一种基于氨基酸含量的蔬果营养功能功效的检测方法与流程

1.本发明涉及蔬果检测技术领域，具体为一种基于氨基酸含量的蔬果营养功能功效的检测方法。


背景技术：

2.蔬果，泛指蔬菜和水果，蔬果是我国国居民膳食中食物构成的主要组成部分，它们富含人体所必需的维生素、无机盐和膳食纤维，含蛋白质和脂肪很少，由于蔬果中含有各种有机酸、芳香物质和红、绿、黄、蓝、紫等色素成分，人们可以烹调出口味各异，花样繁多的佳肴，对增加食欲，促进消化具有重要意义。
3.随着人们生活水平的提高，我们对于蔬果的分析也越加透彻，利用现代的分析仪器可以更加全面的分析出蔬果内的营养成分，进而直观的了解到各类蔬果能够带来的功能和功效，而现有蔬果检测方法一般采用:化学分析法、分光光度法、质谱法等，但这些方法虽然具有较多的优点，但往往无法对各类蔬果进行统一检测，各类蔬果的检测方法繁多，整体操作难度高，导致检测结果参差不齐，因此仍缺少一种可以对各类蔬果进行统一检测的方法。


技术实现要素：

4.本发明旨在解决现有技术或相关技术中存在的技术问题之一。
5.为此，本发明所采用的技术方案为：
6.一种基于氨基酸含量的蔬果营养功能功效的检测方法，包括以下步骤：
7.步骤s1：取蔬果原料充分洗净，去除不可食用部分，放入装有高强度紫外光的容器中，保持15rain消毒，消毒后于60-70℃烘干至恒重，进行粉碎；
8.步骤s2：准确称取粉碎好的蔬果原料30-50g，放入烧杯，加入20ml 80％的乙醇，常温浸泡4-6h，过滤后再加入10ml 80％的乙醇，常温浸泡1-2h，再次过滤；
9.步骤s3：将步骤s2中滤液在70-80℃水浴内加热蒸干，再加入10-20ml柠檬酸和磺基水杨酸的混合液，充分溶解后，定容至20ml，离心分离，取上清液保留；
10.步骤s4：准确称取粉碎好的蔬果原料30-50g，放入水解试管中，加入10-20ml盐酸，再加入1ml去离子水，充分混合，封口后抽至负压，在105-115℃电热恒温箱中水解18-24h，取出过滤，定容至20ml；
11.步骤s5：各取步骤s4中10ml定容液放置于蒸发盘中，在70-80℃蒸干30-40min，直至盐酸除尽，在分别加入10ml柠檬酸钠缓冲液，完全溶解后离心分离，取上清液保留；
12.步骤s6：准确吸取0.2ml混合氨基酸标准，用缓冲液稀释到5ml，作为上机测定用的氨基酸标准；
13.步骤s7：分别将保留的上清液于氨基酸自动分析仪测定，对游离氨基酸和水解氨基酸进行测定。
14.通过采用上述技术方案，通过对蔬果原料两次提取，水解，分别将保留的上清液于
氨基酸自动分析仪测定，对游离氨基酸和水解氨基酸进行测定，而后经过氨基酸测定公式进行测定，相比较传统测定方式来说，该测定方便操作难度低，对于各类蔬果测定都有较高的准确性，并且连续测定四次，计算其标准差和变异系数，以4次结果的平均值作为氨基酸的含量，大大提高了检测记过的精确度。
15.本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述氨基酸的测定公式为：
16.上机样本液中氨基酸含量＝上机标准液中氨基酸量*氨基酸标准峰面积
17.即，ag样本中的氨基酸的mg数＝上机样本中氨基酸量*f*mr*100/(m*v*106)
18.式中：f为样本的稀释倍数，m为样本质量ag，v为上机时的进样量。
19.本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述柠檬酸和磺基水杨酸的混合液为2:1配置。
20.本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述盐酸采用5-6.5mol/l浓度。
21.本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述自动分析仪的测定条件为层析柱216mmx150mm，离子交换树脂日立2619型；缓冲液流速20ml/h，泵压s210035-37.0bar，柱温50、60和70℃，分析时间40min。
22.本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述柠檬酸钠缓冲液的ph为2.2，配置方式为称取19.6g柠檬酸钠(na3c6h507.2h20)和16.5ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50％的氢氧化钠溶液调节ph至2.2。
23.本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：还包括以下重现方法：
24.取制备好的样品溶液，按照选定的色谱条件，进样50ul，连续进样4次，根据测定的结果，计算其标准差和变异系数，以4次结果的平均值作为氨基酸的含量。
25.本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述氨基酸包括赖氨酸、精氨酸、色氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、组氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸和胱氨酸。
26.本发明的上述技术方案具有如下有益的技术效果：
27.本发明中，通过对蔬果原料两次提取，水解，分别将保留的上清液于氨基酸自动分析仪测定，对游离氨基酸和水解氨基酸进行测定，而后经过氨基酸测定公式进行测定，相比较传统测定方式来说，该测定方便操作难度低，对于各类蔬果测定都有较高的准确性，并且连续测定四次，计算其标准差和变异系数，以4次结果的平均值作为氨基酸的含量，精确度较高，便于推广使用。
附图说明
28.图1为本发明一个实施例的样本检测实例图；
29.图2为本发明一个实施例的氨基酸标准色谱图；
30.图3为本发明一个实施例的样本氨基酸色谱图。
具体实施方式
31.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面结合具体实施方式并参照附图，对本发明进一步详细说明。需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
32.该理解，这些描述只是示例性的，而并非要限制本发明的范围。
33.下面结合附图描述本发明的一些实施例提供的一种基于氨基酸含量的蔬果营养功能功效的检测方法。
34.实施例一：
35.本发明提供的一种基于氨基酸含量的蔬果营养功能功效的检测方法，包括以下步骤：
36.步骤s1：取蔬果原料充分洗净，去除不可食用部分，放入装有高强度紫外光的容器中，保持15rain消毒，消毒后于60-70℃烘干至恒重，进行粉碎；
37.步骤s2：准确称取粉碎好的蔬果原料30-50g，放入烧杯，加入20ml 80％的乙醇，常温浸泡4-6h，过滤后再加入10ml 80％的乙醇，常温浸泡1-2h，再次过滤；
38.步骤s3：将步骤s2中滤液在70-80℃水浴内加热蒸干，再加入10-20ml柠檬酸和磺基水杨酸的混合液，充分溶解后，定容至20ml，离心分离，取上清液保留；
39.步骤s4：准确称取粉碎好的蔬果原料30-50g，放入水解试管中，加入10-20ml盐酸，再加入1ml去离子水，充分混合，封口后抽至负压，在105-115℃电热恒温箱中水解18-24h，取出过滤，定容至20ml；
40.步骤s5：各取步骤s4中10ml定容液放置于蒸发盘中，在70-80℃蒸干30-40min，直至盐酸除尽，在分别加入10ml柠檬酸钠缓冲液，完全溶解后离心分离，取上清液保留；
41.步骤s6：准确吸取0.2ml混合氨基酸标准，用缓冲液稀释到5ml，作为上机测定用的氨基酸标准；
42.步骤s7：分别将保留的上清液于氨基酸自动分析仪测定，对游离氨基酸和水解氨基酸进行测定。
43.需要说明的是，氨基酸的测定公式为：
44.上机样本液中氨基酸含量＝上机标准液中氨基酸量*氨基酸标准峰面积
45.即，ag样本中的氨基酸的mg数＝上机样本中氨基酸量*f*mr*100/(m*v*106)
46.式中：f为样本的稀释倍数，m为样本质量ag，v为上机时的进样量。
47.优选的，柠檬酸和磺基水杨酸的混合液为2:1配置。
48.优选的，盐酸采用5-6.5mol/l浓度。
49.优选的，自动分析仪的测定条件为层析柱216mmx 150mm，离子交换树脂日立2619型；缓冲液流速20ml/h，泵压s210035-37.0bar，柱温50、60和70℃，分析时间40min。
50.优选的，柠檬酸钠缓冲液的ph为2.2，配置方式为称取19.6g柠檬酸钠(na3c6h507.2h20)和16.5ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50％的氢氧化钠溶液调节ph至2.2。
51.优选的，测定结果准确，还包括以下重现方法：
52.取制备好的样品溶液，按照选定的色谱条件，进样50ul，连续进样4次，根据测定的结果，计算其标准差和变异系数，以4次结果的平均值作为氨基酸的含量。
53.优选的，氨基酸包括赖氨酸、精氨酸、色氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、组氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸和胱氨酸。
54.具体的，结合图1-3所示，图1展示了实例的一种蔬果检测结果，图2则是常规氨基
酸标准色谱，用于比对，图3为种蔬果检测的色谱图，采用氨基酸的测定公式进行计算，通过对蔬果原料两次提取，水解，分别将保留的上清液于氨基酸自动分析仪测定，对游离氨基酸和水解氨基酸进行测定，而后经过氨基酸测定公式进行测定，相比较传统测定方式来说，该测定方便操作难度低，对于各类蔬果测定都有较高的准确性，并且连续测定四次，计算其标准差和变异系数，以4次结果的平均值作为氨基酸的含量，精确度较高。
55.实施例二：
56.本发明提供的一种基于氨基酸含量的蔬果营养功能功效的检测方法，包括以下步骤：
57.步骤s1：取蔬果原料充分洗净，去除不可食用部分，放入装有高强度紫外光的容器中，保持15rain消毒，消毒后于65℃烘干至恒重，进行粉碎；
58.步骤s2：准确称取粉碎好的蔬果原料30g，放入烧杯，加入20ml 80％的乙醇，常温浸泡4h，过滤后再加入10ml 80％的乙醇，常温浸泡1h，再次过滤；
59.步骤s3：将步骤s2中滤液在75℃水浴内加热蒸干，再加入15ml柠檬酸和磺基水杨酸的混合液，充分溶解后，定容至20ml，离心分离，取上清液保留；
60.步骤s4：准确称取粉碎好的蔬果原料30g，放入水解试管中，加入10ml盐酸，再加入1ml去离子水，充分混合，封口后抽至负压，在115℃电热恒温箱中水解24h，取出过滤，定容至20ml；
61.步骤s5：各取步骤s4中10ml定容液放置于蒸发盘中，在75℃蒸干30-40min，直至盐酸除尽，在分别加入10ml柠檬酸钠缓冲液，完全溶解后离心分离，取上清液保留；
62.步骤s6：准确吸取0.2ml混合氨基酸标准，用缓冲液稀释到5ml，作为上机测定用的氨基酸标准；
63.步骤s7：分别将保留的上清液于氨基酸自动分析仪测定，对游离氨基酸和水解氨基酸进行测定。
64.需要说明的是，氨基酸的测定公式为：
65.上机样本液中氨基酸含量＝上机标准液中氨基酸量*氨基酸标准峰面积
66.即，ag样本中的氨基酸的mg数＝上机样本中氨基酸量*f*mr*100/(m*v*106)
67.式中：f为样本的稀释倍数，m为样本质量ag，v为上机时的进样量。
68.具体的，柠檬酸和磺基水杨酸的混合液为2:1配置。
69.具体的，盐酸采用5-6.5mol/l浓度。
70.具体的，自动分析仪的测定条件为层析柱216mmx 150mm，离子交换树脂日立2619型；缓冲液流速20ml/h，泵压s210035-37.0bar，柱温50、60和70℃，分析时间40min。
71.具体的，柠檬酸钠缓冲液的ph为2.2，配置方式为称取19.6g柠檬酸钠(na3c6h507.2h20)和16.5ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50％的氢氧化钠溶液调节ph至2.2。
72.具体的，测定结果准确，还包括以下重现方法：
73.取制备好的样品溶液，按照选定的色谱条件，进样50ul，连续进样4次，根据测定的结果，计算其标准差和变异系数，以4次结果的平均值作为氨基酸的含量。
74.具体的，氨基酸包括赖氨酸、精氨酸、色氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、组氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸、天冬酰
胺、脯氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸和胱氨酸
75.实施例三：
76.本发明提供的一种基于氨基酸含量的蔬果营养功能功效的检测方法，包括以下步骤：
77.步骤s1：取蔬果原料充分洗净，去除不可食用部分，放入装有高强度紫外光的容器中，保持15rain消毒，消毒后于70℃烘干至恒重，进行粉碎；
78.步骤s2：准确称取粉碎好的蔬果原料30-50g，放入烧杯，加入20ml 80％的乙醇，常温浸泡6h，过滤后再加入10ml 80％的乙醇，常温浸泡1.5h，再次过滤；
79.步骤s3：将步骤s2中滤液在70℃水浴内加热蒸干，再加入14ml柠檬酸和磺基水杨酸的混合液，充分溶解后，定容至20ml，离心分离，取上清液保留；
80.步骤s4：准确称取粉碎好的蔬果原料40g，放入水解试管中，加入12ml盐酸，再加入1ml去离子水，充分混合，封口后抽至负压，在110℃电热恒温箱中水解22h，取出过滤，定容至20ml；
81.步骤s5：各取步骤s4中10ml定容液放置于蒸发盘中，在72℃蒸干30-40min，直至盐酸除尽，在分别加入10ml柠檬酸钠缓冲液，完全溶解后离心分离，取上清液保留；
82.步骤s6：准确吸取0.2ml混合氨基酸标准，用缓冲液稀释到5ml，作为上机测定用的氨基酸标准；
83.步骤s7：分别将保留的上清液于氨基酸自动分析仪测定，对游离氨基酸和水解氨基酸进行测定。
84.需要说明的是，氨基酸的测定公式为：
85.上机样本液中氨基酸含量＝上机标准液中氨基酸量*氨基酸标准峰面积
86.即，ag样本中的氨基酸的mg数＝上机样本中氨基酸量*f*mr*100/(m*v*106)
87.式中：f为样本的稀释倍数，m为样本质量ag，v为上机时的进样量。
88.进一步的，柠檬酸和磺基水杨酸的混合液为2:1配置。
89.进一步的，盐酸采用5-6.5mol/l浓度。
90.进一步的，自动分析仪的测定条件为层析柱216mmx 150mm，离子交换树脂日立2619型；缓冲液流速20ml/h，泵压s210035-37.0bar，柱温50、60和70℃，分析时间40min。
91.进一步的，柠檬酸钠缓冲液的ph为2.2，配置方式为称取19.6g柠檬酸钠(na3c6h507.2h20)和16.5ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50％的氢氧化钠溶液调节ph至2.2。
92.进一步的，测定结果准确，还包括以下重现方法：
93.取制备好的样品溶液，按照选定的色谱条件，进样50ul，连续进样3次，根据测定的结果，计算其标准差和变异系数，以3次结果的平均值作为氨基酸的含量。
94.进一步的，氨基酸包括赖氨酸、精氨酸、色氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、组氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸和胱氨酸。
95.在本说明书的描述中，术语“一个实施例”、“一些实施例”、“具体实施例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或实
例。而且，描述的具体特征、结构、材料或特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
96.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解，在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。