一种抗干扰试剂及其应用的制作方法

1.本发明涉及生物检测技术领域，具体而言，涉及一种抗干扰试剂及其应用。


背景技术：

2.在临床检测中，有时会出现检测结果和患者临床症状不符的情况，尤其在抗原抗体的夹心反应中，如在化学发光、侧向层析、免疫比浊平台中，一旦样本基质中存在一些干扰物质时，必然会影响免疫反应的效率和反应结果的准确性，特别是在液态反应及对样本仅做低倍稀释的情况下更加明显。
3.在实际检测过程中，由于病人自身状态、饮食习惯、采样方式等影响，样本中的干扰情况很难清晰界定是某一种单一因素导致，更多情况下是多种干扰因素的集合，如何消除或减少假阴性或假阳性结果是如今亟待解决的问题之一。
4.鉴于此，特提出本发明。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种抗干扰试剂及其应用。
6.本发明是这样实现的：
7.第一方面，本发明实施例提供了一种抗干扰试剂，按重量份数计，其包括：0.1～1份阻断剂、10～25份非离子表面活性剂以及5～20份无脂肪蛋白；其中，所述阻断剂包括主动阻断剂和被动阻断剂，所述主动阻断剂选自抗hama多抗和抗rf多抗中的至少一种；所述被动阻断剂选自鼠igg、山羊igg和牛igg中的至少一种。
8.第二方面，本发明实施例提供了如前述实施例所述的抗干扰试剂在免疫检测中的应用，所述免疫检测不以疾病的诊断或直接为直接目的。
9.第三方面，本发明实施例提供了如前述实施例所述的抗干扰试剂在制备样品垫处理液中的应用。
10.第四方面，本发明实施例提供了一种样品垫处理液，其包括：如前述实施例所述的抗干扰试剂。
11.第五方面，本发明实施例提供了如前述实施例所述的抗干扰试剂或如前述实施例所述的样品垫处理液在制备免疫层析试纸条中的应用。
12.第六方面，本发明实施例提供了一种免疫层析试纸条，其包括底板以及依次搭接并承载于所述底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫为纤维膜经如前述实施例所述的样品垫处理液浸泡后干燥获得。
13.本发明具有以下有益效果：
14.本发明针对现有抗原抗体夹心反应时所遇到的干扰情况下，提供了一种能减少免疫检测样本中干扰的试剂，按重量份数计，该试剂包括0.1～1份阻断剂、10～25份非离子表面活性剂以及5～20份无脂肪蛋白，可直接加入检测系统，能有效避免或减少样本测试中的假性结果，维持检测结果的准确度和稳定性。
附图说明
15.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
16.图1为实际值和血浆测试值以及血浆和全血测试值的相关性比较结果；
17.图2为配方4和配方5的稳定性结果。
具体实施方式
18.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
19.本发明实施例提供了一种抗干扰试剂，按重量份数计，其包括：0.1～1份阻断剂、10～25份非离子表面活性剂以及5～20份无脂肪蛋白；其中，所述阻断剂包括主动阻断剂和被动阻断剂，所述主动阻断剂选自抗hama多抗和抗rf多抗中的至少一种；所述被动阻断剂选自鼠igg、山羊igg和牛igg中的至少一种。
20.本发明从两方面减少样本检测中的干扰对测试结果的影响，一方面是添加抗干扰试剂与干扰物结合，通过位阻原理减少干扰物进一步与检测微球作用，另一方面是封闭检测微球表面的非特异性部分从而减少干扰物的非特异性干扰。主动阻断剂和被动阻断剂可以减少内源性干扰因素，非离子表面活性剂和无脂肪蛋白可以封闭微球表面，减少脂血对检测结果的干扰。
21.上述限定的各组分的浓度有利于保持试剂的稳定性，进一步提高检测的准确度。
22.阻断剂的重量份数可以在0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0份中的任意一项或任意两项之间的范围。
23.非离子表面活性剂在抗干扰试剂中的重量份数可以10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24和25份中的任意一项或任意两项之间的范围。
24.无脂肪蛋白在抗干扰试剂中的重量份数可以为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19和20份中的任意一项或任意两项之间的范围。
25.优选地，所述主动阻断剂和所述被动阻断剂的质量比为(0.2～0.3)：(0.7～1.0)，该配比能进一步增加试剂的稳定性和检测的准确度。该质量比具体可以为0.2：0.7、0.2：0.8、0.2：0.9、0.2：1.0、0.3：0.7、0.3：0.8、0.3：0.9、0.3：1.0中的任意比例。
26.优选地，所述被动阻断剂包括鼠igg、山羊igg和牛igg；
27.优选地，所述被动阻断剂中，鼠igg、山羊igg和牛igg的质量比为0.1：(0.2～0.4)：(0.2～0.4)，该配比优选为0.1：0.3：0.3。
28.优选地，所述非离子表面活性剂选自brij35、tetronic1307和tween20中的至少一种。
29.优选地，所述无脂肪蛋白选自明胶和牛血清白蛋白中的至少一种。
30.本发明实施例提供了如前述任意实施例所述的抗干扰试剂在免疫检测中的应用，
所述免疫检测不以疾病的诊断或治疗为直接目的。
31.免疫检测包括抗原抗体夹心法，比如在化学发光、侧向层析和免疫比浊平台中进行的。
32.所述免疫检测不以疾病的诊断或治疗为直接目的，而是以检测样本中的靶标物以及如何更有效地实现检测作为直接目的。比如，当待测样本为采集的环境样本，而检测的直接目的则是检测样本中是否存在靶标物。
33.本发明实施例还提供了如前述任意实施例所述的抗干扰试剂在制备样品垫处理液中的应用。
34.本文中的“样品垫处理液”理解为免疫层析试纸条中制备样品垫所需的样品垫处理液。
35.本发明实施例提供了一种样品垫处理液，其包括：如前述任意实施例所述的抗干扰试剂。
36.优选地，在样品垫处理液中，抗干扰试剂各组分的作用浓度如下：0.1～1mg/ml阻断剂、10～25mg/ml非离子表面活性剂以及5～20mg/ml无脂肪蛋白。在该范围限定下，样品垫处理液的技术效果更优。具体地，阻断剂的作用浓度可以为0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.7mg/ml、0.8mg/ml、0.9mg/ml、1mg/ml中的任意一项或任意两项之间的范围。
37.非离子表面活性剂的作用浓度可以为10mg/ml、11mg/ml、12mg/ml、13mg/ml、14mg/ml、15mg/ml、16mg/ml、17mg/ml、18mg/ml、19mg/ml、20mg/ml、21mg/ml、22mg/ml、23mg/ml、24mg/ml、25mg/ml中的任意一项或任意两项之间的范围。
38.无脂肪蛋白的作用浓度可以为5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml、11mg/ml、12mg/ml、13mg/ml、14mg/ml、15mg/ml、16mg/ml、17mg/ml、18mg/ml、19mg/ml、20mg/ml中的任意一项或任意两项之间的范围。
39.所述样本垫处理液还包括处理液基质，处理液基质可以选择现有已知的样本垫处理液，在优选实施方案中，处理液基质包括：2％～10％蔗糖、2％～10％无水乙醇、0.001％～0.1％防腐剂和79.9％～95.9％磷酸缓冲液。需要说明的是，这里的“％”是指质量体积比，比如10％表示10g/100ml。
40.本发明实施例还提供了如前述任意实施例所述的抗干扰试剂或如前述实施例所述的样品垫处理液在制备免疫层析试纸条中的应用。
41.此外，本发明实施例还提供了一种免疫层析试纸条，其包括底板以及依次搭接并承载于所述底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫为玻璃纤维膜经如前述实施例所述的样品垫处理液浸泡后干燥获得。
42.可以理解的是，除样品垫的其他部分的制备均可参照现有公开的工艺流程进行制备，样品垫处理液的浸泡和干燥的具体参数液可以参照现有流程，优选为置于真空干燥箱中干燥2h。只要是采用了本发明实施例提供的样品垫处理液进行样品垫的制备，即属于本发明的保护范围。
43.优选地，所述免疫层析试纸条的检测靶标物为b型利钠肽抗体(bnp)、n端脑钠肽前体抗体、c反应蛋白和降钙素原抗体中的任意一种。
44.以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
45.实施例1
46.一种抗干扰试剂，配方见表1。
47.表1抗干扰试剂的配方
[0048][0049]
设置7组实验组，每组采用其中一个配方制备的抗干扰试剂，添加入处理液基质(5％蔗糖、5％无水乙醇、0.1％防腐剂和89.9％磷酸缓冲液)中获得样品垫处理液，进行b型利钠肽(bnp)免疫层析试纸条的制备，并对临床样本进行测试验证。
[0050]
b型利钠肽免疫层析试纸条的制备方法如下：
[0051]
(1)样品垫的制备：用样品垫处理液浸泡玻璃纤维膜，置于真空干燥箱中，干燥2h，备用。
[0052]
(2)结合垫的制备：用包含bnp检测抗体的荧光微球的结合垫处理液浸泡玻璃纤维膜，置于真空干燥箱中，干燥2h，备用。
[0053]
(3)将2mg/ml bnp捕获抗体和2mg/ml羊抗鼠多克隆抗体分别用划膜包被液以0.75μl/cm的出液量固定于硝酸纤维素膜上作为测试线和质控线，37℃干燥2h，备用。所述划膜包被液为10mm bis-tris ph＝7.3，1％蔗糖和1.5％海藻糖，0.5％bsa，0.02％proclin300。
[0054]
(4)在pvc底板上依次粘贴：样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫，并用斩切机切成3.2mm宽的试纸条。
[0055]
(5)将切好的试纸条装进塑料卡里，通过压壳机，完成试纸条。
[0056]
检测结果见表2。
[0057]
表2不同配方的样本测试结果
[0058][0059]
备注：无阻断剂的成分同样品垫处理液基质
[0060]
如表2所示，配方1～7均可以有效降低hama对测试的影响。
[0061]
同时，对实际值和各条件下的测试值做相关性(r2)比较即以实际值作为x，各配方下测试值作为y，建立一次函数关系，结果如表3所示。
[0062]
表3不同配方下样本相关性
[0063][0064][0065]
配方4、5、6、7在0-5000pg/ml和0-2000pg/ml样本范围内的r2均表现在0.95以上，且斜率接近0.9-1.1，与无阻断剂情况相比，表示在该抗干扰试剂配方下，能够有效减少免疫检测样本中的干扰情况，改善临床相关性。
[0066]
实施例2
[0067]
用添加了配方5的试纸条对30例血浆和全血样本进行测试，其中有6例样本为脂血
样本(标注*)，测试结果见表4。
[0068]
表4血浆和全血测试结果
[0069][0070][0071]
测试结果如表4所示，并对实际值和血浆测试值以及血浆和全血测试值做相关性比较，如图1所示，相关性r2均表现在0.95以上，且斜率接近0.9-1.1，可见在该抗干扰试剂配方下，可以减少脂血对检测结果的干扰，且不受红细胞影响可以直接进行全血测试。
[0072]
实施例3
[0073]
将配方4、5、6、7的试纸条建立标准曲线后，取36个试纸条放置于室温环境(16-25℃)进行不同时间点的检测，实施方法如下：
[0074]
(1)建立标准曲线：用制备好的试纸条测试5500、3200、1600、1200、800、400、100、50、25、0pg/ml10个浓度，每个浓度重复三次取平均值。
[0075]
(2)将放置在室温的试纸条在第1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月的时间点时拿出来测试94和772pg/ml的抗原溶液。
[0076]
检测结果如表5和图2所示。
[0077]
表5试纸条室温稳定性
[0078][0079][0080]
表中用变异系数cv表示不同时间点测试抗原浓度的波动情况，若cv小则表示不同时间点的结果波动小，由cv结果可见配方5相比其他配方在12个月内的结果波动相对更小。图2中的虚线表示靶值
±
15％的结果，同样可以看出配方5相比其他配方相对更稳定。
[0081]
从上述结果可知，采用组合抗干扰试剂即主动阻断剂和被动阻断剂搭配非离子表面活性剂和无脂肪蛋白，可以通过与干扰物竞争作用及封闭检测微球表面的非特异性部分从而有效减少免疫检测样本中的干扰情况；同时按一定比例混合的组合抗干扰试剂，可以进一步提高试纸条的稳定性，从而提高检测的准确度。
[0082]
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。