一种小麦粉及其面粉处理剂中乙酰氧肟酸的测定方法与流程

1.本发明涉及化学分析技术领域，更具体的说是涉及一种小麦粉及其面粉处理剂中乙酰氧肟酸的测定方法。


背景技术：

2.乙酰氧肟酸(acetohydroxamic acid,aha)又名醋羟胺酸、菌石通等，是异羟氧肟酸类化合物，cas号为546-88-3，分子式为c2h5no2，分子量是75.0666。乙酰氧肟酸结构中的-conhoh官能团，是优良的有机配位体，是一种很重要的选矿药剂；上世纪九十年代乙酰氧肟酸作为良好的瘤胃微生物脲酶抑制剂在畜牧业上广泛应用。
3.面粉是我国北方民众最常食用的主食之一，也是许多烘培等加工食品的主要原料，乙酰氧肟酸加入到面粉和面粉处理剂中，可防止面粉及其制品的返色褐变。
4.但是，乙酰氧肟酸是非食品原料。目前暂无针对面粉或面粉处理剂中乙酰氧肟酸的测定标准或方法。
5.因此，建立小麦粉及其面粉处理剂中的乙酰氧肟酸的测定方法并对其监测是本领域技术人员亟需解决的问题。


技术实现要素：

6.有鉴于此，本发明提供了一种小麦粉及其面粉处理剂中乙酰氧肟酸的测定方法。
7.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
8.一种小麦粉及其面粉处理剂中乙酰氧肟酸的测定方法，包括以下步骤：
9.(1)试样提取：将试样加入聚乙二醇混匀，加入无水乙醇，振荡，超声提取，离心得上清液备用；
10.(2)净化分析：将步骤(1)所得上清液转移至已活化的c
18
固相萃取柱中，收集流出液，过滤，得续滤液进行气相色谱分析；
11.(3)绘制标准曲线；
12.(4)将试样定性定量分析。
13.优选的：步骤(1)试样、聚乙二醇和无水乙醇的质量体积比为1g：0.4g：10ml；振荡用涡旋振荡，时间为10min；超声的功率为100khz，提取时间为10min；离心的条件为：4℃下8000r/min，离心时间5min。
14.优选的：步骤(2)活化：用6ml甲醇，6ml乙醇活化；收集流出液：弃去最初的3/5体积量的流出液；过滤：过0.22μm有机系滤膜；续滤液：弃去2～5滴初滤液，即得续滤液。
15.优选的：步骤(2)气相色谱的条件：
16.色谱柱规格：30m
×
320μm
×
0.25μm；
17.载气：高纯氮气，纯度≥99.9995％；柱流速：2.5ml/min；
18.进样口温度：150℃；进样量：2.0μl；
19.升温程序：起始温度100℃，保持1min，15℃/min升温至180℃，保持1min，6℃/min
升温至220℃，保持1min；
20.检测器：氮磷检测器；加热器温度：300℃；空气流量：60ml/min；氢气燃气流量：3ml/min；尾吹气流量(n2)组合：7.5ml/min。
21.隔垫吹扫模式：标准；隔垫吹扫流量：3ml/min。
22.优选的：步骤(3)，标准曲线回归方程为y＝33.236x
–
117.02，其中，x为浓度，y为峰面积。
23.有益效果在于：乙酰氧肟酸分子结构中含有n元素，可以利用气相色谱氮磷检测器(npd)进行测定。试样用乙醇溶液提取，聚乙二醇作为分散剂，采用气相色谱仪氮磷检测器(npd)测定，保留时间定性，外标法定量。
24.经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种小麦粉及其面粉处理剂中乙酰氧肟酸的测定方法，取的技术效果为本发明基于气相色谱技术检测乙酰氧肟酸，通过乙醇提取，c
18
固相萃取柱进行净化，过滤后采用配备氮磷检测器的气相色谱仪进行检测，利用气相色谱法保留时间定性，外标法定量。方法简便，灵敏度高，非常适用于小麦粉及其面粉处理剂中乙酰氧肟酸的测定。检出限为为10mg/kg；定量限为30mg/kg。
附图说明
25.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
26.图1附图为本发明提供的乙酰氧肟酸标准曲线图。
27.图2附图为本发明提供的乙酰氧肟酸标准品的气相色谱图。
28.图3附图为本发明提供的小麦粉中加标样品的乙酰氧肟酸的气相色谱图。
29.图4附图为本发明提供的面粉处理剂中的乙酰氧肟酸的气相色谱图。
具体实施方式
30.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
31.本发明实施例公开了一种小麦粉及其面粉处理剂中乙酰氧肟酸的测定方法。
32.实施例中，所用原料试剂为分析纯，试样中面粉或面粉处理剂均为市售来源。
33.试剂
34.无水乙醇(c2h5oh)：色谱级。
35.聚乙二醇[相对分子质量为8000，ho(ch2ch2o)nh]。
[0036]
甲醇(ch3oh)：色谱级。
[0037]
标准品
[0038]
乙酰氧肟酸标准品(acetohydroxamic acid，aha)：cas号546-88-3，分子式c2h5no2，相对分子质量75.07，纯度≥98％，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
[0039]
乙酰氧肟酸标准储备液：准确称取0.01016g乙酰氧肟酸标准品用乙醇溶解并定容至10ml，配制成浓度为1.0mg/ml的乙酰氧肟酸标准储备液。此溶液在0℃～4℃避光保存，可使用6个月。
[0040]
乙酰氧肟酸标准系列工作液：分别准确吸取1.0mg/ml的乙酰氧肟酸标准储备液0.03、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00ml，用乙醇定容至10ml容量瓶中，得到浓度为3、5、10、20、50、100、200μg/ml的标准系列工作液。
[0041]
材料
[0042]
0.22μm滤膜：有机系。
[0043]c18
固相萃取柱(250mg/3ml)，使用前用6ml甲醇，6ml乙醇活化。
[0044]
仪器和设备
[0045]
气相色谱仪：配有氮磷检测器(npd)。
[0046]
分析天平：感量分别为0.01mg和0.01g。
[0047]
容量瓶：10ml。
[0048]
离心管：15ml具塞离心管。
[0049]
超声波清洗器。
[0050]
涡旋混合器。
[0051]
离心机：转速不低于8000r/min。
[0052]
移液枪：量程分别为200μl和1ml。
[0053]
试样制备和保存
[0054]
称取具代表性小麦粉或面粉处理剂样品约200g，混合均匀，贮存于洁净广口容器中，干燥避光保存备用。
[0055]
实施例1
[0056]
提取
[0057]
准确称取1g(精确至0.01g)试样，置于15ml具塞离心管中，加入0.4g(精确至0.01g)聚乙二醇混匀。准确加入无水乙醇10ml，涡旋振荡10min，超声(功率:100khz)提取10min，在4℃下8000r/min离心5min。上清液备用。
[0058]
净化
[0059]
吸取5ml上清液转移至已活化的c
18
固相萃取柱中，弃去最初的3ml流出液，收集流出液，过0.22μm有机系滤膜，弃去2～5滴初滤液，取续滤液上机测定。
[0060]
气相色谱参考条件
[0061]
色谱柱：agilent 19091n-1131 hp-innowax(40～270℃)，30m
×
320μm
×
0.25μm，或相当者；
[0062]
载气：高纯氮气，纯度≥99.9995％；柱流速：2.5ml/min。
[0063]
进样口温度：150℃；进样模式：不分流；衬管(超高惰性衬管)：agilent 5190-2293：900μl；进样量：2.0μl。
[0064]
升温程序：起始温度100℃，保持1min，15℃/min升温至180℃，保持1min，6℃/min升温至220℃，保持1min。
[0065]
检测器：氮磷检测器(npd)；加热器温度：300℃；空气流量：60ml/min；氢气燃气流量：3ml/min；尾吹气流量(n2)组合：7.5ml/min。
[0066]
隔垫吹扫模式：标准；隔垫吹扫流量：3ml/min。
[0067]
标准曲线的制作
[0068]
将乙酰氧肟酸标准系列工作液按质量浓度由低到高分别注入气相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准系列工作液的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线：
[0069]
用无水乙醇稀释配制成乙酰氧肟酸浓度为3、5、10、20、50、100、200μg/ml的标准溶液，进行测定，以浓度(x)为横坐标，峰面积(y)为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表1，图1。
[0070]
表1
[0071][0072][0073]
标准曲线回归方程为y＝33.236x
–
117.02(r2＝0.9996)，乙酰氧肟酸在3～200μg/ml浓度范围内线性良好，r2达到0.995以上。但考虑到实际样品中含量未知，可能差异较大，而且各种不同品牌型号的气相色谱仪响应强弱也存在差异，因此，在实际样品测定中，可以根据样品浓度或化合物的响应强弱选择不同的线性范围，或者对样品进行适当稀释后进行上机测定，以达到更加准确的定量效果。
[0074]
定性测定
[0075]
将试样溶液注入气相色谱仪中，试样溶液中被测物质的保留时间与标准溶液中乙酰氧肟酸的保留时间偏差在
±
2.5％之内，可以认定试样溶液中存在乙酰氧肟酸。
[0076]
试样溶液的测定
[0077]
将试样溶液注入气相色谱仪中，得到乙酰氧肟酸的峰面积。根据标准曲线，外标法定量，得到试样溶液中乙酰氧肟酸的浓度。试样溶液中乙酰氧肟酸的浓度应该在标准曲线线性范围以内，超出线性范围则应稀释后重新上机测定。
[0078]
空白试验
[0079]
除不加试样或仅加经气相色谱确认不含乙酰氧肟酸的空白试样外，均按试样同法操作。
[0080]
结果计算
[0081]
试样中乙酰氧肟酸的含量按式(1)计算：
[0082][0083]
式中:
[0084]
x-试样中乙酰氧肟酸的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；
[0085]
c-由标准曲线得出的试样溶液中乙酰氧肟酸的浓度，单位为微克每毫升(μg/ml)；
[0086]
v-测定液体积，单位为毫升(ml)；
[0087]
m-试样的质量，单位为克(g)；
[0088]
f-稀释倍数；
[0089]
1000-换算系数。
[0090]
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字。
[0091]
检出限及定量限
[0092]
为确定检出限，在样品中进行低浓度加标(加标水平为50mg/kg)实验，按照样品分析步骤，重复7次空白加标试验，计算7次平行测定次数的标准偏差，按公式(2)计算方法检出限。加标测定结果及标准偏差见表2和表3。计算结果小麦粉的检出限为9.37mg/kg，面粉处理剂的检出限为5.81mg/kg。暂定本方法乙酰氧肟酸的检出限为10mg/kg，以3倍检出限作为定量限，故定量限为30mg/kg。
[0093]
mdl＝t
(n-1,0.99)
×sꢀꢀꢀ
(2)
[0094]
式中：mdl-方法检出限；
[0095]
n-样品的平行测定次数；
[0096]
t-自由度为n-1，置信度为99％时的t的分布(单侧)；
[0097]
s-n次平行测定的标准偏差。
[0098]
其中，当自由度为n-1时，置信度为99％时的t值参考表4。
[0099]
表2
[0100][0101]
表3
[0102][0103]
表4
[0104][0105][0106]
实施例2～13
[0107]
样品检测
[0108]
选择小麦粉和面粉处理剂的具代表性的样品各6批次，共12批次样品，按照本标准规定的方法进行检测，发现两批次面粉处理剂样品中乙酰氧肟酸残留量为38.46(参见图4)和37.25mg/kg，其余样品中乙酰氧肟酸残留量均未检出。
[0109]
实验效果
[0110]
精密度
[0111]
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。
[0112]
称取空白基质样品1g，在不同水平分别添加乙酰氧肟酸标准品(n＝6)，添加水平为50mg/kg和100mg/kg，按照拟定的样品前处理方法进行处理，上机测定，考察方法的精密度。结果见表5、6。小麦粉基质中乙酰氧肟酸在50mg/kg和100mg/kg的添加水平，相对标准偏差(rsd)分别为0.7％和2.3％；面粉处理剂基质中乙酰氧肟酸在50mg/kg和100mg/kg的添加水平，相对标准偏差(rsd)分别为1.8％和3.0％。说明在拟定添加水平上方法的精密度可以满足残留分析的要求。
[0113]
表5小麦粉基质的精密度结果
[0114][0115][0116]
表6面粉处理剂基质的精密度结果
[0117][0118]
加标回收率的测定
[0119]
以不含乙酰氧肟酸的小麦粉和面粉处理剂作为空白基质样品，取空白基质样品1g，在不同水平分别添加乙酰氧肟酸标准品(n＝6)，添加水平为50mg/kg、70mg/kg和100mg/kg，按照拟定的样品前处理方法进行处理，上机测定，进行添加回收实验，计算平均回收率，考察方法的准确度，结果见表7、8。
[0120]
小麦粉基质中乙酰氧肟酸在50mg/kg、70mg/kg和100mg/kg的添加水平，回收率分别为81.1％、92.4％和106.2％；面粉处理剂基质中乙酰氧肟酸在50mg/kg、70mg/kg和100mg/kg的添加水平，回收率分别为93.4％、95.6％和94.9％。说明在拟定添加水平上方法的准确度可以满足残留分析的要求。
[0121]
表7小麦粉基质的准确度结果
[0122][0123][0124]
表8面粉处理剂基质的准确度结果
[0125][0126]
稳定性试验
[0127]
取制备好的小麦粉基质加标溶液，在24小时内连续进样，测定，结果见表9，图2、3。在24小时内选取7个时间点，对比加标溶液的峰面积，rsd值为5.3％，表明基质加标溶液在24小时内的稳定性良好。
[0128]
表9小麦粉基质的稳定性结果
[0129][0130]
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
[0131]
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。