一种达比加群酯的分析检测方法与流程

1.本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种达比加群酯的分析检测方法。


背景技术：

2.达比加群酯是继华法林之后50年来首个上市的口服直接抗凝血药物。达比加群酯属于非肽类凝血酶抑制剂，口服后在体内释放出达比加群，与凝血酶的纤维蛋白特异位点结合，阻止纤维蛋白原裂解为纤维蛋白，从而阻断凝血网络的最后步骤及血栓的形成。达比加群酯是我国非瓣膜房颤患者在预防全身性栓塞和卒中的新选择。
3.因此，达比加群酯原料的纯度对产品的质量来说非常重要，为了保证达比加群酯原料在实际应用中发挥最大的作用，使研发和生产的产品达到一定的品质和功效，达比加群酯原料的含量测定具有非常的重要意义。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于公开一种达比加群酯的分析检测方法，使达比加群酯的含量测定更加准确，重现性良好。
5.为实现上述目的，本发明提供了一种达比加群酯的分析检测方法，该方法包括以下步骤：配置空白溶液、对照品溶液和供试品溶液。空白溶液为乙醇，对照品溶液和供试品溶液均是取达比加群酯加乙醇溶解并稀释制成，每 1ml中含达比加群酯0.1mg/ml或0.05mg/ml的溶液；采用高效液相色谱法检测所述空白溶液、对照品溶液和供试品溶液；色谱条件为：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，检测器为紫外吸收光检测器，流动相由水相和有机相组成，按体积分数设置等度洗脱；并利用外标法进行定量分析。
6.进一步地，水相包括水、盐和酸制剂，水相的ph值为4-5，在该ph值范围内，峰型对称性良好，重现性好。ph值通过酸制剂调节；盐的浓度为 5～10mm。
7.进一步地，盐为乙酸铵或甲酸铵，所述酸试剂为乙酸或甲酸。
8.进一步地，水相与有机相的体积比为7：3或5：5。
9.进一步地，检测器的检测波长为225nm
±
2nm或342nm
±
2nm。其中，达比加群酯的紫外吸收在225nm和342nm附近吸收值较高，可使基线平稳，峰型对称性良好，重现性好。
10.进一步地，色谱柱柱温为30-40℃，流速为0.4-0.6ml/min，进样量为10 μl。在该柱温范围内，达比加群酯能获得更好的峰型，且洗脱时间更理想。在该流速范围内，获得的峰理论板数更好，洗脱时间更理想。
11.与现有技术相比，本发明的有益效果是：通过本发明公开的检测方法，达比加群酯能有更好的保留时间，且色谱柱具有更长的使用寿命，节约成本，同时达比加群酯含量测定更加准确，重现性良好。
附图说明
12.图1为实施例1中空白溶液的色谱图；
13.图2为实施例1中对照品溶液的色谱图；
14.图3为实施例1中供试品溶液的色谱图；
15.图4为实施例2中空白溶液的色谱图；
16.图5为实施例2中对照品溶液的色谱图；
17.图6为实施例2中供试品溶液的色谱图。
具体实施方式
18.定义
19.在本公开中，术语“外标法”是指用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法。
20.在本公开中，术语“梯度洗脱”是指在样品组分的分析周期中，流动相的组成随时间变化的洗脱方式。
21.下面结合各实施方式对本发明进行详细说明，但应当说明的是，这些实施方式并非对本发明的限制，本领域普通技术人员根据这些实施方式所作的功能、方法、或者结构上的等效变换或替代，均属于本发明的保护范围之内。
22.本发明提供了一种达比加群酯的分析检测方法，该方法包括以下步骤：配置空白溶液、对照品溶液和供试品溶液。空白溶液为乙醇，对照品溶液和供试品溶液均是取达比加群酯加乙醇溶解并稀释制成，每1ml中含达比加群酯0.1mg/ml或0.05mg/ml的溶液；采用高效液相色谱法检测所述空白溶液、对照品溶液和供试品溶液；色谱条件为：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，检测器为紫外吸收光检测器，流动相由水相和有机相组成，按体积分数设置等度洗脱；并利用外标法进行定量分析。
23.实施例1：
24.采用agilent zorbax xdb-c18色谱柱，150*4.6mm,3.5μm或与其等效的色谱柱，流动相中水相为10mm的甲酸铵，用甲酸调节其ph值为5，流动相中水相和有机相的体积比为70：30，柱温为30℃，检测波长为225nm，流速为0.4ml/min，进样量为10μl。
25.具体过程如下：
26.取达比加群酯适量，精密称定，加乙醇溶解并稀释制成每1ml中约含达比加群酯0.1mg/ml的溶液，作为供试品溶液；同法制备对照品溶液；取所述对照品溶液和供试品溶液各10μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算含量。
27.系统使用性测定结果：达比加群酯理论板数为66518。
28.外标法计算公式：
29.理论板数计算公式：
30.如图1所示，为空白溶液的图谱，在主峰处，未出现干扰峰。
31.如图2所示，为达比加群酯对照品溶液的高效液相色谱图，达比加群酯的出峰保留时间为31.571min。
32.如图3所示，为达比加群酯供试品溶液的高效液相色谱图，达比加群酯的出峰保留时间为31.560min。
33.实施例2
34.采用agilent zorbax xdb-c18色谱柱，150*4.6mm,3.5μm或与其等效的色谱柱，流动相中水相为5mm的甲酸铵，用甲酸调节其ph值为4.5，流动相中水相和有机相的体积比为50：50，柱温为40℃，检测波长为342nm，流速为0.5ml/min，进样量为10μl。
35.具体过程如下：
36.取达比加群酯适量，精密称定，加乙醇溶解并稀释制成每1ml中约含达比加群酯0.05mg/ml的溶液，作为供试品溶液；同法制备对照品溶液；取所述对照品溶液和供试品溶液各10μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算含量。
37.系统适用性测定结果：达比加群酯理论板数为9736。
38.外标法计算公式：
39.理论板数计算公式：
40.如图4所示，为空白溶液的图谱，在主峰处，未出现干扰峰。
41.如图5所示，为达比加群酯对照品溶液的高效液相色谱图，达比加群酯的出峰保留时间为12.968min。
42.如图6所示，为达比加群酯供试品溶液的高效液相色谱图，达比加群酯的出峰保留时间为13.017min。
43.上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施方式的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施方式或变更均应包含在本发明的保护范围之内。
44.此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。


技术特征：
1.一种达比加群酯的分析检测方法，其特征在于，包括以下步骤：配置空白溶液、对照品溶液和供试品溶液；所述空白溶液为乙醇，所述对照品溶液和供试品溶液均是取达比加群酯加乙醇溶解并稀释制成，每1ml中含达比加群酯0.1mg/ml或0.05mg/ml的溶液；采用高效液相色谱法检测所述空白溶液、对照品溶液和供试品溶液；色谱条件为：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，检测器为紫外吸收光检测器，流动相由水相和有机相组成，按体积分数设置等度洗脱；并利用外标法进行定量分析。2.根据权利要求1所述的达比加群酯的分析检测方法，其特征在于，所述水相包括水、盐和酸制剂，所述水相的ph值为4-5，所述ph值通过酸制剂调节；所述盐的浓度为5～10mm。3.根据权利要求2所述的达比加群酯的分析检测方法，其特征在于，所述盐为乙酸铵或甲酸铵，所述酸试剂为乙酸或甲酸。4.根据权利要求3所述的达比加群酯的分析检测方法，其特征在于，所述水相与有机相的体积比为7：3或5：5。5.根据权利要求4所述的达比加群酯的分析检测方法，其特征在于，所述检测器的检测波长为225nm
±
2nm或342nm
±
2nm。6.根据权利要求5所述的达比加群酯的分析检测方法，其特征在于，所述色谱柱柱温为30-40℃，流速为0.4-0.6ml/min，进样量为10μl。

技术总结
本发明提供了一种达比加群酯的分析检测方法，一种达比加群酯的分析检测方法，该方法包括以下步骤：配置空白溶液、对照品溶液和供试品溶液。空白溶液为乙醇，对照品溶液和供试品溶液均是取达比加群酯加乙醇溶解并稀释制成，每1ml中含达比加群酯0.1mg/ml或0.05mg/ml的溶液；采用高效液相色谱法检测所述空白溶液、对照品溶液和供试品溶液；色谱条件为：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，检测器为紫外吸收光检测器，流动相由水相和有机相组成，按体积分数设置等度洗脱；并利用外标法进行定量分析。本发明所述的达比加群酯的分析检测方法，测定更加准确，重现性良好。重现性良好。重现性良好。


技术研发人员：胡艳萍 刘倩 郭翠霞 张莹
受保护的技术使用者：卓和药业集团股份有限公司
技术研发日：2021.12.27
技术公布日：2022/4/1