技术特征：
1.一种检测样本中替格瑞洛及其代谢物的方法，其特征在于，其包括：采用液相色谱串联质谱检测样本中的替格瑞洛及其代谢产物；所述色谱包括采用流动相a和流动相b进行梯度洗脱；所述流动相a为含甲酸的水溶液，其中，甲酸的体积分数为0.05％～0.2％；所述流动相b包括乙腈溶液；所述洗脱的条件如下：0～1.5min，流动相a的体积百分比由80％～99％降至47％～67％，流动相b的体积百分比由1％～20％增至33％～53％；1.5～3.8min，流动相a体积百分比维持在47％～67％，流动相b体积百分比维持在33％～53％；3.8～3.81min，流动相a体积百分比由47％～67％降至1％～15％，流动相b体积百分比由33％～53％增至85％～99％；3.81～4.5min，流动相a体积百分比维持在1％～15％，流动相b体积百分比维持在85％～99％；所述方法不以疾病的诊断或治疗为直接目的。2.根据权利要求1所述的检测样本中替格瑞洛及其代谢物的方法，其特征在于，所述洗脱的条件如下：0～1.5min，流动相a的体积百分比由90％降至57％，流动相b的体积百分比由10％增至43％；1.5～3.8min，流动相a体积百分比维持在57％，流动相b体积百分比维持在43％；3.8～3.81min，流动相a体积百分比由57％降至5％，流动相b体积百分比由43％增至95％；3.81～4.5min，流动相a体积百分比维持在5％，流动相b体积百分比维持在95％；优选地，所述梯度洗脱的流速为0.2～0.6ml/min；优选地，所述色谱的条件如下：色谱柱为waters acquitytm beh c18色谱柱(2.1
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50mm，1.7μm)和waters vanguardtm预柱(1.7μm，2.1
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5mm)，色谱柱的柱温为30～40℃，进样器温度为4～10℃，进样量为0.1～5μl。3.根据权利要求2所述的检测样本中替格瑞洛及其代谢物的方法，其特征在于，质谱采用esi离子源，检测方式为正离子检测，扫描方式为多重反应监测，离子源温度为130～170℃，脱溶剂温度为450～550℃，脱溶剂气流速为700～900l/hr，毛细管电压为2～4kv，锥孔反吹气流量30～70l/hr。4.根据权利要求1～3所述的检测样本中替格瑞洛及其代谢物的方法，其特征在于，所述代谢物包括ar-c124910xx和ar-c133913xx中的至少一种；优选地，所述样本包括：含有全血样本和/或血浆样本的环境样本、全血样本以及血浆样本中的任意一种。5.根据权利要求4所述的检测样本中替格瑞洛及其代谢物的方法，其特征在于，质谱检测的离子对如下：替格瑞洛的离子对为523.0
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153.0；ar-c124910xx的离子对为479.0
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153.0；ar-c133913xx的离子对为371.0
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183.1。6.根据权利要求4所述的检测样本中替格瑞洛及其代谢物的方法，其特征在于，所述液相色谱串联质谱检测包括样本前处理步骤，所述样本前处理包括将待测样本、内标和沉淀
剂混合以进行蛋白沉淀；优选地，所述沉淀剂包括乙腈或甲醇，进行蛋白沉淀时，乙腈或甲醇的体积为200-400μl。7.试剂组合在制备用于液相色谱串联质谱检测样本中替格瑞洛及其代谢物的试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂组合包括用于实施如权利要求1～6任一项所述的试剂组合，所述试剂盒检测样本中替格瑞洛及其代谢物的方法如权利要求1～6任一项所述；优选地，所述试剂组合包括：如权利要求1～6任一项所述的流动相a、流动相b和沉淀剂；优选地，所述试剂盒还包括替格瑞洛及其代谢物的校准品、质控品和内标。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括：限定有如权利要求1～6任一项所述方法的使用说明书。9.一种检测样本中替格瑞洛及其代谢物的试剂盒，其特征在于，其包括如权利要求7所述的试剂组合，所述试剂盒检测样本中替格瑞洛及其代谢物的方法如权利要求1～6任一项所述。10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括限定有如权利要求1～6任一项所述方法的使用说明书。
技术总结
本发明公开了一种检测替格瑞洛及其代谢物的试剂盒及方法，涉及生物检测领域。本发明提出并验证了一种新的能给对替格瑞洛及其代谢物同时进行测定的方法，避免了同一样本需要多次检测才能获得对应结果的问题；采用超高效液相色谱，较高效液相色谱而言，检测时间大大缩短，检测结果的准确度和稳定性均更高；且样本前处理方法简单，无需加稳定剂，可操作性强；无需昂贵的试剂，血样用量少，成本低，适合常规药物浓度监测及相关临床研究，具有很好的应用前景。前景。前景。
技术研发人员：杨晶 王培乐 邢晗
受保护的技术使用者：郑州大学第一附属医院
技术研发日：2022.07.15
技术公布日：2022/11/22