本发明汇集了用于疾病的快速分子诊断的装置和方法。更准确地说，其为旨在通过等温dna/rna扩增进行病原体检测的平台，其可用于对人类健康具有重要意义的疾病(包括covid-19)的诊断。其还可以重编程和/或配置用于诊断兽医疾病、健康监测或农业综合企业的重要性。
背景技术：
：：1、环介导等温dna/rna扩增技术，也称为lamp(loop-mediated isothermalamplification)，可应用于开发用于鉴定不同病原体的诊断测试。它是一种使用4到6个引物扩增核酸的技术，这些引物被设计为通过产生有助于通过dna聚合酶合成新核酸分子的茎环结构来扩增靶标序列。lamp技术在恒定温度(通常为60-65℃)进行，并且由于它使用多个引物来扩增靶标序列，因此它也具有高度特异性。2、lamp技术已越来越多地用作检测分子靶标(dna/rna)的替代方法，因为它具有高灵敏度、特异性、反应时间减少以及不需要复杂的实验室结构来进行等温扩增反应的优点。3、lamp测定在所谓的lamp测定室或本报告中采用的lamp测定装置中进行，其允许通过加热装置内部的测定室来扩增样品中的遗传物质(dna或rna)以用于病原体检测和疾病诊断。4、在这些测定中，概括地说，将试剂添加到待分析的生物样品中，并将该组在lamp测定室中加热到给定温度，通常范围为60-65℃。然后在测定过程中监测这些样品，其结果可以通过反应中颜色(或荧光)的变化来测量，指示阳性样品，使用可置换探针进行实时读数以构建荧光对时间曲线，并确认相关病原体的存在。5、lamp测定室的几种设置从现有技术中已知，这将在以下段落中描述。6、文献cn203720089u描述了一种lamp反应的荧光强度分析仪，其包括计算机数据处理装置、光学传感器、恒温加热板和uv光源。恒温加热板由底座和空心圆柱体组成，其中放置有由透光材料制成的反应管。圆柱体的侧壁上有孔，在一侧与外部紫外光源对准，并且在另一侧与光学传感器对准，所述光学传感器通过电缆连接到计算机数据处理装置。该传感器能够比较sybr green“染料”(一种dna嵌入荧光团，其在双链分子存在的情况下发出荧光)发出的荧光的强度，作为扩增的dna量增加的间接测量。通过这种方式，可以实时推断给定靶标(或基因)的量化。一种有用的策略例如计算样品之间的病毒载量。7、nature的文章"a smartphone-based diagnostic platform for rapiddetection of zika,chikungunya,and dengue viruses"(priye等人,2017)描述了用于lamp测定的3d打印装置的开发，该装置结合基于智能手机的检测系统，可以同时诊断寨卡病毒、登革病毒和基孔肯雅病毒。盒形装置由三个主要组件组成：(i)加热模块(由与反应模块的管接触的平坦加热表面组成)；(ii)反应模块；以及(iii)检测模块(由安装在表面上的紧凑型led和与其连接的作为激发源的多通道带式滤波器组成)和图像分析(反应中发出的荧光信号由智能手机摄像头捕获，并由特定应用程序进行分析)。这三个组件由智能手机app通过蓝牙连接并远程控制。8、文献"simultaneous and high sensitive detection of salmonella typhiand salmonella paratyphi a in human clinical blood samples using anaffordable and portable device"(kaur等人,2019)提出了一种基于lamp的用于检测人类血液样品中细菌的系统，该系统由lamp扩增单元和检测单元组成，lamp扩增单元由多个筒式加热器和温控介质组成。为了进行检测，将sybr green染料添加到样品中，并将管放置在3d打印的便携式设备中，其中存在以电子方式控制的在管上方的led光源和与管成直角定位的光电探测器。该设备通过蓝牙与智能手机进行通信，所述智能手机使用可以显示、记录和存储每位患者详细信息的应用程序。9、lamp测定的操作化中的一些技术限制使得难以建立可重复且高效的测试。这些点之一与确保反应管内的均匀温度控制有关。在这方面，使用采用对流加热或仅与反应管的一部分表面接触的加热板的室不能在反应流体中提供令人满意的温度平衡。另一个限制因素涉及需要准确读取反应引起的颜色变化。在这方面，使用传感器代替目视检查至关重要。此外，传感器的类型及其相对于反应管的定位对测定的执行有很大影响。10、除上述之外，sars-cov-2病毒(称为covid-19的综合症的病原体)的快速传播给全球公共卫生带来了诸多挑战。由于这种新型冠状病毒的观察到的发病率和死亡率、高传染性和感染性潜力，此外相对于其它病毒性呼吸道感染甚至其它病因的临床鉴别诊断几乎不可能，因此必须应用灵敏的鉴别诊断系统。11、因此，covid-19大流行的到来给医院机构的处理带来了新的挑战。因此，有必要扩大对医院看到的疑似病例的诊断能力，无论是与患者有关，或甚至与直接接触的医护人员有关。12、这些专业人员在他们的护理期间暴露于病毒，使该专业人员群体的感染风险增加，由于临床怀疑而产生一系列病假请求，其中许多没有诊断确认。这是一个与人事管理相关的严重问题，导致工作团队经常缺勤，并成为向民众提供援助的瓶颈。13、自从报道了流行病的爆发，就发布了多种用于通过实时逆转录pcr(rt-pcr)来检测sars-cov-2的方案。然而，开发利用iot(物联网)技术的更简单、更便宜、更灵活的诊断系统变得相关且非常期望，因为目前巴西国家建立的大规模诊断能力和用户访问公共卫生系统(诸如sus)的可用性受到严重限制。14、在分子诊断中实施解决方案的主要限制是高成本、需要足够的基础设施和人员培训。由于需求量大，尽管做出了努力，但最近在巴西乃至全球范围内，无论是在公共部门还是私营部门，大规模检测sars-cov-2疑似病例都存在巨大困难。尽管有效，但rt-pcr技术是集中提供的，没有足够的投入生产来服务于人群，导致系统根据严重程度标准优先诊断。15、因此，根据引用的现有技术文件，注意到现有技术包括许多具有不同配置的lamp测定反应和读取设备。然而，很明显，仍然可以提出许多改进，特别是关于原位进行lamp测定的有效性，因为到目前为止还没有一种单一的lamp测定装置被确定为克服反应温度控制和准确颜色变化读取的限制的技术解决方案。16、因此，如将在以下部分中进一步详述的，本发明旨在提出一种lamp测定装置，其包括有助于其使用并使测试的执行更有效的配置特征。17、本发明还公开了一种基于lamp方法的疾病诊断方法。例如，该方法用于诊断虫媒病毒，诸如寨卡病毒、登革病毒、基孔肯雅病毒和黄热病毒，以及sars-cov-2。技术实现思路1、本发明旨在提供一种应用于病原体鉴定的lamp测定装置，能够在远程位置应用于登革病毒、寨卡病毒、基孔肯雅病毒、黄热病毒和sars.cov-2等病原体的诊断。2、lamp测定装置由与智能手机、平板电脑或计算机兼容的多平台软件控制。该应用程序通过无线连接与装置的固件通信，后者负责管理热控制、读取传感器，以及通过与智能手机、平板电脑或计算机兼容的图像处理多平台软件自动解释结果。该应用程序通过无线连接与设备的固件通信，后者负责管理热控制、读取传感器，以及通过图像处理自动解释结果。除了图形人机界面外，该软件还具有本地数据库、地理配准，并在连接到互联网时自动与web服务器建立通信，能够通过数据挖掘技术(data mining techniques)集中数据和编制报告。存在敏感信息泄露的风险，因为它是一种iot(物联网)设备，其中患者/客户数据通过互联网连接发送到服务器。因此，整个系统是根据个人数据保护一般法(general law ofpersonal dataprotection)(lgpd或lgpdp)第13.709/2018号法开发的。软件和web系统都在保证数据完整性和安全性的加密协议和安全例程下工作。3、为实现上述目的，本发明提供了一种应用于病原体鉴定的促进等温rna/dna扩增的lamp测定装置，其包括：lamp测定室；柜内的隔间，用于正确包装装置电子设备，电源装置；和用于关闭lamp测定室的上盖，其中所述装置在内部包括：圆柱形金属热块，其包括用于定位微管的开口；包含电源电子板的电子设备；至少一个加热元件，其与热块接触并适于通过感应加热热块微管；温度传感器，其适于测量热块的温度；rgb led，其定位在暗室的下部，靠近下方相机并且适于激发定位在热块中的每个微管；相机，其定位在热块下方并适于捕获位于热块中的每个微管的图像；和具有中央处理的控制板，其负责对由相机捕获的图像进行处理、控制热块内的温度并且与用户设备(平板电脑、计算机、智能手机等)进行通信。4、此外，本发明还提供了一种从如上所述的lamp和rt-lamp测定装置中鉴定病原体的方法。当前第1页12当前第1页12