技术特征：
1.一种人肺癌免疫多标及空间转录组检测组合方法，具体包括以下几个步骤：s1、在组织样本上同时标记pd-1/pd-l1/cd8/cd68/foxp3/panck六种抗原，并同时使用dapi对细胞核进行染色，并对颜色进行采集；s2、对六种抗原进行分别标记；s3、计算肿瘤区和非肿瘤区中各细胞类群的数量；s4、通过10x genomics技术，对同一样本上的基因水平进行检测。2.根据权利要求1所述的人肺癌免疫多标及空间转录组检测组合方法，其特征在于：所述s1、在组织样本上同时标记pd-1/pd-l1/cd8/cd68/foxp3/panck六种抗原，并同时使用dapi对细胞核进行染色，具体操作方式如下：ss1、对pd-1/pd-l1/cd8/cd68/foxp3/panck六种抗原分别与一种染料相搭配对应；ss2、在荧光显微镜对每种荧光信号进行采集，不同的抗原表达强弱可指征不同的细胞类群。3.根据权利要求1所述的人肺癌免疫多标及空间转录组检测组合方法，其特征在于：所述s2、对六种抗原进行分别标记，具体操作方式如下：ss1、panck作为肿瘤标志物，其标记区域则为肿瘤区域；cd8阳性为杀伤性t细胞的标记；foxp3阳性细胞为调节性t细胞；cd68+细胞为巨噬细胞；pd-1和pd-l1作为重要的免疫检测点分别进行标记。4.根据权利要求1所述的人肺癌免疫多标及空间转录组检测组合方法，其特征在于：所述s4、通过10x genomics技术，对同一样本上的基因水平进行检测，具体操作方式如下：ss1、通过he染色，获得组织原位的空间信息；ss2、将组织细胞中的mrna进行透化释放与切片表面的barcode互补结合(spatially barcoded oligo-deoxythymidine microarrays)，后续通过建库、测序，获得细胞中完整的转录组数据。
技术总结
本发明公开了一种人肺癌免疫多标及空间转录组检测组合方法，具体包括以下几个步骤：S1、在组织样本上同时标记PD-1/PD-L1/CD8/CD68/Foxp3/PanCK六种抗原，并同时使用DAPI对细胞核进行染色，并对颜色进行采集；S2、对六种抗原进行分别标记；S3、计算肿瘤区和非肿瘤区中各细胞类群的数量；S4、通过10X genomics技术，对同一样本上的基因水平进行检测；本发明通过一次性在同一组织样本上的两张连续切片上完成，一张进行组织多标的标记，标记6种抗原，从而可以获得组织中6种蛋白的表达水平，获得6种以上不同细胞类群的分类及原位信息，特别是在检测各细胞类群的同时对PD-1/PD-L1免疫检测点同步进行检测，对肿瘤的免疫治疗提供依据。依据。依据。
技术研发人员：庞圣如 侯纯纯 韦贝贝 曹晓黎 黄毅
受保护的技术使用者：云准医药科技（上海）有限公司
技术研发日：2021.11.12
技术公布日：2022/2/15