外周血中性粒细胞作为重度哮喘诊断标志物的用途

1.本发明涉及外周血中性粒细胞作为重度哮喘诊断标志物的用途，属于生物医学检测技术领域。


背景技术：

2.作为临床常见疾病，近年来全球哮喘患病率呈增长趋势，大多数哮喘患者通过规范药物治疗即能得到控制或较好改善，但仍有5％到10％的重度患者难以控制。
3.重度哮喘的诊断根据gina和中华医学会呼吸分会哮喘学组的专家共识来进行，一般对应用4级或5级抗哮喘治疗才能达到疾病控制或一旦降低治疗级别，则疾病难以控制的患者群体。因此，判断是否为重度哮喘一般是滞后的，需要对特定病人进行一段时间的随访观察，才能准确诊断。
4.作为慢性气道炎症性疾病，哮喘由嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、肥大细胞、t细胞等多种炎症细胞及细胞因子参与，具有明显的异质性和复杂性。中性粒细胞同时参与炎症反应和氧化应激，近年来在哮喘发生、发展过程中的作用日益受到重视。
5.研究显示中性粒细胞增多与重度哮喘患者激素抵抗有关，部分慢性持续期哮喘患者诱导痰中中性粒细胞增多，部分重度哮喘、急性加重期哮喘患者的支气管活检及诱导痰中发现大量中性粒细胞的存在，哮喘诱导痰中性粒细胞数与气道阻塞程度也存在相关性。
6.成人中性粒细胞起源于骨髓，随着血液循环网分别到达外周和气道，因此我们有理由推测外周血中与诱导痰中此两种细胞计数具有一定的相关性。相较于诱导痰细胞计数，外周血细胞计数是临床常用的基础检验方法，在我国大部分临床医疗场所均可开展，且对人体创伤极小。nadif等在遗传与环境相关哮喘流行病学研究中测定了部分哮喘患者外周血嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的数值，然后确定了临界值，并通过类似于诱导痰炎症表型分类的方法，将哮喘患者分为4个亚型，结果显示亚型间具有不同的表型特征。但是，目前未见通过测定外周中性粒细胞计数及比例评估哮喘严重程度的相关报道。


技术实现要素：

7.本发明旨在旨在提供外周血中性粒细胞作为重度哮喘诊断标志物，以解决现有技术中的标记物并不能方便准确地诊断重度哮喘的技术问题。
8.为了实现上述目的，本发明提供了外周血中性粒细胞作为标志物在制备诊断或辅助诊断重度哮喘的产品中的应用。
9.优选地，所述标志物的应用为：通过血常规检测哮喘患者外周血中性粒细胞的绝对值和/或比例来获取重度哮喘的判断指标。
10.优选地，所述重度哮喘的判断指标为：当所述外周血中性粒细胞的绝对值》4.55
×
109/l或所述外周血中性粒细胞的百分比例》55.15％时，则判断为重度哮喘。
11.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
12.本发明提供了外周血中性粒细胞作为重度哮喘诊断标志物的用途，本发明首次确
定了外周血中性粒细胞绝对值和中性粒细胞百分比的“界值”(cutoff point)，即中性粒细胞绝对值》4.55
×
109/l为重度哮喘(敏感性83.3％，特异性64.0％)；中性粒细胞百分比》55.15％为重度哮喘(敏感性54.8％，特异性88.0％)，其roc曲线的auc分别为0.777和0.762，本发明的结果表明，相较于诱导痰，检测更为快捷便利的外周血中性粒细胞对于重度哮喘的诊断具有良好的应用前景。
附图说明
13.图1为sa与nsa患者外周血中性粒细胞绝对值(a)、外周血中性粒细胞比例(b)、诱导痰中性粒细胞比例(c)的结果比较；
14.图2为哮喘患者外周血与诱导痰中性粒细胞关系；
15.图3为哮喘患者外周血中性粒细胞绝对值水平(a)和比例水平(b)拟合的roc曲线结果；
16.图4为哮喘患者外周血、诱导痰中性粒细胞对哮喘频繁急性发作倾向的影响；
17.图5为哮喘患者外周血中性粒细胞对肺功能参数的影响；
18.图6为哮喘患者诱导痰中性粒细胞比例对肺功能参数的影响。
具体实施方式
19.为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下。
20.本发明的实施例中，通过下述方法招募哮喘患者：纳入标准为符合我国《支气管哮喘防治指南》(2016年版)，且近4周内病情稳定，即没有呼吸道感染、哮喘急性发作等情况的成年哮喘患者。对于符合入组标准的确诊哮喘患者，根据其治疗情况和控制水平，参照我国《支气管哮喘防治指南》(2016年版)将其分为重度哮喘患者和轻中度哮喘患者，分别收入重度哮喘(severe asthma，sa)组25例和非重度哮喘(non-severe asthma，nsa)组42例。
21.本发明的实施例中，通过下述方法检测哮喘患者外周血及诱导痰中性粒细胞：抽取哮喘受试者外周静脉血2ml于edta3.6mg抗凝管内室温保存，2小时内送至中山医院检验科进行血常规检测，以获取外周血中性粒细胞绝对值及比例。参考中华医学会呼吸病学分会哮喘学组《咳嗽的诊断与治疗指南》(2015年版)中高渗盐水雾化诱导痰炎症细胞检测方法进行诱导痰留取并计算中性粒细胞比例。
22.本发明的实施例中，通过下述方法检测哮喘患者肺功能：患者完成肺功能检测的前24小时内不得使用长效β2受体激动剂或抗胆碱能药物，前12小时内不得使用短效β2受体激动剂。由中山医院呼吸内科肺功能室专业技师操作，采用master screen-pft肺功能仪(德国jaeger公司)，每日上午8:00-11:00在25℃左右环境下检测，测定前进行仪器的校正和定标，严格按照操作标准检测，且测定结果至少有三次符合质控要求，取连续三次检测中最优结果，记录fev1％pred、fev1/fvc、fvc％pred、dlco％pred等指标。
23.实施例
24.本实施例提供了外周血中性粒细胞作为重度哮喘诊断标志物的用途：
25.首先招募了一组重度和非重度哮喘患者，分别收集患者外周血及诱导痰，检测外周血中性粒细胞数量、比例及诱导痰中性粒细胞比例。对比两组显示重度哮喘患者血中性粒细胞绝对值(5.24
±
1.87 109/l vs.3.64
±
1.25 109/l，p＜0.001)、血中性粒细胞比例
(62.93
±
7.95％vs.54.84
±
7.57％，p＜0.001)均显著高于非重度哮喘组，如图1所示。对哮喘患者外周血和诱导痰中中性粒细胞比例进行线性回归，结果示两者成正相关(β＝1.171，p＝0.006)，如图2所示。在判断外周血中性粒细胞是否可作为重度哮喘的诊断标准时，采用了诊断性试验的方法，将符合“指南标准”定义为“金标准”，将中性粒细胞作为“新标准”，检验确定了外周血中性粒细胞绝对值和中性粒细胞百分比的“界值”(cutoff point)。即中性粒细胞绝对值》4.55
×
109/l为重度哮喘(敏感性83.3％，特异性64.0％)；中性粒细胞百分比》55.15％为重度哮喘(敏感性54.8％，特异性88.0％)其roc曲线的auc分别为0.777和0.762，如图3所示。
26.此外，以过去一年急性发作0-1次为无哮喘频繁急性发作倾向、≥2次为有哮喘频繁急性发作倾向，在调整年龄、性别、bmi、吸烟情况4项协变量后，对哮喘患者中性粒细胞与哮喘频繁急性发作倾向进行多因素logistic回归，结果显示患者血中性粒细胞绝对值每增加十分之一个单位(108/l)，表现为有哮喘频繁急性发作倾向的危险度相应增加8.09％，p＝0.006；患者血中性粒细胞比例每增加一个单位(1％)，表现为有哮喘频繁急性发作倾向的危险度相应增加10.03％，p＝0.032，如图4所示。对哮喘患者中性粒细胞与肺功能参数进行线性回归，显示外周血中性粒细胞比例与fvc％pred、fev1％pred成负相关(β＝-0.941，p＝0.002)(β＝-0.980，p＝0.005)，与fev/fvc、dlco％pred有负相关趋势。外周血中性粒细胞绝对值与fvc％pred、fev1％pred、fev/fvc成负相关(β＝-3.158，p＝0.045)(β＝-4.059，p＝0.023)(β＝-1.944，p＝0.044)，与dlco％pred有负相关趋势，如图5所示，而诱导痰中性粒细胞比例对肺功能参数的影响如图6所示。因此，相较于诱导痰，检测更为快捷便利的外周血中性粒细胞对于重度哮喘的诊断具有良好的应用前景。
27.上述实施例仅为本发明的优选实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。