用于检测血吸虫感染的蛋白质的制作方法

本发明涉及用于检测血吸虫(schistosoma)感染的诊断工具的领域。本发明涉及能够单独或组合用于检测生物样品中抗血吸虫抗体以及用于诊断人的血吸虫感染的源自埃及血吸虫抗原的蛋白质。

背景技术：

1、由血吸虫属的寄生血吸虫感染引起的血吸虫病的全球负担为186万每伤残调整生命年。埃及血吸虫(schistosoma haematobium)是最常见的影响人类的物种，在全世界热带和亚热带地区预估感染的2亿人中，导致约半数人患有泌尿生殖系统血吸虫病(urogenitalschistosomiasis)(steinmann等lancet infect dis 2006；6(7):411-25)。此外，女性感染埃及血吸虫会极大地增加感染hiv/aids的风险(zirimenya等plos negl trop dis 2020；14(6):e0008383)，并且国际癌症研究机构(international agency for research oncancer，iarc)将泌尿生殖系统血吸虫病认为是1类致癌物，因为其与膀胱的鳞状细胞癌相关联(moller等international journal of cancer journal international du cancer1995；60(5):587-9)。血吸虫病干预议程的重点正从控制发病率转向根除血吸虫病，世界卫生组织(who)既定目标是消除血吸虫病这一公共卫生问题并阻断选定地区的传播。因此，检测感染的方法必须在执行时具有适当的灵敏度和快速的速度，从而诊断新病例、评估控制措施的有效性并适用于大规模疾病监测。

2、虽然目前没有推荐用于检测血吸虫病的金标准，但是广泛使用的诊断感染的方法涉及显微镜检测尿液(泌尿生殖系统血吸虫病)或粪便(肠道血吸虫病)中的寄生虫卵，然而不幸的是，由于该技术依赖于卵排泄率，该方法在低传播区域表现出相对较差的灵敏度(engels等，am j trop med hyg 1996；54(4):319-24)，从而限制了其在地方流行性低的区域作为诊断工具的价值。然而，脱落的卵的数量取决于寄生虫负荷以及淡水接触量和强度。此外，卵脱落每天都在变化检测血液或尿液中循环血吸虫抗原的测试通常比传统显微镜检查更敏感，但并非没有局限性。检测尿液中循环阳极抗原(caa)的测定能够用作即时测试，其具有诊断中度至高水平曼氏血吸虫(s.mansoni)感染的优秀能力，但在检测埃及血吸虫感染中的性能较低(midzi等trans r soc trop med hyg2009；103(1):45-51)。已经证明检测尿液中诸如可溶性卵抗原(sea)等粗制寄生虫抗体的测定与尿卵和血清阳极抗原水平相关联(de dood等frontiers in immunology 2018；9:2635)，但是由于含有数千种血吸虫蛋白的提取物可能与其他蠕虫感染的抗体发生交叉反应，因此可能特异性和再现性较低。已经针对医学上重要的血吸虫开发了基于重组抗原的一系列免疫诊断(hinz等mol cellprobes 2017；31:2-21)。然而，现有的免疫诊断通常缺乏足够的特异性来区分不同的血吸虫种。此外，在血吸虫感染的特定情况下，由于一些感染个体只有低水平的抗体反应，这因为感染是最近发生的或者是由于年龄依赖性抗体反应，免疫诊断学达到高水平的灵敏度尤为重要。

3、因此，仍然需要在所有受感染的个体中，无论其感染的状态如何，具有诊断血吸虫所需的特异性和灵敏度并且可以区分埃及血吸虫感染和其他血吸虫种感染的诊断工具，特别是蛋白质或抗原。

技术实现思路

1、本发明提供了至少一种蛋白质用于检测来自人对象的生物样品中抗血吸虫抗体，优选抗埃及血吸虫抗体和/或用于诊断人对象中，优选来自人对象的生物样品中血吸虫感染的用途，所述蛋白质具有包含选自下组的序列或由其组成的序列：seq id no:1、seq idno:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9和seq id no:10，优选选自下组：seq id no:1、seq id no:2、seq id no:6和seq id no:7。

2、换言之，本发明提供了至少一种蛋白质在制备用于检测来自人对象的生物样品中抗血吸虫抗体和/或用于诊断来自人对象的生物样品中血吸虫感染的试剂盒中的用途，所述蛋白质具有包含选自下组的序列或由其组成的序列：seq id no:1、seq id no:2、seq idno:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9和seq id no:10。

3、本发明还提供了用于检测来自人对象的生物样品中抗血吸虫抗体，优选抗埃及血吸虫抗体的方法，所述方法包括以下步骤：

4、a.使所述生物样品与至少一种蛋白质接触，所述蛋白质具有包含选自下组的序列或由其组成的序列：seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9和seq id no:10；

5、b.确定所述生物样品中能够结合所述至少一种蛋白质的抗体的存在和/或数量。

6、本发明还提供了用于诊断人对象中的血吸虫感染，优选埃及血吸虫感染的方法，所述方法包括以下步骤：

7、a.使来自所述对象的生物样品与至少一种蛋白质接触，所述蛋白质具有包含选自下组的序列或由其组成的序列：seq id no:1,seq id no:2,seq id no:3,seq id no:4,seq id no:5,seq id no:6,seq id no:7,seq id no:8,seq id no:9和seq id no:10；

8、b.确定来自所述对象的生物样品中能够与所述至少一种蛋白质结合的抗体的数量。

9、本发明还提供了治疗感染血吸虫，优选埃及血吸虫的对象的方法，其包括以下步骤：

10、·根据本发明的方法诊断对象中是否存在埃及血吸虫感染，

11、·向诊断患有埃及血吸虫感染的对象给予适合埃及血吸虫感染的治疗。

12、本发明还提供了试剂盒，优选用于本文所定义的用途或方法，所述试剂盒包含至少一种蛋白质以及任选地带有关于如何使用所述至少一种蛋白质的说明的说明书，所述蛋白质具有包含选自下组的序列或由其组成的序列：seq id no:1,seq id no:2,seq id no:3,seq id no:4,seq id no:5,seq id no:6,seq id no:7,seq id no:8,seq id no:9和seq id no:10。

13、定义

14、“蛋白质”、“多肽”和“肽”在本文中指包含通过肽键连接的氨基酸的分子。通常，“肽”用于指20个或更少氨基酸的序列，而“多肽”用于指大于50个氨基酸的序列。然而，在本技术中，为了清楚和便于阅读，本发明中的“蛋白质”、“多肽”和“肽”统称为“蛋白质”。根据本发明的蛋白质、多肽和肽可以通过重组过程纯化、产生(即，在生物体、宿主细胞或无细胞系统中表达编码肽、多肽或蛋白质的外源核酸)或者通过化学合成生产。

15、就测试、测定或诊断而言，“灵敏度”在本文中指测试检测患有疾病的真阳性对象在患有疾病对象的总组中的比例的能力。因此，其与测试识别患有疾病对象的潜力有关。

16、就测试、测定或诊断而言，“特异性”在本文中指测试正确检测出测试结果为阴性的未患病对象占未患病对象总数的比例的能力。换言之，特异性代表未患病对象中阴性测试结果的概率。因此，特异性涉及诊断准确性的方面，其描述了识别未患病对象的测试能力，即排除感兴趣的病症。

17、“抗体”在本文中通常指免疫球蛋白。当述及将根据本发明确定其存在和/或数量的抗体时，术语“抗体”指天然存在的抗体，也就是说来自对象的生物样品中将作为对象的免疫反应产物存在的抗体，与本应添加到生物样品和/或本应注射到患者体内的抗体相反。在本文中，术语抗体是指iga、igd、ige、igg和igm同种型的抗体。优选地，在本发明的上下文中，将根据本发明确定其存在和/或数量的抗体是igg同种型的抗体。在本发明的上下文中，术语“抗血吸虫抗体”指能够结合血吸虫抗原的天然存在的抗体。

18、当述及在测定或测试中用作生物学工具的抗体时，例如作为二抗和/或检测抗体时，术语“抗体”指适合该目的的任何类型的抗体，与来源物种或同种型无关。

19、序列

20、seq id no:1对应于ms3_013701的最小有用序列。

21、seq id no:2对应于sh-tsp-2的最小有用序列。

22、seq id no:3对应于ms3_09198的最小有用序列。

23、seq id no:4对应于ms3_10385的最小有用序列。

24、seq id no:5对应于ms3_10186的最小有用序列。

25、seq id no:6对应ms3_013701的序列。

26、seq id no:7对应sh-tsp-2的序列。

27、seq id no:8对应ms3_09198的序列。

28、seq id no:9对应ms3_10385的序列。

29、seq id no:10对应ms3_10186的序列。