续性监测具有肾功能损伤或处于肾功能损伤风险中的受试者的肾状态。如本文所用，“未来持续性”是指现有的急性肾损伤将持续一段时间，该时间选自21天、14天、7天、5天、96小时、72小时、48小
时、36小时、24小时和12小时。在某些方面，受试者在获得样品时患有急性肾损伤。这并不意味着受试者在获得样品时必须患有急性肾损伤，而是受试者在急性肾损伤发作时患有将持续存在的急性肾损伤。在各个方面，将测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与受试者中急性肾损伤的未来持续性关联。例如，测量的浓度可以与阈值进行比较。对于正向标志物，当测量的浓度高于阈值时，可以将急性肾损伤的未来持续性分配给受试者；或者，当测量的浓度低于阈值时，可以将肾功能的未来改善分配给受试者。对于负向标志物，当测量的浓度低于阈值时，可以将急性肾损伤的未来持续性分配给受试者；或者，当测量的浓度高于阈值时，可以将肾功能的未来改善分配给受试者。
35.在其他方面，本文描述的评估肾脏状态的方法是对受试者的肾损伤进行分类的方法；即，确定受试者的肾损伤是肾前性、肾内在性还是肾后性；和/或将这些类别进一步细分为亚类，例如急性肾小管损伤、急性肾小球肾炎、急性肾小管间质性肾炎、急性血管性肾病或浸润性疾病；和/或分配受试者将进展到特定rifle或kdigo阶段的可能性。在这些方面，将测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与特定的类别和/或亚类关联。以下是优选的分类方面。
36.在优选的分类方面，这些方法包括确定受试者的肾损伤是肾前性、肾内在性还是肾后性；和/或将这些类别进一步细分为亚类，例如急性肾小管损伤、急性肾小球肾炎、急性肾小管间质性肾炎、急性血管性肾病或浸润性疾病；和/或分配受试者将进展到特定rifle阶段的可能性，以及将测定结果，例如与选自胱抑素c、肌酐(例如血清或血浆)和尿排出量的一种或多种标志物组合的c-c基序趋化因子14的测量的浓度或水平与受试者的损伤分类关联。例如，可以将测量的浓度与阈值进行比较，当测量的浓度高于阈值时，分配特定的分类；或者，当测量的浓度低于阈值时，可以将不同的分类分配给受试者。
37.本领域技术人员可以使用多种方法来达到在这些方法中使用的期望阈值。例如，可以通过选择代表在正常受试者中测量的肾损伤标志物的第75、85、90、95或99百分位的浓度，从正常受试者群体中确定阈值。或者，阈值可以从受试者的“患病”群体(例如，患有损伤或具有损伤倾向(例如，进展为arf或一些其他临床结果，例如死亡、透析、肾移植等)的那些)中确定，这通过选择代表在此类受试者中测量的肾损伤标志物的第75、85、90、95或99个百分位数的浓度进行。在另一个替代方案中，阈值可以根据对同一受试者的肾损伤标志物的先前测量来确定；即，受试者中肾损伤标志物水平的时间变化可用于给受试者分配风险。
38.然而，上述讨论并不意味着必须将本文公开的肾损伤标志物与相应的个体阈值进行比较。用于组合测定结果的方法可以包括使用多元逻辑回归、对数线性建模、神经网络分析、n-of-m分析、决策树分析、计算标志物的比率等。该列表并不意味着限制。在这些方法中，通过组合个体标志物确定的复合结果可以被视为它本身就是一个标志物；即，可以为如本文所述的针对个体标志物的复合结果确定阈值，并且将个体患者的复合结果与该阈值进行比较。
39.可以使用roc分析建立特定测试区分两个群体的能力。例如，根据“第一”亚群(该亚群易于发生肾脏状态的一个或多个未来变化)和不那么易于发生变化的“第二”亚群建立的roc曲线可用于计算roc曲线，以及曲线下面积提供了测试质量的度量。优选地，本文所述
的测试提供大于0.5、优选地至少0.6、更优选地0.7、还更优选地0.75、甚至更优选地至少0.8、还甚至更优选地至少0.9并且最优选地至少0.95的roc曲线面积。
40.在某些方面，一种或多种肾损伤标志物或此类标志物的组合的测量的浓度可被视为连续变量。例如，可以将任何特定浓度转换为受试者的未来肾功能减退、损伤发生、分类等的相应概率。在又一个替代方案中，可以在将受试者群体分为“箱(bin)”例如“第一”亚群(例如，它易于发生肾脏状态的一个或多个未来变化、损伤的发生、分类等)和不那么易于发生的“第二”亚群中提供特异性和灵敏度的可接受的水平的阈值。选择阈值以来分离该第一和第二群体(通过测试准确性的一个或多个以下度量)：
41.优势比大于1，优选至少约2或更多或约0.5或更少，更优选至少约3或更多或约0.33或更少，还更优选至少约4或更多或约0.25或更少，甚至更优选至少约5或更多或约0.2或更少，最优选至少约10或更多或约0.1或更少；
42.特异性大于0.5，优选至少约0.6，更优选至少约0.7，还更优选至少约0.8，甚至更优选至少约0.9，最优选至少约0.95，相应的灵敏度大于0.2，优选大于约0.3，更优选大于约0.4，还更优选至少约0.5，甚至更优选约0.6，还更优选大于约0.7，还更优选大于约0.8，更优选大于约0.9，最优选大于约0.95；
43.灵敏度大于0.5，优选至少约0.6，更优选至少约0.7，再更优选至少约0.8，甚至更优选至少约0.9，最优选至少约0.95，相应的特异性大于0.2，优选大于约0.3，更优选大于约0.4，还更优选至少约0.5，甚至更优选约0.6，还更优选大于约0.7，还更优选大于约0.8，更优选大于约0.9，最优选大于约0.95；
44.至少约75％的灵敏度，结合至少约75％的特异性；
45.大于1、至少约2、更优选至少约3、还更优选至少约5、最优选至少约10的阳性似然比(计算为灵敏度/(1-特异性))；或者
46.小于1、小于或等于约0.5、更优选小于或等于约0.3、最优选小于或等于约0.1的阴性似然比(计算为(1-灵敏度)/特异性)。
47.任何上述测量的上下文中的术语“约”是指给定测量的+/-5％。
48.还可以使用多个阈值来评估受试者的肾脏状态。例如，易于发生肾脏状态的一个或多个未来变化、损伤的发生、分类等的“第一”亚群和不那么易于发生的“第二”亚群可以组合成单个组。然后将该组细分为三个或更多个相等的部分(称为三分位数、四分位数、五分位数等，取决于细分的数量)。优势比基于受试者所属的细分分配给受试者。如果考虑三分位数，则最低或最高的三分位数可以用作用于比较其他细分的参考。该参考细分的优势比被分配为1。第二个三分位数被分配一个相对于该第一个三分位数的优势比。也就是说，第二个三分位数中的某个人遭受肾脏状态的一个或多个未来变化的可能性可能是第一个三分位数中的某个人的3倍。第三个三分位数也被分配了一个相对于该第一个三分位数的优势比。
49.在某些方面，测定方法是免疫测定。用于此类测定的抗体将特异性结合感兴趣的全长肾损伤标志物，并且还可结合一种或多种与其“相关”的多肽，如该术语在下文中定义的。许多免疫测定形式是本领域技术人员已知的。优选的体液样品选自尿液、血液(包括全血、血清和血浆)、唾液和眼泪。
50.前述方法步骤不应被解释为意味着肾损伤标志物测定结果在本文所述的方法中
单独使用。相反，额外的变量或其他临床指标可以包括在本文所述的方法中。例如，风险分层、诊断、分类、监测等方法可以将测定结果与选自人口统计信息(例如体重、性别、年龄、种族)、病史(例如，家族史、手术类型、预先存在的疾病例如动脉瘤、充血性心力衰竭、先兆子痫、子痫、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肾功能不全或败血症，毒素暴露类型，例如nsaid、环孢菌素、他克莫司、氨基糖苷类、膦甲酸、乙二醇、血红蛋白、肌红蛋白、异环磷酰胺、重金属、甲氨蝶呤、不透射线造影剂或链脲佐菌素)、临床变量(例如血压、温度、呼吸频率)、风险评分(apache评分、predict评分、ua/nstemi的timi风险评分、framingham风险评分)、肾小球滤过率、估计的肾小球滤过率、尿生产率、血清或血浆肌酐浓度、尿肌酐浓度、钠排泄分数、尿钠浓度、尿肌酐与血清或血浆肌酐比、尿比重、尿渗透压、尿的尿素氮与血浆尿素氮比、血浆bun与肌酐比、计算为尿钠/(尿肌酐/血浆肌酐)的肾衰竭指数、血清或血浆中性粒细胞明胶酶(ngal)浓度、尿ngal浓度、血清或血浆胱抑素c浓度、血清或血浆心肌肌钙蛋白浓度、血清或血浆bnp浓度、血清或血浆ntprobnp浓度和血清或血浆probnp浓度的一种或多种对受试者测得的变量组合。可与一种或多种肾损伤标志物测定结果组合的肾功能的其他量度在下文和harrison’s principles of internal medicine,17th ed.,mcgraw hill,new york,第1741-1830页和current medical diagnosis&treatment 2008,47th ed,mcgraw hill,new york,第785-815页(在此通过引用全文并入)中有所描述。
51.当测量多于一种标志物时，个体标志物可以在同时获得的样品中测量，或者可以从在不同(例如，更早或更晚)时间获得的样品中确定。还可以在相同或不同的体液样品上测量个体标志物。例如，可以在血清或血浆样品中测量一种肾损伤标志物，并可以在尿液样品中测量另一种肾损伤标志物。此外，可能性的分配可以将个体肾损伤标志物测定结果与一个或多个附加变量的时间变化组合。
52.在各个相关方面，本发明还涉及用于执行本文所述方法的装置和试剂盒。合适的试剂盒包含足以对至少一种所述肾损伤标志物进行测定的试剂，以及用于执行所述阈值比较的说明。
53.在某些方面，用于执行此类测定的试剂提供在测定装置中，并且此类测定装置可包含在此类试剂盒中。优选的试剂可包含一种或多种固相抗体，该固相抗体包含检测与固相支持物结合的预期生物标志物靶标的抗体。在夹心免疫测定的情况下，此类试剂还可包含一种或多种可检测标记的抗体，可检测标记的抗体包含检测与可检测的标记结合的预期生物标志物靶标的抗体。可作为测定装置的一部分提供的附加可选元件在下文中描述。
54.可检测标记可包括自身可检测的分子(例如，荧光部分、电化学标记、ecl(电化学发光)标记、金属螯合物、胶体金属颗粒等)以及可通过产生可检测反应产物(例如，酶诸如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)或通过使用本身可检测的特异性结合分子(例如，与二抗结合的标记的抗体、生物素、地高辛、麦芽糖、寡聚组氨酸、2,4-二硝基苯、苯砷酸盐(phenylarsenate)、ssdna、dsdna等)间接检测的分子。
55.可以使用本领域公知的各种光学、声学和电化学方法从信号产生元件产生信号。检测模式的例子包括荧光、放射化学检测、反射、吸光度、电流分析、电导、阻抗、干涉、椭圆偏振等。在这些方法的某些中，固相抗体与换能器(例如衍射光栅、电化学传感器等)偶联用于生成信号，而在其他情况下，信号由与固相抗体在空间上分离的换能器(例如，采用激发光源和光学检测器的荧光计)生成。该列表并不意味着限制。还可以使用基于抗体的生物传
感器来确定分析物的存在或量(任选地消除对标记分子的需要)。
56.在一些方面，可基于一种或多种aki生物标志物的测量值选择受试者用于评估，这些生物标志物指示患有急性肾损伤(例如符合rifle i或f或kdigo 2或3期的定义的急性肾损伤)的增加的风险。此类生物标志物或指标可包括但不限于胰岛素样生长因子结合蛋白7、金属蛋白酶抑制剂2、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、胱抑素-c、白介素-18、甲型肝炎病毒细胞受体1、谷胱甘肽s-转移酶p、脂肪酸结合蛋白、肝脏、肌酐、尿排出量或其组合。
57.在某些方面，标志物的水平可用作持续性aki的“排除”。在这些方面，可以将测量的标志物水平与选自群体研究的阈值进行比较，以将群体分成低于阈值的第一亚群，其相对于高于阈值的第二亚群处于持续性aki的降低的可能性。例如，这样的阈值可以在第一亚群中提供至少0.6、更优选地至少0.7、还更优选地至少0.75、还更优选地至少0.8并且最优选地至少0.9的阴性预测值。一种或多种标志物(包括本文公开的任何标志物)可用于在基于其他标志物或标志物组合评估持续性急性肾损伤的可能性之前和/或之后“排除”受试者，其可包括用于排除受试者的相同或不同标志物。
58.在某些方面，标志物的水平可以用作持续性aki的“纳入”。在这些方面，可以将测量的标志物水平与选自群体研究的阈值进行比较，以将群体分成高于阈值的第一亚群，其相对于低于阈值的第二亚群处于持续性aki的增加的可能性。例如，这样的阈值可以在第一亚群中提供至少0.6、更优选地至少0.7、还更优选地至少0.75、还更优选地至少0.8并且最优选地至少0.9的阳性预测值。一种或多种标志物(包括本文公开的任何标志物)可用于在基于其他标志物或标志物组合评估持续性急性肾损伤的可能性之前和/或之后“纳入”受试者，其可包括用于纳入受试者的相同或不同的标志物。在一些方面，不同的标志物可用于排除或纳入受试者。
59.在某些方面，被“排除”和/或被评估为具有持续性急性肾损伤的相对较低的可能性的受试者被分配到用于受试者的现有aki的“保守”治疗路径，这意味着它不包括肾脏替代疗法(rrt)。类似地，在某些方面，被“纳入”和/或被评估为具有持续性急性肾损伤的相对高的可能性的受试者被分配到用于受试者的现有aki的治疗路径，其包括施用肾脏替代疗法。
60.在本公开内容的一个方面，公开了一种用于诊断受试者中的肾损伤、肾功能减退或急性肾损伤(aki)的发生或不发生的方法。该方法包括进行分析物结合测定，该测定被配置为检测从受试者获得的第一体液样品中的c-c基序趋化因子14。该方法进一步包括确定一种或多种肾损伤标志物的测量值。在一些实施方案中，一种或多种肾损伤标志物选自从受试者获得的第一体液样品或第二体液样品中的肌酐浓度、第一体液样品或第二体液样品中的胱抑素c浓度、计算出的肾小球滤过率和尿排出量。
61.在本公开内容的一个方面，公开了一种用于受试者的风险分层的方法。风险分层包括分配受试者患有持续性急性肾损伤的可能性。该方法包括进行分析物结合测定，该测定被配置为检测从受试者获得的第一体液样品中的c-c基序趋化因子14。该方法进一步包括确定一种或多种肾损伤标志物的测量值。在一些实施方案中，一种或多种肾损伤标志物选自从受试者获得的第一体液样品或第二体液样品中的肌酐浓度、第一体液样品或第二体液样品中的胱抑素c浓度、计算出的肾小球滤过率和尿排出量。
62.在本公开内容的一个方面，公开了一种用于针对急性肾损伤的未来持续性监测受试者的肾损伤的方法。风险分层包括分配受试者患有持续性急性肾损伤的可能性。该方法包括进行分析物结合测定，该测定被配置为检测从受试者获得的第一体液样品中的c-c基序趋化因子14。该方法进一步包括确定一种或多种肾损伤标志物的测量值。在一些实施方案中，一种或多种肾损伤标志物选自从受试者获得的第一体液样品或第二体液样品中的肌酐浓度、第一体液样品或第二体液样品中的胱抑素c浓度、计算出的肾小球滤过率和尿排出量。
63.在上述方法的一些实施方案中，该方法还包括在获得样品后7天内测量尿排出量、尿流率、血肌酐水平或尿肌酐水平。在一些实施方案中，该方法进一步包括计算肾小球滤过率。
64.在上述方法的一些实施方案中，将测定结果和一种或多种肾损伤标志物的测量值组合成单一值以提供复合测定结果。
65.在上述方法的一些实施方案中，该方法进一步包括将测定结果与测量值一起与受试者的肾脏状态的诊断关联。诊断包括肾损伤、肾功能减退或急性肾损伤(aki)的发生或不发生。任选地，如上所述，可以使用复合测定结果将测定结果和测量值一起关联。
66.在一些实施方案中，关联步骤可以包括将受试者分配给具有肾损伤、肾功能减退或急性肾损伤(aki)的已知倾向的个体的预定亚群。任选地，可以通过将复合测定结果与在群体研究中选择的阈值进行比较来进行分配，其中阈值将群体分成高于阈值的第一亚群体和处于或低于阈值的第二亚群体。相对于第二亚群，第一亚群可能具有肾损伤、肾功能减退或急性肾损伤(aki)的增加的倾向。
67.在一些实施方案中，该方法进一步包括基于受试者被分配到的个体预定亚群来治疗受试者。治疗可以包括开始肾脏替代疗法、通过调整化合物的量或选择来改变已知损害肾脏的化合物的施用、延迟或避免已知损害肾脏的程序或改变利尿剂施用中的一种或多种。
68.在一些实施方案中，该方法进一步包括治疗分配给第一亚群的受试者。治疗可以包括开始肾脏替代疗法、通过调整化合物的量或选择来改变已知损害肾脏的化合物的施用、延迟或避免已知损害肾脏的程序或改变利尿剂施用中的一种或多种。任选地，分配给第一亚群的受试者的肾脏替代疗法可以包括连续肾脏替代疗法、间歇性血液透析、腹膜透析或肾移植。
69.在上述方法的一些实施方案中，该方法进一步包括将测定结果和测量值一起与受试者患有持续性急性肾损伤(aki)的可能性关联。任选地，如上所述，可以使用复合测定结果将测定结果和测量值一起关联。
70.在一些实施方案中，关联步骤可以包括将受试者分配给具有持续性急性肾损伤(aki)的已知倾向的个体的预定亚群。任选地，可以通过将复合测定结果与在群体研究中选择的阈值进行比较来进行分配，其中阈值将群体分成高于阈值的第一亚群体和处于或低于阈值的第二亚群体。相对于第二亚群，第一亚群可能具有持续性急性肾损伤(aki)的增加的倾向。
71.在一些实施方案中，该方法进一步包括基于受试者被分配到的个体预定亚群来治疗受试者。治疗可以包括开始肾脏替代疗法、通过调整化合物的量或选择来改变已知损害
肾脏的化合物的施用、延迟或避免已知损害肾脏的程序或改变利尿剂施用中的一种或多种。
72.在一些实施方案中，该方法进一步包括治疗分配给第一亚群的受试者。治疗可以包括开始肾脏替代疗法、通过调整化合物的量或选择来改变已知损害肾脏的化合物的施用、延迟或避免已知损害肾脏的程序或改变利尿剂施用中的一种或多种。任选地，分配给第一亚群的受试者的肾脏替代疗法可以包括连续肾脏替代疗法、间歇性血液透析、腹膜透析或肾移植。
73.在上述方法的一些实施方案中，该方法还包括将测定结果与测量值一起与受试者的肾脏状态变化的发生或不发生关联。任选地，如上所述，可以使用复合测定结果将测定结果和测量值一起关联。
74.在一些实施方案中，关联步骤可以包括将受试者分配给具有持续性急性肾损伤(aki)的已知倾向的个体的预定亚群。任选地，可以通过将复合测定结果与在群体研究中选择的阈值进行比较来进行分配，其中阈值将群体分成高于阈值的第一亚群体和处于或低于阈值的第二亚群体。相对于第二亚群，第一亚群可能具有持续性急性肾损伤(aki)的增加的倾向。
75.在一些实施方案中，该方法进一步包括基于受试者被分配到的个体预定亚群来治疗受试者。治疗可以包括开始肾脏替代疗法、通过调整化合物的量或选择来改变已知损害肾脏的化合物的施用、延迟或避免已知损害肾脏的程序或改变利尿剂施用中的一种或多种。
76.在一些实施方案中，该方法进一步包括治疗分配给第一亚群的受试者。治疗可以包括开始肾脏替代疗法、通过调整化合物的量或选择来改变已知损害肾脏的化合物的施用、延迟或避免已知损害肾脏的程序或改变利尿剂施用中的一种或多种。任选地，分配给第一亚群的受试者的肾脏替代疗法可以包括连续肾脏替代疗法、间歇性血液透析、腹膜透析或肾移植。
77.在上述方法的一些实施方案中，当获得第一和第二体液样品时，受试者具有rifle i期或f期或kdigo 2期或3期。
78.在上述方法的一些实施方案中，结合试剂是抗体。
79.在上述方法的一些实施方案中，第一体液样品是尿液样品。
80.在上述方法的一些实施方案中，第二体液样品是血液样品。
81.在上述方法的一些实施方案中，第一体液样品和第二体液样品是相同的样品。在其他实施例中，第一体液样品和第二体液样品是不同的样品。
82.在上述方法的一些实施方案中，如上所述的复合测定结果是通过使用逻辑回归或线性判别分析获得的函数产生的。在一些实施方案中，单一复合值衍生自逻辑回归模型或线性判别分析，其包含选自ccl14、胱抑素c、肌酐、尿排出量、ccl14 x胱抑素c、ccl14 x胱抑素c x肌酐、ccl14 x胱抑素c/尿排出量、ccl14 x肌酐、ccl14 x肌酐/尿排出量和ccl14/尿排出量的两个或更多个自变量。
83.在上述方法的一些实施方案中，如上所述的复合测定结果选自ccl14 x胱抑素c、ccl14 x胱抑素c x肌酐、ccl14 x胱抑素c/尿排出量、ccl14 x肌酐、ccl14 x肌酐/尿排出量、ccl14/尿排出量和ccl14 x胱抑素c x肌酐/尿排出量。
84.在上述方法的一些实施方案中，将测定结果与测量值一起关联包括使用决策树分析或随机森林分析。
85.在上述方法的一些实施方案中，将测定结果与测量值一起关联包括使用数字实证分析。
86.在上述方法的一些实施方案中，受试者已被诊断患有充血性心力衰竭、先兆子痫、子痫、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肾功能不全、低于正常范围的肾小球滤过、肝硬化、高于正常范围的血清肌酐、败血症、肾功能损伤、肾功能减退和急性肾损伤中的一种或多种。
87.在上述方法的一些实施方案中，第一和第二体液样品是在使患者易发展急性肾衰竭的急性医学事件后7天内获得的，其中所述急性医学事件包括休克、败血症、出血、缺血性手术、腹内压升高、急性失代偿性心力衰竭、缺血、肺栓塞、胰腺炎、烧伤或过度利尿。在一些实施方案中，样品是在急性医学事件后72小时内获得的。在一些实施方案中，样品是在急性医学事件后48小时内获得的。在一些实施方案中，样品是在急性医学事件后24小时内获得的。在一些实施方案中，样品是在急性医学事件后12小时获得的。
88.在上述方法的一些实施方案中，第一和第二体液样品是在使患者易发展急性肾衰竭的急性医学事件后7天内获得的，其中该急性医学事件包括暴露于nsaid、环孢菌素、他克莫司、氨基糖苷类、膦甲酸、乙二醇、血红蛋白、肌红蛋白、异环磷酰胺、重金属、甲氨蝶呤、不透射线造影剂或链脲佐菌素。在一些实施方案中，样品是在急性医学事件后72小时内获得的。在一些实施方案中，样品是在急性医学事件后48小时内获得的。在一些实施方案中，样品是在急性医学事件后24小时内获得的。在一些实施方案中，样品是在急性医学事件后12小时获得的。
89.在上述方法的一些实施方案中，通过将从受试者获得的第一体液样品引入测定仪器中进行测定，该测定仪器使全部或部分的第一体液样品与结合试剂接触。该结合试剂特异性结合c-c基序趋化因子14的结合试剂接触以检测c-c基序趋化因子14。该测定产生指示c-c基序趋化因子14与结合试剂结合的测定结果。
90.在上述方法的一些实施方案中，当获得第一和第二体液样品时，受试者具有rifle r期或kdigo 1期。在一些实施方案中，当获得第一和第二体液样品时，受试者具有rifle i期或kdigo 2期。在一些实施方案中，当获得第一和第二体液样品时，受试者具有rifle f期或kdigo 3期。
91.附图的简要说明
92.图1a-1d示出了用于预测持续性kdigo 3期急性肾损伤的决策树的各种实例。图1a描绘了“持续性”和“非持续性”队列的决策树，其中持续性在样品收集后24小时内开始并持续至少72小时。图1b描绘了“持续性”和“非持续性”队列的另一个决策树，其中持续性在样品收集后48小时内开始并持续至少72小时。图1c描绘了“持续性”和“非持续性”队列的决策树的另一个实例，其中持续性在样品收集后48小时内开始并持续至少72小时。图1d描绘了“持续性”和“非持续性”队列的决策树的另一个实例，其中持续性在样品收集后72小时内开始并持续至少72小时。
93.图2a-2b描绘了尿c-c基序趋化因子配体14浓度(图2a)和血浆胱抑素c浓度(图2b)的箱线图。空心框表示患有各种急性和慢性病况(见表1)且未持续处于急性肾损伤的任何
阶段的患者的标志物水平。阴影框表示在从入组48小时的进展窗口内开始的至少72小时的持续期内，维持最低kdigo 1、2或3期急性水平肾损伤的患者的标志物水平。框和须分别显示四分位距和总观察范围(按框范围的1.5倍设限)。
94.图3描绘了如由入组样品中的尿c-c基序趋化因子14测量值定义的三个三分位数分层的每个患者在入组后90天内开始肾脏替代疗法(rrt)或遭受死亡的患者的累积复合百分比。图表下方的数字表示每个三分位数中在上述时间点未经历rrt或遭受死亡的患者数。
95.发明详述
96.本文公开了用于对患有急性肾损伤(aki)的受试者进行分类和确定治疗方案的方法和组合物。在各个方面，将c-c基序趋化因子14(ccl14)或与其相关的一种或多种标志物以及任选地一种或多种本领域已知的另外的肾损伤标志物的测量的浓度与受试者中持续性aki的可能性关联，并且该关联可用于指导治疗。
97.如本文所用，“肾功能损伤”是肾功能的量度的突然的(14天内，优选7天内，更优选72小时内，更优选48小时内)可测量的降低。例如，可以通过肾小球滤过率(gfr)或估计的gfr的降低、尿排出量减少、血清肌酐增加、血清胱抑素c增加、肾脏替代疗法的需要等来鉴定此类损伤。“肾功能的改善”是肾功能的量度的突然的(在14天内，优选在7天内，更优选在72小时内，并且还更优选在48小时内)可测量的增加。下文描述了用于测量和/或估计gfr的优选方法。
98.如本文所用，“肾功能减退”是肾功能的突然的(14天内，优选7天内，更优选72小时内，更优选48小时内)降低，其通过大于或等于0.1mg/dl(≥8.8μmol/l)的血清肌酐的绝对增加、大于或等于20％(基线的1.2倍)的血清肌酐的百分比增加或尿排出量减少(记录的小于0.5ml/kg/小时的少尿)鉴定。
99.如本文所用，“急性肾衰竭”或“arf”是肾功能的突然的(14天内，优选7天内，更优选72小时内，更优选48小时内)降低，其通过大于或等于0.3mg/dl(≥26.4μmol/l)的血清肌酐的绝对增加、大于或等于50％(从基线的1.5倍)的血清肌酐的百分比增加或尿排出量减少(记录的持续至少6小时的小于0.5ml/kg/小时的少尿)鉴定。该术语与“急性肾损伤”或“aki”同义。
100.在这方面，技术人员将理解从免疫测定获得的信号是一种或多种抗体与靶生物分子(即分析物)和包含抗体结合的必需表位的多肽之间形成的复合物的直接结果。虽然此类测定可检测全长生物标志物并且测定结果被表示为感兴趣的生物标志物的浓度，但来自测定的信号实际上是样品中存在的所有此类“免疫反应性”多肽的结果。生物标志物的表达也可以通过除免疫测定之外的方式来确定，包括蛋白质测量(例如斑点印迹、蛋白质印迹、色谱方法、质谱等)和核酸测量(mrna定量)。该列表并不意味着限制。
101.如本文所用，术语“c-c基序趋化因子14”是指生物样品中存在的一种或多种多肽，其来源于c-c基序趋化因子14前体(人类序列：swiss-prot q16627(seq id no：1))：
102.mkisvaaipf fllitialgt ktesssrgpy hpseccftyt tykiprqrim50
103.dyyetnsqcs kpgivfitkr ghsvctnpsd kwvqdyikdm ken 93
104.已在c-c基序趋化因子14中鉴定出以下结构域：
[0105][0106]
如本文所用，术语“将信号与分析物的存在或量相关”反映了这种理解。通过使用利用已知浓度的感兴趣的分析物计算的标准曲线，测定信号通常与分析物的存在或量相关。当该术语在本文中使用时，如果测定可以产生指示分析物的存在或生理相关浓度的量的可检测信号，则测定“被配置为检测”分析物。因为抗体表位为约8个氨基酸，所以配置为检测感兴趣的标志物的免疫测定还将检测与标志物序列相关的多肽，只要这些多肽包含与测定中使用的抗体结合所需的表位。
[0107]
如本文所用的关于生物标志物例如本文描述的肾损伤标志物之一的术语“相关标志物”是指特定标志物或其生物合成亲本的一个或多个片段、变体等，其可作为标志物本身的替代物或作为独立的生物标志物被检测。该术语还指生物样品中存在的一种或多种多肽，其衍生自与其他物质例如结合蛋白、受体、肝素、脂质、糖等复合的生物标志物前体。
[0108]
本文所用的术语“正向”标志物是指确定在患有疾病或病况的受试者中相对于未患有该疾病或病况的受试者升高的标志物。本文使用的术语“负向”标志物是指确定在患有疾病或病况的受试者中相对于未患有该疾病或病况的受试者减少的标志物。
[0109]
如本文所用，术语“受试者”是指人类或非人类生物体。因此，本文所述的方法和组合物适用于人类和兽医疾病。此外，虽然受试者优选地是活生物体，但本文所述的发明也可用于死后分析。优选的受试者是人，最优选地是“患者”，如本文所用，其是指正在接受疾病或病况的医疗护理的活人。这包括正在接受病理体征调查的没有明确疾病的人。
[0110]
优选地，在样品中测量分析物。这样的样品可以从受试者获得，或者可以从旨在提供给受试者的生物材料获得。例如，样品可以从针对可能移植到受试者中进行评估的肾脏获得，并且分析物测量用于针对预先存在的损伤评估肾脏。优选的样品是体液样品。
[0111]
如本文所用，术语“体液样品”是指为了诊断、预后、分类或评估感兴趣的受试者(例如患者或移植供体)的目的而获得的体液样品。在某些方面，为了确定正在进行的病况的结果或治疗方案对病况的影响的目的，可以获得这样的样品。优选的体液样品包括血液(包括全血、血清和血浆)、脑脊液、尿液、唾液、痰和胸腔积液。此外，本领域技术人员会意识到某些体液样品在分级或纯化程序(例如，将全血分离成血清或血浆成分)之后将更容易被分析。
[0112]
如本文所用，术语“诊断”是指技术人员可以用来估计和/或确定患者是否患有给定疾病或病况的概率(“可能性”)的方法。在本发明的情况下，“诊断”包括使用本发明的肾损伤标志物(任选地与其他临床特征一起)的测定(最优选免疫测定)的结果以得出从其获
得并测定样品的受试者的急性肾损伤或arf的诊断(即，发生或不发生)。这种诊断是“确定的”并不意味着该诊断是100％准确的。许多生物标志物指示多种病况。熟练的临床医生不会在信息真空中使用生物标志物结果，而是将测试结果与其他临床指标一起使用以得出诊断。因此，在预定诊断阈值一侧的测量的生物标志物水平表明相对于在预定诊断阈值的另一侧的测量水平，受试者中疾病发生的更大可能性。
[0113]
类似地，预后风险表示给定过程或结果将发生的概率(“可能性”)。预后指标的水平或水平的变化(其进而与发病率(例如，肾功能恶化、未来的arf或死亡)的增加的可能性关联)被称为患者中不良后果的“增加的可能性的指示”。
[0114]
arf可分类为肾前性、肾内在性或肾后性。内在性肾病可进一步分为肾小球、肾小管、间质和血管异常。下表描述了arf的主要原因，该表改编自merck manual,17
th ed.,chapter 222，其通过引用全文并入本文：
[0115]
[0116]
[0117][0118]
在缺血性arf的情况下，病程可分为四个阶段。在持续数小时到数天的初始阶段期间，减少的肾脏灌注演变成损伤。肾小球超滤减少，滤液流量由于肾小管内的碎片而减少，并且发生滤液通过受损上皮的回漏。在这个阶段可以通过肾脏再灌注介导肾损伤。初始阶段之后是扩展阶段，其特征是持续的缺血性损伤和炎症，并且可能涉及内皮损伤和血管充血。在维持阶段，其持续1至2周，发生肾细胞损伤，并且肾小球滤过和尿排出量降至最低。随后可以进入恢复阶段，其中肾上皮得到修复并且gfr逐渐恢复。尽管如此，患有arf的受试者的存活率可能低至约60％。
[0119]
由放射性对比剂(也称为造影剂)和其他肾毒素(例如环孢菌素)、抗生素(包括氨基糖苷类)和抗癌药物(例如顺铂)引起的急性肾损伤在几天到约一周的时间内出现。造影剂诱导的肾病(cin，其是放射性对比剂引起的aki)被认为是由肾内血管收缩(导致缺血性损伤)和活性氧的产生引起的，活性氧对肾小管上皮细胞具有直接毒性。cin通常表现为血尿素氮和血清肌酐的急性(24-48小时内发病)但可逆(3-5天达到峰值，1周内消退)的升高。
[0120]
通常报告的用于定义和检测aki的标准是血清肌酐的突然升高(通常在大约2-7天内或在住院期间内)。虽然使用血清肌酐升高来定义和检测aki是良好建立的，但血清肌酐升高的幅度和测量它的时间(来定义aki)在出版物之间存在很大差异。传统上，血清肌酐的相对较大的增加(例如100％、200％)、增加至少100％至超过2mg/dl的值和其他定义用于定义aki。然而，最近的趋势是使用较小的血清肌酐升高来定义aki。praught和shlipak,curr opin nephrol hypertens14:265-270,2005和chertow等人,j am soc nephrol 16:3365-3370,2005(其以及其中列出的参考文献通过引用整体并入本文)中综述了血清肌酐升高、
aki和相关健康风险之间的关系。正如这些出版物中所描述的，现在已知急性肾功能恶化(aki)和死亡风险增加以及其他有害结果与血清肌酐的极小增加有关。这些增加可以确定为相对(百分比)值或标称值。血清肌酐相对损伤前值的小至20％的相对增加据报道指示急性肾功能恶化(aki)和增加的健康风险，但定义aki和增加的健康风险的更常见报告的值是至少25％的相对增加。小至0.3mg/dl、0.2mg/dl或甚至0.1mg/dl的标称增加据报道指示肾功能恶化和死亡风险增加。血清肌酐升高到这些阈值的不同时间段已被用于定义aki，例如，范围为2天、3天、7天，或定义为患者住院或在重症监护室中的不同时间段。这些研究表明，对于肾功能恶化或aki没有特定的血清肌酐升高阈值(或升高的时间段)，而是随着血清肌酐升高幅度的增加，风险持续增加。
[0121]
一项研究(lassnigg等人,j am soc nephrol 15:1597-1605,2004)调查了血清肌酐的增加和减少。心脏手术后具有血清肌酐的-0.1至-0.3mg/dl的轻度下降的患者具有最低的死亡率。具有血清肌酐的较大下降(大于或等于-0.4mg/dl)或血清肌酐的任何增加的患者具有较高的死亡率。这些发现使作者得出结论，即使肾功能的非常细微的变化(如手术的48小时内通过肌酐的微小变化所检测到的)也会严重影响患者的结局。为了在临床试验和临床实践中就使用血清肌酐定义aki的统一分类系统达成共识，bellomo等人,crit care.8(4):r204-12,2004(其针对rifle标准的全部内容通过引用并入本文)提出了用于对aki患者进行分层的以下分类：
[0122]“风险”：血清肌酐从基线增加1.5倍或持续6小时的《0.5ml/kg体重/小时的尿产生；
[0123]“损伤”：血清肌酐从基线增加2.0倍或持续12小时的《0.5ml/kg/hr的尿产生；
[0124]“衰竭”：血清肌酐从基线增加3.0倍或肌酐》355μmol/l(升高》44)或持续24小时的低于0.3ml/kg/hr的尿排出量或持续至少12小时的无尿；
[0125]
并包括两个临床结果：
[0126]“损失”：持续需要肾脏替代治疗超过4周。
[0127]“esrd”：终末期肾病-需要透析超过3个月。
[0128]
这些标准被称为rifle标准，它提供了一种有用的临床工具来分类肾脏状态。如kellum,crit care med.36:s141-45,2008和ricci等人,kidney int.73,538-546,2008(通过引用整体并入本文)中所讨论的，rifle标准提供了已在众多研究中得到验证的aki的统一定义。
[0129]
最近，mehta等人,crit care 11:r31(doi:10.1186.cc5713),2007(通过引用整体并入本文)提出以下类似的已根据rifle进行了修改的分类用于对aki患者(akin)进行分层：
[0130]“i期”：大于或等于0.3mg/dl(≥26.4μmol/l)的血清肌酐增加或增加到大于或等于基线的150％(1.5倍)或持续超过6小时的小于0.5ml/kg/h的尿排出量；
[0131]“ii期”：血清肌酐增加至超过基线的200％(》2倍)或持续超过12小时的小于0.5ml/kg/h的尿排出量；
[0132]“iii期”：血清肌酐增加至超过基线的300％(》3倍)或血清肌酐≥354μmol/l伴有至少44μmol/l的急性升高或持续24小时的小于0.3ml/kg/h的尿排出量或持续12小时的无尿。
[0133]
类似地，kidney disease:improving global outcomes(kdigo)acute kidney injury work group.kdigo clinical practice guideline for acute kidney injury,kidney inter.,suppl.2012；2:1
–
138引用了rifle和akin并提供以下aki分期指南：
[0134][0135]
cin共识工作小组(mccollough等人,rev cardiovasc med.2006；7(4):177-197，通过引入整体并入本文)使用25％的血清肌酐升高来定义造影剂诱发的肾病(这是一种类型的aki)。尽管各组提出略有不同的标准用于使用血清肌酐检测aki，但共识是血清肌酐的微小变化(例如0.3mg/dl或25％)足以检测aki(肾功能恶化)，并且血清肌酐变化的幅度是aki严重程度和死亡风险的指标。
[0136]
aki的这些分类系统通常包括每个阶段的血清肌酐标准和尿排出量标准。无论在本文何处指定，aki的任何阶段都可以被认为等同于(即取代)使受试者有资格处于aki的该特定阶段的任何个体标准。在一些实施方案中，本文公开的方法还可用于关联由特定aki阶段定义的肾脏状态(例如，达到特定aki阶段的可能性或在特定阶段的持续aki的可能性)，其中特定的aki阶段可以通过满足使受试者符合该特定阶段的血清肌酐标准和使受试者符合该特定阶段的尿排出量标准来定义。在一些实施方案中，可以通过满足所有标准(即所有血清肌酐标准和所有尿排出量标准两者)来定义特定的aki阶段。除非另有说明，否则本文公开的所有方法可根据这些实施方案中的任一个定义aki的阶段。
[0137]
尽管在数天内血清肌酐的连续测量是检测和诊断aki的公认方法，并且被认为是评估aki患者的最重要工具之一，但通常认为血清肌酐在诊断、评估和监测aki患者方面存在一些局限性。血清肌酐升高到被认为是aki诊断性的值(例如，0.3mg/dl或25％升高)的时间段可以是48小时或更长时间，这取决于所使用的定义。由于aki中的细胞损伤可在数小时内发生，在48小时或更长时间检测到的血清肌酐升高可是损伤的晚期指标，因此依赖血清肌酐可延迟aki的诊断。此外，在aki的最急性期当肾功能迅速变化时，血清肌酐不是准确肾脏状态和治疗需求的良好指标。一些aki患者将完全康复，一些将需要透析(短期或长期)，
并且一些将具有其他不利结果，包括死亡、重大不良心脏事件和慢性肾病。因为血清肌酐是滤过率的标志物，它不能区分aki的原因(肾前性、肾内在性、肾后性阻塞、动脉硬化等)或内在性肾病中损伤的类别或部位(例如，管状、肾小球或间质起源)。尿排出量类似受限。了解这些事情对于管理和治疗aki患者至关重要。
[0138]
标志物测定
[0139]
一般而言，免疫测定涉及将含有或怀疑含有感兴趣的生物标志物的样品与至少一种与生物标志物特异性结合的抗体接触。然后产生指示通过样品中的多肽与抗体的结合形成的复合物的存在或量的信号。然后将该信号与样品中生物标志物的存在或量关联。用于检测和分析生物标志物的许多方法和装置是技术人员众所周知的。参见，例如，美国专利6,143,576；6,113,855；6,019,944；5,985,579；5,947,124；5,939,272；5,922,615；5,885,527；5,851,776；5,824,799；5,679,526；5,525,524；和5,480,792，以及the immunoassay handbook,david wild,ed.stockton press,new york,1994，其各自通过引用整体并入本文，包括所有表格、图和权利要求。
[0140]
本领域已知的测定装置和方法可以利用各种夹心、竞争性或非竞争性测定形式的标记的分子来产生与感兴趣的生物标志物的存在或数量相关的信号。合适的测定形式还包括色谱法、质谱法和蛋白质“印迹”方法。此外，某些方法和装置例如生物传感器和光学免疫测定可用于确定分析物的存在或数量而无需标记的分子。参见，例如，美国专利5,631,171；和5,955,377，其各自通过引用整体并入本文，包括所有表格、图和权利要求。本领域技术人员还认识到，包括但不限于beckmanabbottrochedade behring系统的机器人仪器属于能够进行免疫测定的免疫测定分析仪。但是可以使用任何合适的免疫测定，例如酶联免疫测定(elisa)、放射免疫测定(ria)、竞争性结合测定等。
[0141]
抗体或其他多肽可以固定在各种固体支持物上以用于测定。可用于固定特定结合成员的固相包括在固相结合测定中开发和/或用作固相的那些。合适的固相的例子包括膜过滤器、纤维素基纸、珠子(包括聚合物、乳胶和顺磁性颗粒)、玻璃、硅片、微粒、纳米颗粒、tentagel、agrogel、pega凝胶、spocc凝胶和多孔板。可以通过在固体支持物上以阵列形式涂覆抗体或多种抗体来制备测定条。然后可以将该条带浸入测试样品中，然后通过洗涤和检测步骤快速处理以产生可测量的信号，例如有色斑点。抗体或其他多肽可以通过直接缀合到测定装置表面或通过间接结合而结合到测定装置的特定区域。在后一种情况的一个例子中，抗体或其他多肽可以固定在颗粒或其他固体支持物上，并且该固体支持物固定在装置表面上。
[0142]
生物测定需要用于检测的方法，最常见的用于结果定量的方法之一是将可检测标记与对所研究的生物系统中的成分之一具有亲和力的蛋白质或核酸缀合。可检测标记可包括自身可检测的分子(例如，荧光部分、电化学标志物、金属螯合物等)以及可通过可检测反应产物的产生(例如，酶如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)或通过自身可检测的特异性结合分子(例如，生物素、地高辛、麦芽糖、寡聚组氨酸、2,4-二硝基苯、苯砷酸盐、ssdna、dsdna等)间接检测的分子。
[0143]
固相和可检测标记缀合物的制备通常包括使用化学交联剂。交联剂含有至少两个反应基团，并且一般分为同功能交联剂(含有相同反应基团)和异功能交联剂(含有不同反
43,1991；nelson and griswold,comput.methods programs biomed.27:65-8,1988。
[0149]
术语“表位”是指能够与抗体特异性结合的抗原决定簇。表位通常由分子的化学活性表面组群(例如氨基酸或糖侧链)组成，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。构象和非构象表位的区别在于在变性溶剂的存在下与前者而非后者的结合的丢失。
[0150]
测定关联
[0151]
如本文所用的关于生物标志物的使用的术语“关联”是指将患者中生物标志物的存在或量与其在已知患有给定病况或已知处于给定病况的风险中的人；或在已知没有特定病况的人中的存在或量进行比较。通常，这采取将生物标志物浓度形式的测定结果与预定阈值进行比较的形式，该阈值被选择以指示疾病的发生或不发生或某些未来结果的可能性。
[0152]
选择诊断阈值包括(除其他以外)疾病的概率的考虑、不同测试阈值下真假诊断的分布以及治疗(或未能治疗)的后果的估计(基于诊断)。例如，当考虑施用一种高效且风险水平低的特定疗法时，几乎不需要进行测试，因为临床医生可以接受大量的诊断不确定性。另一方面，在治疗方案效果较差且风险较高的情况下，临床医生通常需要更高程度的诊断确定性。因此，在选择诊断阈值时涉及成本/收益分析。
[0153]
可以以多种方式确定合适的阈值。例如，使用心肌肌钙蛋白诊断急性心肌梗塞的一个推荐诊断阈值是正常群体中所见的浓度的第97.5个百分位数。另一种方法可能是查看来自同一患者的连续样品，其中使用先前的“基线”结果来监测生物标志物水平的时间变化。
[0154]
人口研究也可用于选择决策阈值。接收者操作特性(“roc”)起源于二战期间为分析雷达图像而开发的信号检测理论领域，并且roc分析通常用于选择能够最好地区分“患病”亚群和“无病”亚群的阈值。在这种情况下，假阳性发生在该人测试呈阳性但实际上并未患病时。另一方面，假阴性发生在该人检测为阴性，提示他们是健康的，而实际上他们确实患有这种疾病时。为了绘制roc曲线，随着决策阈值的不断变化确定真阳性率(tpr)和假阳性率(fpr)。由于tpr等同于灵敏度且fpr等同于1-特异性，因此roc图有时称为灵敏度相对(1-特异性)图。一个完美的测试将具有1.0的roc曲线下面积；随机测试将具有0.5的面积。选择阈值以提供可接受水平的特异性和灵敏度。
[0155]
在此上下文中，“患病”是指具有一种特征(疾病或病况的存在或某些结果的发生)的群体，而“未患病”则是指缺乏该特征的群体。虽然单个决策阈值是这种方法的最简单应用，但也可以使用多个决策阈值。例如，在第一阈值以下，疾病的不存在可以被分配为具有相对高的置信度，并且在第二阈值以上，疾病的存在也可以被分配为具有相对高的置信度。在两个阈值之间可以被认为是不确定的。这在本质上仅是示例性的。
[0156]
除了阈值比较之外，用于将测定结果与患者分类(疾病的发生或不发生、结果的可能性等)关联的其他方法包括决策树、规则集、贝叶斯方法和神经网络方法。这些方法可以产生代表受试者属于多个分类中的一个分类的程度的概率值。
[0157]
可以如fischer等人,intensive care med.29:1043-51,2003中所述获得测试准确度的量度，并将其用于确定给定生物标志物的有效性。这些量度包括灵敏度和特异性、预测值、似然比、诊断优势比和roc曲线面积。roc图的曲线下面积(“auc”)等同于分类器将随
机选择的正实例排名高于随机选择的负实例的概率。roc曲线下面积可以被认为等同于mann-whitney u检验，其测试在所考虑的两个组中获得的分数之间的中值差异(如果这些组具有连续数据)，或者等同于wilcoxon秩检验。
[0158]
如上所述，合适的测试可以在这些不同的量度上表现出一种或多种以下结果：特异性为大于0.5，优选地至少0.6，更优选地至少0.7，还更优选地至少0.8，甚至更优选地至少0.9，最优选至少0.95，相应的灵敏度为大于0.2，优选大于0.3，更优选大于0.4，还更优选至少0.5，甚至更优选0.6，还更优选大于0.7，还更优选大于0.8，更优选大于0.9，最优选大于0.95；灵敏度为大于0.5，优选至少0.6，更优选至少0.7，更优选至少0.8，甚至更优选至少0.9，最优选至少0.95，相应的特异性为大于0.2，优选大于0.3，更优选大于0.4，还更优选至少0.5，甚至更优选0.6，还更优选大于0.7，还更优选大于0.8，更优选大于0.9，最优选大于0.95；至少75％的灵敏度，结合至少75％的特异性；roc曲线面积为大于0.5，优选至少0.6，更优选0.7，更优选至少0.75，甚至更优选至少0.8，更优选至少0.9，最优选至少0.95；优势比为不等于1，优选至少约2或更多或约0.5或更少，更优选至少约3或更多或约0.33或更少，还更优选至少约4或更多或约0.25或更少，甚至更优选至少约5或更多或约0.2或更少，最优选至少约10或更多或约0.1或更少；阳性似然比(计算为灵敏度/(1-特异性))为大于1、至少2、更优选至少3、还更优选至少5、最优选至少10；和或阴性似然比(计算为(1-灵敏度)/特异性)为小于1、小于或等于0.5、更优选小于或等于0.3、最优选小于或等于0.1。
[0159]
额外的临床指标可以与本发明的肾损伤标志物测定结果组合。这些包括与肾脏状态相关的其他生物标志物。实例包括以下内容，它们引用常见的生物标志物名称，后跟该生物标志物或其亲本的swiss-prot条目编号：肌动蛋白(p68133)；腺苷脱氨酶结合蛋白(dpp4，p27487)；α-1-酸性糖蛋白1(p02763)；α-1-微球蛋白(p02760)；白蛋白(p02768)；血管紧张素原酶(肾素，p00797)；膜联蛋白a2(p07355)；β-葡萄糖醛酸酶(p08236)；b-2-微球蛋白(p61769)；β-半乳糖苷酶(p16278)；bmp-7(p18075)；脑钠肽(probnp、bnp-32、ntprobnp；p16860)；钙结合蛋白β(s100-β，p04271)；碳酸酐酶9(q16790)；酪蛋白激酶2(p68400)；簇蛋白(p10909)；补体c3(p01024)；富含半胱氨酸的蛋白质(cyr61,o00622)；细胞色素c(p99999)；表皮生长因子(egf,p01133)；内皮素-1(p05305)；外泌体胎球蛋白-a(p02765)；脂肪酸结合蛋白，心脏(fabp3，p05413)；脂肪酸结合蛋白，肝脏(p07148)；铁蛋白(轻链，p02792；重链p02794)；果糖-1,6-二磷酸酶(p09467)；gro-α(cxcl1，(p09341)；生长激素(p01241)；肝细胞生长因子(p14210)；胰岛素样生长因子i(p05019)；免疫球蛋白g；免疫球蛋白轻链(κ和λ)；干扰素γ(p01308)；溶菌酶(p61626)；白介素-1α(p01583)；白介素-2(p60568)；白介素-4(p05112)；白介素-9(p15248)；白介素-12p40(p29460)；白介素-13(p35225)；白介素-16(q14005)；l1细胞粘附分子(p32004)；乳酸脱氢酶(p00338)；亮氨酸氨肽酶(p28838)；meprin a-α亚基(q16819)；meprin a-β亚基(q16820)；midkine(p21741)；mip2-α(cxcl2，p19875)；mmp-2(p08253)；mmp-9(p14780)；netrin-1(o95631)；中性内肽酶(p08473)；骨桥蛋白(o14788)；肾乳头状抗原1(rpa1)；肾乳头状抗原2(rpa2)；视黄醇结合蛋白(p09455)；核糖核酸酶；s100钙结合蛋白a6(p06703)；血清淀粉样蛋白p组分(p02743)；钠/氢交换异构体(nhe3，p48764)；亚精胺/精胺n1-乙酰转移酶(p21673)；tgf-β1(p01137)；转铁蛋白(p02787)；三叶因子3(tff3,q07654)；toll样蛋白4(o00206)；总蛋白质；肾小管间质性肾炎抗原(q9ujw2)；尿调素(tamm-horsfall蛋白，p07911)。
[0160]
出于风险分层的目的，脂联素(q15848)；碱性磷酸酶(p05186)；氨肽酶n(p15144)；钙结合蛋白d28k(p05937)；胱抑素c(p01034)；f1fo atp酶的8个亚基(p03928)；γ-谷氨酰转移酶(p19440)；gsta(α-谷胱甘肽-s-转移酶，p08263)；gstpi(谷胱甘肽-s-转移酶p；gst类-pi；p09211)；igfbp-1(p08833)；igfbp-2(p18065)；igfbp-6(p24592)；整合膜蛋白1(itm1,p46977)；白介素-6(p05231)；白介素-8(p10145)；白介素-18(q14116)；ip-10(10kda干扰素-γ诱导蛋白，p02778)；irpr(ifrd1,o00458)；异戊酰辅酶a脱氢酶(ivd，p26440)；i-tac/cxcl11(o14625)；角蛋白19(p08727)；kim-1(甲型肝炎病毒细胞受体1，o43656)；l-精氨酸：甘氨酸脒基转移酶(p50440)；瘦素(p41159)；脂质运载蛋白2(ngal，p80188)；mcp-1(p13500)；mig(γ-干扰素诱导的单核因子q07325)；mip-1a(p10147)；mip-3a(p78556)；mip-1β(p13236)；mip-1d(q16663)；nag(n-乙酰-β-d-氨基葡萄糖苷酶，p54802)；有机离子转运蛋白(oct2，o15244)；骨保护素(o14788)；p8蛋白(o60356)；纤溶酶原激活剂抑制剂1(pai-1,p05121)；proanp(1-98)(p01160)；脑啡肽原(p01210)；蛋白磷酸酶1-β(ppi-β，p62140)；rab gdi-β(p50395)；肾激肽释放酶(p06870)；整合膜蛋白的rt1.b-1(α)链(q5y7a8)；可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员1a(stnfr-i，p19438)；可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员1b(stnfr-ii，p20333)；金属蛋白酶组织抑制剂3(timp-3,p35625)；upar(q03405)可以与本发明的肾损伤标志物测定结果组合。
[0161]
与细胞凋亡、坏死、内皮损伤、细胞-细胞和细胞-基质粘附、细胞保护、氧化过程、细胞周期调节、炎症、肾小管损伤、免疫功能和纤维化相关的生物标志物可以是单独或组合用于基于肾组织损伤和修复的合理机制预测和/或诊断肾脏状态包括肾损伤、急性肾损伤和/或持续性急性肾损伤的合适候选物(kashani k,al-khafaji a,ardiles t,artigas a,bagshaw sm,bell m等人crit care.2013；17(1):r25)。c-c基序趋化因子14(ccl14)可用作与肾脏状态相关的肾损伤标志物，包括当前和/或未来持续性急性肾损伤的标志物。ccl14是小分子趋化因子家族的成员，其最初被认为在白细胞趋化性中起作用，并与组织损伤和修复过程有关。ccl14以高亲和力结合趋化因子受体ccr1和ccr5，并以较低亲和力结合ccr3。(detheux m,standker l,vakili j,munch j,forssmann u,adermann k等人j exp med.2000；192(10):1501-8.)。ccl14是用于单核细胞/巨噬细胞募集的重要趋化因子，并且与多种疾病(包括类风湿性关节炎、多发性硬化症和狼疮)中的促炎趋化性相关(rump l,mattey dl,kehoe o,middleton j.cytokine.2017；97:133-40；vyshkina t,sylvester a,sadiq s,bonilla e,perl a,kalman b.j neuroimmunol.2008；200(1-2):145-52)。
[0162]
可以与本发明的肾损伤标志物测定结果组合的其他临床指标包括人口统计信息(例如体重、性别、年龄、种族)、病史(例如家族史、手术类型、预先存在的疾病，例如动脉瘤、充血性心力衰竭、先兆子痫、子痫、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肾功能不全或败血症，毒素暴露的类型，例如nsaid、环孢菌素、他克莫司、氨基糖苷类、膦甲酸、乙二醇、血红蛋白、肌红蛋白、异环磷酰胺、重金属、甲氨蝶呤、不透射线造影剂或链脲佐菌素)、临床变量(例如血压、体温、呼吸频率)、风险评分(apache评分、predict评分、ua/nstemi的timi风险评分、framingham风险评分)、尿总蛋白测量值、肾小球滤过率、估计的肾小球滤过率、尿生产率、血清或血浆肌酐浓度、肾乳头状抗原1(rpa1)测量；肾乳头状抗原2(rpa2)测量；尿肌酐浓度、钠排泄分数、尿钠浓度、尿肌酐与血清或血浆肌酐的比率、尿比重、尿渗透压、尿的尿素氮与血浆尿素氮的比率、血浆bun与肌酐比率和/或计算为尿钠/(尿肌酐/血浆肌酐)的
肾衰竭指数。可与肾损伤标志物测定结果组合的其他肾功能量度描述于下文和harrison’s principles of internal medicine,17
th ed.,mcgraw hill,new york,第1741-1830页和current medical diagnosis&treatment 2008,47th ed,mcgraw hill,new york,第785-815页(通过引用全文并入本文)。
[0163]
以这种方式组合测定结果/临床指标可以包括使用多元逻辑回归、对数线性建模、神经网络分析、n-of-m分析、决策树分析等。这个列表并不意味着限制。
[0164]
在个体标志物的测量结果或值(例如，样品中个体标志物浓度的测定结果)和/或其他临床指标被组合成单一复合值时，单一复合值可以被视为它是个体生物标志物，例如用于统计的目的。在一些方面(“产品模型”)，算术运算符(例如“x”(乘法)和“/”(除法)可以在其通常意义上用于将个体参数(例如标志物水平)组合成单一复合值。在另一方面，逻辑回归可用于将个体参数组合成单一复合值。逻辑回归是一种广泛用于具有二元结果的模型(例如“持续”或“非持续”二分法)的方法。例如，下面将简要描述逻辑回归的方法，而完整的处理可以在文献中找到。该模型可以由以下函数表示：
[0165][0166]
在该模型中，x和β是向量，x代表不同的观察值或分析物值，yi＝1表示患病状态，∏i是给定xi的第i个实例下该状态的模型概率。每个样品的面板值为∏i。对数几率或logit是：
[0167][0168]
观察到真实结果的概率可以定义为pi：
[0169][0170]
似然函数是观察到真实结果的概率的乘积，所以对数似然(ll)是：
[0171]
ll＝ln(l(α，β))＝∑ln(pi)
[0172]
为了找到最佳拟合模型的参数α和β，最小化负对数似然(-ll)。这种最小化可以使用levenberg-marquardt方法(numerical recipes：the art of scientific computing，third edition，cambridge university press，2007)来执行。每个参数的初始点为0。
[0173]
比较两个嵌套模型的拟合的常用统计量是似然比检验。该统计量或偏差是两个模型的两倍负对数似然(-2ll)之差，并且是渐近χ2分布，其中df等于模型之间自由度的数量(独立参数的数量)的变化。p值是从这个统计数据计算出来的。零假设是逻辑模型与常数模型(β设置为0)没有区别，其使用似然比检验对每个模型进行检验。“模型p值”被定义为零假设为真的概率。对于常数模型，可以找到α和-2ll的封闭形式解。它是数据集中患病(#d)和未患病(#nd)样品数量的函数。
[0174][0175]-2ll＝-2*[#ndln(1
‑ⅱ
)+#dln(ⅱ)]
[0176]
其中：
[0177]
在一些实施方案中，ccl14可以使用产品模型与胱抑素c、肌酐和尿排出量中的一种或多种组合成单一复合值。例如，标志物的测量可以组合为：ccl14 x胱抑素c、ccl14 x胱抑素c x肌酐、ccl14 x胱抑素c/尿排出量、ccl14 x肌酐、ccl14 x肌酐/尿排出量、ccl14/尿排出量和ccl14 x胱抑素c x肌酐/尿排出量。
[0178]
在一些实施方案中，可以使用逻辑回归将ccl14与胱抑素c、肌酐和尿排出量中的一种或多种组合成单一复合值。在逻辑回归模型中，具有高风险和/或阳性诊断(例如，持续性aki的风险)的受试者的几率的对数(l0g-odds)通过预测因子的线性组合建模。例如，如本文别处所述，可以组合标志物的测量。
[0179]
在一些实施方案中，可以使用对数线性建模将ccl14与胱抑素c、肌酐和尿排出量中的一种或多种组合成单一复合值。举例来说，可以如khoury等人“familial aggregation in chronic obstructive pulmonary disease:use of the loglinear model to analyze intermediate environmental and genetic risk factors.genet epidemiol.2(2):155-66(1985)(其全文以引用方式并入本文)所描述的那样执行对数线性建模的方法。
[0180]
在一些实施方案中，可以使用线性判别式将ccl14与胱抑素c、肌酐和尿排出量中的一种或多种组合成单一复合值。线性判别式对高风险和低风险受试者或具有阳性和阴性诊断的受试者之间的关系进行建模，例如，(例如，处于持续性aki的高风险和低风险的受试者)通过找到最大化两组之间的分离的预测因子的线性组合。
[0181]
在一些实施方案中，通过在决策树分析中一起使用测量或测定结果，ccl14可以与胱抑素c、肌酐和尿排出量中的一种或多种一起使用(即组合)。例如，可以如song,yy,and lu y(2015)“decision tree methods:applications for classification and prediction.”shanghai arch psychiatry.2015apr 25；27(2):130
–
135(其全部内容通过引用并入本文)中所述执行决策树分析的方法。决策树包含两个或更多节点(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10个节点)(其中测试输入变量)和从每个节点延伸的两个分支(它们表示节点处的测试的两种可能结果)的序列。为了对输入进行分类，从顶部“放下”一棵树，并最终将概率分类为在树枝的累积末端形成的至少两个类别之一。除了附加标志物或指标(例如，胱抑素c、肌酐和尿排出量中的一种或多种)的一个或多个测量或测定结果之外，输入还可以包括ccl14的测量或测定结果。输出可包括本文别处公开的任何一种或多种肾脏状态(例如，持续性aki的风险或可能性、持续性aki的诊断、aki的风险或可能性、aki的诊断、与aki相关的结果等等)。可以估计满足特定分支末端要求的受试者具有特定肾脏状态的概率，例如，基于满足相同分支末端要求(例如，来自群体研究)的实际具有该特定肾脏状态的群体的比例。
[0182]
决策树分析可用于生成对应于两个或更多分支终端的肾脏状态(例如，持续性aki)的两个或更多概率。在一些实施方案中，每个末端的概率可以按降序/升序排列并且与肾脏状态的相对风险或可能性关联。例如，具有三个分支终端的决策树可用于将受试者分类为具有患有特定肾脏状态的相对高、中或低风险。在一些实施方案中，可以将一个或多个分支终端归为同一类别。例如，高于或低于阈值概率的所有概率都可以归为一类。举例来
说，具有三个或更多分支终端的决策树可用于为受试者分配相对高或低的持续性急性肾损伤风险，或者具有四个或更多分支终端的决策树可用于为受试者分配相对高、中或低风险的持续性急性肾损伤风险。在一些实施方式中，至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的概率可以被认为足以将受试者分类为处于最高风险或可能性。在一些实施方式中，不超过40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或5％的概率可以被认为足以将受试者分类为处于最低风险或可能性。在一些实施方式中，可以将中风险或可能性分配给不满足最高或最低风险或可能性的标准的任何受试者。在一些实施方式中，多个分支可以被折叠成单个分支并且基于具有特定肾脏状态的受试者的调整的比例重新计算概率。在一些实施方式中，最高风险组的概率可以是最低风险组的至少1.10、1.25、1.5、1.75、2.0、3.0、4.0或5.0倍。在一些实施方式中，最高风险组的概率可以是中风险组的至少1.10、1.25、1.5、1.75、2.0、3.0、4.0或5.0倍。在一些实施方式中，每个风险组可以是下一个最高风险组的至少1.10、1.25、1.5、1.75、2.0、3.0、4.0或5.0倍。
[0183]
在决策树分析的各种实施方案中，节点可以包括标志物的阈值，其中一个分支指定测量结果(例如，标志物浓度)大于阈值，而另一个分支指定测量结果处于或低于阈值。在一些实施方案中，决策树可以包括至少一个ccl14节点和选自胱抑素c节点、肌酐节点和尿排出量节点的附加节点。在一些实施方案中，决策树可以包括至少一个ccl14节点和选自胱抑素c节点、肌酐节点和尿排出量节点的两个附加节点。在一些实施方案中，决策树可以包括至少一个ccl14节点、胱抑素c节点、肌酐节点和尿排出量节点。在一些实施方案中，决策树可以包括用于相同标志物的多于一个节点。例如，系列中的第一节点(即朝向树的顶部)可以指定第一阈值，并且系列中的第二节点(即朝向树的底部)可以指定取决于第二节点位于第一节点的哪个分支而高于或低于第一阈值的第二阈值。
[0184]
在各种实施方案中，一个或多个节点可以包括对应于rifle或kdigo标准的阈值测试。例如，在一个实施方案中，节点可以测试血清肌酐是否高于使受试者有资格处于rifle r、i或f期之一或处于kdigo 1、2或3期之一的阈值，如在本文别处所定义的。在另一个实施方案中，节点可以测试尿排出量是否低于使受试者有资格处于rifle r、i或f期之一或处于kdigo 1、2或3期之一的阈值，如本文别处所定义的。一般而言，同时满足rifle r、i或f期之一或kdigo 1、2或3期之一的血清肌酐标准和尿排出量标准的受试者可能比仅满足同一阶段的血清肌酐标准或尿排出量标准的受试者处于不利肾脏状态(例如，在该rifle阶段的持续性aki或进展到aki的下一阶段)更大的风险或可能性。一般而言，满足ccl14、胱抑素c、肌酐和尿排出量的多个阈值(即超过正向标志物的阈值或落在或低于负向标志物的阈值)的受试者与仅满足阈值之一的受试者相比将处于表现出满足这些阈值所定义的肾脏状态的更大可能性或风险。随着满足的阈值数量的增加，风险或可能性可能增加。任何节点的特定阈值可以是本文别处公开的任何阈值。在一些实施方式中，可以调整阈值以允许比单独使用标志物更大比例的群体满足分支标准，并且可以通过将标志物与附加标志物结合使用提高所选群体实际表现出测试的肾脏状态的概率。
[0185]
在一些实施方案中，在任何节点中的输入可以是ccl14、胱抑素c、肌酐和尿排出量的单一测量或测定结果。在一些实施方案中，在任何节点中的输入可以是复合值。在一些实施方案中，在节点中的输入可以包括单一测量/测定结果和复合值。复合值可由如本文别处所述的ccl14、胱抑素c、肌酐和尿排出量的一个或多个测量或测定结果的组合产生。例如，
10；34(10):1733
–
1746或jayson等人“plasma tie2 is a tumor vascular response biomarker for vegf inhibitors in metastatic colorectal cancer.”nat commun.9:4672(2018)(均通过引用整体并入本文)所描述的那样执行。
[0190]
在一些实施方案中，ccl14可以与胱抑素c、肌酐和尿排出量中的一种或多种组合成单一复合值(使用标志物比率)。举例来说，可以通过评估生物流体中的ccl-14水平与测量的尿排出量的比率来执行使用标志物比率的方法。在一些实例中，该比率可以包括作为分子的正向标志物和作为分母的负向标志物。在这个例子中，复合数可以被认为是正向标志物。相反，该比率可以包括作为分子的负向标志物和作为分母的正向标志物。在这个例子中，复合数可以被认为是负向标志物。
[0191]
在一些实施方案中，ccl14可以通过在规则集中一起使用测量或测定结果与胱抑素c、肌酐和尿排出量中的一种或多种一起使用(即组合)。例如，可以如woetzel等人“identification of rheumatoid arthritis and osteoarthritis patients by transcriptome-based rule set generation.”arthritis res ther.16(2):r84(2014)(其全部内容通过引用并入本文)所描述的那样执行用于使用规则集来分析标志物的方法。
[0192]
急性肾衰竭的诊断
[0193]
如上所述，本文使用的术语“急性肾(或肾脏)损伤”和“急性肾(或肾脏)衰竭”部分地根据血清肌酐从基线值的变化来定义。arf的大多数定义都有共同的要素，包括使用血清肌酐和通常尿排出量。患者可能会出现肾功能不全，而没有可用的肾功能基线量度用于此比较。在这种情况下，可以通过假设患者最初具有正常的肾小球滤过率(gfr)来估计基线血清肌酐值。肾小球滤过率(gfr)是单位时间内从肾(肾脏)小球毛细血管滤入鲍曼囊的液体体积。肾小球滤过率(gfr)可以通过测量血液中具有稳定水平的任何化学物质来计算，并且是自由过滤但
[0194][0195]
既不会被肾脏重吸收也不会被肾脏分泌。gfr通常以ml/min为单位表示：
[0196]
通过将gfr标准化至体表面积，可以假设每1.73m2约75-100ml/min的gfr。因此，测量的gfr指示尿液中源自可计算的血液量的物质的数量。有几种不同的技术可用于计算或估计肾小球滤过率(gfr或egfr)。然而，在临床实践中，肌酐清除率用于测量gfr。肌酐由身体天然产生(肌酐(creatinine)是肌酸酐(creatinine)的代谢物，其存在于肌肉中)。它被肾小球自由过滤，但也由肾小管以非常少的量主动分泌，使得肌酐清除率将实际gfr高估10-20％。考虑到肌酐清除率测量的简便性，这个误差幅度是可以接受的。
[0197]
如果已知肌酐尿浓度(u
cr
)、尿流率(v)和肌酐血浆浓度(p
cr
)的值，则可以计算肌酐清除率(ccr)。由于尿浓度和尿流率的乘积产生肌酐的排泄率，肌酐清除率也被称为其排泄率(u
cr
×
v)除以其血浆浓度。这通常在数学上表示为：
[0198][0199]
通常进行24小时尿液收集，从一天早上的空膀胱到第二天早上的膀胱内容物，然后进行比较血液测试：
[0200][0201]
为了比较不同体型的人的结果，ccr通常针对体表面积(bsa)进行校正，并与平均体型的人相比较地表示为ml/min/1.73m2。虽然大多数成年人的bsa接近1.7(1.6-1.9)，但极度肥胖或苗条的患者应针对其实际bsa校正其ccr：
[0202][0203]
肌酐清除率测量的准确性(即使在收集完成时)是有限的，因为随着肾小球滤过率(gfr)的下降，肌酐分泌增加，因此血清肌酐的升高较少。因此，肌酐排泄远大于滤过负荷，导致gfr的潜在高估(多达两倍差异)。然而，对于临床目的，重要的是确定肾功能是否稳定或恶化或好转。这通常是通过单独监测血清肌酐来确定的。与肌酐清除率一样，在arf的非稳态条件下，血清肌酐将不会准确反映gfr。尽管如此，血清肌酐从基线变化的程度将反映gfr的变化。血清肌酐很容易测量，并且特异于肾功能。
[0204]
为了以ml/kg/hr为基础确定尿排出量，每小时收集和测量尿液就足够了。例如，在只有累积24小时排出量可用且未提供患者体重的情况下，已经描述了rifle尿排出量标准的微小修改。例如，bagshaw等人,nephrol.dial.transplant.23:1203
–
1210,2008假设患者平均体重为70公斤，并且基于《35ml/h(风险)、《21ml/h(损伤)或《4ml/h(衰竭)将患者分配了rifle分类。
[0205]
选择治疗方案
[0206]
一旦获得诊断，临床医生可以容易地选择与诊断相容的治疗方案，例如开始肾脏替代疗法、通过调整化合物的量或选择来改变已知对肾脏有损害的化合物的施用(例如、撤回或减少已知对肾脏有害的化合物的递送)、肾移植、延迟或避免已知对肾脏有害的程序、改变利尿剂施用、启动目标导向治疗等。本领域技术人员知晓与本文所述的诊断方法相关讨论的许多疾病的适当治疗。参见，例如，merck manual of diagnosis and therapy,17th ed.merck research laboratories,whitehouse station,nj,1999。此外，由于本文描述的方法和组合物提供预后信息，本发明的标志物可用于监测治疗过程。例如，改善或恶化的预后状态可能表明特定治疗有效或无效。利尿剂用于急性肾损伤(aki)以优化体液管理并帮助管理电解质紊乱。然而，利尿剂治疗也具有副作用，包括容量缺失(volume depletion)、低血压、心输出量减少和肾功能恶化。与利尿剂的施用、配量或停用相关的决定不仅取决于肾脏状态，还取决于患者状态的其他方面，例如体液平衡。决定利尿剂在患有aki或有发展aki风险的患者中适当使用的这些因素是本领域技术人员所理解的，如例如在cerda,j.“loop diuretics in acute kidney injury”encyclopedia of intensive care medicine,2012ed,p 1337-1341(其全部内容以引用方式并入本文)中描述的。
[0207]
在一些实施方式中，被分配了相对较低的肾损伤(例如持续性急性肾损伤)风险的受试者可按照本领域已知的根据更保守或不太激进的治疗方案(关于肾损伤)(其可能需要更少的风险、成本、疼痛、不适和/或副作用)进行治疗。当预测病况改善或不显著恶化时，治疗可包括本领域已知的用于治疗现有肾损伤(例如，急性肾损伤)的治疗，和/或治疗可包括对患者的合并症或其他病况的治疗。此类治疗可包括通常会增加肾损伤风险的治疗(例如，递送肾毒性剂或缺血性程序)。此类治疗在治疗合并症或除肾损伤之外的其他病况时可能更激进/更不保守。治疗方案可包括在足够长的时间后对低风险受试者进行额外测试以评
估肾损伤(例如，持续性急性肾损伤)的风险是否增加，并确定低风险受试者的治疗策略是否应该行进或继续。在一些实例中，治疗可包括通过调节化合物的量或选择来改变已知对肾脏有损害的化合物的施用(例如，撤回或减少已知对肾脏有损害的化合物(包括但不限于本文别处公开的任何肾毒性剂，例如造影剂、抗生素等)的递送)，延迟或避免已知损害肾脏的程序(例如，包括但不限于本文别处公开的任何程序，其易使受试者面临急性肾损伤的风险，例如血管或心脏手术或引起缺血的任何其他手术)，或改变利尿剂施用。在该实例中可以撤回的化合物的其他实例包括但不限于nsaid、环孢菌素、他克莫司、氨基糖苷类、膦甲酸、乙二醇、血红蛋白、肌红蛋白、异环磷酰胺、重金属、甲氨蝶呤、不透射线的造影剂或链脲佐菌素。
[0208]
在一些方面，治疗方案可以包括重新测试高风险患者以确认初始测试的结果，或者可以在足够长的时间段之后重新测试高风险受试者以确定肾状态是否已经改善、恶化或保持相对稳定。受试者的后续测试可包括与最初执行以初始评估受试者的肾脏状态的测试相同的测试和/或不同的测试(包括本文所述的那些)。受试者可以根据需要重新测试(例如，大约每12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、120小时、144小时、168小时等)。
[0209]
在一些实施方式中，被分配了相对较高的肾损伤(例如持续性急性肾损伤)风险的受试者可以根据本领域已知的根据不太保守或更激进的治疗方案(关于肾损伤)(其可能需要相对更多的风险、成本、疼痛、不适和/或副作用)进行治疗。治疗可以包括对患者的合并症或其他病况的治疗。此类治疗在治疗合并症或除肾损伤之外的其他病况时可能不太激进/更保守。治疗可以包括本领域已知的用于治疗现有肾损伤(例如，急性肾损伤)的治疗。在一些实施方案中，还可以通过以下一种或多种方式治疗高风险受试者：开始肾脏替代疗法、通过调整化合物的量或选择来改变已知对肾脏有损害的化合物的施用(例如，撤回或减少已知对肾脏有损害的化合物的递送、延迟或避免已知对肾脏有害的程序)，以及改变利尿剂施用，如本文其他地方所描述的。可以用这些治疗的更激进/更不保守的形式来治疗高风险受试者。例如，以下类型的肾脏替代治疗可能比低风险受试者更适合高风险受试者：连续肾脏替代治疗(例如，连续静脉血液透析(cvvhd)、连续静脉血液滤过(cvvh)、连续静脉血液透析滤过(cvvhdf))、间歇性血液透析(ihd)、腹膜透析和肾移植。在一些实施方案中，可在高风险受试者中减少、停止或暂停利尿剂施用以避免进一步加重肾损伤。
[0210]
本领域技术人员容易理解，本发明很好地适用于实现目标并获得所提及的目的和优点以及其中固有的那些目的和优点。本文提供的实施例是优选方面的代表，是示例性的，并不意在限制本发明的范围。
[0211]
包括在以下实施例中的样品是如hoste,e.,a.bihorac,a.al-khafaji,l.m.ortega,m.ostermann,m.haase,k.zacharowski等人"identification and validation of biomarkers of persistent acute kidney injury:the ruby study."intensive care med(feb 6 2020)(其通过引用整体并入本文)中所述收集的。
[0212]
实施例1.免疫测定形式
[0213]
将硝化纤维素膜预先层压到背衬卡上，并用测试线抗体和阳性对照抗体划线。然后将条纹硝化纤维素膜固化并与芯吸垫和样品垫层压。将卡片切成5mm宽的测试条并放入卡盒外壳中。
[0214]
将纯化的重组人c-c基序趋化因子14蛋白掺入合并的尿液中并连续稀释以生成一
组涵盖一系列浓度的标准样品。在测试前，将人尿液样品的冷冻的一次性使用等分式样在室温水浴中解冻不到20分钟。
[0215]
将100μl测试缓冲液添加到冻干的缀合珠，该珠含有荧光染料负载的涂有c-c基序趋化因子14检测抗体的聚苯乙烯颗粒。将100μl标准或人尿液样品添加到重建的缀合物溶液中。然后将100μl尿液样品/缀合物混合物装载入测试盒的样品端口。在大约20分钟时，在644nm下激发后使用荧光读数器读取在663nm下发射的荧光。通过与从c-c基序趋化因子14标准品确定的标准曲线进行比较，将c-c基序趋化因子14浓度分配给测试尿液样品。本文报道的c-c基序趋化因子14的单位是ng/ml。
[0216]
实施例2：在用于评估入住icu的患者的肾脏状态：在kdigo 3期持续的产品模型中使用c-c基序趋化因子14和血清肌酐、尿排出量和胱抑素c中的一种或多种
[0217]
被认为在过去36小时内发展kdigo 2或3期急性肾损伤的重症监护病房(icu)患者参加了以下研究。如果患者之前接受过肾移植、正在接受或迫切需要肾脏替代治疗、正在接受仅安慰措施或已知感染了人类免疫缺陷病毒或活动性肝炎，则将其排除在外。在入组时和在受试者住院时每12小时直至第3天、然后每24小时直至第7天收集血液样品(edta血浆10ml，血清3ml)和尿液样品(50ml)。在入组尿液样品中测量c-c基序趋化因子14(ccl14)。在入组血浆样品中测量胱抑素c。在roche cobas c-701仪器上通过jaffe方法测量入组血清样品中的血清肌酐(scr)，并以mg/dl的单位报告。在临床站点记录尿流量和患者体重，并针对样品收集的时间以ml/kg/h为单位报告加权调整的尿排出量。评估了入组后90天内血清肌酐水平、肾脏替代疗法(rrt)和死亡的记录。
[0218]
表1：肾损伤标志物，包括除非另有说明，否则在本文报告测量结果的单位，除非另有说明，否则测量标志物的体液样品类型，以及除非另有说明，否则用于测量标志物的测定。从emd millipore(billerica，ma)获得的商业免疫测定使用luminex 200平台(luminex，austin，tx)进行测量。
[0219][0220]
肾脏状态通过仅基于血清肌酐、仅基于尿排出量或基于血清肌酐或尿排出量的kdigo标准进行评估。两个队列被定义为代表“持续”和“非持续”群体。“持续”是指在24、48或72小时内最低kdigo阶段为3期的那些患者，持续期可以从样品采集时间开始至样品采集后24、48、72、96或168小时。“非持续”是指在3期不持续且其在24、48或72小时内的最低kdigo阶段为2期或以下的那些患者，其中持续期可以从样品采集时间开始至样品采集后
24、48、72、96或168小时。如果患者达到kdigo 3期并在持续期内死亡或接受肾脏替代治疗(rrt)，则该患者被视为“持续性”的。
[0221]
使用接收者操作特征(roc)分析确定区分“持续”和“非持续”队列的能力。针对对应于测定结果的第25、50和75百分位数(四分位数2、四分位数3和四分位数4)的截止值确定灵敏度、特异性和优势比。
[0222]
将个体标志物测定结果组合以提供如本文所示的单一结果：c-c基序趋化因子14/(加权调整的尿排出量)、c-c基序趋化因子14x血清肌酐、c-c基序趋化因子14x胱抑素-c、c-c基序趋化因子14x血清肌酐/(加权调整的尿排出量)、c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)。然后使用标准统计方法将单一结果作为个体生物标志物处理。在表达这些组合时，算术运算符例如“x”(乘法)和“/”(除法)按其普通数学意义使用。
[0223]
表2：所有患者和根据由在入组后48小时内开始的时间段内持续至少72小时的持续性kdigo 3期急性肾损伤定义的持续性状态的基线患者特征。
[0224]
[0225]
[0226][0227]
表2中的连续和分类基线变量分别使用wilcoxon秩和检验和fisher精确检验在终点阴性和阳性患者之间进行比较。在最初入组的364名患者中，331名(91％)仍包括在分析中。如表2所示，与未发生持续性急性肾损伤的患者相比，发生持续性急性肾损伤的患者更可能具有较低的bmi，不太可能有糖尿病病史，但具有更高的血清肌酐值和apache iii评分(在入组时)。发生持续性3期急性肾损伤的患者在入组时更有可能具有3期急性肾损伤，这与较高的血清肌酐入组水平一致。此外，128(39％)名患者在90(
±
7)天时经历了重大肾脏不良事件(make
90
)。重大肾脏不良事件被定义为由以下组成：死亡，其中108名患者(84％)死亡；由17名患者(13％)经历的大于或等于25％的使用mdrd方程计算的估计gfr(egfr)损失；或透析，在7名患者(5％)中开始。
[0228]
表3：“持续性”和“非持续性”队列的样品中的标志物水平和roc曲线下面积(auc)的比较，其中持续性在样品收集后24小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。标志物是正向或负向的，这可以从auc的数值辨别出来。更具体地说，auc值》0.5指示正向标志物，auc值《0.5指示负向标志物。
[0229]
c-c基序趋化因子14
[0230]
[0231]
[0232][0233]
加权调整的尿排出量
[0234]
[0235][0236]
血清肌酐
[0237]
[0238][0239]
胱抑素-c
[0240]
[0241]
[0242][0243]
c-c基序趋化因子14/(加权调整的尿排出量)
[0244]
[0245]
[0246][0247]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐
[0248]
[0249][0250]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c
[0251]
[0252]
[0253][0254][0255]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐/(加权调整的尿排出量)
[0256]
[0257]
[0258][0259]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0260]
[0261]
[0262][0263]
表4：“持续性”和“非持续性”队列的尿液样品中标志物水平和roc曲线下面积(auc)的比较，其中持续性在样品收集后48小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。标志物是正向或负向的，这可以从auc的数值辨别出来。更具体地说，auc值》0.5指示正向标志物，auc值《0.5指示负向标志物。
[0264]
c-c基序趋化因子14
[0265]
[0266]
[0267][0268]
加权调整的尿排出量
[0269][0270]
血清肌酐
[0271]
[0272][0273]
胱抑素-c
[0274]
[0275]
[0276][0277]
c-c基序趋化因子14/(加权调整的尿排出量)
[0278]
[0279]
[0280][0281][0282]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐
[0283]
[0284][0285]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c
[0286]
[0287]
[0288][0289]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐/(加权调整的尿排出量)
[0290]
[0291]
[0292][0293]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0294]
[0295]
[0296][0297]
表5：“持续性”和“非持续性”队列的尿液样品中标志物水平和roc曲线下面积(auc)的比较，其中持续性在样品收集后72小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。标志物是正向或负向的，这可以从auc的数值辨别出来。更具体地说，auc值》0.5指示正向标志物，auc值《0.5指示负向标志物。
[0298]
c-c基序趋化因子14
[0299]
[0300]
[0301][0302]
加权调整的尿排出量
[0303][0304]
血清肌酐
[0305]
[0306][0307][0308]
胱抑素-c
[0309]
[0310]
[0311][0312]
c-c基序趋化因子14/(加权调整的尿排出量)
[0313]
[0314]
[0315][0316]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐
[0317]
[0318][0319]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c
[0320]
[0321]
[0322][0323]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐/(加权调整的尿排出量)
[0324]
[0325]
[0326][0327]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0328]
[0329]
[0330]
[0331][0332]
表6：“持续性”和“非持续性”队列的尿液样品中标志物水平和roc曲线下面积(auc)的比较，其中持续性在样品收集后96小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。标志物是正向或负向的，这可以从auc的数值辨别出来。更具体地说，auc值》0.5指示正向标志物，auc值《0.5指示负向标志物。
[0333]
c-c基序趋化因子14
[0334]
[0335]
[0336][0337]
加权调整的尿排出量
[0338]
[0339][0340]
血清肌酐
[0341]
[0342][0343]
胱抑素-c
[0344]
[0345]
[0346][0347]
c-c基序趋化因子14/(加权调整的尿排出量)
[0348]
[0349]
[0350][0351]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c
[0352]
[0353]
[0354][0355][0356]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐
[0357]
[0358][0359]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐/(加权调整的尿排出量)
[0360]
[0361]
[0362][0363]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0364]
[0365]
[0366][0367]
表7：“持续性”和“非持续性”队列的尿液样品中标志物水平和roc曲线下面积(auc)的比较，其中持续性在样品收集后168小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。标志物是正向或负向的，这可以从auc的数值辨别出来。更具体地说，auc值》0.5指示正向标志物，auc值《0.5指示负向标志物。
[0368]
c-c基序趋化因子14
[0369]
[0370]
[0371][0372]
加权调整的尿排出量
[0373][0374]
血清肌酐
[0375]
[0376][0377]
胱抑素-c
[0378]
[0379]
[0380][0381]
c-c基序趋化因子14/(加权调整的尿排出量)
[0382]
[0383]
[0384][0385]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐
[0386]
[0387][0388]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c
[0389]
[0390]
[0391][0392]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐/(加权调整的尿排出量)
[0393]
[0394]
[0395][0396]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0397]
[0398]
[0399][0400]
实施例3.在用于评估入住icu的患者的肾脏状态：在kdigo 3期持续的逻辑回归模型中使用c-c基序趋化因子14和血清肌酐、尿排出量和胱抑素c中的一种或多种
[0401]
使用与上述实施例2中相同的研究和患者队列，将具有c-c基序趋化因子14、血清肌酐和胱抑素c浓度和加权调整的尿排出量的组合作为预测因子的逻辑回归模型用于区分“持续”和“非持续”队列。属于“持续”队列的患者的几率的对数(log-odds)通过预测因子的线性组合建模。使用roc分析确定预测因子的组合区分“持续”和“非持续”队列的总体能力，并在对应于对数几率值的第25、50和75个百分位数的截断处确定灵敏度和特异性。
[0402]
因为逻辑回归模型没有对预测因子的权重做出先验假设，所以使用标志物浓度和加权调整的尿排出量数据(称为训练数据集)的比例来生成模型参数，然后使用这些参数来预测剩余数据(称为验证数据集)的队列分类。为确保roc auc、灵敏度和特异性估计的稳健性，使用了k折交叉验证技术(k-fold cross-validation technique)，从而将整个数据集划分为k个近似相等的子集。然后使用k-1个子集作为训练数据集估计模型参数，并使用剩余的验证数据集预测队列分类。使用k个子集中的每一个作为验证数据集重复训练和分类的这个过程，并对分类结果进行平均以给出roc auc、灵敏度和特异性的估计。
[0403]
将个体标志物测定结果组合用作本文所示的回归的预测因子：c-c基序趋化因子14与加权调整的尿排出量，c-c基序趋化因子14与血清肌酐，c-c基序趋化因子14与胱抑素-c，c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量，以及c-c基序趋化因子14与胱抑素-c和加权调整的尿排出量。在拟合程序之前对测定结果和加权调整的尿排出量进行对数转换。
[0404]
表8：“持续性”和“非持续性”队列的样品中roc auc的比较，其中持续性在样品收集后24小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。使用4折交叉验证来估计显示的统计数据。
[0405]
c-c基序趋化因子14与加权调整的尿排出量
[0406][0407][0408]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐
[0409]
c-c基序趋化因子14与胱抑素-c
[0410][0411]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量
[0412][0413]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0414]
[0415][0416]
表9：“持续性”和“非持续性”队列的尿液样品中标志物水平和roc曲线下面积(auc)的比较，其中持续性在样品收集后48小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。使用4折交叉验证来估计显示的统计数据。
[0417]
c-c基序趋化因子14与加权调整的尿排出量
[0418]
[0419][0420]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐
[0421][0422]
c-c基序趋化因子14与胱抑素-c
[0423]
[0424][0425]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量
[0426][0427]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0428][0429]
表10：“持续性”和“非持续性”队列的尿液样品中标志物水平和roc曲线下面积(auc)的比较，其中持续性在样品收集后72小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。使用4折交叉验证来估计显示的统计数据。
[0430]
c-c基序趋化因子14与加权调整的尿排出量
[0431][0432]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐
[0433]
c-c基序趋化因子14与胱抑素-c
[0434]
[0435][0436]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量
[0437][0438]
c-c基序趋化因子14与胱抑素-c和加权调整的尿排出量
[0439][0440]
实施例4.在用于评估入住icu的患者的肾脏状态：在kdigo 3期持续的线性判别式中使用c-c基序趋化因子14和血清肌酐、尿排出量和胱抑素c中的一种或多种
[0441]
使用与上述实施例2相同的研究和患者队列，将具有c-c基序趋化因子14、血清肌酐和胱抑素c浓度和加权调整的尿排出量的组合作为预测因子的线性判别分析用于区分“持续”和“非持续”队列。尽管与逻辑回归模型(在上面的实施例3中描述)相似，因为这两种技术都使用预测变量的线性组合来确定类别成员资格，但它们在用于对结果建模的拟合函数方面有所不同。线性判别式通过找到最大化两组之间的分离的预测因子的线性组合对“持续”和“非持续”队列之间的关系进行建模，从而实现最佳分类。使用roc分析确定预测因子的组合区分“持续”和“非持续”队列的总体能力，并对于对应于判别值的第25、50和75个百分位数的截断值确定灵敏度和特异性。
[0442]
线性判别式不对预测因子的权重做出先验假设，因此使用k折交叉验证技术(在上面的实施例7中描述)来确保roc auc、灵敏度和特异性估计的稳健性。
[0443]
将个体标志物测定结果组合用作本文所示的回归的预测因子：c-c基序趋化因子14与加权调整的尿排出量，c-c基序趋化因子14与血清肌酐，c-c基序趋化因子14与胱抑素-c，c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量，以及c-c基序趋化因子14与胱抑素-c和加权调整的尿排出量。在拟合程序之前对测定结果和加权调整的尿排出量进行对数转换。
[0444]
表11：“持续性”和“非持续性”队列的样品中roc auc的比较，其中持续性在样品收集后24小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。使用4折交叉验证来估计显示的统计数据。
[0445]
c-c基序趋化因子14与加权调整的尿排出量
[0446][0447][0448]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐
[0449][0450]
c-c基序趋化因子14与胱抑素-c
[0451][0452]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量
[0453][0454]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0455]
[0456][0457]
表12：“持续性”和“非持续性”队列的尿液样品中标志物水平和roc曲线下面积(auc)的比较，其中持续性在样品收集后48小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。使用4折交叉验证来估计显示的统计数据。
[0458]
c-c基序趋化因子14与加权调整的尿排出量
[0459]
[0460][0461]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐
[0462][0463]
c-c基序趋化因子14与胱抑素-c
[0464]
[0465][0466]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量
[0467][0468]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0469][0470][0471]
表13：“持续性”和“非持续性”队列的尿液样品中标志物水平和roc曲线下面积
(auc)的比较，其中持续性在样品收集后72小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。使用4折交叉验证来估计显示的统计数据。
[0472]
c-c基序趋化因子14与加权调整的尿排出量
[0473][0474][0475]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐
[0476]
c-c基序趋化因子14与胱抑素-c
[0477][0478]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量
[0479][0480]
c-c基序趋化因子14与胱抑素-c和加权调整的尿排出量
[0481][0482]
实施例5.在用于评估入住icu的患者的肾脏状态：在kdigo 3期持续的决策树中使用c-c基序趋化因子14和血清肌酐、尿排出量和胱抑素c中的一种或多种
[0483]
使用与上述实施例2相同的研究和患者队列，使用c-c基序趋化因子14、血清肌酐和胱抑素c浓度以及加权调整的尿排出量作为输入变量来应用决策树算法，以将样品分类为“持续性”和“非持续”队列。决策树由测试输入变量的节点和表示节点处测试的可能结果的分支的序列组成。为了对输入进行分类，将其从顶部放下一棵树，并最终将概率分类产生到两个类别之一中(在终端分支处)。使用数据的一个子集，调整节点处的分割以提供“持续”和“非持续”队列之间的最佳分离。通过血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。
[0484]
图1a举例说明了“持续性”和“非持续性”队列的决策树的实例，其中持续性在样品收集后24小时内开始并持续至少72小时。在这棵树的节点上使用了c-c基序趋化因子14(ccl14)、血清肌酐和加权调整的尿排出量。“n”表示该终端分支处的样品数，“y”表示“非持续”和“持续”样品的比例。生物标志物的单位可以在上表1中找到。
[0485]
图1b提供了“持续性”和“非持续性”队列的决策树的实例，其中持续性在样品收集后48小时内开始并持续至少72小时。在这棵树的节点上使用了c-c基序趋化因子14(ccl14)、血清肌酐和加权调整的尿排出量。
[0486]
图1c提供了“持续性”和“非持续性”队列的决策树的实例，其中持续性在样品收集后48小时内开始并持续至少72小时。在这棵树的节点上使用了c-c基序趋化因子14(ccl14)、胱抑素c和加权调整的尿排出量。图1d提供了“持续性”和“非持续性”队列的决策树的实例，其中持续性在样品收集后72小时内开始并持续至少72小时。在这棵树的节点上使用了c-c基序趋化因子14(ccl14)、血清肌酐和加权调整的尿排出量。
[0487]
在图1a-1d中，“n”表示该终端分支处的样品数量，“y”表示“非持续”和“持续”样品
的比例(即y＝(非持续比例，持续比例))。生物标志物的单位可以在上表1中找到。
[0488]
实施例6.在用于评估入住icu的患者的肾脏状态：在kdigo 3期持续的随机森林算法中使用c-c基序趋化因子14和血清肌酐、尿排出量和胱抑素c中的一种或多种
[0489]
使用与上述实施例2相同的研究和患者队列，使用c-c基序趋化因子14、血清肌酐和胱抑素c浓度以及加权调整的尿排出量作为输入变量来应用随机森林算法，以将样品分类为“持续性”和“非持续”队列。使用数据集的随机抽样生成了一组分类树。每棵个体树都与其他不同，并且每个节点代表对输入变量之一的测试，而每个分支表示测试的结果。为了对输入进行分类，将其放下每棵树，为类别之一给出分类或“投票”。进而，森林将最终分类给所有树中具有最多“投票”的类别。类别的投票比例近似于样品属于该类别的概率，并用于roc分析以确定输入区分“持续”和“非持续”队列的整体能力。此外，针对对应于投票比例的第25、第50和第75个百分位数的截断值确定灵敏度和特异性。
[0490]
分别类似于实施例3和4中的逻辑回归和线性判别分析，使用k折交叉验证来确保roc auc、灵敏度和特异性估计的稳健性。此外，对于下表14-16中持续性起始窗口和标志物的组合，随机森林算法的每次计算使用最少500棵树。
[0491]
个体标志物测定结果组合用作如本文所示的随机森林算法的输入变量：c-c基序趋化因子14与加权调整的尿排出量，c-c基序趋化因子14与血清肌酐，c-c基序趋化因子14与胱抑素-c，c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整尿排出量，以及c-c基序趋化因子14与胱抑素-c和加权调整尿排出量。
[0492]
表14：“持续性”和“非持续性”队列的样品中roc auc的比较，其中持续性在样品收集后24小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。使用4折交叉验证来估计显示的统计数据。
[0493]
c-c基序趋化因子14与加权调整的尿排出量
[0494]
[0495][0496]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐
[0497][0498]
c-c基序趋化因子14与胱抑素-c
[0499][0500]
[0501]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量
[0502]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0503]
[0504][0505]
表15：“持续性”和“非持续性”队列的尿液样品中标志物水平和roc曲线下面积(auc)的比较，其中持续性在样品收集后48小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。使用4折交叉验证来估计显示的统计数据。
[0506]
c-c基序趋化因子14与加权调整的尿排出量
[0507][0508]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐
[0509][0510]
c-c基序趋化因子14与胱抑素-c
[0511]
[0512][0513]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量
[0514][0515]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0516]
[0517][0518]
表16：“持续性”和“非持续性”队列的尿液样品中标志物水平和roc曲线下面积(auc)的比较，其中持续性在样品收集后72小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。使用4折交叉验证来估计显示的统计数据。
[0519]
c-c基序趋化因子14与加权调整的尿排出量
[0520]
[0521][0522]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐
[0523][0524]
c-c基序趋化因子14与胱抑素-c
[0525][0526]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量
[0527][0528]
c-c基序趋化因子14与胱抑素-c和加权调整的尿排出量
[0529][0530]
实施例7.在用于评估入住icu的患者的肾脏状态：在kdigo 3期持续的“n-of-m”(即“数字实证”)分析中使用c-c基序趋化因子14和血清肌酐、尿排出量和胱抑素c中的一种或多种
[0531]
使用与上述实施例2中相同的研究和患者队列，使用c-c基序趋化因子14、血清肌酐和胱抑素c浓度以及加权调整的尿排出量作为输入变量来应用“n-of-m”分析，以分层风险(在“持续”队列中)，其中风险被定义为给定群体中属于“持续”队列的患者的百分比。在“n-of-m”分析中，将样品浓度或加权调整的尿排出量与截断值进行比较。对于c-c基序趋化因子14、血清肌酐和胱抑素c，高于截断值的浓度与“持续”风险增加有关，而对于加权调整的尿排出量，低于截断值的值与风险增加有关。在该模型中，假设来自个体输入变量的风险是累积的，因此“阳性”的数量(即对于c-c基序趋化因子14、血清肌酐和胱抑素c的高于截断值的浓度以及对于加权调整的尿排出量的低于截断值的值)对“持续性”的风险进行分层。
[0532]
对于c-c基序趋化因子14和胱抑素c，各自浓度的第25、第50和第75个百分位数用作截断值。对于血清肌酐，截断值设置为患者基线水平的两倍。对于加权调整的尿排出量，截断值是尿持续至少12小时低于0.5ml/kg/h。
[0533]
表17：具有0、1、2或3个“阳性”的“持续性”风险，其中持续性在样品收集后24小时
内开始和通过血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。c-c基序趋化因子14和胱抑素c的单位可以在上表1中找到。
[0534]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量
[0535][0536]
c-c基序趋化因子14与胱抑素c和加权调整的尿排出量
[0537][0538][0539]
表18：具有0、1、2或3个“阳性”的“持续性”风险，其中持续性在样品收集后48小时内开始和通过血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。c-c基序趋化因子14和胱抑素c的单位可以在上表1中找到。
[0540]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量
[0541][0542]
c-c基序趋化因子14与胱抑素c和加权调整的尿排出量
[0543][0544][0545]
表19：具有0、1、2或3个“阳性”的“持续性”风险，其中持续性在样品收集后72小时内开始和通过血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。c-c基序趋化因子14和胱抑素c的单位可以在上表15中找到。
[0546]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量
[0547][0548]
c-c基序趋化因子14与胱抑素c和加权调整的尿排出量
[0549][0550][0551]
实施例8：在用于评估入住icu的患者的肾脏状态：在kdigo 2或3期持续的产品模型中使用c-c基序趋化因子14和血清肌酐、尿排出量和胱抑素c中的一种或多种
[0552]
使用与上述实施例2相同的研究和患者队列，肾脏状态通过仅基于血清肌酐、仅基于尿排出量或基于血清肌酐或尿排出量的kdigo标准进行评估。两个队列被定义为代表“持续”和“非持续”群体。“持续”是指在24、48或72小时内最低kdigo阶段为2或3期的那些患者，其中持续期可以从样品采集时间开始至样品采集后的24、48、72、96或168小时。“非持续”是指在2或3期不持续且其在24、48或72小时内的最低kdigo阶段为无aki或1期的那些患者，其
中持续期可以从样品采集时间开始至样品采集后24、48、72、96或168小时。如果患者在达到kdigo 2或3期后的持续期内死亡或接受肾脏替代治疗(rrt)，则该患者被视为“持续性”的。
[0553]
使用接收者操作特征(roc)分析确定区分“持续”和“非持续”队列的能力。针对对应于测定结果的第25、50和75百分位数(四分位数2、四分位数3和四分位数4)的截止值确定灵敏度、特异性和优势比。
[0554]
表20：“持续性”和“非持续性”队列的样品中的标志物水平和roc曲线下面积(auc)的比较，其中持续性在样品收集后24小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。标志物是正向或负向的，这可以从auc的数值辨别出来。更具体地说，auc值》0.5指示正向标志物，auc值《0.5指示负向标志物。
[0555]
c-c基序趋化因子14
[0556]
[0557]
[0558][0559]
加权调整的尿排出量
[0560][0561]
血清肌酐
[0562]
[0563][0564]
胱抑素-c
[0565]
[0566]
[0567][0568]
[0569]
c-c基序趋化因子14/(加权调整的尿排出量)
[0570]
[0571]
[0572][0573]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐
[0574]
[0575][0576]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c
[0577]
[0578]
[0579][0580]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐/(加权调整的尿排出量)
[0581]
[0582]
[0583][0584]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0585]
[0586]
[0587][0588]
表21：“持续性”和“非持续性”队列的尿液样品中标志物水平和roc曲线下面积(auc)的比较，其中持续性在样品收集后48小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。标志物是正向或负向的，这可以从auc的数值辨别出来。更具体地说，auc值》0.5指示正向标志物，auc值《0.5指示负向标志物。
[0589]
c-c基序趋化因子14
[0590]
[0591]
[0592][0593]
加权调整的尿排出量
[0594]
[0595][0596]
血清肌酐
[0597]
[0598][0599]
胱抑素-c
[0600]
[0601]
[0602][0603]
c-c基序趋化因子14/(加权调整的尿排出量)
[0604]
[0605]
[0606][0607]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐
[0608]
[0609][0610][0611]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c
[0612]
[0613]
[0614][0615]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐/(加权调整的尿排出量)
[0616]
[0617]
[0618][0619]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0620]
[0621]
[0622][0623]
表22：“持续性”和“非持续性”队列的尿液样品中标志物水平和roc曲线下面积(auc)的比较，其中持续性在样品收集后72小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。标志物是正向或负向的，这可以从auc的数值辨别出来。更具体地说，auc值》0.5指示正向标志物，auc值《0.5指示负向标志物。
[0624]
c-c基序趋化因子14
[0625]
[0626]
[0627][0628]
加权调整的尿排出量
[0629][0630]
血清肌酐
[0631]
[0632][0633][0634]
胱抑素-c
[0635]
[0636]
[0637][0638]
c-c基序趋化因子14/(加权调整的尿排出量)
[0639]
[0640]
[0641][0642]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐
[0643]
[0644][0645]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c
[0646]
[0647]
[0648][0649]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐/(加权调整的尿排出量)
[0650]
[0651]
[0652][0653]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0654]
[0655]
[0656][0657]
表23：“持续性”和“非持续性”队列的尿液样品中标志物水平和roc曲线下面积(auc)的比较，其中持续性在样品收集后96小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。标志物是正向或负向的，这可以从auc的数值辨别出来。更具体地说，auc值》0.5指示正向标志物，auc值《0.5指示负向标志物。
[0658]
c-c基序趋化因子14
[0659]
[0660]
[0661][0662]
加权调整的尿排出量
[0663]
[0664]
[0665][0666]
血清肌酐
[0667]
[0668][0669]
胱抑素-c
[0670]
[0671]
[0672][0673]
c-c基序趋化因子14/(加权调整的尿排出量)
[0674]
[0675]
[0676][0677]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐
[0678]
[0679][0680]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c
[0681]
[0682]
[0683][0684]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐/(加权调整的尿排出量)
[0685]
[0686]
[0687][0688]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0689]
[0690]
[0691][0692]
表24：“持续性”和“非持续性”队列的尿液样品中标志物水平和roc曲线下面积(auc)的比较，其中持续性在样品收集后168小时内开始，并通过仅血清肌酐(scr)、仅尿排出量(uo)或血清肌酐或尿排出量kdigo标准评估肾脏状态。标志物是正向或负向的，这可以从auc的数值辨别出来。更具体地说，auc值》0.5指示正向标志物，auc值《0.5指示负向标志物。
[0693]
c-c基序趋化因子14
[0694]
[0695]
[0696]
[0697][0698]
加权调整的尿排出量
[0699]
[0700][0701]
血清肌酐
[0702]
[0703][0704][0705]
胱抑素-c
[0706]
[0707]
[0708][0709]
c-c基序趋化因子14/(加权调整的尿排出量)
[0710]
[0711]
[0712][0713]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐
[0714]
[0715][0716]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c
[0717]
[0718]
[0719][0720]
c-c基序趋化因子14x血清肌酐/(加权调整的尿排出量)
[0721]
[0722]
[0723][0724]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0725]
[0726]
[0727][0728]
实施例9：使用c-c基序趋化因子14与其他标志物组合用于评估入住icu的患者的肾脏状态：在kdigo 3期持续
[0729]
使用与上述实施例2和8相同的研究和患者队列，通过仅基于血清肌酐、仅基于尿排出量或基于血清肌酐或尿排出量的kdigo标准评估肾脏状态。两个队列被定义为代表“持续”和“非持续”群体。“持续性”是指在24、48或72小时内的最低kdigo阶段为3期的那些患者，其中持续期可以从样品采集时间开始至样品采集后24、48或72小时。“非持续性”是指在3期不持续且其在24、48或72小时内的最低kdigo阶段为2期或以下的那些患者，其中持续期可以从样品采集时间开始至样品采集后24、48或72小时。如果患者达到kdigo 3期并在持续期内死亡或接受肾脏替代治疗(rrt)，则该患者被视为“持续性”的。
[0730]
使用接收者操作特征(roc)曲线下面积评估生物标志物(包括两种标志物的所有组合)对持续性aki的预测能力。roc曲线下面积(auc)的置信区间和auc的成对比较通过delong方法计算。使用cochran-armitage检验比较了ccl14三分位数中make
90
的发生。rrt启动或死亡的复合的make
90
的累积发生率曲线通过kaplan-meier方法估计，并使用对数秩检验来比较各组。使用r3.5.1进行统计分析。双侧p值《0.05被认为具有统计学意义。
[0731]
图2a和2b描绘了不同患者组的尿c-c基序趋化因子14(图2a)和血浆胱抑素c(图2b)的测量的浓度。空心框表示患有各种急性和慢性病况的未在急性肾损伤的任何阶段持续的患者的标志物水平。阴影框表示在从入组48小时的进展窗口内开始的至少72小时的持续期内，维持最低kdigo 1、2或3期急性水平肾损伤的患者的标志物水平。ccl14和胱抑素c都表现出随着急性肾损伤阶段的增加而增加的浓度。ccl14和胱抑素c均被确定为对于持续性急性肾损伤是“正向”的。在经历图2a所示的不同合并症的患者之间，在急性肾损伤的任何阶段均未持续的患者中的尿c-c基序趋化因子14水平是相似的。
[0732]
尿c-c基序趋化因子配体14证明了在从入组48小时内开始的持续期内持续至少72小时的持续性3期急性肾损伤的可预测性，具有0.83(0.78-0.87)的接受者操作特征曲线下面积(auc)(95％ci)。对急性肾损伤持续性的定义的灵敏度分析证明了c-c基序趋化因子14在24、48和72小时持续时间的持续期内的一致表现，其中持续期在入组后24、48和72小时的
进展窗口内开始。roc auc(95％ci)的范围为从24小时持续性和24小时内进展的0.79(0.74-0.84)到48小时持续性和48小时内进展的0.84(0.79-0.88)。此外，其中在入组时回顾性确定为不处于kdigo 2-3期的53名患者(表1)被排除的灵敏度分析显示在入组后48小时内开始的至少72小时的持续期内持续的持续性kdigo 3期急性肾损伤的结果几乎没有变化。(auc(95％ci)＝0.81(0.76-0.86))。
[0733]
表25:尿c-c基序趋化因子14用于预测不同持续时间和不同窗口(入组为具有kdigo 2期急性肾损伤的那些患者进展为持续性kdigo 3期)的持续性kdigo 3期急性肾损伤的roc auc(95％ci)。
[0734][0735][0736]
表26：尿ccl14和血浆胱抑素c关于预测在从入组后48小时内开始的持续期内持续至少72小时的持续阶段kdigo 3期急性肾损伤的roc auc(95％ci)的比较。
[0737][0738]
图3描绘了在入组样品中由尿c-c基序趋化因子14测量结果定义的三个三分位数中的每一个在入组后90天内开始肾脏替代治疗(rrt)或遭受死亡的患者的复合百分比。复合终点的发展在三分位数之间增加(对数秩p《0.001)，并且在第一个三分位数和第三个三分位数之间从约30％大致翻倍到约60％。如图3所示，大多数符合条件的事件发生在入组后的30天内。make
90
终点的发生率(包括大于或等于25％的egfr的损失(未显示))对于c-c基序趋化因子14测量结果的第一、第二和第三三分位数分别为29％、41％和46％(p＝0.01)。
[0739]
使用多变量逻辑回归模型测试了c-c基序趋化因子配体14与其他临床变量相比增强持续性kdigo 3期急性肾损伤的可预测性的能力。尿c-c基序趋化因子配体14在添加到在入组后48小时内开始的持续期内持续至少72小时的持续性kdigo 3期急性肾损伤的五参数临床模型中时，显著改善了风险预测(使用roc auc、综合判别改进(idi)和无类别净重分类改进(cfnri)分析中的任何一项)。
[0740]
表27：5参数参考逻辑回归模型和更新为包括尿c-c基序趋化因子配体14的相同模型的临床参数的优势比和p值之间的比较。
[0741][0742]
[0743]
参考模型和新模型的auc之间的差异具有统计学意义(p＝0.015)。血清肌酐轨迹被测量为相对于前一天的血清肌酐浓度变化，如使用两个血清肌酐结果(在入组前18(
±
9)小时和7(
±
4)小时的平均(
±
sd)收集时间)确定的。尿ccl14浓度进行对数转换。通过减去平均值并除以标准偏差来标准化所有数值变量。在总共308名患者中，34％被归类为持续性患者。
[0744]
表28：相对于表27的参考模型的新逻辑回归模型的使用roc auc、综合判别改进(idi)和无类别净重分类改进(cfnri)分析的分析，其中事件是在入组后48小时内开始的持续期内持续至少72小时的持续性kdigo 3期急性肾损伤和非事件是根据相同参数定义的非持续性急性肾损伤。
[0745] 值95％cip-值idi0.1080.071-0.145《0.001idi_事件0.0710.038-0.104《0.001idi_非事件0.0370.019-0.055《0.001cfnri0.8110.575-1.046《0.001cfnri_事件0.3520.161-0.544《0.001cfnri_非事件0.4580.321-0.596《0.001auc_参考模型0.8520.808-0.893《0.001auc_新模型0.8940.854-0.925《0.001auc差0.0420.014-0.0690.003
[0746]
c-c基序趋化因子配体14与血浆胱抑素c和血清肌酐通过逻辑回归模型的组合显著改善了用于预测在入组后48小时内开始的持续期内持续至少72小时的持续性急性肾损伤的auc(对于血浆胱抑素c的auc增加＝0.028，p＝0.04，和对于血清肌酐的auc增加＝0.04，p《0.01)。
[0747]
表29：尿c-c基序趋化因子配体14和血浆胱抑素c或血清肌酐的2-标志物组合和单独的尿c-c基序趋化因子配体14之间的roc auc差异(95％ci)。标志物浓度进行了对数转换。
[0748][0749]
表30：来自尿c-c基序趋化因子配体14与血浆胱抑素c或血清肌酐的逻辑回归模型的在间隔为0.1的0.1至0.9范围内的概率截断值下的灵敏度、特异性和优势比。
[0750]
尿c-c基序趋化因子14与血浆胱抑素c
[0751][0752][0753]
尿c-c基序趋化因子14与血清肌酐
[0754][0755]
升高的尿c-c基序趋化因子14被显示预测患有kdigo 2或3期急性肾损伤的危重患者的大型异质队列中持续性急性肾损伤的发展。这些发现支持趋化因子信号传导和巨噬细胞运输在肾损伤和修复中的作用，并指示c-c基序趋化因子14可能是肾组织损伤和/或无法恢复的重要介质。急性肾损伤与肾脏炎症有关。在肾脏炎症期间，循环单核细胞被募集、激活并分化为巨噬细胞。在损伤后可以观察到肾小球和间质巨噬细胞浸润。巨噬细胞被认为在肾脏损伤和修复中发挥着多种作用(meng xm,tang pm,li j,lan hy.kidney dis(basel).2015；1(2):138-46)。响应于组织损伤，巨噬细胞取决于组织损伤和修复的阶段而被激活具有巨噬细胞的功能状态。因此，巨噬细胞可能促成组织损伤和修复(急性肾损伤后)(huen sc,cantley lg.annu rev physiol.2017；79:449-69)。这种巨噬细胞极化是由直接微环境决定的，并且似乎在急性肾损伤后肾功能的恢复中起着关键作用。
[0756]
实施例10.在用于评估入住icu的患者的肾脏状态：rifle i或f期或kdigo 2期或3期的产品模型中使用c-c基序趋化因子14和血清肌酐、尿排出量和胱抑素c中的一种或多种
[0757]
来自重症监护病房(icu)的被认为有发生急性肾损伤风险的急性病患者参加了以下研究。如果患者之前接受过肾移植、入组前具有已知中度至重度aki(例如rifle i期或rifle f期/akin ii期或akin iii/kdigo 2期或kdigo 3期)、正在接受或迫切需要肾脏替代治疗或已知感染人类免疫缺陷病毒或活动性肝炎，则将其排除在外。患者是kashani k.等人crit care.2013；17(1):r25(通过引用整体并入本文)中研究的群体的一个子集。在入组时和在受试者住院时每12小时直至第4天、然后每24小时直至第7天从每位患者收集血液样品(edta血浆10ml，血清3ml)和尿液样品(50ml)。在下表31-33所示的时间测量尿液和/或血液样品收集物中的分析物浓度和尿排出量。
[0758]
基于血清肌酐或尿排出量、仅血清肌酐或仅尿排出量，通过rifle和kdigo标准评估肾脏状态。两个队列被定义为代表“患病”和“非患病”群体。“患病”表示在指定时间段内达到指定最大rifle或kdigo阶段的那些患者。“aki阶段之前”的时间表示收集样品的时间，相对于特定患者达到该队列定义的最低疾病阶段的时间，分为三个组，其为+/-12小时。例如，使用0vs r、i、f作为两个队列的“24小时之前”意味着到达r期(或如果没有样品在r处，则为i，或如果没有样品在r或i处，则为f)之前的24小时(+/-12小时)。
[0759]
使用roc分析确定区分“患病”和“未患病”队列的能力。此外，灵敏度和特异性是在特定值(70％、80％或90％)或对应于c-c基序趋化因子、血清肌酐和胱抑素c浓度和加权调整的尿排出量的第25、50和75个百分位数(或四分位数2、四分位数3和四分位数4)的截断值处确定的。
[0760]
将个体标志物结果组合以提供如本文所示的单一结果：c-c基序趋化因子14x血清肌酐/(加权调整的尿排出量)和c-c基序趋化因子14x胱抑素c/(加权调整的尿排出量)。然后使用标准统计方法处理单一结果作为个体生物标志物。在表达这些组合时，算术运算符例如“x”(乘法)和“/”(除法)按其普通数学意义使用。
[0761]
表31：“未患病”队列(未进展超过rifle 0或r期的患者)和“患病”队列(在达到i或f期之前0、24小时和48小时时进展到i或f期的患者)之间的auc比较。
[0762]
c-c基序趋化因子14
[0763]
[0764]
[0765][0766]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量
[0767]
[0768][0769]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0770]
[0771]
[0772][0773]
表32：使用在研究期间的最大标志物水平的“非患病”队列(没有进展超过rifle 0期的患者)与使用在入组和达到f期前0、24小时和48小时之间收集的样品的最大标志物水平的“患病”队列(进展到f期的患者)之间的auc比较。
[0774]
c-c基序趋化因子14
[0775]
[0776]
[0777][0778]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量
[0779]
[0780][0781]
c-c基序趋化因子14x胱抑素-c/(加权调整的尿排出量)
[0782]
[0783]
[0784][0785]
表33：“未患病”队列(在样品收集的12、24和36小时内未进展超过kdigo 0或1期的患者)和“患病”队列(在样品收集的12、24和36小时内进展到kdigo 2或3期的患者)之间的auc比较，其中尿液和血液样品是在入组的18小时内收集的。
[0786]
c-c基序趋化因子14
[0787]
[0788][0789]
c-c基序趋化因子14与血清肌酐和加权调整的尿排出量
[0790][0791]
c-c基序趋化因子14与胱抑素-c和加权调整的尿排出量
[0792][0793]
本文公开的结果证明，将ccl14与本文公开的标志物和/或指标(参数)(特别是胱抑素c、肌酐(例如，血清肌酐或尿肌酐)和尿排出量中的一种或多种)(其单独至少在某种程度上预测肾脏状态)一起(即组合)使用可以相对于使用单独的组分个体标志物或指标提供肾脏状态(特别是急性肾损伤，尤其是持续性急性肾损伤)的改善的可预测性。在一些实施方案中，将ccl14与本文公开的一种或多种另外的肾损伤标志物一起(即组合)使用包括将ccl14的测量结果与另外的肾损伤标志物的一种或多种测量结果组合成单一复合值或测定结果。在一些实施方案中，将ccl14与本文公开的一种或多种另外的肾损伤标志物一起(即组合)使用包括使用ccl14的测量结果或其他测定结果与另外的肾损伤标志物的一种或多种测量或测定结果而不将测量/测定结果组合为单一复合值或测定结果。例如，测量/测定结果可以一起用于决策树分析、随机森林分析和/或n-of-m(数字实证)分析。如果通过一种或多种另外的肾损伤标志物的测量/测定捕获的预测信息与通过ccl14的测量/测定捕获的预测信息是非冗余的，那么一起使用这些标志物可导致比单独使用这些标志物提高的预测能力。用于评估每个参数的测量结果可来自相同的样品或来自不同的样品。测量可以基本上同时进行或可以在时间上间隔开(例如，在大约6小时、12小时、24小时、48小时、72小时或更多时间内)。可以通过例如auc的差异、概率的差异、灵敏度的差异、特异性的差异、结果的差异(任何其他合适模型)(包括本文别处描述的那些(例如，预测的事件和/或非事件的得分的差异))和/或与个体参数相关的其他合适度量来评估一起使用标志物的改善的预测能力。
[0794]
在一些方面，本文公开的参数或参数组合可预测持续性急性肾损伤的发展。持续性急性肾损伤可定义为受试者在具有最短持续时间的持续期内维持最低水平的肾损伤(例
如，kdigo 1期、kdigo 2期或kdigo 3期)。在一些情况下，持续时间可为至少约24小时、48小时、72小时、96小时、120小时、144小时或168小时。可以在确定参数时或之后(例如，获得受试者样品的时间)开始的任何持续期内测量持续性急性肾损伤。例如，持续期可以在样品获得时或在从对患者采样时或相关时间点开始12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、120小时、144小时、188小时或更长的进展窗口内开始。在样品获得时开始的持续期可以被认为是受试者当前正在经历持续性急性肾损伤的诊断。在一些方面，本文公开的参数或其组合可以与在特定时间范围内或在近似时间点开始的持续性急性肾损伤的可能性关联。在一些实施方式中，持续期的开始可以从与在某些进展窗口内发展持续性急性肾损伤的可能性相关的数据推断。例如，在12小时内发展持续性急性肾损伤的可能性和在24小时内发展持续性急性肾损伤的可能性的比较可以告知在大约12小时和24小时之间发作的持续性急性肾损伤发展的可能性。
[0795]
持续性急性肾损伤可根据严重程度的任何阶段进行定义。例如，急性肾损伤可以在kdigo 1期、kdigo 2期或kdigo 3期持续存在。在一些实施方式中，肾损伤程度的其他分类可以适当地代替kdigo阶段，反之亦然(rifle r期可以对应于kdigo 1期，rifle i期可以对应于kdigo 2期，并且rifle f期可以对应于kdigo 3期)。在一些实施方式中，本文公开的参数或组合可用于预测维持在某一严重程度水平或某一严重程度范围内的持续性急性肾损伤。例如，这些参数可能能够预测在持续期内持续处于kdigo 2期但未达到kdigo 3期的持续性急性肾损伤，在持续期内持续处于kdigo 1期但未达到kdigo 2期的急性肾损伤，在持续期内持续处于kdigo 1或2期但未达到kdigo 3期的急性肾损伤等。在一些情况下，急性肾损伤在特定阶段持续的可能性可以从在两个或更多个最小阶段的持续性的可能性推断。例如，在kdigo 3期的持续性急性肾损伤的可能性和在kdigo 2或3期的持续性急性肾损伤的可能性可以告知在kdigo 2期的持续性急性肾损伤(其在持续期内不会进展到kdigo 3期)的可能性。
[0796]
在一些方面，当确定用于预测持续性急性肾损伤的可能性的参数时(例如，当收集样品时)，受试者可能正在经历急性肾损伤。例如，当确定参数时，受试者可能具有至少kdigo 1期、至少kdigo 2期或至少kdigo 3期。在一些方面，当确定参数时，受试者可能没有正在经历急性肾损伤。在一些方面，受试者是否正在经历急性肾损伤和/或受试者处于急性肾损伤的哪个阶段可能是未知的或可能是不确定的，直到在用于评估肾脏状态的参数之后(例如，获得持续性急性肾损伤的预测)。在一些实施方式中，可以基于具有急性肾损伤和/或持续性急性肾损伤的风险来测试受试者。风险可能是相对最近暴露于使受试者易患肾损伤例如持续性急性肾损伤的药剂(例如，nsaid、环孢菌素、他克莫司、氨基糖苷类、膦甲酸、乙二醇、血红蛋白、肌红蛋白、异环磷酰胺、重金属、甲氨蝶呤、不透射线造影剂或链脲佐菌素)和/或使患者易患肾损伤的风险例如持续性急性肾损伤的相对最近的急性医学事件(休克、败血症、出血、缺血性手术、增加的腹腔内压力伴急性失代偿性心力衰竭、缺血、肺栓塞、胰腺炎、烧伤或过度利尿)。在一些方面，受试者可能被诊断患有一种或多种增加肾损伤风险例如持续性急性肾损伤的病况或合并症(例如，充血性心力衰竭、先兆子痫、子痫、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肾功能不全、低于正常范围的肾小球滤过、肝硬化、高于正常范围的血清肌酐、败血症、肾功能损伤、肾功能减退或急性肾损伤)。在一些情况下，暴露、急性医疗事件和/或诊断可以在测试受试者前约最后24小时、最后48小时、最后72小时、
最后96小时、最后120小时、最后7天或最后一个月内发生。
[0797]
在一些方面，受试者可能在测试之前的一段时间内已经患有急性肾损伤或最低程度的急性肾损伤。例如，受试者可能已经经历了至少24小时、至少24小时、至少48小时、至少72小时、至少96小时、至少120小时、至少7天或更长时间的急性肾损伤。在一些实施方式中，如果在经历了较长时间或至少最短持续时间(在测试前)的急性肾损伤后对患者进行评估，则可以提高肾脏状态(例如急性肾损伤)的可预测性。在一些实施方式中，受试者可能已经经历不超过24小时、不超过24小时、不超过48小时、不超过72小时、不超过96小时、不超过120小时或不超过7天的急性肾损伤。在一些实施方式中，如果在经历了较长时间或至少最短持续时间(在测试前)的急性肾损伤后对患者进行评估，则可以提高肾脏状态(例如持续性急性肾损伤)的可预测性。在一些实施方式中，可通过在受试者已经历不长于最大阈值且不短于最小阈值的时间范围的急性肾损伤之后测试受试者来优化可预测性。在一些方面，通过本文公开的一个或多个参数对肾脏状态的评估可以预测受试者进展为比受试者当前正在经历的急性肾损伤水平更严重的持续性急性肾损伤的可能性(例如，经历kdigo 2期急性肾损伤的受试者进展为持续性kdigo 3期急性肾损伤的可能性或经历kdigo 1期肾损伤的受试者进展为持续性kdigo 2或3期急性肾损伤的可能性)。在一些方面，评估可以预测受试者在持续期内维持至少其当前急性肾损伤水平的可能性(例如，经历kdigo 2期急性肾损伤的受试者在持续期内进展为持续性kdigo 2或3期急性肾损伤的可能性)。
[0798]
在任何一个或多个阶段的持续性急性肾损伤的可能性可能提示从急性肾损伤中恢复的可能性。例如，经历kdigo 3期急性肾损伤的受试者进展为持续性kdigo 3期急性肾损伤的相对低可能性可能告知受试者更可能从如例如由受试者在持续期内维持最大的kdigo 2期定义的3期急性肾损伤中恢复。在一些实施方案中，持续性急性肾损伤由在持续时间段(即持续期)内维持最低水平/阶段的aki定义，并且恢复相应地由在持续时间段(即恢复期)内达到低于定义持续性的最低水平/阶段的aki水平/阶段定义。在一些实施方案中，从急性肾损伤的恢复由在持续时间段(即恢复期)内维持aki的最大水平/阶段定义，并且持续性相应地由在持续时间段(即持续期)内达到高于定义恢复的最大水平/阶段的aki水平/阶段定义。
[0799]
在一些实施方案中，受试者可持续处于rifle r期或kdigo 1期急性肾损伤。在一些实施方案中，受试者可持续处于rifle i期或kdigo 2期急性肾损伤。在一些实施方案中，受试者可持续处于rifle f期或kdigo 3期急性肾损伤。在一些实施方案中，受试者可变得持续处于rifle r期或kdigo 1期急性肾损伤。在一些实施方案中，受试者可变得持续处于rifle i期或kdigo 2期急性肾损伤。在一些实施方案中，受试者可变得持续处于rifle f期或kdigo 3期急性肾损伤。在一些实施方案中，受试者可从rifle r期或kdigo 1期急性肾损伤中恢复。在一些实施方案中，受试者可从rifle i期或kdigo 2期急性肾损伤中恢复(恢复至rifle/kdigo 0期或rifle r期/kdigo 1期)。在一些实施方案中，受试者可从rifle f期或kdigo 3期急性肾损伤中恢复(恢复至rifle/kdigo 0期、rifle r期/kdigo 1期或rifle i期/kdigo 2期)。ccl14与胱抑素c、肌酐和尿排出量中的一种或多种组合可以根据本文公开的任何方法进行关联以预测这些结果(肾脏状态)中的任何一种。
[0800]
在一些实施方案中，受试者可处于rifle r期或kdigo 1期急性肾损伤。在一些实施方案中，受试者可处于rifle i期或kdigo 2期急性肾损伤。在一些实施方案中，受试者可
处于rifle f期或kdigo 3期急性肾损伤。在一些实施方案中，受试者可发展rifle r期或kdigo 1期急性肾损伤。在一些实施方案中，受试者可发展rifle i期或kdigo 2期急性肾损伤。在一些实施方案中，受试者可发展rifle f期或kdigo 3期急性肾损伤。ccl14与胱抑素c、肌酐和尿排出量中的一种或多种组合可以根据本文公开的方法与这些结果(肾脏状态)中的任一种关联。
[0801]
在一些实施方案中，当获得样品时，受试者可处于rifle r期或kdigo 1期急性肾损伤。在一些实施方案中，当获得样品时，受试者可处于rifle i期或kdigo 2期急性肾损伤。在一些实施方案中，当获得样品时，受试者可处于rifle f期或kdigo 3期急性肾损伤。受试者当前的肾脏状态可是已知的(诊断出的)或未知的。在一些实施方案中，当前肾脏状态的诊断可用于促进与未来肾脏状态的关联。在一些实施方案中，与未来肾脏状态(例如，肾脏状态的变化)的关联可以与当前肾脏状态的诊断同时进行。
[0802]
在一些实施方案中，当获得样品时，受试者可患有持续性rifle r期或kdigo 1期急性肾损伤。在一些实施方案中，当获得样品时，受试者可患有持续性rifle i期或kdigo 2期急性肾损伤。在一些实施方案中，当获得样品时，受试者可具有持续的rifle f期或kdigo 3期急性肾损伤。受试者当前的肾脏状态可是已知的(诊断出的)或未知的。在一些实施方案中，当前肾脏状态的诊断可用于促进与未来肾脏状态的关联。在一些实施方案中，与未来肾脏状态(例如，肾脏状态的变化)的关联可以与当前肾脏状态的诊断同时进行。
[0803]
特别地，单独的或与一种或多种标志物/指标例如肌酐、尿排出量和/或胱抑素c组合的c-c基序趋化因子14测量结果可用于预测肾脏状态，例如持续性急性肾损伤。在一些方面，这些参数中的两个或更多个可以根据任何合适的方法(包括本文别处描述的那些)组合成单一复合值。例如，ccl14的浓度可以乘以血清肌酐和/或可以乘以胱抑素c的浓度。任何这些标志物或这些标志物的任何复合物的浓度可以除以尿排出量(例如，加权调整的尿排出量)。或者，可以使用逻辑回归模型或其他合适的模型组合所有这些标志物，或者可以通过“产品模型”先组合这些标志物中的一些，然后可以使用逻辑回归模型或其他合适的模型将这些复合值与另外的参数组合。这些参数中的一个或多个可以根据相同的方法与一个或多个另外的参数(包括本文别处描述的那些或本领域已知的那些)进一步组合。
[0804]
单独的或与一种或多种标志物/指标例如肌酐(例如，血清或血浆)、尿排出量和/或胱抑素c组合的c-c基序趋化因子14测量可提供影响患者前瞻性治疗方案的有价值的信息。被鉴定为具有持续性急性肾损伤(特别是持续性kdigo 2或3期急性肾损伤，尤其是持续性kdigo 3期急性肾损伤)的相对较大的可能性的患者可以被鉴定为开始rrt的候选者。来自此类分析的预测信息可以使rrt的起始比以其他方式的开始更早，从而允许对患者进行更有效的治疗。相反，可以确定被鉴定为具有持续性急性肾损伤的可能性相对较小的患者或被鉴定为可能仅持续处于较不严重的阶段(例如，kdigo 1期)的患者会受益于避免启动rrt以及其中固有的风险，因为这样的患者更有可能在没有这种治疗的情况下康复。处于持续性急性肾损伤的相对较高风险的患者可被分类到更高级别的护理(例如转诊中心)，以减轻持续性急性肾损伤的潜在影响。处于持续性急性肾损伤的相对较高风险的患者可受益于额外的干预措施，这些干预措施可以预防或减轻从急性肾损伤到慢性肾病的转变(chawla ls,bellomo r,bihorac a,goldstein sl,siew ed,bagshaw sm等人nat rev nephrol.2017；13(4):241-57)。
[0805]
尽管已经对本发明进行了足够详细的描述和示例以供本领域技术人员制作和使用它，但在不脱离本发明的精神和范围的情况下，各种替代、修改和改进应该是明显的。本文提供的实施例代表优选方面，是示例性的，并不意在限制本发明的范围。本领域技术人员将想到其中的修改和其他用途。这些修改包含在本发明的精神内并且由权利要求的范围限定。
[0806]
对于本领域技术人员来说明显的是，在不脱离本发明的范围和精神的情况下，可以对本文公开的发明进行各种替换和修改。
[0807]
说明书中提到的所有专利和出版物都指示了本发明所属领域的普通技术人员的水平。所有专利和出版物以相同的程度通过引用并入本文，就好像每个单独的出版物被具体地和单独地指示为通过引用并入一样。
[0808]
本文举例说明性描述的本发明可在不存在本文未具体公开的任何一个或多个要素、一个或多个限制的情况下适当地实施。因此，例如，在本文的每个实例中，术语“包括”、“基本上由
……
组成”和“由
……
组成”中的任何一个可以替换为其他两个术语中的任一个。已经使用的术语和表达被用作描述而非限制的术语，并且在使用这些术语和表达时无意排除所示和描述的特征的任何等效物或其部分，但应认识到在要求保护的本发明的范围内可以进行各种修改。因此，应当理解，虽然本发明已经通过优选方面和可选特征具体公开，但是本领域技术人员可以对本文公开的概念进行修改和变化，并且这种修改和变化被认为是在所附权利要求书所限定的本发明的范围内。
[0809]
在以下权利要求中阐述了其他方面。