用于制备泪液稀释液的方法与流程

本发明涉及用于制备泪液稀释液的方法，特别是使用吸附性片材采集的泪液样本和使用泪液样本洗脱液制备泪液稀释液的方法。

背景技术：

1、泪液是弱碱性的透明液体，其主要包含水，并且还含有无机盐以及生物活性分子如蛋白质、脂类、溶菌酶、补体系统等物质，是组成非常复杂的体系。泪液均匀地分布在结膜囊内，由此形成被称为泪膜的液态薄膜。通常将位于角膜前的泪膜称为角膜前泪膜(pctf)。角膜前泪膜具有仅6～10nm厚度，然而其能够保持眼球的湿润并且通过填充角膜上的微小起伏来改善眼镜的屈光。

2、人角膜前泪膜的分泌状况不仅受到眼表的代谢状态的影响，而且通过分析其组成还能检测眼表疾病的存在和人体内环境平衡。因此，pctf成分的生化分析结果具有检测疾病存在或进展并应用于临床治疗的潜力。另外，由于泪液存在于体表(眼表)，因此对其进行采样的过程为非侵入性的，相比于采集血样、尿样和粪便样本而言，为受试者提供了更为舒适、卫生和简便的选择。

3、然而，相比于采集血样、尿样和粪便样本等临床上的常规样本，能够被采集到的泪液样本量过小。由此导致检测结果的检出率、准确性、可重现性、可靠性均较差，或者必须付出极大努力才能保证可靠结果。

4、此外，目前的泪液样本的采集方式主要包括刺激采泪法和毛细管采泪法。前者需要刺激泪液分泌，通常将刺激性物质如清凉油涂抹于下眼睑或使用针刺激睛明穴的方式来实现，容易导致受试者不适，样本量也不能定量采集，因而检测结果波动极大；后者需要眼部出现反射泪液之后用毛细管在眼表吸取泪液，对操作者的要求极高，否则易伤害到受试者眼部，并且受制于毛细管的容量，采集的样本量过少，不利于后续检测。另外，刺激采泪法由于使用了刺激性物质，因此存在污染样本的风险，不能真实反映泪液的情况。

5、同时，目前的免疫学检测技术，包括荧光免疫层析技术、胶体金免疫层析技术、磁颗粒免疫化学发光技术、乳胶微球免疫层析技术和酶联免疫吸附技术(elisa)等，为了获得更可靠的检测结果，均需要大体积的样本以及多个单独的仪器设备配合，步骤繁琐冗长，对操作人员的操作要求高，流程耗费的时间长；因而限制了它们在检测小体积样本中的应用。而如果在这些方法中采用小体积的样本，则结果可靠性差，使得获得临床上有意义的判断依据存在困难。

6、因此，本领域亟需能够可靠地采集和处理小体积泪液样本的手段。

技术实现思路

1、鉴于现有技术中存在的问题，发明人发现通过使用吸收性材料能够稳定采集小体积的泪液样本，并且经过特定组成的样本洗脱液洗脱之后能够稳定释放出样本的待检测物质。由此可以获得能够进一步用于待检测物质的定性、半定量和定量分析。在另外的步骤中，还可以通过不同的待检测物质的分析结果，实现对受试者的各种生理参数的分析。由此，完成了本发明。

2、因此，在第一方面中，在本文中提供了一种制备泪液稀释液的方法，其包括以下步骤：

3、a.使第一吸收性片材与眼表接触以采集泪液，获得经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材，其中经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材具有预定长度的完全饱和的部分或完全被泪液饱和；和

4、b.使第一吸收性片材的预定长度的完全饱和的部分与预定体积的样本洗脱液接触预定时间获得泪液稀释液，或使完全被泪液饱和的第一吸收性片材浸泡于预定体积的样本洗脱液中以获得泪液稀释液。

5、在一个实施方案中，第一吸收性片材与样本洗脱液接触的预定时间为1s～5min，优选3s～3min，更优选5s～1min。第一吸收性片材与样本洗脱液接触可以以浸没和/或搅拌的方式进行。

6、在一个实施方案中，所述样本洗脱液包含作为溶剂的水、缓冲剂、表面活性剂、稳定剂、防腐剂和渗透压调节剂，并且具有7.0～9.0的ph值。

7、在一个实施方案中，为了将样本洗脱稀释剂调节至7.0～9.0的ph值，任选地使用ph值调节剂。优选地，ph调节剂包括有机或无机酸，例如盐酸、硫酸、磷酸；或有机或无机碱，例如氢氧化钠、氢氧化钾。ph调节剂的含量没有特别限制，本领域技术人员可以根据样本洗脱液的最终ph值选择其浓度和用量，从而使样本洗脱液达到最终的期望的ph值。在一个实施方案中，样本洗脱液具有弱碱性，例如其ph值为约7.1～8.5，优选7.5～8.2，更优选7.8～8.1，例如约7.4、7.6或8.0。优选地，样本洗脱液的最终ph通过hcl溶液来调节。

8、在一个实施方案中，缓冲剂选自有机胺类缓冲剂，优选带有羟基的有机胺类缓冲剂。作为一个实例，缓冲剂可以选自三羟甲基氨基丙烷，即氨基丁三醇(tris)和/或三羟甲基氨基丙烷-盐酸(tris-hcl)。在样本洗脱液中，缓冲剂的含量可以在10mm至100mm，优选20mm至80mm之间，更优选35mm至60mm之间，尤其是约50mm。

9、在一个实施方案中，三羟甲基氨基甲烷作为缓冲剂并且hcl作为ph值调节剂的组合是优选的。

10、在一个实施方案中，表面活性剂可以包括第一表面活性剂和第二表面活性剂，二者可以相同或不同。优选地，表面活性剂选自非离子型表面活性剂。在一个实施方案中，第一表面活性剂不同于第二表面活性剂。优选地，第一表面活性剂选自聚山梨醇酯类表面活性剂，更优选吐温(tween)系列的表面活性剂，例如吐温20、吐温80等。优选地，第二表面活性剂选自嵌段聚醚型表面活性剂，例如具有端羟基的聚乙二醇类表面活性剂，更优选聚乙二醇苯基醚类表面活性剂。作为一个实例，第二表面活性剂可以为聚乙二醇单-4-辛基苯基醚，其例如可以以名称曲拉通(tritontm)获得；或者，例如为甲基环氧乙烷与1，2-乙二胺和环氧乙烷聚合物型表面活性剂。作为一个实例，其例如可以以名称tetronic 1307(s9)获得。在样本洗脱液中，表面活性剂的含量可以在0.1重量％至5％重量之间，优选在0.5重量％至4％重量之间，更优选在1重量％至3.5％重量之间。第一表面活性剂与第二表面活性剂之间的重量比例可以为10∶1至1∶10之间，优选1∶1至1∶10之间，更优选1∶1至1∶8之间，例如约1∶5。在一个实施方案中，第一表面活性剂不同于第二表面活性剂，和第一表面活性剂选自吐温系列表面活性剂并且第二表面活性剂选自曲拉通系列表面活性剂；吐温20和曲拉通x-100的组合是优选的，其浓度比优选为约1∶1、1∶2、1∶5或1∶10；在最优选的实施方案中，样本洗脱液中含有约0.5％重量的吐温20和约2.5％重量的曲拉通x-100。

11、在一个实施方案中，稳定剂选自白蛋白、酪蛋白、明胶等。优选地，稳定剂选自酪蛋白。在样本洗脱液中，稳定剂的含量可以在0.1重量％至5％重量之间，优选在0.5重量％至4％重量之间，更优选在0.8重量％至2％重量之间，例如为约1重量％。

12、在一个实施方案中，样本洗脱液中不包含粒度大于0.50μm的颗粒物，优选不包含粒度大于0.45μm的颗粒物，更优选不包含粒度大于0.40μm的颗粒物。

13、在一个实施方案中，防腐剂选自proclin-300、叠氮化钠、硫柳汞等。在样本洗脱液中，防腐剂的含量可以在0.01至0.5重量％之间，优选在0.05至0.4重量％之间，更优选在0.1至0.3重量％之间，例如为0.1重量％、0.2重量％或0.3重量％。

14、在一个实施方案中，渗透压调节剂为nacl。

15、在一个实施方案中，样本洗脱液可以包含或不包含有机溶剂。优选地，样本洗脱液不包含有机溶剂。因此，在优选的实施方案中，样本洗脱液仅包含水作为溶剂。

16、在一个实施方案中，样本洗脱液可以包含约50mm的缓冲剂，约0.5％的第一表面活性剂，约2.5重量％的第二表面活性剂，约1重量％的稳定剂，以及任选的约0.2重量％的稳定剂和约0.9重量％的nacl，并且具有约7.4的ph值。

17、作为一个实例，样本洗脱液可以包含约50mm的tris缓冲剂，约0.5％的吐温20，约2.5重量％的曲拉通x-100，约1重量％的酪蛋白，以及任选的约0.2重量％的proclin-300和约0.9重量％的nacl，并且具有约7.4的ph值。

18、作为一个实例，样本洗脱液包含约50mm的tris缓冲剂，约0.5％的吐温20，约2.5重量％的曲拉通x-100，约1重量％的酪蛋白，以及约0.2重量％的proclin-300和约0.9重量％的nacl，并且具有约7.4的ph值。

19、在一个实施方案中，样本洗脱液用于洗脱第一吸收性片材所吸附的泪液。在另一个实施方案中，第一吸收性片材与样本洗脱液组成泪液样本采集和处理装置。

20、在一个实施方案中，第一吸收性片材可以具有一个或多个染色标示线层。染色标示线层可以包含荧光物质例如荧光素钠。优选地，第一吸收性片材为滤纸条。作为一个实例，第一吸收性片材例如是schirmer泪液分泌实验的检测滤纸条。在一个实施方案中，第一吸收性片材还具有一个、两个或更多个从端部开始的可读的刻度。该端部优选为采样端。作为第一吸收性片材的基质材料没有特别限制。在一个实施方案中，第一吸收性片材是亲水性惰性片材，其基质材料可以包含纤维素；聚合物，如聚氨酯。

21、在一个实施方案中，第一吸收性片材的长度为至少约5mm，至少约6mm，至少约10mm，至少约15mm，甚至至少约20mm。在一个实施方案中，第一吸收性片材的宽度为至少约5mm，至少约6mm，或至少约7mm。在一个实施方案中，所述预定长度为至少约5mm，至少约6mm，或至少约7mm，或至少约8mm，或至少约10mm。

22、在一个实施方案中，预定长度的完全饱和的部分含有的泪液为约0.0001～0.0050ml，优选约0.001～0.004ml，更优选约0.0015～0.0025ml，还更优选约0.0018～0.0020ml，最优选约0.0020ml。在本公开中，预定长度的完全饱和的部分含有的泪液也可被简称为“同一泪液样本”，因为第一吸收性片材为一次性使用，每次采集操作所采集的泪液样本仅用于一个检测过程。

23、在一个实施方案中，预定体积的样本洗脱液为至少约0.100ml，或至少约0.150，或至少约0.200ml，或至少约0.250ml，或至少约0.300ml，或至少约0.500ml。

24、在本文的第二方面，还提供了一种免疫学检测试剂盒，其包括免疫学检测卡，其中所述检测卡包括支持物，与支持物固定连接的印迹膜，位于印迹膜的第一端的吸收性垫和位于印迹膜的第二端的样品接收垫，吸收性垫与样品接收垫在空间上彼此分离并且二者之间的印迹膜上存在靠近吸收性垫一侧的控制线和靠近样品接收垫一侧的检测线。

25、在一个实施方案中，支持物由选自以下的至少一种材料制成：聚合物、玻璃和聚氯乙烯(pvc)、聚苯乙烯(ps)或其组合。

26、在一个实施方案中，印迹膜包含选自以下的至少一种材料：纤维素、硝酸纤维素和/或其组合。

27、在一个实施方案中，样品接收垫为玻璃纤维素膜、尼龙材质纤维素、聚酯纤维素。在一个实施方案中，样品接收垫包含下述物质的任一种：荧光乳胶微球、胶体金探针。优选地，荧光乳胶微球为结合荧光标记物探针的聚苯乙烯乳胶微球。

28、在一个实施方案中，免疫学检测卡还包括第二吸收性片材。第二吸收性片材可以与第一吸收性片材在尺寸和结构上相同或不同，但其包含确定含量的目标物质。优选地，第一吸收性片材与第二吸收性片材具有相同的基质材料和尺寸。

29、在一个实施方案中，免疫学检测包括荧光免疫层析、胶体金免疫层析、乳胶微球免疫层析、磁微粒化学发光和/或酶联免疫吸附等。在一个实施方案中，免疫学检测卡为荧光免疫层析检测卡或胶体金免疫层析检测卡。

30、在一个实施方案中，目标物质可以包括：il-8、il-1a、il-1b、il-12、il-6、il-8、肿瘤坏死因子α(tnf-a)和干扰素γ(inf-g)、溶菌酶、乳铁蛋白、表皮生长因子(egf)、脂质沉积蛋白-1、胱抑素s100、a1抗胰蛋白酶、α烯醇化酶、α-1-酸性糖蛋白1、s100 a8(钙粒蛋白a)、s100 a9(钙粒蛋白b)、s100 a4和s100 a11(钙质)、催乳素诱导蛋白(pip)、脯氨酸蛋白4(prr4)、prr3、nacpp4、s100a6、膜联蛋白a1(anxa1)、膜联蛋白a11(anxa11)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-s(cst4)、磷脂酶a2、激活蛋白(plaa)、乳珠蛋白b、亲脂素a、基质金属蛋白酶(mmp)-9、抗rovssa、lavssb抗体、抗a-福德林抗体、水通道蛋白5(aqp5)、补体c-3、白蛋白、钾离子、钠离子、氯离子等。

31、在一个实施方案中，检测线(12)包含鼠抗人基质金属蛋白酶-9 igg；优选地，检测线(12)的鼠抗人基质金属蛋白酶-9 igg浓度为约5.0mg/ml、4.0mg/ml、3.0mg/ml、2.0mg/ml、1.0mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml或这些值的任意两个作为端点的范围以及其中所包括的任意值。在一个实施方案中，控制线(b)包含羊抗鸡igy。在一个实施方案中，荧光乳胶微球包含偶联鼠抗人基质金属蛋白酶-9 igg。在一个实施方案中，检测线(12)包含鼠抗人基质金属蛋白酶-9 igg、控制线(11)包含羊抗鸡igy和荧光乳胶微球包含偶联鼠抗人基质金属蛋白酶-9 igg；因此免疫学检测卡可以用于检测人基质金属蛋白酶。

32、在第三方面，本公开还提供了一种免疫学检测卡的制备方法，包括以下步骤：

33、(i)提供具有控制线和检测线的印迹膜，任选地将其在37℃干燥8-20小时；

34、(ii)提供样品接收垫，并在样品接收垫上提供荧光乳胶微球或胶体金探针，任选地将其在37℃干燥8-20小时；

35、(iii)将样品接收垫放置在印迹膜的靠近检测线的第二端并使二者接触，和

36、(iv)将吸收性垫放置在印迹膜的靠近控制线的第一端并使二者接触。

37、在一个实施方案中，在样品接收垫上提供荧光乳胶微球。优选地，在样品接收垫上提供荧光乳胶微球包括以下步骤：

38、(ii-1)用活化液处理空白的荧光乳胶微球；

39、(ii-2)用偶联缓冲液处理步骤(ii-1)中获得的荧光乳胶微球，获得荧光乳胶微球混悬液；

40、(ii-3)用鼠抗人基质金属蛋白酶-9 igg处理步骤(ii-2)中获得的荧光乳胶微球混悬液；

41、(ii-4)用封闭液处理步骤(ii-3)中获得的荧光乳胶微球混悬液；

42、(ii-5)用第二洗涤液处理步骤(ii-4)中获得的荧光乳胶微球混悬液；

43、(ii-6)将步骤(ii-5)中获得的荧光乳胶微球混悬液用微球稀释液稀释后喷洒在空白的样品接收垫上。

44、优选地，在步骤(ii-1)之前还包括步骤(ii-0)用第一洗涤液洗涤荧光乳胶微球，以获得空白的荧光乳胶微球，更优选地，所述洗涤在超声下进行，还更优选地，所述洗涤还包括在超声处理之后离心。优选地，第一洗涤液包含吗啉乙磺酸，优选为吗啉乙磺酸的水溶液。

45、优选地，步骤(ii-1)的用活化液处理空白的荧光乳胶微球包括用第一活化液和第二活化液处理空白的荧光乳胶微球。第一活化液为n-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐在第一洗涤液中的溶液，优选地，n-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐的浓度为10～30mg/ml。第二活化液为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐在第一洗涤液中的溶液，优选地，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐的浓度为10～30mg/ml。封闭液包含酪蛋白、牛血清白蛋白和缓冲剂。

46、优选地，步骤(ii-2)的偶联缓冲液包含n-(2-羟乙基)哌嗪-n′-2-乙烷磺酸，其浓度优选为约6g/l，优选具有约8.0的ph值。

47、优选地，在步骤(ii-1)、(ii-2)、(ii-3)、(ii-4)和/或(ii-5)的处理之后还分别包括离心，优选进行5～60min，更优选进行10～40min，还更优选进行10～30min。

48、优选地，在步骤(ii-0)和/或(ii-4)还包括使用超声辅助洗涤。

49、优选地，步骤(ii-6)中的喷涂以5-10μl/cm的使用量进行。

50、优选地，在步骤(ii-3)中，鼠抗人基质金属蛋白酶9(mmp-9)igg与步骤(ii-2)中获得的荧光乳胶微球混悬液的质量比为(0.1-0.5)∶(1-5)。步骤(ii-3)的处理在35～40℃，优选37℃进行至少2小时，优选至少3小时的时间。

51、优选地，步骤(ii-4)的处理在35～40℃，优选37℃进行5～60min，更优选进行10～40min，还更优选进行10～30min的时间。

52、作为一个实例，第一洗涤液为具有约6.1的ph值的约10.66g/l的吗啉乙磺酸水溶液；第一活化液为约20mg/ml的n-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐在第一洗涤液中的溶液；第二活化液为约20mg/ml的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐在第一洗涤液中的溶液；偶联缓冲液为具有约8.0的ph值的约5.96g/l的n-(2-羟乙基)哌嗪-n′-2-乙烷磺酸溶液；封闭液为包含30g/l的酪蛋白，10g/l牛血清白蛋白与0.05mol/l的trisbase缓冲液的溶液；第二洗涤液为具有约8.0的ph的6g/l的trisbase缓冲液；和微球稀释液为具有约8.0的ph的30％蔗糖、0.5％酪蛋白、1％甘氨酸与50mm trisbase的缓冲液。

53、在第四方面，本文中还提供了一种检测泪液中目标物质的方法。

54、在一个实施方案中，检测泪液中目标物质的方法包括以下步骤：

55、a.使第一吸收性片材与眼表接触以采集泪液，获得经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材，其中经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材具有预定长度的完全饱和的部分或完全被泪液饱和；

56、b.使第一吸收性片材的预定长度的完全饱和的部分与预定体积的样本洗脱液接触预定时间获得泪液稀释液，或使完全被泪液饱和的第一吸收性片材浸泡于预定体积的样本洗脱液中以获得泪液稀释液；和

57、c.将获得的泪液稀释液用于免疫学检测，以分析泪液中的目标物质。

58、在一个实施方案中，检测泪液中目标物质的方法的步骤c包括使获得的泪液稀释液与本公开的第二方面中的免疫层析检测卡接触。

59、在一个实施方案中，检测泪液中目标物质的方法包括以下步骤：

60、a’.使第一吸收性片材与眼表接触以采集泪液，获得经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材，其中经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材具有完全饱和的部分；

61、b’.使第一吸收性片材与本公开的第二方面中的免疫学检测卡接触。

62、在一个实施方案中，检测泪液中目标物质的方法包括以下步骤：

63、a.使至少两个第一吸收性片材与同一受试者眼表在不同时间点接触以采集泪液，获得至少两个经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材，其中经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材具有预定长度的完全饱和的部分或完全被泪液饱和；

64、b.使每个第一吸收性片材的预定长度的完全饱和的部分与预定体积的样本洗脱液接触预定时间获得泪液稀释液，或使每个完全被泪液饱和的第一吸收性片材浸泡于预定体积的样本洗脱液中以获得泪液稀释液；和

65、c.将获得的泪液稀释液用于免疫学检测，以分析对同一受试者在不同时间点采集的泪液中的目标物质。

66、在一个实施方案中，检测泪液中目标物质的方法包括以下步骤：

67、a’.使至少两个第一吸收性片材与同一受试者眼表在不同时间点接触以采集泪液，获得至少两个经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材，其中经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材具有完全饱和的部分；

68、b’.使至少两个第一吸收性片材分别单独与本公开的第二方面中的免疫学检测卡接触。

69、在一个实施方案中，同一受试者在不同时间点处于不同状态，例如分别处于健康状态或者疾病状态，尤其是例如在不同时间点均处于健康状态或均处于疾病状态，或者在至少一个时间点处于健康状态和在至少另一个时间点处于疾病状态。在一个实施方案中，本文中提供了针对同一受试者在不同时间点采集的一种或多种泪液中目标物质的定性、半定量或定量检测。在一个实施方案中，本文中提供了同一受试者在不同时间点的多个泪液样本中目标物质定量的方式检测。

70、在一个实施方案中，检测泪液中目标物质的方法包括以下步骤：

71、a.使第一吸收性片材与至少两个不同受试者眼表接触以采集泪液，获得至少两个经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材，其中经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材具有预定长度的完全饱和的部分或完全被泪液饱和；

72、b.使每个第一吸收性片材的预定长度的完全饱和的部分与预定体积的样本洗脱液接触预定时间获得泪液稀释液，或使完全被泪液饱和的第一吸收性片材浸泡于预定体积的样本洗脱液中以获得泪液稀释液；和

73、c.将获得的泪液稀释液分别用于免疫学检测，以分析对不同受试者采集的泪液中的目标物质。

74、在一个实施方案中，检测泪液中目标物质的方法包括以下步骤：

75、a’.使至少两个第一吸收性片材分别与不同受试者眼表在不同时间点接触以采集泪液，获得至少两个经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材，其中经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材具有完全饱和的部分；

76、b’.使至少两个第一吸收性片材分别单独与本公开的第二方面中的免疫学检测卡接触，以分析泪液中的目标物质。

77、在一个实施方案中，不同受试者处于相同或者类似状态，例如分别处于健康状态或患有相同或者类似疾病。在一个实施方案中，不同受试者为不同状态，例如分别处于健康或患有相同或类似疾病。在一个实施方案中，本文中提供了对不同受试者一种或多种泪液中的目标物质定性、半定量或定量的方式检测。在一个实施方案中，本文中提供了对不同受试者多种泪液中的目标物质定量的方式检测。

78、在一个实施方案中，检测泪液中目标物质的方法包括以下步骤：

79、a.使第一吸收性片材与眼表接触以采集泪液，获得经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材；

80、b.从经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材截取预定长度的完全饱和的部分；

81、c.使预定长度的完全饱和的部分与预定体积的样本洗脱液接触预定时间；

82、d.收集与第一吸收性片材接触后的样本洗脱液，获得泪液稀释液；和

83、e.将步骤d收集的泪液稀释液用于免疫学检测，以分析泪液中的目标物质。

84、在一个实施方案中，检测泪液中目标物质的方法包括以下步骤：

85、a.使第一吸收性片材与眼表接触以采集泪液，获得经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材，经泪液至少部分饱和的第一吸收性片材具有预定长度的完全饱和的部分；

86、b.使预定长度的完全饱和的部分与预定体积的样本洗脱液接触预定时间；

87、c.收集与第一吸收性片材接触后的样本洗脱液，获得泪液稀释液；和

88、d.将步骤c收集的泪液稀释液用于免疫学检测，以分析泪液中的目标物质。

89、在一个实施方案中，本文中提供了不同的目标物质定性、半定量或定量的方式检测。在一个实施方案中，本文中提供了在同一泪液样本中对至少约2，至少约5，至少约10，至少约20，至少约50，至少或100，至少约200，或更多种不同的目标物质定性、半定量或定量的方式检测。在一个实施方案中，该同一泪液样本为小体积的样本，例如泪液样本的量少于约0.0050ml，优选少于约0.0040ml，更优选少于0.0030ml，最优选少于0.0025ml。在一个实施方案中，本文中提供了在同一泪液样本中对至少约2，至少约5，至少约10，至少约20，至少约50，至少约100，至少约200，或更多不同的目标物质进行定量和比较的方式检测。在一个实施方案中，本文中提供了在同一泪液样本中对至少约2，至少约5，至少约10，至少约20，至少约50，至少约100，至少约200，或更多不同的目标物质的相对量进行比较的检测方法。

90、本领域技术人员能够理解，本公开中的任意方面、实施方案或实施例中的特征可以彼此组合，只要这些特征之间本身不存在任何冲突或不兼容的情形。

91、本发明的有益效果

92、本公开所提供的方法能够将吸水性物质片材，尤其是典型的schirmer泪液检测滤纸条的固定长度部分或全长作为采集泪液样本的装置并且可以由此进行定量，再经样本洗脱液洗脱后能够可再现地稳定释放定量的泪液样本。本公开的方式相比于现有泪液采集和处理方式，大大提高了后续将采集的泪液样本用于其它检测的便捷性、准确性、稳定性。结合荧光免疫层析技术、胶体金免疫层析技术、乳胶层析免疫技术等平台检测泪液中的目标物质，使得采样和检测过程更加便利并且降低了操作难度和成本。