用于分析物的检测和分析的多重的通过连接共定位测定法的制作方法

背景技术：

1、生物细胞和生物分子(例如红细胞、白细胞、血小板、蛋白质、dna和rna)的快速和特异性检测在多个领域(例如基因组学、蛋白质组学、诊断学、治疗学和病理学研究)中变得越来越重要。例如，快速准确地检测特定抗原和病毒对于防治流行病(例如aids、流感和其他感染性疾病)来说是至关重要的。基因组技术的成熟和个性化医疗的进步将需要更快速、更灵敏的测定法来检测和量化大量细胞和生物分子。医学研究的进展将越来越依赖于通过蛋白质组学对多种蛋白质进行准确、及时和具有成本效益的评估。然而，目前的自动化、高灵敏度和低成本的测定法不能高效或有效地进行多重分析。

技术实现思路

1、本文提供了用于高分辨率检测和/或量化样品中分析物的组合物和方法。本文所描述的所提供的组合物和方法部分地具有能够在样品中对分析物进行高分辨率和多重检测的优点。因此，本文提供了检测和/或量化样品中分析物的方法，所述方法包括：(a)使样品与复合物接触，所述复合物包括：(i)支持物，(ii)可释放地偶联至所述支持物的捕获试剂，(iii)可释放地偶联至所述支持物的检测试剂，其中所述捕获试剂和所述检测试剂被配置成同时与所述分析物结合；(b)使所述检测试剂从所述支持物解偶联；(c)使所述捕获试剂从所述支持物解偶联；和(d)检测所释放的检测试剂或捕获试剂中的一者或两者。

2、在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述支持物进一步包括第一锚元件和与其偶联的第二锚元件，并且其中所述捕获试剂通过所述第一锚元件可释放地偶联至所述支持物，并且所述检测试剂通过所述第二锚元件可释放地偶联至所述支持物。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述捕获试剂包括与其偶联的第一钩元件，并且其中所述第一钩元件可释放地偶联至所述第一锚元件。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述检测试剂包括与其偶联的第二钩元件，并且其中所述第二钩元件可释放地偶联至所述第二锚元件。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(1)所述捕获试剂包括与其偶联的第一钩元件，并且其中所述第一钩元件可释放地偶联至第一锚元件，并且(2)所述检测试剂包括与其偶联的第二钩元件，并且其中所述第二钩元件可释放地偶联至所述第二锚元件。

3、在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述支持物进一步包括与其偶联的锚元件，并且其中所述捕获试剂通过所述锚元件可释放地偶联至所述支持物，并且所述检测试剂通过所述锚元件可释放地偶联至所述支持物。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(1)所述捕获试剂包括与其偶联的第一钩元件，并且其中所述第一钩元件可释放地偶联至所述锚元件，并且(2)所述检测试剂包括与其偶联的第二钩元件，并且其中所述第二钩元件可释放地偶联至所述锚元件。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(b)的解偶联包括施加使所述检测试剂从所述支持物解偶联的刺激。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(b)或(c)的解偶联包括施加使所述捕获试剂从所述支持物解偶联的刺激。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述刺激是热刺激、光刺激、化学刺激、机械刺激、辐射刺激、生物刺激或它们的任何组合。

4、在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(b)的解偶联包括提供使所述检测试剂从所述支持物解偶联的置换剂。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(b)或(c)的解偶联包括提供使所述捕获试剂从所述支持物解偶联的置换剂。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(d)的检测包括识别对应于所述检测试剂或所述捕获试剂的核酸分子。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中识别核酸分子包括进行测序反应、pcr、qpcr或基于核酸探针的测定。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述核酸分子包括条形码序列、独特分子标识符序列、引物结合序列或它们的组合。

5、在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(b)的解偶联包括提供使所述检测试剂从所述支持物解偶联的可检测置换剂。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述可检测置换剂是寡核苷酸。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述寡核苷酸包括条形码序列、独特分子标识符序列、引物结合序列或它们的组合。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(b)或(c)的解偶联包括提供使所述捕获试剂从所述支持物解偶联的可检测置换剂。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述可检测置换剂是寡核苷酸。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述寡核苷酸包括条形码序列、独特分子标识符序列、引物结合序列或它们的组合。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(e)的检测包括检测置换剂。

6、在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中在(d)之后，所述方法包括在第二支持物上捕获所述检测试剂和/或所述捕获试剂。

7、还提供了处理分析物以检测和量化分析物的方法，所述方法包括：(a)使包括分析物的样品与复合物接触，所述复合物包括：(i)支持物，(ii)附接至所述支持物的捕获试剂，(iii)附接至所述支持物的检测试剂，从而产生分析物结合复合物，所述分析物结合复合物包括偶联至所述捕获试剂和所述检测试剂的分析物；(b)使所述检测试剂从所述支持物解偶联；和(c)使所述捕获试剂从所述支持物解偶联，其中所述检测试剂包括可检测元件。

8、在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述可检测元件是被配置成通过测序反应、核酸扩增反应进行检测或偶联至标记探针(例如可检测置换剂)进行检测的核酸序列。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述支持物进一步包括第一锚元件和与其偶联的第二锚元件，并且其中所述捕获试剂通过所述第一锚元件可释放地偶联至所述支持物，并且所述检测试剂通过所述第二锚元件可释放地偶联至所述支持物。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述第一锚元件包括第一锚寡核苷酸，并且所述第二锚元件包括第二锚寡核苷酸。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述捕获试剂包括与其偶联的第一钩元件，并且其中所述第一钩元件可释放地偶联至所述第一锚元件。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述检测试剂包括与其偶联的第二钩元件，并且其中所述第二钩元件可释放地偶联至所述第二锚元件。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(1)所述捕获试剂包括与其偶联的第一钩元件，并且其中所述第一钩元件可释放地偶联至所述第一锚元件，并且(2)所述检测试剂包括与其偶联的第二钩元件，并且所述第二钩元件可释放地偶联至所述第二锚元件。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述支持物进一步包括与其偶联的锚元件，并且其中所述捕获试剂通过所述锚元件可释放地偶联至所述支持物，所述并且检测试剂通过所述锚元件可释放地偶联至所述支持物。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(1)所述捕获试剂包括与其偶联的第一钩元件，并且其中所述第一钩元件可释放地偶联至所述锚元件，并且(2)所述检测试剂包括与其偶联的第二钩元件，并且其中所述第二钩元件可释放地偶联至所述锚元件。

9、在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述第一钩元件包括第一钩寡核苷酸，并且所述第二钩元件包括第二钩寡核苷酸。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述第一钩寡核苷酸和所述第二钩寡核苷酸中的一者或两者包括条形码序列、独特分子标识符序列、引物结合序列或它们的组合。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述方法进一步包括(e)检测所述检测试剂。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(e)的检测包括识别对应于所述检测试剂的核酸分子。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中识别所述核酸分子包括进行测序反应、pcr、qpcr或基于核酸探针的测定。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述核酸分子包括条形码序列、独特分子标识符序列、引物结合序列或它们的组合。

10、在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(b)的解偶联包括提供使所述检测试剂从所述支持物解偶联的可检测置换剂。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述可检测置换剂是寡核苷酸。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述寡核苷酸包括条形码序列、独特分子标识符序列、引物结合序列或它们的组合。

11、在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(b)或(c)的解偶联包括提供使所述捕获试剂或所述检测试剂从所述支持物解偶联的可检测置换剂。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述可检测置换剂是寡核苷酸。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述寡核苷酸包括条形码序列、独特分子标识符序列、引物结合序列或它们的组合。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中在(d)之后，所述方法包括在第二支持物上捕获所述检测试剂和/或所述捕获试剂。

12、进一步提供了检测和/或量化样品中分析物的方法，所述方法包括：(a)使样品与复合物接触，所述复合物包括：(i)支持物和(ii)可释放地偶联至所述支持物的捕获试剂；(b)提供检测试剂，其中所述捕获试剂和所述检测试剂被配置成同时与所述分析物结合；(c)使所述检测试剂从所述支持物解偶联；(d)使所述捕获试剂从所述支持物解偶联；和(e)检测所释放的检测试剂或捕获试剂中的一者或两者。还提供了处理分析物以检测和量化分析物的方法，所述方法包括：(a)使包括分析物的样品与复合物接触，所述复合物包括：(i)支持物和(ii)附接至所述支持物的捕获试剂，从而产生偶联至所述捕获试剂的分析物；(b)使分析物结合复合物与所述检测试剂接触，所述检测试剂被配置成偶联至所述分析物并且偶联至所述支持物，从而产生包括偶联至所述捕获试剂和所述检测试剂的所述分析物的所述分析物结合复合物；和(c)使所述捕获试剂和所述检测试剂中的至少一者从所述支持物解偶联，其中所述检测试剂中的至少一者包括可检测元件。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述捕获试剂和所述检测试剂中的至少一者被配置成通过测序反应、核酸扩增反应(例如pcr)或偶联至标记剂(例如置换试剂)进行检测。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述方法进一步包括(d)检测所述捕获试剂和所述检测试剂中的至少一者。

13、在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述支持物进一步包括第一锚元件和与其偶联的第二锚元件，并且其中所述捕获试剂通过所述第一锚元件可释放地偶联至所述支持物，并且所述检测试剂通过所述第二锚元件可释放地偶联至所述支持物。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述第一锚元件包括第一锚寡核苷酸，并且第二锚元件包括第二锚寡核苷酸。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述捕获试剂包括与其偶联的第一钩元件，并且其中所述第一钩元件可释放地偶联至所述第一锚元件。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述检测试剂包括与其偶联的第二钩元件，并且其中所述第二钩元件被配置成可释放地偶联至所述第二锚元件。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(i)所捕获试剂包括与其偶联的第一钩元件，并且其中所述第一钩元件可释放地偶联至所述第一锚元件，并且(ii)所述检测试剂包括与其偶联的第二钩元件，并且其中所述第二钩元件被配置成可释放地偶联至所述第二锚元件。

14、在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述支持物进一步包括与其偶联的锚元件，并且其中所述捕获试剂通过所述锚元件可释放地偶联至所述支持物，并且通过所述锚元件可释放地偶联至所述支持物，并且所述检测试剂被配置成通过所述锚元件可释放地偶联至所述支持物。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(i)所述捕获试剂包括与其偶联的第一钩元件，并且其中所述第一钩元件可释放地偶联至所述锚元件，并且(ii)所述检测试剂包括与其偶联的第二钩元件，并且其中所述第二钩元件可释放地偶联至所述锚元件。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述第一钩元件包括第一钩寡核苷酸，并且所述第二钩元件包括第二钩寡核苷酸。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述第一钩寡核苷酸和所述第二钩寡核苷酸中的一者或两者包括条形码序列、独特分子标识符序列、引物结合序列或它们的组合。

15、在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(b)或(c)的解偶联包括提供使所述检测试剂从所述支持物解偶联的可检测置换剂。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述可检测置换剂是寡核苷酸。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述寡核苷酸包括条形码序列、独特分子标识符序列、引物结合序列或它们的组合。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(b)或(c)的解偶联包括提供使所述捕获试剂从所述支持物解偶联的可检测置换剂。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述可检测置换剂是寡核苷酸。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述寡核苷酸包括条形码序列、独特分子标识符序列、引物结合序列或它们的组合。

16、在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(i)所述分析物是抗体分子，(ii)所述捕获试剂是抗原，并且(iii)所述检测试剂对免疫球蛋白类别igg、igm、iga、igd或ige具有特异性。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述检测试剂包括抗igg抗体、抗igm抗体、抗iga抗体、抗igd抗体或抗ige抗体。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述检测试剂包括蛋白a、蛋白g或蛋白m。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(i)所述分析物是包括翻译后修饰的蛋白质，(ii)所述捕获试剂结合所述蛋白质，并且(iii)所述检测试剂对翻译后修饰或包括翻译后修饰的蛋白质具有特异性。

17、本文提供了检测样品中分析物的方法，所述方法包括：(a)使样品与复合物接触，所述复合物包括：(i)支持物，(ii)偶联至所述支持物的第一捕获试剂和第一检测试剂，其中所述第一捕获试剂和所述第一检测试剂被配置成同时偶联至所述样品中的第一分析物，以及(iii)偶联至所述支持物的第二捕获试剂和第二检测试剂，其中所述第二捕获试剂和第二检测试剂被配置成同时偶联至第二分析物；(b)提供第一置换试剂，其被配置成使所述第一检测试剂和/或所述第二检测试剂从所述支持物解偶联；(c)提供第二置换试剂，其被配置成使所述第一捕获试剂和/或所述第二捕获试剂从所述支持物解偶联；和(d)检测(i)解偶联的第一捕获试剂和解偶联的第一检测试剂，和/或(ii)解偶联的第二捕获试剂和解偶联的第二检测试剂中的至少一者。还提供了处理分析物以检测和量化分析物的方法，所述方法包括：(a)使样品与复合物接触，所述复合物包括：(i)支持物，(ii)偶联至所述支持物的第一捕获试剂和第一检测试剂，其中所述第一捕获试剂和所述第一检测试剂被配置成同时偶联至所述样品中的第一分析物，以及(iii)偶联至所述支持物的第二捕获试剂和第二检测试剂，其中所述第二捕获试剂和所述第二检测试剂被配置成同时偶联至第二分析物；(b)使分析物结合复合物与检测试剂接触，所述检测试剂被配置成偶联至所述分析物并且偶联至所述支持物，从而产生包括偶联至所述捕获试剂和所述检测试剂的所述分析物的分析物结合复合物；和(c)使所述捕获试剂和所述检测试剂中的至少一者从所述支持物解偶联；并且其中(i)所述第一捕获试剂和所述第二捕获试剂，和/或(ii)所述第一检测试剂和所述第二检测试剂中的至少一者包括可检测元件。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(i)所述第一捕获试剂和所述第二捕获试剂，和/或(ii)所述第一检测试剂和所述第二检测试剂中的至少一者被配置成通过测序反应、核酸扩增反应(例如pcr)或偶联至标记剂(例如置换试剂)进行检测。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述方法进一步包括(d)检测(i)解偶联的第一捕获试剂和解偶联的第一检测试剂，和/或(ii)解偶联的第二捕获试剂和解偶联的第二检测试剂中的至少一者。

18、在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述支持物进一步包括与其偶联的第一锚元件、第二锚元件、第三锚元件和第四锚元件，并且其中(i)所述第一捕获试剂通过所述第一锚元件可释放地偶联至所述支持物，并且所述第一检测试剂通过所述第二锚元件可释放地偶联至所述支持物，并且(ii)所述第二捕获试剂通过所述第三锚元件可释放地偶联至所述支持物，并且所述第二检测试剂通过所述第四锚元件可释放地偶联至所述支持物。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述第一锚元件包括第一锚寡核苷酸，所述第二锚元件包括第二锚寡核苷酸。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(i)所述第一捕获试剂包括与其偶联的第一钩元件，并且所述第二捕获试剂包括与其偶联的第三钩元件，并且(ii)所述第一钩元件可释放地偶联至所述第一锚元件，并且所述第二钩元件可释放地偶联至所述第三锚元件。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(i)所述第一检测试剂包括与其偶联的第二钩元件和与其偶联的第四检测钩元件，并且(ii)所述第二钩元件被配置成可释放地偶联至所述第二锚元件，所述第四钩元件被配置成可释放地偶联至所述第四锚元件。

19、在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(i)所述第一捕获试剂包括与其偶联的第一钩元件，并且所述第二捕获试剂包括与其偶联的第三钩元件，并且(ii)所述第一钩元件可释放地偶联至所第一锚元件，并且所述第二钩元件可释放地偶联至所述第三锚元件；并且其中(iii)所述第一检测试剂包括与其偶联的第二钩元件和与其偶联的第四检测钩元件，并且(iv)所述第二钩元件被配置成可释放地偶联至所述第二锚元件，并且所述第四钩元件被配置成可释放地偶联至所述第四锚元件。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述支持物进一步包括与其偶联的第一锚元件和与其偶联的第二锚元件，并且其中(i)所述第一捕获试剂通过所述第一锚元件可释放地偶联至所述支持物，并且所述第一检测试剂被配置成通过所述第一锚元件可释放地偶联至所述支持物，并且(ii)所述第二捕获试剂通过所述第二锚元件可释放地偶联至所述支持物并且第二检测试剂被配置成通过第二锚元件可释放地偶联至支持物。

20、在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述第一钩元件包括第一钩寡核苷酸，所述第二钩元件包括第二钩寡核苷酸，所述第三钩元件包括第三钩寡核苷酸，和/或所述第四钩元件包括第四钩寡核苷酸。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中第一钩寡核苷酸、第二钩寡核苷酸、第三钩寡核苷酸和第四钩寡核苷酸中的至少一种包括条形码序列、独特分子标识符序列、引物结合序列或它们的组合。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中(b)或(c)的解偶联包括提供使捕获试剂与支持物解偶联的置换剂。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述可检测置换剂是寡核苷酸。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述寡核苷酸被配置成被检测。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述寡核苷酸包括条形码序列、独特分子标识符序列、引物结合序列或它们的组合。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中所述寡核苷酸包括荧光标记。

21、进一步提供了通过连接共定位测定组合物(co-localization by linkage assaycomposition)，其包括：复合物，所述复合物包括(i)支持物，(ii)可释放地偶联至支持物的捕获试剂，(iii)可释放地偶联至支持物的检测试剂，其中捕获试剂和检测试剂被配置成同时结合到分析物。在一些实施方案中，提供了前述实施方案中任一个所述的方法，其中用于前述方法中的任一项。还提供了通过连接共定位测定组合物，其包括复合物，所述复合物包括：(i)支持物，(ii)偶联至支持物的第一捕获试剂和第一检测试剂，其中第一捕获试剂和第一检测试剂被配置成同时偶联至所述样品中的第一分析物，以及(iii)偶联至支持物的第二捕获试剂和第二检测试剂，其中第二捕获试剂和第二检测试剂被配置成同时偶联至第二分析物。

22、援引并入

23、本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度如同每个单独的出版物、专利或专利申请被具体地且单独地指示通过引用并入的程度。