RAGA蛋白作为预测肿瘤免疫治疗效果和预后的标志物的应用的制作方法

本发明涉及肿瘤标志物，更具体地，涉及raga蛋白作为预测肿瘤免疫治疗效果和预后的标志物的应用，尤其是作为预测肺癌免疫治疗效果和预后的标志物的应用。

背景技术：

1、肿瘤是威胁人类健康与生命的重大疾病，肿瘤治疗后复发且恶化是治愈肿瘤最主要的挑战之一，绝大多数肿瘤患者因为治疗后复发而最终死亡。近年来，肿瘤免疫治疗成为了肿瘤治疗的重要研究方向，肿瘤免疫治疗通常依据肿瘤免疫标志物建立个性化治疗方案。理想的肿瘤标志物应具有较高的鉴别敏感性和特异性，能够通过肿瘤标志物准确鉴别出肿瘤类型。然而，由于缺乏有效的疗效和预后生物标志物，许多患者并不能从这些疗法中受益，很大程度上限制了肿瘤免疫疗法的临床应用。虽然目前已经有报道多种肿瘤免疫治疗与预后分析的标志物，包括基因突变、癌基因或者抑癌基因等。例如，中国专利cn109576365a公开了一种预测头颈部肿瘤免疫治疗疗效的标志物及应用，所述标志物包含113个基因，其中113个基因组成的标志物可有效对患者分为免疫型与非免疫型，进一步结合由48个基因组成标志物，可将患者区分为免疫激活型，免疫耗竭型，与非免疫型三个亚组。然而，许多肿瘤预后分析标志物检测假阳性比率仍非常高，仍然具有很大的局限性，尤其是各种恶性肿瘤标志物尚未真正发现，这给肿瘤诊断和治疗带来了难题。

2、巨噬细胞作为一类具有吞噬清除能力的免疫细胞，是肿瘤微环境免疫调控的重要细胞。cd47蛋白作为巨噬细胞特异性的免疫检查点分子，在肿瘤组织中高表达，通过抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬杀伤导致肿瘤免疫逃逸，从而促进肿瘤恶性进展过程，cd47作为肿瘤免疫逃逸的重要检查点在肿瘤免疫治疗中发挥重要作用。rag蛋白家族是类似ras的小gtp酶，在氨基酸刺激的mtorc1活化过程中具有关键性的作用，可以将mtorc1招募到溶酶体，raga蛋白是其中的一员，已知具有调控细胞营养信号传导功能，但在肿瘤中的报道较少。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供raga蛋白作为标志物在制备预测肿瘤患者免疫治疗效果的产品中的应用。

2、本发明的第二个目的在于提供raga蛋白作为标志物在制备预测肿瘤患者预后的产品中的应用。

3、本发明的第三个目的在于提供检测raga蛋白表达的试剂在制备预测肿瘤患者免疫治疗效果的产品中的应用。

4、本发明的第四个目的在于提供检测raga蛋白表达的试剂在制备预测肿瘤患者预后的产品中的应用。

5、本发明的第五个目的在于提供一种预测肿瘤患者免疫治疗效果和预后的试剂盒。

6、本发明上述目的通过以下技术方案予以实现：

7、本发明通过免疫印迹法和流式细胞分析发现raga敲低促进cd47表达，从而抑制巨噬细胞吞噬肿瘤细胞。通过小鼠肿瘤模型发现raga敲低促进cd47免疫检查点治疗敏感性。通过raga和cd47特异性抗体检测肺癌肿瘤组织中raga和cd47，发现raga表达水平与cd47治疗敏感性负相关，与肿瘤患者预后分析明显相关，且raga高表达cd47低表达患者生存期最长。

8、本发明研究显示，raga蛋白能够抑制肿瘤巨噬细胞免疫检查点分子cd47蛋白，促进巨噬细胞吞噬，raga低表达肿瘤对cd47治疗抗体更敏感，即raga蛋白表达与肿瘤患者cd47免疫检查点治疗敏感性负相关，且raga在肿瘤组织中的表达与肿瘤患者预后呈明显正相关。表明raga蛋白可作为预测肿瘤免疫治疗效果与预后的标志性，可以快速、准确建立肿瘤免疫治疗方案及清楚地判断肿瘤患者预后状态。

9、因此，本发明首先提供raga蛋白作为标志物在制备预测肿瘤患者免疫治疗效果的产品中的应用。所述raga在肿瘤组织中的表达与cd47免疫检查点治疗敏感性负相关，raga低表达的肿瘤组织对cd47治疗抗体更敏感，可通过raga表达情况预测肿瘤患者免疫治疗效果；具体是预测肿瘤患者cd47免疫检查点的治疗效果。

10、raga蛋白单独或联合cd47蛋白作为标志物在制备预测肿瘤患者预后的产品中的应用。所述raga在肿瘤组织中的表达与肿瘤患者预后呈明显正相关，raga高表达患者表现出较好的生存期；而raga高表达且cd47低表达肿瘤患者生存期更长。

11、本发明还提供检测raga蛋白表达的试剂在制备预测肿瘤患者免疫治疗效果的产品中的应用。

12、检测raga蛋白表达的试剂单独或联合检测cd47蛋白表达的试剂在制备预测肿瘤患者预后的产品中的应用。

13、具体地，所述raga蛋白氨基酸序列如seq id no.1所示。

14、优选地，所述肿瘤为肺癌。

15、优选地，所述检测raga蛋白表达的试剂为raga蛋白的特异性抗体。

16、优选地，所述产品为试剂盒。

17、本发明还提供一种预测肿瘤患者免疫治疗效果和预后的试剂盒，所述试剂盒包含检测raga蛋白表达的试剂。

18、优选地，所述试剂盒还包含检测cd47蛋白表达的试剂。

19、优选地，所述检测raga蛋白表达的试剂为raga蛋白的特异性抗体。

20、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

21、本发明提供了raga蛋白作为预测肿瘤免疫治疗效果和预后的标志物的新用途。本发明研究显示，raga蛋白能够抑制肿瘤巨噬细胞免疫检查点分子cd47蛋白，促进巨噬细胞吞噬，raga低表达肿瘤对cd47治疗抗体更敏感，即raga蛋白表达与肿瘤患者cd47免疫检查点治疗敏感性负相关，且raga在肿瘤组织中的表达与肿瘤患者预后呈明显正相关。表明raga蛋白可作为预测肿瘤免疫治疗效果与预后的标志性，可以快速、准确建立肿瘤免疫治疗方案及清楚地判断肿瘤患者预后状态，尤其适用于肺癌的免疫治疗及预后分析研究。

技术特征：

1.raga蛋白作为标志物在制备预测肿瘤患者免疫治疗效果的产品中的应用。

2.raga蛋白单独或联合cd47蛋白作为标志物在制备预测肿瘤患者预后的产品中的应用。

3.检测raga蛋白表达的试剂在制备预测肿瘤患者免疫治疗效果的产品中的应用。

4.检测raga蛋白表达的试剂单独或联合检测cd47蛋白表达的试剂在制备预测肿瘤患者预后的产品中的应用。

5.根据权利要求1～4任一所述应用，其特征在于，所述raga蛋白氨基酸序列如seq idno.1所示。

6.根据权利要求1～4任一所述应用，其特征在于，所述肿瘤为肺癌。

7.根据权利要求3或4所述应用，其特征在于，所述检测raga蛋白表达的试剂为raga蛋白的特异性抗体。

8.根据权利要求1～4任一所述应用，其特征在于，所述产品为试剂盒。

9.一种预测肿瘤患者免疫治疗效果和预后的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含检测raga蛋白表达的试剂。

10.根据权利要求9所述试剂盒，其特征在于，所述检测raga蛋白表达的试剂为raga蛋白的特异性抗体。

技术总结
本发明公开了RAGA蛋白作为预测肿瘤免疫治疗效果和预后的标志物的应用。本发明研究显示，RAGA蛋白能够抑制肿瘤巨噬细胞免疫检查点分子CD47蛋白，促进巨噬细胞吞噬，RAGA低表达肿瘤对CD47治疗抗体更敏感，即RAGA蛋白表达与肿瘤患者CD47免疫检查点治疗敏感性负相关，且RAGA在肿瘤组织中的表达与肿瘤患者预后呈明显正相关。表明RAGA蛋白可作为预测肿瘤免疫治疗效果与预后的标志性，可以快速、准确建立肿瘤免疫治疗方案及清楚地判断肿瘤患者预后状态，尤其适用于肺癌的免疫治疗及预后分析研究。

技术研发人员：金国祥
受保护的技术使用者：广东省人民医院
技术研发日：
技术公布日：2024/2/25