一种阿维巴坦有关物质的检测方法与流程

1.本发明属于药物分析领域，具体涉及一种阿维巴坦有关物质的检测方法。


背景技术：

2.阿维巴坦(分子式为c7h
11
n3o6s，分子量为265.25)化学名为((2s,5r)-2-氨基羰基-7-氧代-1,6-二氮杂双环[3,2,1]辛-6-基)硫酸单酯，是诺韦克赛尔公司开发的一个非β-内酰胺类β-内酰胺酶抑制剂。阿维巴坦属于二氮杂双环辛酮化合物，其本身并没有明显的抗菌活性，而是通过抑制β-内酰胺酶起作用。阿维巴坦能抑制a型(包括esbl和kpc)、部分c型和部分d型β-内酰胺酶。因此，与青霉类、头孢类和碳青霉烯类抗生素联合使用时，具有广谱抗菌活性，尤其是对含有超广谱β-内酰胺酶的大肠杆菌和克雷伯肺炎杆菌、含有超量ampc酶的大肠杆菌以及同时含有ampc、超广谱β-内酰胺酶的大肠杆菌的活性显著。
[0003]
阿维巴坦是一种可逆型酶抑制剂，自身结构可经逆反应恢复，因而具有长效的抑酶作用。另外，阿维巴坦本身不具有β-内酰胺结构，不会诱导产生β-内酰胺酶。因此，阿维巴坦是非常被看好的新型β-内酰胺酶抑制剂，能够有效缓解抗生素的耐药问题。2015年2月27日，艾尔建的avycaz(阿维巴坦钠+头孢他啶)被fda批准上市，剂型为注射剂，适应症是成人复杂性腹腔内感染、复杂性尿路感染(cuti)、肾脏感染(肾盂肾炎)和革兰氏阴性菌感染。2016年6月29日，阿斯利康公司的zavicefta(阿维巴坦钠+头孢他啶)获得ema批准。阿维巴坦与头孢洛林、氨曲南的联用复方也在临床研究当中。
[0004]
目前，各国药典均未收录阿维巴坦有关物质的相关内容。检索现有技术和相关文献，尚无阿维巴坦有关物质的检测方法。因此，有必要开发快速准确检测阿维巴坦有关物质的方法，实现阿维巴坦质量有效控制。


技术实现要素：

[0005]
针对阿维巴坦有关物质目前尚无简单、便捷、高效的检测方法，本发明旨在提供一种阿维巴坦有关物质的检测方法，弥补现有技术中的空白。本发明的检测方法具有稳定性指示作用，可用于阿维巴坦的质量控制。本方法操作简便、成本低廉，具有良好的经济效益和推广前景。
[0006]
为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
[0007]
一种阿维巴坦有关物质的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
[0008]
色谱条件：
[0009]
色谱柱以多孔石墨烯为填充剂；
[0010]
以磷酸盐溶液为流动相a；
[0011]
以有机溶剂-流动相a为流动相b；
[0012]
洗脱方式为梯度洗脱；
[0013]
记录色谱图。
[0014]
在一项优选的实施方案中，所述方法还包括以下步骤：
[0015]
流动相流速为1～2ml/min；
[0016]
柱温为50～70℃；
[0017]
进样体积为15-25μl；和/或
[0018]
检测波长为192～198nm。
[0019]
在一项优选的实施方案中，所述方法还包括以下步骤：
[0020]
供试品溶液配制：
[0021]
称取本品适量，加乙腈-水溶解稀释、摇匀，作为供试品溶液；
[0022]
和/或
[0023]
混合对照溶液配制：
[0024]
称取阿维巴坦对照品和去羰基阿维巴坦对照品适量，加乙腈-水溶解稀释、摇匀，作为混合对照溶液。
[0025]
在一项优选的实施方案中，所述供试品溶液和混合对照溶液配制中的乙腈-水的体积比为1～10:90～100。
[0026]
在一项优选的实施方案中，所述乙腈-水的体积比为5:95。
[0027]
在一项优选的实施方案中，所述供试品溶液为每1ml中约含2mg的溶液。
[0028]
在一项优选的实施方案中，所述混合对照溶液中阿维巴坦和去羰基阿维巴坦的比例为1～5:5～1。
[0029]
在一项优选的实施方案中，所述混合对照溶液中阿维巴坦和去羰基阿维巴坦的比例为2:1。
[0030]
在一项优选的实施方案中，所述色谱柱为thermo hypercarb(100
×
4.6mm，5μm)色谱柱。
[0031]
在一项优选的实施方案中，所述磷酸盐溶液为磷酸二氢铵溶液、磷酸二氢钾溶液、磷酸二氢钠溶液、磷酸二氢钙溶液中的一种或几种。
[0032]
在一项优选的实施方案中，所述磷酸盐溶液为磷酸二氢铵溶液。
[0033]
在一项优选的实施方案中，所述磷酸二氢铵溶液的摩尔浓度为0.01～0.1mol/l。
[0034]
本发明要求保护的技术方案如下：
[0035]
1.一种阿维巴坦有关物质的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
[0036]
色谱条件：
[0037]
色谱柱以多孔石墨烯为填充剂；
[0038]
以磷酸盐溶液为流动相a；
[0039]
以有机溶剂-流动相a为流动相b；
[0040]
洗脱方式为梯度洗脱；
[0041]
记录色谱图。
[0042]
2.根据方案1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：
[0043]
流动相流速为1～2ml/min；
[0044]
柱温为50～70℃；
[0045]
进样体积为15-25μl；和/或
[0046]
检测波长为192～198nm。
[0047]
3.根据方案1或2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：
[0048]
供试品溶液配制：
[0049]
称取本品适量，加乙腈-水溶解稀释、摇匀，作为供试品溶液；
[0050]
和/或
[0051]
混合对照溶液配制：
[0052]
称取阿维巴坦对照品和去羰基阿维巴坦对照品适量，加乙腈-水溶解稀释、摇匀，作为混合对照溶液。
[0053]
4.根据方案3所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液和混合对照溶液配制中的乙腈-水的体积比为1～10:90～100。
[0054]
5.根据方案4所述的方法，其特征在于，所述乙腈-水的体积比为5:95。
[0055]
6.根据方案3所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液为每1ml中约含2mg的溶液。
[0056]
7.根据方案3所述的方法，其特征在于，所述混合对照溶液中阿维巴坦和去羰基阿维巴坦的比例为1～5:5～1。
[0057]
8.根据方案7所述的方法，其特征在于，所述混合对照溶液中阿维巴坦和去羰基阿维巴坦的比例为2:1。
[0058]
9.根据方案1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为thermo hypercarb(100
×
4.6mm，5μm)色谱柱。
[0059]
10.根据方案1-9任一项所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐溶液为磷酸二氢铵溶液、磷酸二氢钾溶液、磷酸二氢钠溶液、磷酸二氢钙溶液中的一种或几种。
[0060]
11.根据方案10所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐溶液为磷酸二氢铵溶液。
[0061]
12.根据方案11所述的方法，其特征在于，所述磷酸二氢铵溶液的摩尔浓度为0.01～0.1mol/l。
[0062]
13.根据方案12所述的方法，其特征在于，所述磷酸二氢铵溶液的摩尔浓度为0.05mol/l。
[0063]
14.根据方案1-13任一项所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂-流动相a为乙腈-流动相a。
[0064]
15.根据方案14所述的方法，其特征在于，所述乙腈-流动相a的体积比为40～60:60～40。
[0065]
16.根据方案15所述的方法，其特征在于，所述乙腈-流动相a的体积比为50:50。
[0066]
17.根据方案1-16任一项所述的方法，其特征在于，所述流动相b的ph值为2.8～3.2。
[0067]
18.根据方案17所述的方法，其特征在于，所述流动相b的ph值为3.0。
[0068]
19.根据方案1-18任一项所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件为：
[0069][0070][0071]
20.根据方案19所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件为：
[0072]
时间(分钟)流动相a％流动相b％0100021000156040250100271000351000
[0073]
21.根据方案2-20任一项所述的方法，其特征在于，所述流动相流速为1.5ml/min。
[0074]
22.根据方案2-21任一项所述的方法，其特征在于，所述柱温为60℃。
[0075]
23.根据方案2-22任一项所述的方法，其特征在于，进样体积为20μl。
[0076]
24.根据方案2-23任一项所述的方法，其特征在于，所述检测波长为195nm。
附图说明
[0077]
图1为对比例1色谱条件下检测阿维巴坦有关物质的液相色谱图。
[0078]
图2为对比例2色谱条件下检测阿维巴坦有关物质的液相色谱图。
[0079]
图3为对比例3色谱条件下检测阿维巴坦有关物质的液相色谱图。
[0080]
图4为对比例4色谱条件下检测阿维巴坦有关物质的液相色谱图。
[0081]
图5为实施例1色谱条件下检测阿维巴坦有关物质的液相色谱图。
具体实施方式
[0082]
以下将结合附图和具体实施例对本发明中的技术方案做出进一步的阐述。下列实施例中未注明具体技术或条件者均按照本领域的文献中所描述的技术或条件进行。除另有说明外，下列实施例中所使用的试剂、药品及仪器均可通过常规商业手段获得。
[0083]
表1阿维巴坦有关物质
[0084][0085]
对比例1：
[0086]
(1)色谱条件
[0087]
参照头孢他啶阿维巴坦(4:1)进口注册标准(jx20180249)，其中：
[0088]
色谱柱：thermo，hypercarb
tm
(100
×
4.6mm，5μm)色谱柱；
[0089]
流动相a：磷酸盐缓冲溶液(100mm磷酸二氢钾)；
[0090]
流动相b：磷酸盐缓冲溶液(200mm磷酸二氢钾)-乙腈(50:50)；
[0091]
流动相流速：1.5ml/min；
[0092]
进样量：5μl；
[0093]
柱温：60℃；
[0094]
检测波长：195nm；
[0095]
梯度洗脱条件见表2。
[0096]
表2洗脱条件
[0097]
时间(分钟)a相(％)b相(％)095515010019010019.0195524955
[0098]
(2)溶液配制
[0099]
供试品溶液：取阿维巴坦钠适量，加乙腈-水(5:95)溶解并稀释制成每1ml中约含2mg的溶液，摇匀。
[0100]
混合对照溶液：取阿维巴坦对照品和去羰基阿维巴坦对照品适量，置同一容量瓶中，精密称定，加乙腈-水(5:95)溶解并定量稀释制成每1ml中约含阿维巴坦20μg，去羰基阿维巴坦10μg，摇匀。
[0101]
(3)测定结果
[0102]
精密量取供试品溶液和混合对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，如图1和表3所示。
[0103]
表3阿维巴坦有关物质检测结果
[0104][0105]
结果表明：在该色谱条件下，去羰基阿维巴坦保留时间短，只有1.496分钟，并且受到空白干扰，未能达到分析目的，不适于阿维巴坦有关物质的检测。
[0106]
对比例2：
[0107]
(1)色谱条件
[0108]
色谱柱：thermo，hypercarb
tm
(100
×
4.6mm，5μm)色谱柱；
[0109]
流动相a：磷酸盐缓冲溶液(50mm磷酸二氢钾)；
[0110]
流动相b：乙腈；
[0111]
流动相流速：1.5ml/min；
[0112]
进样量：10μl；
[0113]
柱温：60℃；
[0114]
检测波长：195nm；
[0115]
梯度洗脱条件见表4。
[0116]
表4洗脱条件
[0117]
时间(分钟)a相％b相％0100011000108515305050311000401000
[0118]
(2)溶液配制
[0119]
供试品溶液：取阿维巴坦钠适量，加乙腈-水(5:95)溶解并稀释制成每1ml中约含
2mg的溶液，摇匀。
[0120]
混合对照溶液：取阿维巴坦对照品和去羰基阿维巴坦对照品适量，置同一容量瓶中，精密称定，加乙腈-水(5:95)溶解并定量稀释制成每1ml中约含阿维巴坦20μg，去羰基阿维巴坦10μg，摇匀。
[0121]
(3)测定结果
[0122]
精密量取供试品溶液和混合对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，如图2和表5所示。
[0123]
表5阿维巴坦有关物质检测结果
[0124][0125]
结果表明：与对比例1方法相比，该方法将初始梯度由5％b相降至0％b相，并保持2min，可避免去羰基峰受干扰。同时降低盐浓度，对分离没有负面效果，降低盐析出的可能性。但是二硫酸盐的分离度为1.02，分离度较低。
[0126]
对比例3：
[0127]
(1)色谱条件
[0128]
色谱柱：thermo，hypercarb
tm
(100
×
4.6mm，5μm)色谱柱；
[0129]
流动相a：磷酸盐缓冲溶液(50mm磷酸二氢铵)；
[0130]
流动相b：乙腈；
[0131]
流动相流速：1.5ml/min；
[0132]
进样量：20μl；
[0133]
柱温：60℃；
[0134]
检测波长：195nm；
[0135]
梯度洗脱条件见表6。
[0136]
表6洗脱条件
[0137]
时间(分钟)a相％b相％0100021000108515158515255050305050311000401000
[0138]
(2)溶液配制
[0139]
供试品溶液：取阿维巴坦钠适量，加乙腈-水(5:95)溶解并稀释制成每1ml中约含2mg的溶液，摇匀。
[0140]
混合对照溶液：取阿维巴坦对照品和去羰基阿维巴坦对照品适量，置同一容量瓶中，精密称定，加乙腈-水(5:95)溶解并定量稀释制成每1ml中约含阿维巴坦20μg，去羰基阿维巴坦10μg，摇匀。
[0141]
(3)测定结果
[0142]
精密量取供试品溶液和混合对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，如图3和表7所示。
[0143]
表7阿维巴坦有关物质检测结果
[0144][0145]
结果表明：该色谱条件下，二硫酸盐的分离度显著提高，为5.36。可见，与对比例2中的方法相比，该方法将磷酸二氢钾更换为磷酸二氢铵，可有效提高二硫酸盐的分离度。
[0146]
对比例4：
[0147]
(1)色谱条件
[0148]
色谱柱：thermo，hypercarb
tm
(100
×
4.6mm，5μm)色谱柱；
[0149]
流动相a：磷酸盐缓冲溶液(50mm磷酸二氢铵)；
[0150]
流动相b：a相-乙腈(50:50)，磷酸调节ph值至3.0；
[0151]
流动相流速：1.5ml/min；
[0152]
进样量：20μl；
[0153]
柱温：60℃；
[0154]
检测波长：195nm；
[0155]
梯度洗脱条件见表8。
[0156]
表8洗脱条件
[0157]
时间(分钟)a相％b相％0100021000107030157030250100261000351000
[0158]
(2)溶液配制
[0159]
供试品溶液：取阿维巴坦钠适量，加乙腈-水(5:95)溶解并稀释制成每1ml中约含2mg的溶液，摇匀。
[0160]
混合对照溶液：取阿维巴坦对照品和去羰基阿维巴坦对照品适量，置同一容量瓶中，精密称定，加乙腈-水(5:95)溶解并定量稀释制成每1ml中约含阿维巴坦20μg，去羰基阿维巴坦10μg，摇匀。
[0161]
(3)测定结果
[0162]
精密量取供试品溶液和混合对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，如图4和表9所示。
[0163]
表9阿维巴坦有关物质检测结果
[0164][0165][0166]
结果表明：与对比例3的检测方法相比，该方法更利于体系平衡。但是杂质m的分离度只有1.13，未能达到有效分离的效果。
[0167]
实施例1：
[0168]
(1)色谱条件
[0169]
色谱柱：thermo，hypercarb
tm
(100
×
4.6mm，5μm)色谱柱；
[0170]
流动相a：磷酸盐缓冲溶液(50mm磷酸二氢铵)；
[0171]
流动相b：a相-乙腈(50:50)，磷酸调节ph值至3.0；
[0172]
流动相流速：1.5ml/min；
[0173]
进样量：20μl；
[0174]
柱温：60℃；
[0175]
检测波长：195nm；
[0176]
梯度洗脱条件见表10。
[0177]
表10洗脱条件
[0178]
时间(分钟)a相(％)b相(％)0100021000156040250100271000351000
[0179]
(2)溶液配制
[0180]
供试品溶液：取阿维巴坦钠适量，加乙腈-水(5:95)溶解并稀释制成每1ml中约含2mg的溶液，摇匀。
[0181]
混合对照溶液：取阿维巴坦对照品和去羰基阿维巴坦对照品适量，置同一容量瓶中，精密称定，加乙腈-水(5:95)溶解并定量稀释制成每1ml中约含阿维巴坦20μg，去羰基阿维巴坦10μg，摇匀。
[0182]
(3)测定结果
[0183]
精密量取供试品溶液和混合对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，如图5和表11所示。
[0184]
表11阿维巴坦有关物质检测结果
[0185][0186]
结果表明：在对比例4的方法的基础上对洗脱梯度进行调整，m的分离度为1.63，达到了有效分离的效果。可见，该检测方法能有效分离各杂质。同时，该方法还降低了流动相盐析的可能性。
[0187]
由实施例1和对比例1-4可以看出，本发明以多孔石墨烯为色谱柱的填充剂，以磷酸二氢铵溶液为流动相a，以乙腈-流动相a(50:50)为流动相b，进行梯度洗脱，能够有效地分离测定阿维巴坦有关物质。本发明的检测方法具有稳定性指示作用，可用于阿维巴坦的质量控制。
[0188]
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求为保护范围。