亚洲玉米螟性诱信息素类农药检测方法及应用与流程

1.本发明涉及检测领域，特别涉及一种亚洲玉米螟性诱信息素类农药检测方法。


背景技术：

2.亚洲玉米螟是玉米的重要害虫，一般田块减产8％～12％，危害严重田块减产20％以上，过去一直用有机氯或有机磷农药防治，不仅伤害天敌，而且带来较严重的农药残留和污染问题。近几年来提出推广高效、低毒、低残留农药，实施农药零增长行动，开发绿色农药已成为农药行业大势所趋，昆虫信息素作为新型生物农药具有无毒、不伤害天敌、不污染环境、不易产生抗性、应用条件广等优势，是国家大力推广的绿色防控技术之一。亚洲玉米螟性诱信息素是亚洲玉米螟雌蛾释放的能引诱同种雄蛾交配的性信息素，主要成分为顺-12-十四碳烯基乙酸酯和反-12-十四碳烯基乙酸酯。亚洲玉米螟性诱信息素挥散芯作为新型的生物农药，其原理就是通过人工合成的信息素吸引雄蛾并配合诱捕器进行诱杀，降低与雌成虫交配机率，间接降低虫密度，由此达到防治效果。
3.然而亚洲玉米螟性诱信息素挥散芯的含量也会影响到该农药的质量，故有必要检测亚洲玉米螟性诱信息素挥散芯的含量，但目前国内并无检测分析亚洲玉米螟性诱信息素类农药的相关技术研究。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种亚洲玉米螟性诱信息素类农药检测方法，可以快速且准确检测亚洲玉米螟性诱信息素类农药中的两种成分的含量，为亚洲玉米螟性诱信息素类农药的相关的质量控制提供技术支撑。
5.为实现以上目的，本技术方案提供一种亚洲玉米螟性诱信息素类农药检测方法，包括以下步骤：
6.取待测试样，加入2ml水进行分散，用丙酮溶解所述待测试样，并添加溶解于丙酮的十二烷溶液得到待测溶液，对所述待测溶液加入具有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪中进行气相色谱检测，其中气相色谱检测的条件：
7.气相色谱柱：db-1701毛细管柱；
8.色谱条件为：
9.柱温：50℃维持2min,再从50℃以15℃/min的速度升温至250℃；气化室260℃；检测器室260℃；
10.气体流量(ml/min)：惰性气体1.5ml/min，氢气30ml/min，空气300ml/min
11.分流比：10:1
12.进样体积：2.0μl
13.保留时间：十二烷8.2min，反-12-十四碳烯乙酸酯13.7min，顺-12-十四碳烯乙酸酯13.8min。
14.其中惰性气体可以为氮气。
15.基于气相色谱检测得到的反-12-十四碳烯乙酸酯与内标物的峰面积比和/或顺-12-十四碳烯乙酸酯与内标物的峰面积比，将所述峰面积比以及待测试样的质量代入标准定量函数中得到待测试样中的反-12-十四碳烯乙酸酯和/或顺-12-十四碳烯乙酸酯的含量。
16.所述标准定量函数的获取方式如下：
17.取已知质量以及质量分数的反-12-十四碳烯乙酸酯和顺-12-十四碳烯乙酸酯作为标样，加入丙酮溶解后添加和待测试样测试时相同量的溶解于丙酮的十二烷溶液得到标准溶液，将标准溶液置于和待测试样测试时相同的气相色谱检测条件中进行检测，得到反-12-十四碳烯乙酸酯的标样与内标物峰面积比以及顺-12-十四碳烯乙酸酯的标样与内标物峰面积比；以反-12-十四碳烯乙酸酯的标样与内标物峰面积比和/或顺-12-十四碳烯乙酸酯的标样与内标物峰面积比、反-12-十四碳烯乙酸酯的标样质量以及顺-12-十四碳烯乙酸酯的标样质量，以及反-12-十四碳烯乙酸酯标样的质量分数以及顺-12-十四碳烯乙酸酯标样的质量分数构建标准定量函数。
18.具体的标准定量函数如下；
[0019][0020]
其中x为待测试样中反-12-十四碳烯乙酸酯和/或顺-12-十四碳烯乙酸酯的含量；
[0021]
a1—标样中反-12-十四碳烯乙酸酯或顺-12-十四碳烯乙酸酯与内标物峰面积比的平均值；
[0022]
a2—待测试样中反-12-十四碳烯乙酸酯或顺-12-十四碳烯乙酸酯与内标物峰面积比的平均值；
[0023]
m1—标样反-12-十四碳烯乙酸酯或顺-12-十四碳烯乙酸酯的质量，g；
[0024]
m2—待测试样质量，g；
[0025]
p—标样中反-12-十四碳烯乙酸酯或顺-12-十四碳烯乙酸酯的质量分数，％。
[0026]
由于本方案是利用标样对待测试样进行检测，为了保证标准定量函数的准确性，本方案需要对标准溶液的测试进行控制。具体的，在气相色谱检测时，待气相色谱仪的仪器基线平直后，连续注入数针标准溶液，计算各针相对应的响应值重复性，待相邻两针的相对应响应值之差小于1.5％后，依次加入标准溶液和待测溶液进行进样测定。
[0027]
该方案可应用检测亚洲玉米螟性诱信息素类农药中的亚洲玉米螟性诱信息素的含量，亚洲玉米螟性诱信息素包括但不限于亚洲玉米螟性诱信息素挥散芯。
[0028]
相较现有技术，本技术方案具有以下特点和有益效果：
[0029]
本方案可检测亚洲玉米螟性诱信息素类农药中的两种成分：反-12-十四碳烯乙酸酯和顺-12-十四碳烯乙酸酯，通过本方案提供的气相色谱条件可准确地定量检测到ze异构的反-12-十四碳烯乙酸酯和顺-12-十四碳烯乙酸酯，且可以减少农药产品中其他成分的干扰。
[0030]
值得一提的是，反-12-十四碳烯乙酸酯和顺-12-十四碳烯乙酸酯在气相检测时的分离难度较大，本方案选择合适的色谱柱以及色谱条件来克服分离难度的问题；且本方案是在农药产品中检测以上两种成分，需要将目标成分从农药成分中全部溶解出来才能进行准确分析，故本方案先用水对样品进行分散，之后选择丙酮这种极性大的溶剂作为溶液，可
以有效地从各种液体样品，固体样品及粘稠的膏状物质的农药产品中完全溶解出目标化合物；另外，本方案为了避免对检测造成干扰，选择对可能存在的干扰物分析无影响的十二烷作为内标物。
附图说明
[0031]
图1是空白溶液的色谱图。
[0032]
图2是制剂的空白色谱图。
[0033]
图3是内标溶液的色谱图。
[0034]
图4是反-12-十四碳烯乙酸酯标样的色谱图。
[0035]
图5是顺-12-十四碳烯乙酸酯标样的色谱图。
[0036]
图6是反-12-十四碳烯乙酸酯线性相关方程图。
[0037]
图7是正-12-十四碳烯乙酸酯线性相关方程图。
[0038]
图8至图13是标准溶液的色谱图。
[0039]
图14至图18是准确度溶液的色谱图。
[0040]
图19至图24是精密度溶液的色谱图。
具体实施方式
[0041]
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0042]
可以理解的是，术语“一”应理解为“至少一”或“一个或多个”，即在一个实施例中，一个元件的数量可以为一个，而在另外的实施例中，该元件的数量可以为多个，术语“一”不能理解为对数量的限制。
[0043]
本方案可在农药产品中利用气相检测法检测到亚洲玉米螟性诱信息素类农药中的两种异构体成分：反-12-十四碳烯乙酸酯和顺-12-十四碳烯乙酸酯，以下先对该两种成分的物化性质进行说明：
[0044]
(一)反-12-十四碳烯乙酸酯的物化性质：
[0045]
中文名称：反-12-十四碳烯乙酸酯
[0046]
化学名称：(e)-12-tetradecenyl acetate
[0047]
cas no.：35153-21-0
[0048]
结构式：
[0049][0050]
实验式：c16h30o2
[0051]
相对分子质量：254.41g/mol
[0052]
生物活性：昆虫信息素
[0053]
沸点：300.1℃
[0054]
闪燃点：87.2
±
17.6℃
[0055]
相对密度：0.878
±
0.06g/cm3 at 20℃。
[0056]
(二)顺-12-十四碳烯乙酸酯
[0057]
中文名称：顺-12-十四碳烯乙酸酯
[0058]
化学名称：(z)-12-tetradecenyl acetate
[0059]
cas no.：35153-20-9
[0060]
结构式：
[0061][0062]
实验式：c16h30o2
[0063]
相对分子质量：254.41g/mol
[0064]
生物活性：昆虫信息素
[0065]
沸点：316℃
[0066]
闪燃点：229℃
[0067]
相对密度：0.878
±
0.06g/cm3 at 20℃。
[0068]
实施例一
[0069]
一、试剂和溶液
[0070]
丙酮：hplc；
[0071]
内标物：十二烷，应没有干扰分析的杂质；
[0072]
反-12-十四碳烯乙酸酯标样：已知质量分数，p＝88.78％；
[0073]
顺-12-十四碳烯乙酸酯标样：已知质量分数，p＝93.72％。
[0074]
二、仪器
[0075]
气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器；
[0076]
色谱数据处理机或色谱工作站；
[0077]
气相色谱柱：30m
×
0.32mm(i.d.)db-1701毛细管柱，膜厚0.25μm(或具同等效果的色谱柱)；
[0078]
微量进样器：10μl。
[0079]
三、色谱条件
[0080]
温度(℃)：柱温气化室260，检测器室260
[0081]
气体流量(ml/min)：载气(n2)1.5，氢气30，空气300
[0082]
分流比：10:1
[0083]
进样体积：2.0μl
[0084]
保留时间(min)：十二烷8.2，反-12-十四碳烯乙酸酯13.7，顺-12-十四碳烯乙酸酯13.8。
[0085]
上述操作参数是典型的，可根据不同仪器、不同剂型产品特点对给定的操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。
[0086]
四、测定步骤：
[0087]
1)内标溶液的配制
[0088]
准确称取十二烷0.1g(精确至0.0002g)于100ml容量瓶中，加入丙酮溶解定容，摇
匀，备用。
[0089]
2)标样溶液的配制
[0090]
准确称取0.15g反-12-十四碳烯乙酸酯，0.25g顺-12-十四碳烯乙酸酯(均精确至0.0002g)于100ml容量瓶，加入丙酮溶解定容，摇匀，移取5.00ml上述溶液和5.00ml内标溶液置于25ml容量瓶中，加入丙酮稀释定容，摇匀，备用。
[0091]
3)试样溶液的配制
[0092]
准确称取试样2.0g(精确至0.0002g)于锥形瓶中，加入2ml水，移入5.00ml内标和20.00ml丙酮，封口，超声30min，摇匀，备用。
[0093]
4)测定
[0094]
在上述气相色谱条件下，待仪器基线平直后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对应的响应值重复性，待相邻两针的相对应响应值之差小于1.5％，按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标溶液样的顺序分别进样，分析测定。
[0095]
五、结果分析
[0096]
5.1分离度分析：
[0097]
利用气相色谱仪检测到的各类溶液的色谱图如图1-6所示。图1是空白溶液的色谱图，图2是制剂的空白色谱图，图3是内标溶液的色谱图，图4是反-12-十四碳烯乙酸酯标样的色谱图；图5是顺-12-十四碳烯乙酸酯标样的色谱图。可以看到反-12-十四碳烯乙酸酯和顺-12-十四碳烯乙酸酯与相邻峰分离度均＞1.5，符合定量分析要求。
[0098]
5.2线性相关：
[0099]
线性母液：称取0.15g反-12-十四碳烯乙酸酯标样和0.25g顺-12-十四碳烯乙酸酯标样(均精确至0.0002g)置于同一个100ml容量瓶，丙酮溶解、定容、摇匀备用。
[0100]
反-12-十四碳烯乙酸酯线性母液浓度：0.1452g/100ml*88.78％＝1.2891mg/ml。
[0101]
顺-12-十四碳烯乙酸酯线性母液浓度：0.2538g/100ml*93.72％＝2.2849mg/ml。
[0102]
内标母液浓度：0.1056g/100ml＝1.0560mg/ml。
[0103]
内标溶液加入体积：5.00ml。
[0104]
配制6个浓度线性校正曲线，每个浓度重复进样两次，浓度涵盖反-12-十四碳烯乙酸酯和顺-12-十四碳烯乙酸酯测定浓度的40％～160％。
[0105]
以线性校正溶液中反-12-十四碳烯乙酸酯质量为横坐标，以反-12-十四碳烯乙酸酯与内标物的峰面积比为纵坐标绘制标准曲线，反-12-十四碳烯乙酸酯线性相关测定结果见表1，线性相关曲线如图6所示，标准溶液的色谱图如8-13所示。
[0106]
表1反-12-十四碳烯乙酸酯线性相关测试结果
[0107][0108]
线性方程：y＝0.1581x+0.0017
[0109]
相关系数：r＝0.9992
[0110]
其中相关系数＞0.99，符合ny/t2887-2016的要求，在反-12-十四碳烯乙酸酯浓度0.1031mg/ml～0.4125mg/ml范围内，线性相关确认合格。
[0111]
以线性校正溶液种顺-12-十四碳烯乙酸酯质量为横坐标，以顺-12-十四碳烯乙酸酯与内标物的峰面积比为纵坐标绘制标准曲线，顺-12-十四碳烯乙酸酯线性相关测定结果见表2和图7。
[0112]
表2顺-12-十四碳烯乙酸酯线性相关测试结果
[0113][0114][0115]
线性方程：y＝0.1655x+0.0036
[0116]
相关系数：r＝0.9992
[0117]
其中相关系数＞0.99，符合ny/t2887-2016的要求，在顺-12-十四碳烯乙酸酯浓度
0.1828mg/ml～0.7312mg/ml范围内，线性相关确认合格。
[0118]
5.3准确度测试：
[0119]
按制剂标称值合成4个实验室样品(将原药以外的所有助剂混匀，作制剂空白，再按制剂标称值在制剂空白中添加有效成分)，进行准确度测定。
[0120]
内标母液浓度：0.1056g/100ml＝1.0560mg/ml
[0121]
标样母液：称取0.15g反-12-十四碳烯乙酸酯标样和0.25g顺-12-十四碳烯乙酸酯标样(均精确至0.0002g)置于同一个100ml容量瓶，丙酮溶解、定容、摇匀备用。
[0122]
反-12-十四碳烯乙酸酯标样母液浓度：0.1554g*88.78％/100ml＝1.3796mg/ml
[0123]
顺-12-十四碳烯乙酸酯标样母液浓度：0.2598g*93.72％/20＝2.4348mg/ml
[0124]
空白溶液：2.0g(精确至0.02g)制剂空白中加入2ml水，加入5.00ml内标母液和20.00ml丙酮，超声30min，摇匀，备用。
[0125]
准确度溶液：2.0g(精确至0.02g)制剂空白中先加入5.00ml标样母液，之后加入2ml水，5.00ml内标，15.00ml丙酮，超声30min，摇匀，重复配制四个。准确度溶液色谱图如图14至图18所示。
[0126]
反-12-十四碳烯乙酸酯准确度测定结果见表3。
[0127]
表3反-12-十四碳烯乙酸酯准确度验证测试结果
[0128][0129]
制剂中有效成分含量为《1％时，要求回收率95～105％。测得结果为99.741％～100.713％，符合标准要求，准确度合格。
[0130]
顺-12-十四碳烯乙酸酯准确度测定结果见表4。
[0131]
表4顺-12-十四碳烯乙酸酯准确度验证测试结果
[0132][0133][0134]
制剂中有效成分含量为《1％时，要求回收率95～105％。测得结果为100.199％～101.180％，符合标准要求，准确度合格。
[0135]
5.4精密度分析
[0136]
重复进行6次样品测定。
[0137]
内标母液浓度：0.1056g/100ml＝1.0560mg/ml
[0138]
试样溶液：称取试样2.0g(精确至0.0002g)于锥形瓶中，加入2ml水，移入5ml内标母液和20ml丙酮，超声30min，摇匀，重复配制六个。试样溶液谱图见19至图24。
[0139]
反-12-十四碳烯乙酸酯精密度测定结果见表5
[0140]
表5反-12-十四碳烯乙酸酯精密度测试结果
[0141][0142]
按照ny/t 2887-2016，rsd的可接受标准为：％rsd＜0.67
×2(1-0.5log w)
，其中w为6次平行测定结果的平均值。
[0143]
反-12-十四碳烯乙酸酯精密度测试结果评价见表6。
[0144]
表6反-12-十四碳烯乙酸酯精密度测试结果评价
[0145]
[0146]
顺-12-十四碳烯乙酸酯精密度测定结果见表7:
[0147]
表7顺-12-十四碳烯乙酸酯精密度测试结果
[0148][0149]
按照ny/t 2887-2016，rsd的可接受标准为：％rsd＜0.67
×2(1-0.5log w)
，其中w为6次平行测定结果的平均值，顺-12-十四碳烯乙酸酯精密度测试结果评价见表9。
[0150]
表9顺-12-十四碳烯乙酸酯精密度测试结果评价
[0151][0152]
本发明不局限于上述最佳实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是具有与本技术相同或相近似的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。