一种左旋奥拉西坦异构体的检测方法与流程

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种左旋奥拉西坦异构体的检测方法。

背景技术：

1、奥拉西坦(oxiracetam)是由意大利史比克切姆公司于1974年合成的抗缺氧类促智药，临床上主要用于治疗脑卒中、脑外伤引起的神经功能缺失、记忆和认知障碍；轻中度阿尔茨海默症、血管性痴呆、混合型痴呆等。奥拉西坦的药理作用主要有如下几个方面：在各种行为实验中均能改善思维、提高记忆力和学习成绩；能够减少电休克所致的记忆力损伤；拮抗患有原发性高血压脑血管损伤大鼠学习能力的降低；促进大脑皮层和海马部位乙酰胆碱的转运，增加对胆碱摄取的亲和力和脑磷酸酯酶a1的活性，抑制脑磷脂分解，激活酰苷酸激活酶，增加脑内能量储存，提高大脑中三磷酸腺苷(atp)/二磷酸腺苷(atp)比值，促使大脑中的蛋白质合成增加；降低脑血管阻力，抑制血小板聚集，改善微循环，增加脑血流量，减轻缺血再灌注，改善神经营养代谢，促进神经细胞可塑性修复，恢复受损大脑高级皮层功能；能激活神经营养因子，促进神经轴索再生，防止神经萎缩，有助于促进损伤后大脑功能的恢复；促进大脑皮质联络纤维突触有可塑性，调动未受损脑组织重组及功能重建，恢复受损的神经功能，提高患者生活质量。

2、奥拉西坦是由两种异构体(s)-奥拉西坦((s)-oxiracetam)和(r)-奥拉西坦((r)-oxiracetam)组成的消旋体。研究表明，其左旋体药效优于右旋体或消旋体。cn103735545a中提到左旋奥拉西坦对酒精中毒所致昏迷的促醒作用明显，而右旋奥拉西坦基本没有作用。cn103599101a中披露左旋奥拉西坦对液压及自由落体所致创伤性脑损伤大鼠学习记忆认知功能障碍均有明显的改善作用，其药效远高于右旋奥拉西坦。cn102204904a报道左旋奥拉西坦对老年痴呆、认知功能障碍等疾病疗效优于奥拉西坦混旋体和右旋奥拉西坦，而右旋奥拉西坦对老年痴呆、认知功能障碍等疾病疗效较差，甚至无效。

3、目前奥拉西坦已公开的有关物质测定方法为hplc法(药典标准征求意见稿)，具体如下：有关物质取左旋奥拉西坦适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，用流动相定量稀释制成每1ml中含1μg的溶液，作为对照溶液；精密称取奥拉西坦酸(杂质i)对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含3μg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定，用内嵌极性基团的耐水十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(推荐techmate c18-st柱，4.6mm×250mm，5μm，或效能相当的色谱柱)，以0.02mol/l磷酸二氢钠溶液为流动相；检测波长为210nm。精密量取供试品溶液、对照溶液和对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液的色谱图中如有与杂质ⅰ峰保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，不得过0.3％；其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液的主峰面积(0.1％)，其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的5倍(0.5％)。供试品溶液色谱图中小于对照溶液主峰面积0.3倍的色谱峰忽略不计。

4、申请人经过实验发现，上述方法并不能将左旋奥拉西坦与右旋奥拉西坦两种异构体检测出来，因此，有必要开发快速准确检测左旋奥拉西坦与右旋奥拉西坦两种异构体的方法，实现左旋奥拉西坦质量的有效控制。

技术实现思路

1、针对现有检测方法无法将左旋奥拉西坦与右旋奥拉西坦两种异构体检测出来的问题，本发明旨在提供一种左旋奥拉西坦异构体的检测方法，弥补现有技术中的空白。本发明的检测方法具有稳定性，可用于左旋奥拉西坦的质量控制。本方法操作简便、成本低廉，具有良好的经济效益和推广前景。

2、为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

3、一种左旋奥拉西坦异构体的检测方法，所述方法的色谱条件包括：

4、色谱柱：以表面共价键合有直链淀粉-三(3-氯苯基氨基甲酸酯)的硅胶为填充剂；

5、流动相：烷烃、醇、三氟乙酸；

6、流速：0.9～1.1ml/min；

7、柱温：30～40℃；

8、检测波长：215～225nm。

9、在某些优选的实施方案中，所述烷烃为正己烷。

10、在某些优选的实施方案中，所述醇为乙醇。

11、在某些优选的实施方案中，所述烷烃、醇、三氟乙酸的体积比为65～75:25～35:0.05～0.15。

12、在某些优选的实施方案中，所述烷烃、醇、三氟乙酸的体积比为70:30:0.1。

13、在某些优选的实施方案中，所述流速为1ml/min。

14、在某些优选的实施方案中，所述柱温为35℃。

15、在某些优选的实施方案中，所述检测波长为220nm。

16、在某些优选的实施方案中，所述色谱柱为chiralpak id。

17、在某些优选的实施方案中，所述方法还包括以下步骤：

18、供试品溶液配制：称取左旋奥拉西坦，加有机溶剂溶解稀释、摇匀，作为供试品溶液；和/或

19、对照品溶液配制：称取右旋奥拉西坦对照品，加有机溶剂溶解稀释、摇匀，作为对照品溶液；

20、优选地，所述有机溶剂是无水乙醇。

技术特征：

1.一种左旋奥拉西坦异构体的检测方法，其特征在于，所述方法的色谱条件包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述烷烃为正己烷。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述醇为乙醇。

4.根据权利要求1-3任一项所述的左旋奥拉西坦异构体的检测方法，其特征在于，所述烷烃、醇、三氟乙酸的体积比为65～75:25～35:0.05～0.15。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述烷烃、醇、三氟乙酸的体积比为70:30:0.1。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流速为1ml/min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述柱温为35℃。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测波长为220nm。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为chiralpak id。

10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：

技术总结
本发明属于药物分析领域，具体涉及一种左旋奥拉西坦异构体的检测方法。该方法以表面共价键合有直链淀粉‑三(3‑氯苯基氨基甲酸酯)的硅胶为色谱柱填充剂，以烷烃、醇、三氟乙酸为流动相，通过等度洗脱，对左旋奥拉西坦异构体进行检测，从而有效控制左旋奥拉西坦的质量。本发明的测定方法准确度高，稳定性好，操作简便，针对性强，具有很好的应用价值。

技术研发人员：请求不公布姓名
受保护的技术使用者：盛禾（中国）制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13