检测附子土壤和/或附子不同部位中多效唑的方法与流程

1.本发明属于质量检测技术领域，具体涉及检测附子土壤和/或附子不同部位中多效唑的方法。


背景技术：

2.多效唑是一种三唑类植物生长调节剂，能够延缓植物生长，提高抗倒伏能力和抗逆性，提高作物产量。多效唑已被广泛应用于农作物、蔬菜、果树等种植，并且正逐渐应用于中药材种植。如在麦冬栽培过程中，通过长期大量使用多效唑等植物生长调节剂，使得现有多效唑的用量达到水稻的100倍以上。然而，过多使用多效唑，不仅容易导致土壤板结，还会造成药材质量下降，并且具有一定的毒性。
3.我国现已制定部分植物生长调节剂的最大残留限量标准(gb2763-2016)，限量标准涉及的产品种类多为水果、蔬菜等，并未涉及中药材。文献报道中绝大部分也都是针对水果蔬菜中的植物生长调节剂残留量的检测，少有文献涉及中药材中植物生长调节剂的残留检测。因收集附子样品时常出现附子个头大小尺寸差距极大的情况。因此，非常有必要在附子的生长过程中进行多效唑的监测，以便为附子药材的质量提供参考依据，同时也有利于保障药材安全。
4.现有多效唑的检测方法有很多，例如气相色谱质谱法、高效液相色谱法、液相色谱质谱法等。这些方法主要是针对药材进行检测，而对于种植药材的土壤和药材种植过程中不同药用部位的多效唑的质谱成像检测还未见有应用，并且也未见有针对附子生长过程中附子不同部位中多效唑的检测方法。


技术实现要素：

5.本发明所要解决的技术问题是提供一种能够快速检测附子土壤和/或附子不同部位中多效唑的方法，通过高分辨质谱成像实时监控附子生长过程中多效唑在土壤和附子不同部位中的分布。
6.本发明为解决上述技术问题采用的技术方案是提供了一种检测附子土壤和/或附子不同部位中多效唑的方法。该方法包括如下步骤：
7.a、制备待测样品溶液和对照品溶液；
8.b、在滤纸上打孔，分别吸取待测样品溶液和对照品溶液进行点样，晾干，置于导电玻璃板上；
9.c、采用desi检测点样样品，进行质谱成像扫描，根据成像结果，对待测样品中多效唑的残留进行判定。
10.其中，上述检测附子土壤和/或附子不同部位中多效唑的方法中，步骤b中，所述待测样品溶液的吸取量为2～10μl。
11.进一步地，步骤b中，所述在滤纸上打孔的直径为4～10mm。
12.其中，上述检测附子土壤和/或附子不同部位中多效唑的方法中，步骤c中，所述
desi检测的条件为：正离子全扫描，喷雾电压3.5～3.9kv。扫描范围：100～600m/z。空间分辨率110～200μm。喷雾器压力0.6～0.8mpa。离子源温度160～180℃。
13.优选地，步骤c中，所述desi检测的条件为：正离子全扫描，喷雾电压3.5kv。扫描范围：100～600m/z。空间分辨率110μm。喷雾器压力0.6mpa。离子源温度160℃。
14.进一步地，步骤c中，所述desi检测采用的雾化剂为含有0.35～0.45wt％的甲酸和98～100wt％甲醇的水溶液。
15.优选地，步骤c中，所述desi检测采用的雾化剂为含有0.4wt％的甲酸和98wt％甲醇的水溶液。
16.其中，上述检测附子土壤和/或附子不同部位中多效唑的方法中，步骤a中，所述待测样品溶液的制备是分别将不同生长时期的附子根部土壤、附子根和附子茎叶干燥，打粉，过筛，加入冰醋酸溶液静置，加入乙腈混匀，加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末，振荡，冷却，离心，取上清液置于装有净化材料的分散固相萃取净化管中使净化完全，离心，取上清液置于氮吹仪上水浴浓缩，加入乙腈混匀，滤过即得。
17.优选地，步骤a中，所述待测样品溶液的制备是将不同生长时期的附子根部土壤、附子根和附子茎叶干燥，打粉，过三号筛，分别精密称取3g置于50ml聚丙乙烯具塞离心管中，加入15ml体积百分比为1％的冰醋酸溶液，涡旋使药粉充分浸润，静置30min，加入15ml乙腈，涡旋混匀，置振荡器震荡5min，加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末，其中无水硫酸镁与无水乙酸钠的质量比为4:1，摇散，振荡3min，于冰浴中冷却10min，离心5分钟，取上清液9ml置于装有净化材料的分散固相萃取净化管中使净化完全，离心5分钟，精密吸取上清液5ml置于氮吹仪上于40℃水浴浓缩至4ml，加入乙腈稀释至1.0ml，混匀，滤过即得。
18.进一步地，步骤a中，所述净化材料为无水硫酸镁900mg，n-丙基乙二胺300mg，十八烷基硅烷键合硅胶300mg，硅胶300mg，石墨化碳黑90mg。
19.本发明的有益效果是：
20.本发明采用desi(电喷雾解析电离成像技术)对附子根部土壤和/或附子不同部位中的多效唑进行质谱成像，相比现有技术中常用的液相色谱法，本发明方法能够更加快速、直观，通过成像图反映出附子不同部位的多效唑的分布以及多效唑在不同部位中的含量差异，相比液相色谱能够获得更多的信息。本发明方法能够实现附子在生长过程中对其植物生长调节剂的实时监控，从而掌握附子的生长情况。
附图说明
21.图1为实施例1中附子根部土壤及附子不同部位样品点样分布。
22.图2为实施例1中附子根部土壤及附子不同部位样品多效唑质谱成像图。
23.图3为验证例1中附子根部土壤及附子不同部位样品多效唑的响应值。
具体实施方式
24.下面将通过具体的实施例对本发明作进一步地详细阐述。
25.实施例1
26.a、待测样品和对照品溶液的制备
27.按照表1采集不同时间点的附子生长土壤、附子地上部分(茎叶)、附子地下部分
(根)，采集完成后至于-80℃进行储藏，检测时取出，分别进行干燥，打粉，过三号筛，分别精密称定粉末3g置于50ml聚苯乙烯具塞离心管中，加入15ml1％的冰醋酸溶液，涡旋使药粉充分浸润，放置30min，加入乙腈15ml，涡旋混匀，置于振荡器上剧烈震荡(500次/分)5min，加入6g无水硫酸镁和1.5g无水乙酸钠的混合粉末，立即摇散，再置于振荡器上剧烈振荡(500次/分)3min，在冰浴中冷却10min，离心(每分钟4000转)5分钟，取上清液9ml，置于预先装有净化材料的分散固相萃取净化管，净化材料为无水硫酸镁900mg，n-丙基乙二胺300mg，十八烷基硅烷键合硅胶300mg，硅胶300mg，石墨化碳黑90mg，涡旋使充分混匀，置于振荡器上剧烈振荡(500次/分)5min使净化完全，离心(每分钟4000转)5分钟，精密吸取上清液5ml，置氮吹仪上于40℃水浴浓缩至0.4ml，加乙腈稀释至1.0ml，涡旋混匀，滤过，取续滤液，即得。
28.精密称取多效唑对照品适量，用甲醇溶解，配制成每1ml含有多效唑1-1000μg的溶液。
29.b、点样
30.在滤纸上打孔，打孔的直径为4mm，分别吸取待测样品溶液和对照品溶液2μl进行点样，晾干，置于导电玻璃板上，具体点样样品信息见图1。
31.c、检测
32.将导电玻璃板放置于质谱成像仪上检测，解析电喷雾电离离子源(desi)正离子全扫描，喷雾电压3.5kv，扫描范围：100-600m/z，空间分辨率110μm，喷雾器压力0.6mpa，雾化剂为含有0.4wt％的甲酸和98wt％甲醇的水溶液，离子源温度160℃。根据成像结果，对待测样品中多效唑的残留进行判定。
33.将得到的原始数据采用hdi软件进行成像分析，结果如图2所示，与图1相对应，显黄色的为多效唑对照品，显浅蓝色主要是收集泥土的样品，其它显黑色的样品表示没有检测到多效唑。
34.表1样品来源信息表
35.[0036][0037]
验证例1
[0038]
采用液相色谱-质谱联用方法对附子土壤及不同部位中多效唑进行检测，包括以下步骤：
[0039]
a、制备待测样品、对照品溶液，同实施例1中的步骤a；
[0040]
b、仪器分析条件；色谱条件：色谱柱：acquity uplc
r beh c18(2.1mm
×
100mm，1.7μm)色谱柱；流动相：0.1％甲酸铵水(a)-0.1％甲酸铵乙腈(b)，梯度洗脱程序见下表2，流速0.4ml
·
min-1
，柱温40℃，进样量1μl。
[0041]
表2uplc梯度洗脱程序
[0042]
时间(t/min)0.1％甲酸铵水溶液(a)0.1％甲酸铵乙腈(b)09553703053070601001101001295514955
[0043]
q-tof/ms条件
[0044]
质谱采用waters synapt g2 hdms系统。以氮气作为雾化、锥孔气，源温度(source temperature)：150℃，反向锥孔气流(cone gas flow)：50l/h，脱溶剂气温度(desolvation temperature)：450℃，脱溶剂气流(desolvation gas flow)：800l/h，样品锥空电压(sampling cone)：40v，萃取锥空电压(extraction cone)：4v，毛细管电压(capillary voltage)：正离子模式2.5kv，扫描时间(scan time)：0.2s，扫描间隔(inter scan time)：0.02s，质荷比：m/z 100-600da，锁定质量数亮氨酸脑啡肽：正离子模式(esi+)m/z 556.2766。
[0045]
c、数据分析。
[0046]
对收集的样品进行液相色谱-质谱联用数据采集，并对其进行分析，发现收集的样品中，土壤样品中均含有一定量的多效唑，地上地下的个别样品中多效唑的含量较高。具体见图3，图中各样品的响应值与上述质谱成像的响应值基本匹配。
[0047]
通过上述实施例可以看到，本发明方法将质谱成像与液相色谱-质谱联用进行验证，试验结果基本吻合。采用本发明方法能够实现对附子种植土壤、附子不同部位的多效唑高分辨质谱成像，从而能够快速、直观地分析样品中多效唑的残留。