一种基于定量核磁共振氢谱法测量马来酸氨氯地平的方法

1.本发明涉及药品测量技术领域，更具体地说，它涉及一种基于定量核磁共振氢谱法测量马来酸氨氯地平的方法。


背景技术：

2.马来酸左旋氨氯地平是临床上常用的治疗轻、中、重度高血压药物，属于二氢吡啶类钙通道阻滞剂，是氨氯地平的左旋体。马来酸左旋氨氯地平通过阻断电压依赖性l型钙通道而具有抗高血压作用，从而减少细胞外钙离子进入血管平滑肌细胞，导致血管扩张和血压下降。减少外周血管总阻力，缓解冠状痉挛，减轻心脏负荷，降低心脏能量消耗和对氧的需求，从而减少心绞痛。
3.目前，马来酸氨氯地平结构测定的相关资料较少，现有的采用红外光谱法、元素分析法、核磁共振波谱法及x射线粉末衍射法等手段测定马来酸左旋氨氯地平的结构。其中，核磁共振波谱法所测得数据未见有波谱图形。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供一种基于定量核磁共振氢谱法测量马来酸氨氯地平的方法，对马来酸氨氯地平的结构进行确证，对结构中的c、h原子进行归属，得到系列图谱，弥补马来酸氨氯地平核磁共振波谱图数据的缺失。
5.本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种基于定量核磁共振氢谱法测量马来酸氨氯地平的方法，包括如下步骤：
6.s1:制备用于核磁共振测量的马来酸氨氯地平溶液；取马来酸氨氯地平5.00mg，精密称定，置ep管中，加入氘代dmso 0.6ml溶解，振荡，用移液枪将溶液移至5mm核磁管中静置，将核磁管放置超导nmr谱仪中；
7.s2:定量1hnmr参数；启动超导nmr谱仪，脉冲程序为zg30，探头温度为295.2k，谱宽(sw)为7211.5hz(谱仪对应的质子共振频率为600mhz时)，中心频率(o1)为3000.5hz(谱仪对应的质子共振频率为600mhz时)，采样次数(ns)为16，线宽因子(lb)为0.3hz.对采样时间(aq)、延迟时间(d1)进行设置；进样、标峰、计算信噪比。
8.本发明进一步设置为：对所述步骤s2中，为保证结果的准确性，使d1≥5t1，t1为纵向弛豫时间。
9.本发明进一步设置为：对所述步骤s2中，设置系列延迟时间数值(vdlist)参数0.01、0.1、0.25、0.5、1、2、3、4、5、10、15、20；检测得到马来酸氨氯地平t1＝787.1ms，设定d1为4.0s，采样时间aq＝4.5s，使aq+d1≥5t1。
10.本发明进一步设置为：对所述步骤s2中设置采样次数(ns)为16次。
11.综上所述，本发明具有以下有益效果：采用nmr技术的一维、二维实验方法对马来酸氨氯地平的结构进行确证；同时，建立了定量核磁共振氢谱法测定马来酸氨氯地平的含量，此法的稳定性好，回收率好。
附图说明
12.图1是本发明实施例马来酸氨氯地平化学分子结构式；
13.图2是本发明实施例马来酸氨氯地平核磁共振氢谱图；
14.图3是本发明实施例马来酸氨氯地平核磁共振碳谱图；
15.图4是本发明实施例马来酸氨氯地平核磁共振dept-90谱图；
16.图5是本发明实施例马来酸氨氯地平核磁共振dept-135谱图；
17.图6是本发明实施例马来酸氨氯地平核磁共振hmbc谱图；
18.图7是本发明实施例ti测定图；
19.图8是本发明实施例线性范围测定结果。
具体实施方式
20.以下结合附图1-8对本发明作进一步详细说明。
21.实施例：取马来酸氨氯地平15.00mg，精密称定，置ep管中，加入氘代dmso 0.6ml溶解，振荡，用移液枪将溶液移至5mm核磁管中，静置。测定温度为298.15k，1h nmr和
13
c nmr的工作频率分别为600.1mhz和150.9mhz。1h nmr和
13
c nmr和dept-135，dept-90采用标准脉冲程序，谱宽分别为12019.230hz、36231.883hz和24038.461hz、36231.883hz。hmbc的f2维(1h)和f1维(
13
c)维谱宽分别为5617.978hz和33200.277hz，累加次数为32，得到马来酸氨氯地平的波谱图。
22.马来酸氨氯地平的质量ws＝wr*(as/ar)*(es/er)；
23.wr，内标物的质量；as，待测物特征峰面积；ar，内标物的特征峰面积；es，待测物的特征峰质子当量质量；er，内标物的特征峰质子当量质量。
24.选择四甲基硅烷作为内标物，四甲基硅烷(tetramethylsilane，tms)，化学式(ch3)4si，质子峰化学位移：0ppm，质子数12；氘代dmso 0.6ml含tms 0.288mg。
25.现有的定量核磁方法大多数采用内标法，用以校准和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，其测定的结果相比于外标法更准确。内标法需要在样品中加入一定量的内标物，内标物的谱峰对待测物的谱峰不产生干扰，测定内标物和待测物的特征峰面积的相对响应值，即可得出待测物的质量。tms常常作为核磁共振试验的内标物，溶解于大部分有机溶剂，具有惰性、易挥发等特点。本实验所选用的氘代dmso 0.6ml含0.288mg的tms，避免筛选其他内标物这一过程。故选用氘代dmso中已添加的tms作为内标物。
26.一种基于定量核磁共振氢谱法测量马来酸氨氯地平的方法，如图1、图2所示，s1:制备用于核磁共振氢谱测量的马来酸氨氯地平溶液；取马来酸氨氯地平5.00mg，精密称定，置ep管中，加入氘代dmso 0.6ml溶解，振荡，用移液枪将溶液移至5mm核磁管中静置，将核磁管放置超导nmr谱仪中；
27.s2:定量1h nmr参数；启动超导nmr谱仪，脉冲程序为zg30，探头温度为295.2k，谱宽(sw)为7211.5hz(谱仪对应的质子共振频率为600mhz时)，中心频率(o1)为3000.5hz(谱仪对应的质子共振频率为600mhz时)，采样次数(ns)为16，线宽因子(lb)为0.3hz.马来酸氨氯地平质子信号δh8.40(1h，s)作为定量峰；进样、标峰、计算信噪比。为保证结果的准确性，使d1≥5t1，设置vdlist参数0.01、0.1、0.25、0.5、1、2、3、4、5、10、15、20；检测得到马来酸氨氯地平t1＝787.1ms，设定d1为4.0s，采样次数(ns)为16次，采样时间aq＝4.5s，使aq+d1≥
5t1，t1为纵向弛豫时间。
28.1.定量限测定
29.按照步骤s1配制马来酸氨氯地平溶液待测样品，标号1。在步骤s2中波谱条件下，进样，标峰，计算信噪比。
30.用移液枪取标号1溶液0.120ml置ep管中,加入氘代dmso，稀释5倍使成0.6ml溶液，振荡，用移液枪将溶液移至5mm核磁管中，静置，标号2。在步骤s2中色谱条件下，进样，标峰，计算信噪比。
31.用移液枪取标号2溶液0.120ml置ep管中,加入氘代dmso，稀释5倍使成0.6ml溶液，振荡，用移液枪将溶液移至5mm核磁管中，静置，标号3。在步骤s2中色谱条件下，进样，标峰，计算信噪比，其进样、标峰、信噪比的结果见表一。
32.表一待测样品信噪比结果
[0033][0034]
2.线性范围测定
[0035]
按照步骤s1配制马来酸氨氯地平溶液待测样品，配制6个不同浓度的待测样品。取6支5mm核磁管并进行标号，分别为1，2，3，4，5，6；精密称取3mg/4mg/5mg/6mg/7mg/8mg马来酸氨氯地平并溶解于600μl氘代dmso，转移至核磁管。进行1h nmr实验，采集数据处理后，计算马来酸氨氯地平特征峰峰面积与内标物特征峰面积的比值，将比值设为纵坐标；计算马来酸氨氯地平与内标物的质量比，将质量比设为横坐标进行线性回归，得马来酸氨氯地平到回归方程y＝0.0146x-0.023。结果显示，相关性r＝0.998＞0.95，该方法相关性良好，6支试管的测量结果见表二。
[0036]
表二线性范围的测定
[0037][0038]
3.稳定性测定
[0039]
按照步骤s1配制马来酸氨氯地平溶液待测样品，精密称取马来酸氨氯地5mg至ep管中，加入氘代dmso 0.6ml溶解，振荡，用移液枪将溶液移至5mm核磁管，测试。分别在0h，
6h，12h，18h，24h，36h，48h，进样测定1h nmr实验，计算出马来酸氨氯地平实际值，马来酸氨氯地平实际值(见表三)与马来酸氨氯地平的称量值比值的rsd＝11.0％。
[0040]
表三稳定性实验
[0041][0042]
4.仪器精密度试验
[0043]
按照步骤s1配制马来酸氨氯地平溶液待测样品，精密称取马来酸氨氯地5mg至ep管中，加入氘代dmso 0.6ml溶解，振荡，用移液枪将溶液移至5mm核磁管，按1h nmr测定条件连续测定5次，计算出马来酸氨氯地平实际值，5次测定的rsd(见表四)为5.1％。结果显示，该方法的精密度较好。仪器精密度的rsd为5.1％，结果偏大。
[0044]
表四仪器精密度
[0045][0046]
5.回收率试验
[0047]
按照步骤s1制备核磁待测样品配制待测样品，分别标号为1、2、3、4、5、6、7、8，再按1h nmr测定条件进样，根据待测物峰面积与内标物峰面积的比值计算得出马来酸氨氯地平实际值，再计算其回收率，结果显示马来酸氨氯地平的平均回收率(见表五)为103.5％。
[0048]
表五回收率试验
[0049][0050]
本次测定采用核磁共振波谱法对马来酸氨氯地平的结构进行确证，波谱数据解析，补充相应的波谱图形；在定量核磁共振波谱条件优化、方法学考察中，马来酸氨氯地平标准曲线的相关系数为0.998，回归方程y＝0.0146x-0.023，仪器精密度实验的rsd为5.1％，回收率平均值103.5％。所以，马来酸氨氯地平在选定范围内线性关系良好，精密度较好，回收率较好。
[0051]
本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。