本发明涉及生物
技术领域：
：，具体而言，涉及一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其应用。
背景技术：
：：新型冠状病毒sars-cov-2(即2019-ncov)是2019年新发现的一种病毒，可导致人类病毒性肺炎或肺部感染。冠状病毒基因组依次编码为刺突蛋白、包膜蛋白、膜蛋白和核衣壳蛋白。其中刺突蛋白是冠状病毒最重要的表面膜蛋白，含有两个亚基，s1亚基与s2亚基。其中s1主要包含有受体结合区（receptorbindingdomain，rbd），负责识别细胞的受体。sars-cov-2的刺突蛋白与人血管紧张素转化酶2（angiotensin-convertingenzyme2，ace2）蛋白互作来感染人的呼吸道上皮细胞。刺突蛋白负责新冠病毒与宿主细胞膜受体结合及膜融合，是新冠中和抗体的重要作用位点以及疫苗设计的关键靶点。目前新冠疫苗是预防新型冠状病毒疾病的有效方法之一。预防性疫苗成功与否的关键是其能否诱导人体免疫系统产生能够结合新冠病毒的保护性抗体（即新冠病毒的中和性抗体），从而实现预防感染的目标，因此建立稳定、有效的疫苗评价系统，检测疫苗免疫反应的保护效果，对于疫苗的研制和质控具有重要意义。新冠病毒中和抗体检测中常用方法有：空斑减少中和试验(prnt)、酶联免疫吸附法(elisa)、胶体金法、化学发光法等。其中，prnt检测的是中和抗体，但是由于该方法是建立在活毒基础上的，需要在bsl-3级实验室完成，并且prnt检测周期偏长、空斑计数的误差偏大，给许多研究者带来了困难。酶联免疫吸附法(elisa)和胶体金法虽然操作简单方便，但在检测的灵敏度，稳定性等方面还有待进一步提高。全自动化学发光免疫分析是在酶免疫分析基础上结合了高灵敏度的化学发光测定技术和磁性微粒分离技术，大大提高了检测灵敏度；其次由于使用全自动仪器及配套试剂，使人为因素减至最低，提高了方法的稳定性和结果的重复性。但是目前市售的新冠病毒中和抗体发光检测试剂盒检测时间较慢，通常需要30min以上，并且分析灵敏度较差。有鉴于此，特提出本发明。技术实现要素：本发明的第一目的在于提供一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒。本发明的第二目的在于提供一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒的应用。为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，包括（a）或（b）：（a）示踪物标记的rbd三聚体抗原，包被在固体支持物上的ace2，以及，含有0.2-10mg/ml十二烷基二甲基甜菜碱的工作液；（b）示踪物标记的ace2，包被在固体支持物上的rbd三聚体抗原，以及，含有0.2-10mg/ml十二烷基二甲基甜菜碱的工作液；其中，所述rbd三聚体抗原利用二硫键将刺突蛋白的rbd与s2亚基完全交联得到。进一步地，所述工作液包括：0.01mol/l-0.2mol/l磷酸盐缓冲液，0.1-50mg/ml牛血清白蛋白，5-50mg/ml氯化钠，10-50mg/ml蔗糖，0.2-10mg/ml十二烷基二甲基甜菜碱和0.5-5ml/lproclin300，ph为6.0-7.6。进一步地，所述工作液包括：浓度为0.05mol/l的磷酸盐缓冲液，10mg/ml的牛血清白蛋白，8mg/ml的氯化钠，10mg/ml的蔗糖，0.2-10mg/ml的十二烷基二甲基甜菜碱和0.5ml/l的proclin300，ph为7.4。进一步地，所述工作液中十二烷基二甲基甜菜碱的浓度为5mg/ml。进一步地，示踪物包括吖啶酯及其衍生物、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或三联吡啶钌；固体支持物包括磁性微粒、微孔滴定板、硝酸纤维素膜或聚苯乙烯胶乳，磁性微粒包括羧基磁珠、氨基磁珠、nhs磁珠、羟基磁珠、甲苯磺酰基磁珠或环氧基磁珠。进一步地，（a）中ace2或（b）中rbd三聚体抗原均独立地通过生物素-亲和素系统包被在固体支持物上。进一步地，试剂盒还包括新型冠状病毒中和抗体的校准品和质控品。进一步地，校准品和质控品的保存液均独立地包括0.01mol/l-0.2mol/l磷酸盐缓冲液，100-500ml/l小牛血清，5-100ml/l乙二醇，0.2-10ml/ltween20和0.5-5ml/lproclin300，ph为6.0-7.6。进一步地，校准品和质控品的保存液均独立地包括0.05mol/l的磷酸盐缓冲液，100ml/l小牛血清，5ml/l乙二醇，1ml/ltween20和0.5ml/lproclin300，ph为7.4。试剂盒在新型冠状病毒中和抗体检测或新型冠状病毒疫苗评价中的应用。与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明提供的检测新型冠状病毒中和抗体试剂盒，利用待检测样本中的中和抗体和ace2竞争性结合新型冠状病毒rbd的原理，通过检测ace2和恒定量rbd的结合量实现定性或定量检测中和抗体。具体包括（a）或（b）两种方案：（a）示踪物标记的rbd三聚体抗原，包被在固体支持物上的ace2，以及，含有0.2-10mg/ml十二烷基二甲基甜菜碱的工作液；（b）示踪物标记的ace2，包被在固体支持物上的rbd三聚体抗原，以及，含有0.2-10mg/ml十二烷基二甲基甜菜碱的工作液。其中，rbd三聚体抗原是指s蛋白的rbd与s2亚基完全交联形成的预融合状态，该rbd三聚体抗原表位全面并且具备高稳定性，可以极大地提高与中和抗体的反应速度并且改善检测灵敏度。同时，发明人在试剂盒研发过程中首次发现十二烷基二甲基甜菜碱的存在会显著提高反应体系中rbd三聚体抗原与新冠中和性抗体的蛋白结合速度，提升阳性样本平均发光强度，缩短检测时间。该反应令人惊讶，十二烷基二甲基甜菜碱的使用效果为偶然发现，因为无法预知已知用于表面活性剂的十二烷基二甲基甜菜碱能够对中和抗体检测产生影响。试验结果发现，十二烷基二甲基甜菜碱有利于rbd三聚体抗原的封闭区打开，打开后的空间结构更利于与中和性抗体结合，将检测时间缩短至15min。具体实施方式下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。除非另有说明，本文中所用的专业与科学术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法或材料也可应用于本发明中。本发明提供的检测新型冠状病毒中和抗体试剂盒，利用待检测样本中的中和抗体和ace2竞争性结合新型冠状病毒rbd的原理，通过检测ace2和恒定量rbd的结合量实现定性或定量检测中和抗体。具体包括（a）或（b）两种方案：（a）示踪物标记的rbd三聚体抗原，包被在固体支持物上的ace2，以及，含有0.2-10mg/ml十二烷基二甲基甜菜碱的工作液；（b）示踪物标记的ace2，包被在固体支持物上的rbd三聚体抗原，以及，含有0.2-10mg/ml十二烷基二甲基甜菜碱的工作液；其中，所述rbd三聚体抗原利用二硫键将刺突蛋白的rbd与s2亚基完全交联得到。在优选的实施方式中，本发明中的rbd三聚体抗原通过如下方法得到：采用蛋白质工程，利用二硫键将刺突蛋白的rbd与s2亚基完全交联，形成一种闭合型稳定构型，该rbd三聚体抗原可在4℃长期保存，在60℃加热条件下，依然维持其原有结构与抗原性。可以理解的是，只要能够实现检测rbd三聚体抗原和ace2结合量的技术方案均可实现新型冠状病毒中和抗体的检测，所以，用于分离rbd三聚体抗原和ace2结合物的固相支持物可以与rbd三聚体抗原连接，也可以与ace2连接，与之对应的，用于检测的示踪物可以与ace2连接，也可以与rbd三聚体抗原连接。本发明中，rbd三聚体抗原是指s蛋白的rbd与s2亚基完全交联形成的预融合状态，与单独的rbd抗原相比，该rbd三聚体抗原表位全面并且具备高稳定性，可以极大地提高与中和抗体的反应速度并且改善检测灵敏度。同时，发明人在试剂盒研发过程中首次发现十二烷基二甲基甜菜碱的存在会显著提高反应体系中rbd三聚体抗原与新冠中和性抗体的蛋白结合速度，提升阳性样本平均发光强度，缩短检测时间，该反应令人惊讶，十二烷基二甲基甜菜碱的使用效果为偶然发现，因为无法预知已知用于表面活性剂的十二烷基二甲基甜菜碱能够对中和抗体检测产生影响。试验结果发现，十二烷基二甲基甜菜碱有利于rbd三聚体抗原的封闭区打开，打开后的空间结构更利于与中和性抗体结合。需要说明的是，十二烷基二甲基甜菜碱的浓度可以但不限于为0.2mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml或10mg/ml。本发明中工作液是指反应发生时所存在的体系，例如rbd三聚体抗原、ace2均可保存于该工作液中制备成试剂盒。在优选的实施方式中，工作液包括：0.01mol/l-0.2mol/l磷酸盐缓冲液，0.1-50mg/ml牛血清白蛋白，5-50mg/ml氯化钠，10-50mg/ml蔗糖，0.2-10mg/ml十二烷基二甲基甜菜碱和0.5-5ml/lproclin300，ph为6.0-7.6。该工作液可以提供rbd三聚体抗原与ace2或中和抗体蛋白反应的稳定环境，有利于rbd三聚体抗原封闭区的打开，使之与中和抗体有效结合。磷酸盐缓冲液的浓度可以但不限于为0.01mol/l、0.05mol/l、0.1mol/l、0.15mol/l或0.2mol/l；牛血清白蛋白的浓度可以但不限于为0.1mg/ml、1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、40mg/ml、45mg/ml或50mg/ml；氯化钠的浓度可以但不限于为5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、40mg/ml、45mg/ml或50mg/ml；蔗糖的浓度可以但不限于为10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、40mg/ml、45mg/ml或50mg/ml；proclin300的浓度可以但不限于为0.5ml/l、1ml/l、2ml/l、3ml/l、4ml/l或5ml/l；ph可以但不限于为6.0、6.5、7.0或7.6。在优选的实施方式中，工作液包括：浓度为0.05mol/l的磷酸盐缓冲液，10mg/ml的牛血清白蛋白，8mg/ml的氯化钠，10mg/ml的蔗糖，0.2-10mg/ml的十二烷基二甲基甜菜碱和0.5ml/l的proclin300，ph为7.4。在优选的实施方式中，工作液中十二烷基二甲基甜菜碱浓度为5mg/ml。在优选的实施方式中，示踪物为化学发光免疫分析中所用到的标记物，例如直接化学发光免疫分析中的吖啶酯及其衍生物；化学发光酶免疫分析中的辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶；电化学发光免疫分析中的三联吡啶钌，通过加入氧化剂和naoh；底物发光剂；电子供体，实现发光检测信号。在优选的实施方式中，固体支持物可以为本领域常用的可实现分离纯化的材料，例如为磁性微粒、微孔滴定板、硝酸纤维素膜或聚苯乙烯胶乳。进一步优选为磁性微粒，也称为磁性微球、磁珠或磁球，可以是本领域中常用的磁性微粒，是将纳米级的fe2o3或fe3o4磁性粒子和有机高分子材料进行复合，形成具有超顺磁性和极大量蛋白吸附容量的微米级的固相微球，具有在外加磁场作用下可迅速被磁化，在撤走磁场后剩磁为零的属性。其中，有机高分子材料的种类没有特别限制，可根据需要进行选择。具体可以为羧基磁珠、氨基磁珠、nhs磁珠、羟基磁珠、甲苯磺酰基磁珠或环氧基磁珠，根据磁性微粒与rbd三聚体抗原或ace2连接方式的不同，可以选取不同功能集团的磁性微粒。优选地，磁性微粒应能满足直径为0.1-5μm。在优选的实施方式中，（a）中ace2或（b）中rbd三聚体抗原均独立地通过生物素-亲和素系统包被在固体支持物上。在优选的实施方式中，还包括新型冠状病毒中和抗体的校准品和质控品。实现新型冠状病毒中和抗体的定量检测，同时对检测结果进行质控。优选地，校准品包括中和抗体浓度为3-9au/ml的低点校准品溶液和浓度为200-500au/ml的高点校准品溶液；质控品包括中和抗体浓度12-20au/ml的低点质控品溶液和浓度为50-100au/ml的高点质控品溶液。在优选的实施方式中，校准品和质控品的保存液均独立地包括0.01mol/l-0.2mol/l磷酸盐缓冲液，100-500ml/l小牛血清，5-100ml/l乙二醇，0.2-10ml/ltween20和0.5-5ml/lproclin300，ph为6.0-7.6。该保存液可以实现中和抗体稳定保存，延长试剂盒有效期。在优选的实施方式中，校准品和质控品的保存液均独立地包括0.05mol/l的磷酸盐缓冲液，100ml/l小牛血清，5ml/l乙二醇，1ml/ltween20和0.5ml/lproclin300，ph为7.4。在一种实施方式中，以本发明（a）方案中的试剂盒为例。检测原理如下：先加入待测样本、校准品或质控品和恒定量示踪物标记的新冠rbd三聚体抗原，示踪物标记的新冠rbd三聚体抗原与待测新冠中和抗体相结合，从而会阻碍rbd三聚体抗原与生物素标记的ace2抗原反应，当待测的新冠中和抗体浓度高时，则结合在固体支持物ace2抗原上的示踪物标记的新冠rbd三聚体抗原含量减少，用洗涤液洗涤后加入发光催化剂或发光底物，仪器检测到的发光信号值低，表明中和抗体浓度较高；反之，当待测新冠中和抗体浓度低时，则所测发光信号值高，表明中和抗体浓度低。通过用已知的新冠中和抗体（低值，高值校准品）浓度检测所绘制的标准曲线，可以计算出新冠病毒中和抗体的浓度，进而推算出待测新冠病毒中和抗体的中和能力以及给予疫苗后，是否产生了保护性抗体及滴度。提供其制备方法如下：包被链霉亲和素的磁性微球的制备1)配制ph为3.6的醋酸缓冲液：称取2.55g三水合乙酸钠用4500ml纯化水溶解后再加入14ml乙酸混匀后，定容至5000ml，即得ph为3.6的醋酸缓冲液。2)磁性微球连接(磁性微球连接cmc法)：往磁性微球中加入包被体积等量的上述ph3.6醋酸缓冲液悬浮，其中磁性微球浓度为20mg/ml，再加入浓度为10mg/ml的1-环已基-2-吗啉乙基碳二亚胺对甲苯磺酸盐(cmc)，按1mg磁性微球加入12μg链霉亲和素(sa)，组成反应体系。将上述反应体系放入恒温震荡水浴箱中37℃反应24小时。3)磁性微球的清洗：磁珠清洗液的配制：在0.05mph7.4的pbs中溶入bsa，使bsa浓度为0.5g/ml，即为磁珠清洗液。清洗：将反应好的反应体系倒入烧杯中，然后置于磁铁上沉淀后，倒掉上清，加入5倍体积的磁珠清洗液搅拌清洗，然后放置在磁铁上，待上清液清亮后倒掉上清液。4)磁性微球的悬浮：磁珠悬浮液的配制：在0.05mph7.4的pbs中溶入bsa和甲基纤维素(mc)，使bsa的浓度为0.5g/ml，mc的浓度为0.4g/ml，即为磁珠悬浮液。清洗完毕后，加入包被体积的磁珠悬浮液，悬浮浓度为20mg/ml，即得到包被链霉亲和素的磁性微球溶液。标记生物素的ace2抗原的制备1)0.1mol/l的碳酸缓冲液(透析液)的配制：在5000ml烧杯中加入na2co314.31g，nahco326.46g，加水定容至4500ml，即得0.1mol/l的碳酸缓冲液(透析液)。上述配制好的透析液置于磁力搅拌器上备用。2)选用截留量为14000的透析袋，量取合适的尺寸，取1-2mgace2抗原用透析液调整到1-2ml，放入透析液中，室温搅拌透析2-3小时。将活化的生物素溶于二甲基甲酰胺(dmf)中，按照生物素与ace2抗原的摩尔比为5:1-20:1的比例将二者混合，37℃反应2h；再将反应后的液体用0.1mol/lpbs于4℃透析24小时，即制成标记生物素的ace2抗原溶液。3)以g-25凝胶柱纯化上述反应得到的标记生物素的ace2抗原。酶标rbd三聚体抗原的制备a:将1ml的10-15mg/mlnaio4水溶液与1ml的5mg/mlalp（碱性磷酸酶）或hrp（辣根过氧化物酶）水溶液于2-8℃混合反应30min-60min，制成活化的alp或hrp溶液；然后，向所述活化的alp或hrp溶液中加入0.5ml的90％乙二醇水溶液室温避光反应30min-60min，得到alp或hrp混合溶液；b:将经过0.05-0.1mol/lph为8.5-9.5碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液透析得到的rbd三聚体抗原（制备方法参照文献xiaolixiong等，athermostable,closedsars-cov-2spikeproteintrimer.naturestructural&molecularbiologyvolume27,pages934–941(2020)）与步骤a得到的alp或hrp混合溶液按质量比1:1-1:2进行混合，于2-8℃透析过夜，得到透析好的抗原；c:向步骤b得到的所述透析好的抗原中加入2-8mg/ml的nabh4溶液80-120μl，2-8℃反应2-4h，然后装入透析袋中，于10-50mm，ph为7.4pbs溶液中2-8℃透析过夜；d:在搅拌下，向步骤c得到的抗体溶液中逐滴加入等体积的饱和硫酸铵，置2-8℃反应1h-2h；于3000-5000rpm，30-40min离心弃上清，沉淀物用半饱和硫酸铵洗两次；然后将沉淀物溶于1ml10-50mm的pbs溶液；将上述溶液于10-50mm的pbs溶液中透析后，10000-12000rpm离心，去除沉淀，取上清液即为酶标rbd三聚体抗原。试剂盒配制新型冠状病毒中和抗体试剂盒包括：链霉亲和素偶联的磁性微粒溶液，生物素标记的ace2抗原溶液，示踪物标记的rbd三聚体抗原溶液，新型冠状病毒的中和抗体校准品溶液和质控品溶液。生物素标记的ace2抗原溶液中ace2抗原的浓度为25-5000ng/ml，示踪物标记的rbd三聚体抗原溶液中rbd三聚体抗原的工作浓度为50-5000ng/ml。二者的溶液为本发明提供的工作液，具体包括：0.01mol/l-0.2mol/l磷酸盐缓冲液，0.1-50mg/ml牛血清白蛋白，5-50mg/ml氯化钠，10-50mg/ml蔗糖，0.2-10mg/ml十二烷基二甲基甜菜碱和0.5-5ml/lproclin300，ph为6.0-7.6。新型冠状病毒的中和抗体校准品溶液包括中和抗体浓度为3-9au/ml的低点校准品溶液和浓度为200-500au/ml的高点校准品溶液；质控品溶液包括中和抗体浓度12-20au/ml的低点质控品溶液和浓度为50-100au/ml的高点质控品溶液。校准品溶液和质控品溶液的保存液包括0.01mol/l-0.2mol/l磷酸盐缓冲液，100-500ml/l小牛血清，5-100ml/l乙二醇，0.2-10ml/ltween20和0.5-5ml/lproclin300，ph为6.0-7.6。该试剂盒检测新型冠状病毒中和抗体的方法如下：a)一次加样：将20μl待测样本、高或低浓度校准品分别加入到反应杯中，然后再加入50μl示踪物标记的rbd三聚体抗原溶液，混匀，37℃温浴5min，使待测样本中的新冠病毒中和抗体和rbd三聚体抗原充分反应，形成复合物。b)二次加样：将50μl生物素标记的ace2抗原溶液和25μl包被链霉亲和素的磁性微球溶液加入上述复合物中，混合均匀，37℃温浴5min，使上述复合物中未反应的rbd三聚体抗原与ace2抗原反应，形成示踪物标记rbd三聚体抗原-生物素标记ace2抗原-包被链霉亲和素的磁性微球复合物。c)检测：外加磁场清洗上述复合物沉淀，去除上清液，并以清洗液清洗后，加入发光催化剂或发光底物，整个反应体系的反应时间为15min，检测发出的相对光强度，通过计算得到新冠病毒中和抗体的含量。本发明还提供上述试剂盒在新型冠状病毒中和抗体检测或新型冠状病毒疫苗评价中的应用。下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。新型冠状病毒ace2抗原和rbd三聚体抗原均购自珠海丽禾医疗诊断产品有限公司。ace2抗原是利用基因工程技术通过真核表达系统（hek293细胞）制备得到；rbd三聚体抗原通过蛋白质工程设计了二硫键将刺突蛋白的受体结合域（rbd）与s2蛋白交联形成稳定的三聚体结构，具体制备方法参考文献xiaolixiong等，athermostable,closedsars-cov-2spikeproteintrimer.naturestructural&molecularbiologyvolume27,pages934–941(2020)。实施例1生物素标记的ace2抗原溶液以及碱性磷酸酶标记的rbd三聚体抗原溶液制备：配置工作液ph为7.4，浓度为0.05mol/l的磷酸盐缓冲液，所述缓冲液中含有10mg/ml的牛血清白蛋白，8mg/ml的氯化钠，10mg/ml的蔗糖，5mg/ml的十二烷基二甲基甜菜碱和0.5ml/l的proclin300。然后用该工作液将生物素标记ace2抗原，碱性磷酸酶标记的rbd三聚体抗原分别稀释到0.5mg/l。新型冠状病毒的中和抗体校准品和质控品溶液制备：配制保存液ph为7.4，浓度为0.05mol/l的磷酸盐缓冲液，所述缓冲液中含有100ml/l小牛血清，5ml/l乙二醇，1ml/ltween20和0.5ml/lproclin300。然后用该保存液配制新型冠状病毒中和抗体的校准品和质控品。校准品溶液：中和抗体浓度为10au/ml的低点校准品溶液和浓度为200au/ml的高点校准品溶液；质控品溶液：中和抗体浓度20au/ml的低点质控品溶液和浓度为100au/ml的高点质控品溶液。试剂分装及组装将链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液5.0ml/瓶、生物素标记的ace2抗原工作液9.5ml/瓶、碱性磷酸酶标记的rbd三聚体抗原工作液9.5ml/瓶、校准品/质控品工作液1.0ml/支分装后，组装在一起，保存于2-8℃。对比例1将实施例1中的rbd三聚体抗原替换为单独的rbd抗原，其余条件与实施例1相同。对比例2将实施例1中生物素标记的ace2抗原溶液以及碱性磷酸酶标记的rbd三聚体抗原溶液中的十二烷基二甲基甜菜碱去除，其余条件与实施例1相同。对比例3将实施例1中生物素标记的ace2抗原溶液以及碱性磷酸酶标记的rbd三聚体抗原溶液中的十二烷基二甲基甜菜碱替换为相同浓度的十八烷基三甲基氯化铵（阳离子表面活性剂），其余条件与实施例1相同。对比例4将实施例1中生物素标记的ace2抗原溶液以及碱性磷酸酶标记的rbd三聚体抗原溶液中的十二烷基二甲基甜菜碱替换为相同浓度的十二烷基苯磺酸钠（阴离子表面活性剂），其余条件与实施例1相同。对比例5将实施例1中生物素标记的ace2抗原溶液以及碱性磷酸酶标记的rbd三聚体抗原溶液中的十二烷基二甲基甜菜碱替换为相同浓度的吐温80（非离子表面活性剂），其余条件与实施例1相同。对比例6将实施例1中生物素标记的ace2抗原溶液以及碱性磷酸酶标记的rbd三聚体抗原溶液中的十二烷基二甲基甜菜碱替换为相同浓度的十二烷基氨基丙酸（氨基酸型两性离子表面活性剂），其余条件与实施例1相同。对比例7将实施例1中生物素标记的ace2抗原溶液以及碱性磷酸酶标记的rbd三聚体抗原溶液中的十二烷基二甲基甜菜碱替换为相同浓度的十八烷基二羟乙基氧化胺（氧化胺型两性离子表面活性剂），其余条件与实施例1相同。对比例8，9和实施例2，3将实施例1中生物素标记的ace2抗原溶液以及碱性磷酸酶标记的rbd三聚体抗原溶液中的十二烷基二甲基甜菜碱浓度改为0.15mg/ml，0.2mg/ml，10mg/ml，12mg/ml，分别对应为对比例8，实施例2，实施例3和对比例9，其余条件与实施例1相同。使用实施例1和对比例1,2,3,4,5中的试剂盒检测广东某医院收集的50例新型冠状病毒疫苗样本作为阳性样本（编号为p1-p50）和30例未注射过新冠疫苗的健康人样本作为阴性样本（编号为n1-n30），比较六种试剂盒与样本的反应光强度。以全自动化学发光法免疫分析仪为检测仪器，将试剂盒装载到仪器上进行测试。结果如表1所示。表1样本编号实施例1（光强度）对比例1（光强度）信号值偏差对比例2（光强度）信号值偏差对比例3（光强度）信号值偏差对比例4（光强度）信号值偏差对比例5（光强度）信号值偏差n127462641-3.82%2029-26.11%2563-6.66%2403-12.49%2586-5.83%n22032249122.59%251423.72%243019.59%241919.05%1850-8.96%n316701531-8.32%220231.86%1612-3.47%260956.23%226835.81%n4145715788.30%171117.43%233860.47%187828.89%1431-1.78%n52414280816.32%270011.85%2209-8.49%1904-21.13%2222-7.95%n626971943-27.96%1555-42.34%1705-36.78%1810-32.89%2287-15.20%n7231925309.10%23471.21%24726.60%24063.75%1947-16.04%n81689208723.56%234038.54%190913.03%252049.20%211625.28%n91533169010.24%180217.55%203933.01%222044.81%192825.77%n102409265610.25%1912-20.63%2251-6.56%1881-21.92%1984-17.64%n11250626053.95%1795-28.37%2068-17.48%1900-24.18%2253-10.10%n1225162322-7.71%1623-35.49%2319-7.83%2162-14.07%1997-20.63%n132254250411.09%23423.90%24287.72%249610.74%2027-10.07%n14161117548.88%180311.92%194720.86%243150.90%205927.81%n15171317582.63%189610.68%215725.92%214925.45%195814.30%n16248226466.61%1848-25.54%2080-16.20%1892-23.77%2071-16.56%n1725122504-0.32%1713-31.81%2206-12.18%1945-22.57%2174-13.46%n18237924733.95%2127-10.59%24221.81%24653.61%2013-15.38%n192082236513.59%2028-2.59%20910.43%245918.11%2046-1.73%n20164517053.65%188814.77%210527.96%240646.26%200021.58%n212226264418.78%1856-16.62%2154-3.23%1956-12.13%2021-9.21%n22249325964.13%1740-30.20%2103-15.64%1909-23.43%2144-14.00%n23241224842.99%1934-19.82%2291-5.02%2346-2.74%2031-15.80%n24222724047.95%2037-8.53%2130-4.36%245910.42%2041-8.35%n25165417546.05%199920.86%210527.27%243647.28%200120.98%n261950254830.67%1860-4.62%21369.54%219712.67%20143.28%n272361260310.25%1752-25.79%2151-8.89%1941-17.79%2089-11.52%n28241525124.02%1881-22.11%2173-10.02%2196-9.07%2049-15.16%n29240224662.66%1955-18.61%2290-4.66%2385-0.71%2036-15.24%n301804245335.98%202412.20%212217.63%245936.31%201411.64%阴性样本偏差均值//7.67%/-5.11%/3.48%/7.49%/-2.14%p117754795343-46.30%134048-24.50%132450-25.40%149672-15.70%155531-12.40%p2156596921-55.80%13263-15.30%11102-29.10%13138-16.10%13404-14.40%p38273339877-51.80%66931-19.10%59402-28.20%67758-18.10%71068-14.10%p417967795408-46.90%150569-16.20%128828-28.30%144640-19.50%160991-10.40%p514500878449-45.90%115861-20.10%102376-29.40%121082-16.50%127027-12.40%p69122648988-46.30%72981-20.00%65500-28.20%74805-18.00%78454-14.00%p712071361201-49.30%93673-22.40%89690-25.70%99468-17.60%107917-10.60%p86284228153-55.20%52976-15.70%45938-26.90%53227-15.30%54547-13.20%p96752427955-58.60%52669-22.00%48347-28.40%55370-18.00%57936-14.20%p106345839661-37.50%50576-20.30%46261-27.10%53559-15.60%56858-10.40%p111803189366-94.81%135599-24.80%131452-27.10%151647-15.90%162286-10.00%p129041057049-36.90%72961-19.30%67265-25.60%74950-17.10%77753-14.00%p13211467200-65.95%16684-21.10%15838-25.10%17805-15.80%18080-14.50%p149783754202-44.60%78367-19.90%73280-25.10%78857-19.40%83553-14.60%p1511092271767-35.30%93396-15.80%78755-29.00%90069-18.80%97279-12.30%p1612118275496-37.70%96219-20.60%88705-26.80%98036-19.10%105550-12.90%p178442346939-44.40%65681-22.20%59856-29.10%69480-17.70%74968-11.20%p1817716280432-54.60%137478-22.40%129683-26.80%143678-18.90%156434-11.70%p19331797157-78.43%28036-15.50%23557-29.00%27472-17.20%29529-11.00%p2014537678067-46.30%123424-15.10%106997-26.40%120371-17.20%127495-12.30%p2111472855184-51.90%93733-18.30%82834-27.80%92241-19.60%99010-13.70%p2213875771182-48.70%110867-20.10%98517-29.00%111283-19.80%121690-12.30%p23165619100199-39.50%130508-21.20%119246-28.00%138457-16.40%147235-11.10%p2416507773129-55.70%137014-17.00%121167-26.60%132392-19.80%141141-14.50%p259249055309-40.20%74824-19.10%66963-27.60%75379-18.50%79079-14.50%p2610499470976-32.40%89035-15.20%74126-29.40%84520-19.50%91450-12.90%p27398308857-77.76%33656-15.50%29594-25.70%31944-19.80%35608-10.60%p28181669121537-33.10%139158-23.40%136070-25.10%152057-16.30%159142-12.40%p29294917488-74.61%24301-17.60%21794-26.10%24330-17.50%25244-14.40%p305297230141-43.10%40630-23.30%37822-28.60%44338-16.30%45980-13.20%p3113286759126-55.50%104301-21.50%97790-26.40%111077-16.40%118916-10.50%p3211226250855-54.70%87789-21.80%82737-26.30%92841-17.30%96545-14.00%p3312612152088-58.70%95852-24.00%90429-28.30%103419-18.00%111869-11.30%p3412483965540-47.50%98123-21.40%91882-26.40%103866-16.80%109733-12.10%p35330178425-74.48%25192-23.70%23805-27.90%27932-15.40%29484-10.70%p3613454969965-48.00%101046-24.90%94992-29.40%112752-16.20%118807-11.70%p3713002173462-43.50%107657-17.20%96346-25.90%109088-16.10%110778-14.80%p381633699454-94.21%135760-16.90%120240-26.40%136086-16.70%141641-13.30%p3916891092394-45.30%131074-22.40%121108-28.30%140026-17.10%147121-12.90%p404506422667-49.70%37313-17.20%32942-26.90%38259-15.10%38349-14.90%p4113540268920-49.10%107915-20.30%95594-29.40%112519-16.90%120914-10.70%p42188008704-53.70%14796-21.30%13423-28.60%15303-18.60%16807-10.60%p4316313980428-50.70%138179-15.30%114850-29.60%135079-17.20%142910-12.40%p4411451668824-39.90%96766-15.50%80390-29.80%91613-20.00%98026-14.40%p45186302107124-42.50%145688-21.80%135628-27.20%152022-18.40%160220-14.00%p466918129402-57.50%57559-16.80%49257-28.80%57005-17.60%61986-10.40%p4713006058657-54.90%101967-21.60%95204-26.80%105219-19.10%117054-10.00%p488673347443-45.30%65483-24.50%61060-29.60%73116-15.70%76845-11.40%p49141727384-47.90%11862-16.30%10416-26.50%11607-18.10%12556-11.40%p5015375578569-48.90%123465-19.70%115162-25.10%127002-17.40%131461-14.50%阳性样本偏差均值//-51.83%/-19.74%/-27.48%/-17.50%/-12.52%阴性样本平均发光强度接近情况下，阳性样本平均光光强度越高，分析灵敏度越高，达到同一信号所需的时间越短，检测时间越短。从上述结果中可以看出，本发明实施例1和对比例1两种试剂盒的检测结果：30例阴性样本光强度差异较小，50例阳性样本光强度差异较为明显，其中实施例1试剂盒检测光强度比对比例1平均光强度高51.83%。说明本发明实施例1试剂盒相比于对比例1试剂盒达到同一信号值所需时间更短，反应时间较市售同类产品的30min缩短为15min，同时也证明rbd三聚体抗原相比于单独的rbd抗原可以极大提高与新冠病毒中和抗体及ace2抗原的反应速度。对比实施例1和对比例2，3，4，5五种试剂盒的检测结果：30例阴性样本光强度差异较小，50例阳性样本光强度差异较为明显，其中实施例1试剂盒检测光强度比对比例2平均光强度高19.74%，比对比例3高27.48%，比对比例4高17.50%，比对比例5高12.52%，说明本发明所使用的十二烷基二甲基甜菜碱相比于不含表面活性剂、含有阳离子、阴离子或非离子型表面活性剂可以较大的提高试剂盒中抗原抗体的反应速度。由于rbd三聚体抗原具有封闭状态和打开状态，在打开状态下rbd三聚体抗原更利于与新冠中和性抗体特异性结合。表面活性剂的使用会对rbd三聚体抗原表面电荷产生影响，使得rbd三聚体抗原的空间结构发生改变，进而促使rbd三聚体抗原的封闭区打开，加快与新冠中和性抗体的结合速度。推测由于使用十八烷基三甲基氯化铵（阳离子表面活性剂）、十二烷基苯磺酸钠（阴离子表面活性剂）、吐温80（非离子表面活性剂）或不加入表面活性剂可能使得rbd三聚体抗原的封闭区打开不充分，影响其空间结构，相较于使用十二烷基二甲基甜菜碱，不利于与新冠中和性抗体结合，使得检测到的平均光强度较低。使用实施例1和对比例6，7中的试剂盒检测50例阳性样本和30例阴性样本，比较三种试剂盒与样本的反应光强度。以全自动化学发光法免疫分析仪为检测仪器，将试剂盒装载到仪器上进行测试。结果如表2所示。表2样本编号实施例1（光强度）对比例6（光强度）信号值偏差对比例7（光强度）信号值偏差n127462589-5.70%2688-2.10%n2203221134.00%1878-7.60%n3167017233.20%1546-7.40%n414571425-2.20%1390-4.60%n524142334-3.30%24772.60%n626972532-6.10%2651-1.70%n723192196-5.30%23702.20%n8168917061.00%1660-1.70%n915331512-1.40%15642.00%n1024092315-3.90%2301-4.50%n11250625993.70%25461.60%n1225162383-5.30%2365-6.00%n13225423584.60%2249-0.20%n1416111522-5.50%16673.50%n1517131694-1.10%1609-6.10%n16248224970.60%2455-1.10%n17251226234.40%2354-6.30%n1823792243-5.70%24744.00%n19208221302.30%2072-0.50%n20164517063.70%1535-6.70%n2122262099-5.70%2215-0.50%n22249325783.40%25482.20%n23241224481.50%2234-7.40%n2422272118-4.90%2091-6.10%n2516541626-1.70%16851.90%n2619501843-5.50%20052.80%n2723612186-7.40%2274-3.70%n2824152231-7.60%2253-6.70%n2924022212-7.90%24481.90%n30180418150.60%1692-6.20%阴性样本偏差均值//-1.77%/-2.08%p1177547150915-15.00%145589-18.00%p21565912950-17.30%12809-18.20%p38273368255-17.50%67924-17.90%p4179677149312-16.90%145718-18.90%p5145008122242-15.70%120067-17.20%p69122676356-16.30%74714-18.10%p7120713100554-16.70%98864-18.10%p86284251719-17.70%50902-19.00%p96752456923-15.70%54019-20.00%p106345852226-17.70%51211-19.30%p11180318149664-17.00%148041-17.90%p129041075040-17.00%72780-19.50%p132114617572-16.90%17382-17.80%p149783780716-17.50%80520-17.70%p1511092293064-16.10%90845-18.10%p1612118299490-17.90%100581-17.00%p178442371422-15.40%69902-17.20%p18177162149170-15.80%145981-17.60%p193317927605-16.80%26875-19.00%p20145376120953-16.80%117900-18.90%p2111472897289-15.20%92471-19.40%p22138757114752-17.30%114058-17.80%p23165619136304-17.70%135476-18.20%p24165077135693-17.80%133052-19.40%p259249078154-15.50%74917-19.00%p2610499488195-16.00%86830-17.30%p273983032780-17.70%31904-19.90%p28181669154237-15.10%149150-17.90%p292949124920-15.50%23799-19.30%p305297244338-16.30%43013-18.80%p31132867112405-15.40%109748-17.40%p3211226292616-17.50%89810-20.00%p33126121105816-16.10%104554-17.10%p34124839104865-16.00%102618-17.80%p353301728064-15.00%26810-18.80%p36134549113156-15.90%110061-18.20%p37130021109608-15.70%105447-18.90%p38163369134616-17.60%135270-17.20%p39168910142560-15.60%137155-18.80%p404506437674-16.40%36998-17.90%p41135402113738-16.00%108728-19.70%p421880015585-17.10%15472-17.70%p43163139135405-17.00%132958-18.50%p4411451696079-16.10%94819-17.20%p45186302156866-15.80%151091-18.90%p466918157628-16.70%57213-17.30%p47130060109250-16.00%104178-19.90%p488673373116-15.70%71381-17.70%p491417211834-16.50%11522-18.70%p50153755130384-15.20%126233-17.90%阳性样本偏差均值//-16.42%/-18.36%从上述结果中可以看出，对比实施例1和对比例6，7三种试剂盒的检测结果：30例阴性样本光强度差异较小，50例阳性样本光强度差异较为明显，其中实施例1试剂盒检测光强度比对比例6平均光强度高16.42%，比对比例7高18.36%，说明本发明所使用的十二烷基二甲基甜菜碱类两性离子表面活性剂相比于氨基酸型两性离子表面活性剂和氧化胺型两性离子表面活性剂可以较大的提高试剂盒中rbd三聚体抗原与新冠中和性抗体的反应速度，且十二烷基氨基丙酸（氨基酸型两性离子表面活性剂）、十八烷基二羟乙基氧化胺（氧化胺型两性离子表面活性剂）的平均发光强度低于吐温80（非离子表面活性剂）的平均发光强度。推测十二烷基二甲基甜菜碱可以促使rbd三聚体抗原的封闭区打开，加快与新冠中和性抗体的结合速度。其他种类两性表面活性剂可能使得rbd三聚体抗原的封闭区打开不充分，影响其空间结构，相较于使用十二烷基二甲基甜菜碱，不利于与新冠中和性抗体结合，使得检测到的平均光强度较低。使用实施例1和对比例1中的试剂盒同时检测稀释10倍后的50例阳性样本，比较两种试剂盒的检出率比较其分析灵敏度。结果如表3所示。表3样本编号实施例1浓度对比例1浓度正常值范围<20au/ml<20au/mlp-1180.25172.32p-215.97.03p-383.9988.11p-4182.41175.66p-5147.2279.64p-692.6297.06p-7122.55117.28p-863.828.58p-968.5571.77p-1064.4240.27p-11183.0617.39p-1291.7992.61p-1321.4712.34p-1499.33103.8p-15112.61114.08p-16123.03128.81p-1785.7187.08p-18179.86184.72p-1933.6813.78p-20147.59145.08p-21116.4856.02p-22140.87140.17p-23168.14101.73p-24167.59168.76p-2593.991.18p-26106.59107.45p-2740.4419.25p-28184.44189.78p-2929.9417.75p-3053.7830.6p-31134.89131.79p-32113.97118.07p-33128.04128.17p-34126.74127.63p-3533.5216.46p-36136.6134.14p-37132137.02p-38165.867.01p-39171.48171.65p-4045.7543.65p-41137.46142p-4219.098.84p-43165.62171.25p-44116.26122.07p-45189.14181.95p-4670.2368.83p-47132.04126.23p-4888.0584.44p-4914.397.5p-50156.1162.65检出率94.00%80.00%从上述结果中可以看出，本发明实施例1和对比例1试剂盒的检测结果：50例疫苗样本稀释10倍后采用实施例1的试剂盒检测仍能检测出49例阳性，检出率为94%，而对比例1的试剂盒仅能检测出40例阳性,检出率为80%，实施例1的试剂盒相较于对比例1的试剂盒漏检率降低了70%。说明本发明所用的rbd三聚体抗原与新冠病毒中和抗体的结合能力比单独的rbd抗原更强，实施例1的试剂盒分析灵敏度更优。使用实施例1-3和对比例2，8，9中的试剂盒检测50例阳性样本和30例阴性样本，比较六种试剂盒与样本的反应光强度。以全自动化学发光法免疫分析仪为检测仪器，将试剂盒装载到仪器上进行测试。结果如表4所示。表4样本编号实施例1（光强度）对比例2（光强度）信号值偏差对比例8（光强度）信号值偏差实施例2（光强度）信号值偏差实施例3（光强度）信号值偏差对比例9（光强度）信号值偏差n127462029-26.11%2563-6.66%2403-12.49%2586-5.83%1418-48.36%n22032251423.72%243019.59%241919.05%1850-8.96%2001-1.53%n31670220231.86%1612-3.47%260956.23%226835.81%236441.56%n41457171117.43%233860.47%187828.89%1431-1.78%276089.43%n52414270011.85%2209-8.49%1904-21.13%2222-7.95%2340-3.07%n626971555-42.34%1705-36.78%1810-32.89%2287-15.20%1408-47.79%n7231923471.21%24726.60%24063.75%1947-16.04%1438-37.99%n81689234038.54%190913.03%252049.20%211625.28%212125.58%n91533180217.55%203933.01%222044.81%192825.77%271076.78%n1024091912-20.63%2251-6.56%1881-21.92%1984-17.64%26439.71%n1125061795-28.37%2068-17.48%1900-24.18%2253-10.10%1957-21.91%n1225161623-35.49%2319-7.83%2162-14.07%1997-20.63%1420-43.56%n13225423423.90%24287.72%249610.74%2027-10.07%1490-33.90%n141611180311.92%194720.86%243150.90%205927.81%255158.35%n151713189610.68%215725.92%214925.45%195814.30%264954.64%n1624821848-25.54%2080-16.20%1892-23.77%2071-16.56%2364-4.75%n1725121713-31.81%2206-12.18%1945-22.57%2174-13.46%1526-39.25%n1823792127-10.59%24221.81%24653.61%2013-15.38%1442-39.39%n1920822028-2.59%20910.43%245918.11%2046-1.73%1980-4.90%n201645188814.77%210527.96%240646.26%200021.58%257656.60%n2122261856-16.62%2154-3.23%1956-12.13%2021-9.21%253613.93%n2224931740-30.20%2103-15.64%1909-23.43%2144-14.00%2058-17.45%n2324121934-19.82%2291-5.02%2346-2.74%2031-15.80%1455-39.68%n2422272037-8.53%2130-4.36%245910.42%2041-8.35%1892-15.04%n251654199920.86%210527.27%243647.28%200120.98%228237.97%n2619501860-4.62%21369.54%219712.67%20143.28%256131.33%n2723611752-25.79%2151-8.89%1941-17.79%2089-11.52%2266-4.02%n2824151881-22.11%2173-10.02%2196-9.07%2049-15.16%1745-27.74%n2924021955-18.61%2290-4.66%2385-0.71%2036-15.24%1624-32.39%n301804202412.20%212217.63%245936.31%201411.64%19668.98%阴性样本偏差均值//-5.11%/3.48%/7.49%/-2.14%/1.40%p1177547134048-24.50%142215-19.90%162456-8.50%166184-6.40%151092-14.90%p21565913263-15.30%12699-18.90%14030-10.40%15174-3.10%13248-15.40%p38273366931-19.10%66269-19.90%75370-8.90%78265-5.40%70323-15.00%p4179677150569-16.20%146257-18.60%161889-9.90%167818-6.60%152366-15.20%p5145008115861-20.10%116441-19.70%132247-8.80%139933-3.50%123547-14.80%p69122672981-20.00%72342-20.70%83837-8.10%86938-4.70%78181-14.30%p712071393673-22.40%95725-20.70%109849-9.00%114315-5.30%103210-14.50%p86284252976-15.70%49834-20.70%55992-10.90%58883-6.30%52913-15.80%p96752452669-22.00%54087-19.90%61920-8.30%64485-4.50%57260-15.20%p106345850576-20.30%50576-20.30%58318-8.10%59651-6.00%54257-14.50%p11180318135599-24.80%147139-18.40%163909-9.10%169860-5.80%152910-15.20%p129041072961-19.30%74046-18.10%82816-8.40%86613-4.20%76668-15.20%p132114616684-21.10%17192-18.70%19264-8.90%19920-5.80%18059-14.60%p149783778367-19.90%78661-19.60%88640-9.40%94217-3.70%83944-14.20%p1511092293396-15.80%89625-19.20%99830-10.00%103601-6.60%94838-14.50%p1612118296219-20.60%96461-20.40%109670-9.50%114032-5.90%103853-14.30%p178442365681-22.20%68636-18.70%75643-10.40%79442-5.90%71169-15.70%p18177162137478-22.40%144387-18.50%158560-10.50%168835-4.70%150942-14.80%p193317928036-15.50%26211-21.00%29795-10.20%31221-5.90%28368-14.50%p20145376123424-15.10%116592-19.80%129675-10.80%138253-4.90%123133-15.30%p2111472893733-18.30%91668-20.10%105091-8.40%109336-4.70%96486-15.90%p22138757110867-20.10%113642-18.10%124188-10.50%130709-5.80%117805-15.10%p23165619130508-21.20%132164-20.20%148726-10.20%155682-6.00%141935-14.30%p24165077137014-17.00%133217-19.30%147414-10.70%159299-3.50%138830-15.90%p259249074824-19.10%75749-18.10%83611-9.60%86756-6.20%79264-14.30%p2610499489035-15.20%85675-18.40%94285-10.20%97959-6.70%88930-15.30%p273983033656-15.50%31665-20.50%36006-9.60%37161-6.70%33537-15.80%p28181669139158-23.40%148787-18.10%164047-9.70%171496-5.60%153874-15.30%p292949124301-17.60%23298-21.00%27132-8.00%27663-6.20%25156-14.70%p305297240630-23.30%42748-19.30%48681-8.10%51065-3.60%45026-15.00%p31132867104301-21.50%105629-20.50%118384-10.90%127685-3.90%112273-15.50%p3211226287789-21.80%90371-19.50%102720-8.50%105302-6.20%96433-14.10%p3312612195852-24.00%102662-18.60%115527-8.40%119058-5.60%108212-14.20%p3412483998123-21.40%100495-19.50%112605-9.80%116475-6.70%106488-14.70%p353301725192-23.70%26381-20.10%30277-8.30%31069-5.90%27932-15.40%p36134549101046-24.90%107370-20.20%120152-10.70%125803-6.50%115039-14.50%p37130021107657-17.20%104407-19.70%117279-9.80%121960-6.20%111298-14.40%p38163369135760-16.90%130859-19.90%148339-9.20%157651-3.50%140497-14.00%p39168910131074-22.40%136986-18.90%153877-8.90%160802-4.80%141884-16.00%p404506437313-17.20%36367-19.30%40513-10.10%42721-5.20%38575-14.40%p41135402107915-20.30%110217-18.60%120779-10.80%126872-6.30%115092-15.00%p421880014796-21.30%15360-18.30%16864-10.30%18180-3.30%16036-14.70%p43163139138179-15.30%130348-20.10%146825-10.00%155308-4.80%139810-14.30%p4411451696766-15.50%91269-20.30%104668-8.60%108561-5.20%96193-16.00%p45186302145688-21.80%151277-18.80%167299-10.20%177360-4.80%157425-15.50%p466918157559-16.80%55898-19.20%62609-9.50%65999-4.60%58527-15.40%p47130060101967-21.60%103138-20.70%117574-9.60%123297-5.20%110031-15.40%p488673365483-24.50%70080-19.20%78580-9.40%82049-5.40%73810-14.90%p491417211862-16.30%11338-20.00%12967-8.50%13322-6.00%11961-15.60%p50153755123465-19.70%123158-19.90%140840-8.40%144837-5.80%130999-14.80%阳性样本偏差均值//-19.74%/-19.52%/-9.46%/-5.32%/-14.97%从上述结果中可以看出，本发明所使用的十二烷基二甲基甜菜碱的浓度范围为0.2-10mg/ml时，实施例2和3的试剂盒与实施例1的试剂盒相比光强度偏差均在10%以内。浓度过低或过高时，对比例8和9的试剂盒检测结果与未加十二烷基二甲基甜菜碱表面活性剂的试剂盒较为接近，其中十二烷基二甲基甜菜碱的最优浓度为5mg/ml。推测在工作液中十二烷基二甲基甜菜碱浓度为5mg/ml时rbd三聚体抗原的封闭区打开较为完全，形成的空间结构更利于与新冠中和性抗体结合。本发明公开了一种检测新型冠状病毒中和抗体的化学发光试剂盒。利用链霉亲和素-生物素的信号放大系统，采用rbd三聚体抗原替代单独的rbd抗原，加入5mg/ml十二烷基二甲基甜菜碱，极大提高了试剂盒的平均光强度、分析灵敏度和检测速度，同时可以实现新型冠状病毒中和抗体的定量检测；尤其是将试剂盒用于全自动化学发光系统，加样、孵育、清洗和检测等步骤均可实验自动化，避免了人为操作带来的结果偏差，提高了工作效率，通过内置校准曲线到测试软件，只需测试样本即可定量检测样本中的新型冠状病毒中和抗体，使检测更快速、更可靠、更稳定。尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。当前第1页12当前第1页12