一种羟基苯甲酰奎宁酸和羟基肉桂酰奎宁酸异构体定性分析方法与流程

1.本发明属于分离分析化学领域，具体涉及一种羟基苯甲酰奎宁酸和羟基肉桂酰奎宁酸异构体定性分析方法。


背景技术：

2.公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
3.在iupac系统中奎宁酸被定义为1l-1(oh),3,4/5-tetrahydroxycyclohexane carboxylic acid，是多个羟基化合物，奎宁酸中存在多个酯化位点。其中，羟基苯甲酰奎宁酸和羟基肉桂酰奎宁酸是一类由奎宁酸和不同数目的苯甲酸或者肉桂酸酯化而成的酚酸类化合物。这类物质广泛存在于植物中，具有抗氧化、抗癌、抗炎、抗菌、抗糖尿病等作用。羟基肉桂酰奎宁酸和羟基苯甲酰奎宁酸由于酯化位置和酰基数目的不同而具有复杂的结构。由于酯化位置的不同，羟基肉桂酰和羟基苯甲酰奎宁酸化合物存在1-、3-、4-、5-酰基异构体。根据酰基化基团的数目的不同又可以分为四类，包括单取代、二取代、三取代和四取代酯。此类化合物结构复杂，绝大部分化合物缺失标样，而标样的缺失又给化合物解析带来了巨大的困难，特别是异构体的准确识别。因此，迫切需要一种能够在无标样的情况下，准确识别此类化合物异构体的方法。


技术实现要素：

4.为了解决现有技术的不足，本发明的目的是提供一种羟基苯甲酰奎宁酸和羟基肉桂酰奎宁酸异构体定性分析方法，本发明合成了羟基苯甲酰奎宁酸和羟基肉桂酰奎宁酸，并通过uplc-qtof-ms/ms系统分析其ms/ms裂解规律和色谱保留规律，区分了羟基苯甲酰和羟基肉桂酰奎宁酸的异构体。
5.为了实现上述目的，本发明的技术方案为：
6.一方面，一种羟基苯甲酰奎宁酸和羟基肉桂酰奎宁酸异构体定性分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.(1)通过steglich酯化反应合成一系列单取代和二取代的羟基苯甲酰奎宁酸不同位置异构体和羟基肉桂酰奎宁酸不同位置异构体；
8.(2)通过uplc
–
qtof
–
ms/ms对(1)得到的不同位置异构体进行定性分析；
9.以有标样的咖啡酰奎宁酸异构体、阿魏酰奎宁酸异构体、二咖啡酰奎宁酸异构体的洗脱规律为依据，确定其余单取代和二取代的羟基苯甲酰奎宁酸不同位置异构体、羟基肉桂酰奎宁酸不同位置异构体的色谱保留规律；
10.将洗脱得到的不同位置异构体，在负离子模式下，以多个碰撞能进行二级质谱分析，根据异构体的主要碎片离子种类或相对强度或子离子和母离子的强度比值对不同位置
异构体进行定性判断。
11.本发明的有益效果为：
12.除了咖啡酰奎宁酸及二咖啡酰奎宁酸有标样，单阿魏酰奎宁酸异构体部分有标样外，二阿魏酰奎宁酸、对香豆酰奎宁酸、二对香豆酰奎宁酸、香草酰奎宁酸、二香草酰奎宁酸、丁香酰奎宁酸和二香草酰奎宁酸异构体都是没有标样的，因此没有办法对其进行质谱规律研究，也没有人研究过。本发明通过合成反应，合成出来了这些单取代和二取代的羟基苯甲酰奎宁酸不同位置异构体和羟基肉桂酰奎宁酸不同位置异构体，利用有标样的咖啡酰奎宁酸及二咖啡酰奎宁酸的洗脱规律为依据，确认其余单取代和二取代的羟基苯甲酰奎宁酸不同位置异构体、羟基肉桂酰奎宁酸不同位置异构体的色谱保留规律，并利用部分有标样的单阿魏酰奎宁酸进行验证，确认准确；然后对其二级质谱裂解规律和进行了研究，并给出了区分位置异构体的方法，给无标样的异构体的定性分析提供了一种新思路。
附图说明
13.构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
14.图1为单香草酰奎宁酸异构体的二级质谱图；
15.图2为单丁香酰奎宁酸异构体的二级质谱图；
16.图3为单咖啡酰奎宁酸异构体的二级质谱图；
17.图4为单阿魏酰奎宁酸异构体的二级质谱图；
18.图5为单对香豆酰奎宁酸异构体的二级质谱图；
19.图6为二咖啡酰奎宁酸异构体的二级质谱图；
20.图7为二阿魏酰奎宁酸异构体的二级质谱图；
21.图8为二对香豆酰奎宁酸异构体的二级质谱图；
22.图9为二香草酰奎宁酸异构体的二级质谱图；
23.图10为二丁香酰奎宁酸异构体的二级质谱图。
具体实施方式
24.应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
25.需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
26.鉴于二阿魏酰奎宁酸、对香豆酰奎宁酸、香草酰奎宁酸和丁香酰奎宁酸异构体没有标样的，没有办法对其进行质谱规律研究，本发明提出了一种羟基苯甲酰奎宁酸和羟基肉桂酰奎宁酸异构体定性分析方法。
27.本发明的一种典型实施方式，提供了一种羟基苯甲酰奎宁酸和羟基肉桂酰奎宁酸异构体定性分析方法，包括以下步骤：
28.(1)通过steglich酯化反应合成一系列单取代和二取代的羟基苯甲酰奎宁酸不同位置异构体和羟基肉桂酰奎宁酸不同位置异构体；
29.(2)通过uplc
–
qtof
–
ms/ms对(1)得到的不同位置异构体进行定性分析；
30.以有标样的咖啡酰奎宁酸异构体、阿魏酰奎宁酸异构体、二咖啡酰奎宁酸异构体的洗脱规律为依据，确定其余单取代和二取代的羟基苯甲酰奎宁酸不同位置异构体、羟基肉桂酰奎宁酸不同位置异构体的色谱保留规律；
31.将洗脱得到的不同位置异构体，在负离子模式下，以多个碰撞能进行二级质谱分析，根据异构体的主要碎片离子种类或相对强度或子离子和母离子的强度比值对不同位置异构体进行定性判断。
32.该实施方式的一些实施例中，所述色谱保留规律的确认具体为：有标样的3-,4-,5-位单咖啡酰奎宁酸异构体和单阿魏酰奎宁酸异构体的色谱保留规律一致，以此确定其余单取代和二取代的羟基苯甲酰奎宁酸不同位置异构体、羟基肉桂酰奎宁酸不同位置异构体的色谱保留规律也是一致。
33.该实施方式的一些实施例中，所述羟基苯甲酰奎宁酸包括香草酰奎宁酸、丁香酰奎宁酸、二香草酰奎宁酸、二丁香酰奎宁酸。
34.该实施方式的一些实施例中，所述羟基肉桂酰奎宁酸包括阿魏酰奎宁酸、对香豆酰奎宁酸、二阿魏酰奎宁酸、二对香豆酰奎宁酸。
35.该实施方式的一些实施例中，所述碰撞能为10-30ev。
36.该实施方式的一些实施例中，色谱条件为：色谱柱为2.1mm
×
100mm，1.8μm的agilent sb-c18柱，流速为0.3ml/min，柱温为40℃，进样量2μl。
37.该实施方式的一些实施例中，流动相a和b分别为含有质量分数为0.6％甲酸的水溶液和乙腈溶液；
38.洗脱程序为梯度洗脱：起始梯度为5％ b；20min，线性升至25％ b；35min，线性升至100％ b，维持5min；最后降至5％b，维持5min。
39.该实施方式的一些实施例中，质谱条件为：喷雾器，2.0bar；干燥气流速，8l/min；雾化气压力，200kpa；干燥气温度，200℃；离子漏斗，300vpp；六级杆，60vpp；传输时间，70μs；碰撞池射频电压振幅，600vpp；脉冲前等待时间，7μs；毛细管电压负模式下设置为3000v；质量数扫描范围为50-1200；二级质谱分析时碰撞能为10-30ev。
40.该实施方式的一些实施例中，所述steglich酯化反应为：在反应容器中，依次加入苯甲酸或者肉桂酸、奎宁酸、1-乙基-(3-二甲基氮基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和4-二甲基吡啶，惰性气体保护下，加入有机溶剂，室温下搅拌反应，反应结束后抽滤、真空干燥即得。
41.该实施方式的一些实施例中，羟基苯甲酸或羟基肉桂酸与奎宁酸、1-乙基-(3-二甲基氮基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和4-二甲基吡啶的摩尔比为1-1.5：1-1.5：1-1.5：0.5-1，优选为1：1.5：1.5：0.5。
42.为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。
43.实施例1
44.一种羟基苯甲酰奎宁酸和羟基肉桂酰奎宁酸异构体定性分析方法，包括：
45.1)羟基苯甲酰奎宁酸和羟基肉桂酰奎宁酸异构体合成：通过1-乙基-(3-二甲基氮
基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(edci)和4-二甲基吡啶(dmap)催化咖啡酸、阿魏酸、对香豆酸、香草酸或丁香酸(a)与奎宁酸(b)的steglich酯化反应，合成一系列单取代或者二取代羟基苯甲酰奎宁酸和羟基肉桂酰奎宁酸。
46.具体为：在50ml圆底烧瓶中，依次加入a(1mmol，1eq)、b(1.5mmol,1.5eq)、edci(1.5mmol,1.5eq)和dmap(0.5mmol,0.5eq)，氮气保护下，加入二氯甲烷溶剂10ml，在室温下搅拌反应6h，抽滤，滤饼依次用石油醚和乙酸乙酯洗涤三次，然后在60℃下真空干燥12h得反应物。
47.2)液相色谱-质谱分析条件：使用超高效液相色谱(uplc，acquity，h-class,waters)-高分辨飞行时间质谱(impactⅱ，bruker)。
48.色谱柱为agilent sb-c18柱(2.1mm
×
100mm，1.8μm，美国agilent公司)，流速为0.3ml/min，柱温为40℃，进样量2μl。
49.流动相a和b分别为含有质量分数为0.6％甲酸的水溶液和乙腈溶液。
50.洗脱梯度：起始梯度为5％ b；20min，线性升至25％ b；35min，线性升至100％ b，维持5min；最后降至5％b，维持5min。总时间为45min。
51.质谱条件为：喷雾器，2.0bar；干燥气流速，8l/min；雾化气压力，200kpa；干燥气温度，200℃；离子漏斗，300vpp；六级杆，60vpp；传输时间，70μs；碰撞池射频电压振幅，600vpp；脉冲前等待时间，7μs；毛细管电压负模式下设置为3000v；质量数扫描范围为50-1200；二级质谱分析时碰撞能为10-30ev。对合成的反应物进行ms/ms分析，二级碰撞能设置为10-30ev。
52.3)羟基肉桂酰奎宁酸和羟基苯甲酰奎宁酸异构体的洗脱规律：对羟基苯甲酰奎宁酸和羟基肉桂酰奎宁酸异构体的洗脱规律进行研究。
53.以有标样的咖啡酰奎宁酸异构体、阿魏酰奎宁酸、二咖啡酰奎宁酸异构体的洗脱规律为依据，确定其余单取代和二取代的羟基苯甲酰奎宁酸不同位置异构体、羟基肉桂酰奎宁酸不同位置异构体的色谱保留规律，规律如下：
54.1.单取代羟基苯甲酰奎宁酸和羟基肉桂酰奎宁酸
55.单羟基肉桂酰奎宁酸和羟基苯甲酸奎宁酸在c18反向色谱柱上洗脱顺序一致。
56.咖啡酰奎宁酸异构体在c18反向色谱柱上的洗脱顺序依次为1-o-咖啡酰奎宁酸(3.1min)》3-o-咖啡酰奎宁酸(4.3min)》5-o-咖啡酰奎宁酸(7.8min)》4-o-咖啡酰奎宁酸(8.4min)。
57.阿魏酰奎宁酸异构体在c18反向色谱柱上的洗脱顺序依次为1-o-阿魏酰奎宁酸(6.9min)》3-o-阿魏酰奎宁酸(7.9min)》5-o-阿魏酰奎宁酸(11.2min)》4-o-阿魏酰奎宁酸(11.3min)。
58.香草酰奎宁酸异构体在c18反向色谱柱上的洗脱顺序依次为1-o-香草酰奎宁酸(2.5min)》3-o-香草酰奎宁酸(3.0min)》5-o-香草酰奎宁酸(6.8min)》4-o-香草酰奎宁酸(6.9min)。
59.丁香酰奎宁酸异构体在c18反向色谱柱上的洗脱顺序依次为1-o-丁香酰奎宁酸(3.4min)》3-o-丁香酰奎宁酸(4.0min)》5-o-丁香酰奎宁酸(7.8min)》4-o-丁香酰奎宁酸(8.3min)。
60.对香豆酰奎宁酸异构体在c18反向色谱柱上的洗脱顺序依次为1-o-对香豆酰奎宁
酸(4.7min)》3-o-对香豆酰奎宁酸(6.1min)》5-o-对香豆酰奎宁酸(9.8min)》4-o-对香豆酰奎宁酸(10.0min)。
61.2.二取代羟基苯甲酰奎宁酸和羟基肉桂酰奎宁酸
62.二羟基肉桂酰奎宁酸和二羟基苯甲酸奎宁酸在c18反向色谱柱上洗脱顺序一致。
63.二咖啡酰奎宁酸在c18反向色谱柱上的洗脱顺序依次为1,3-o-咖啡酰奎宁酸(11.2min)》1,4-o-咖啡酰奎宁酸(16.4min)》3,4-o-咖啡酰奎宁酸(16.7min)》1,5-o-咖啡酰奎宁酸(17.2min)＞3,5-o-咖啡酰奎宁酸(17.3min)＞4,5-o-咖啡酰奎宁酸(18.7min)。
64.二阿魏酰奎宁酸在c18反向色谱柱上的洗脱顺序依次为1,3-o-阿魏酰奎宁酸(16.5min)》1,4-o-阿魏酰奎宁酸(22.7min)》3,4-o-阿魏酰奎宁酸(23.2min)》1,5-o-阿魏酰奎宁酸(23.7min)＞3,5-o-阿魏酰奎宁酸(23.8min)＞4,5-o-阿魏酰奎宁酸(24.6min)。
65.二对香豆酰奎宁酸在c18反向色谱柱上的洗脱顺序依次为1,3-o-对香豆酰奎宁酸(16.8min)》1,4-o-对香豆酰奎宁酸(21.1min)》3,4-o-对香豆酰奎宁酸(22.0min)》1,5-o-对香豆酰奎宁酸(23.2min)＞3,5-o-对香豆酰奎宁酸(23.4min)＞4,5-o-对香豆酰奎宁酸(24.2min)。
66.二香草酰奎宁酸在c18反向色谱柱上的洗脱顺序依次为1,3-o-香草酰奎宁酸(9.4min)》1,4-o-香草酰奎宁酸(11.0min)》3,4-o-香草酰奎宁酸(16.5min)》1,5-o-香草酰奎宁酸(17.6min)＞3,5-o-香草酰奎宁酸(18.5min)＞4,5-o-香草酰奎宁酸(21.7min)。
67.二丁香酰奎宁酸在c18反向色谱柱上的洗脱顺序依次为1,3-o-丁香酰奎宁酸(8.6min)》1,4-o-丁香酰奎宁酸(13.4min)》3,4-o-丁香酰奎宁酸(17.0min)》1,5-o-丁香酰奎宁酸(18.0min)＞3,5-o-丁香酰奎宁酸(18.9min)＞4,5-o-丁香酰奎宁酸(21.5min)。
68.4)羟基肉桂酰奎宁酸和羟基苯甲酰奎宁酸异构体的质谱裂解规律：对负离子模式下不同碰撞能下羟基苯甲酰奎宁酸和羟基肉桂酰奎宁酸的ms/ms谱图进行分析，并对异构体的主要碎片离子进行相对强度的相关性分析，根据异构体的主要碎片离子种类或相对强度或子离子和母离子的强度比值对不同位置异构体进行定性判断。
69.1.单取代羟基苯甲酰奎宁酸
70.香草酰奎宁酸是由一分子香草酸和奎宁酸酯化而成。1-o-香草酰奎宁酸、3-o-香草酰奎宁酸、4-o-香草酰奎宁酸和5-o-香草酰奎宁酸的ms/ms谱图有显著不同。在20ev碰撞能下(图1)，3-o-香草酰奎宁酸的基峰为167。5-o-香草酰奎宁酸的基峰为191。4-o-香草酰奎宁酸的基峰为173。1-o-香草酰奎宁酸中，167和191的强度都比较高。191的峰强为基峰167的92％。
71.丁香酰奎宁酸是由一分子丁香酸和奎宁酸酯化而成。1-o-丁香酰奎宁酸、3-o-丁香酰奎宁酸、4-o-丁香酰奎宁酸和5-o-丁香酰奎宁酸的ms/ms谱图有显著不同。在20ev碰撞能下(图2)，3-o-丁香酰奎宁酸的基峰为197。5-o-丁香酰奎宁酸的基峰为191。4-o-丁香酰奎宁酸的基峰为173。1-o-香草酰奎宁酸中，197和173的强度都比较高，173的峰强为基峰197的74％。
72.2.单取代羟基肉桂酰奎宁酸
73.咖啡酰奎宁酸是由一分子咖啡酸和奎宁酸酯化而成。1-o-咖啡酰奎宁酸、3-o-咖啡酰奎宁酸、4-o-咖啡酰奎宁酸和5-o-咖啡酰奎宁酸的ms/ms谱图有显著不同。在20ev碰撞能下(图3)，3-o-咖啡酰奎宁酸的基峰为191，179峰强为基峰的77％。5-o-咖啡酰奎宁酸的
基峰为191。4-o-咖啡酰奎宁酸的基峰为173，179的相对峰强为基峰79％。1-o-咖啡酰奎宁酸的基峰为191。
74.阿魏酰奎宁酸是由一分子阿魏酸和奎宁酸酯化而成。1-o-阿魏酰奎宁酸、3-o-阿魏酰奎宁酸、4-o-阿魏奎宁酸和5-o-阿魏酰奎宁酸的的ms/ms谱图有显著不同。在20ev碰撞能下(图4)，3-o-阿魏酰奎宁酸的基峰为193。5-o-阿魏酰奎宁酸的基峰为191。4-o-阿魏酰奎宁酸的基峰为173。1-o-咖啡酰奎宁酸的基峰为193，173峰强为基峰的68％。
75.对香豆酰奎宁酸是由一分子对香豆酸和奎宁酸酯化而成。1-o-对香豆酰奎宁酸、3-o-对香豆酰奎宁酸、4-o-对香豆酰奎宁酸和5-o-对香豆酰奎宁酸的ms/ms谱图有显著不同。在20ev碰撞能下(图5)，3-o-对香豆酰奎宁酸的基峰为163。5-o-对香豆酰奎宁酸的基峰为191，173的峰强为基峰的60％。4-o-对香豆酰奎宁酸的基峰为173。1-o-对香豆酰奎宁酸的基峰为191。
76.3.二取代羟基苯甲酰奎宁酸和羟基肉桂酰奎宁酸
77.二咖啡酰奎宁酸是由两分子咖啡酸和奎宁酸酯化而成。在高碰撞能下，1,4-o-咖啡酰奎宁酸，4,5-o-咖啡酰奎宁酸，3,4-o-咖啡酰奎宁酸的基峰为173，而1,3-o-咖啡酰奎宁酸，1,5-o-咖啡酰奎宁酸，3,5-o-咖啡酰奎宁酸的基峰为191。随着碰撞能的增加，母离子515的信号强度逐渐减弱，子离子353的信号强度逐渐增加。子离子353和母离子515的强度比值(353/515)可以进一步对上述异构体进行区分。在15、20ev碰撞能下(图6)，子离子353和母离子515的强度比值(353/515)在1,4-o-咖啡酰奎宁酸，4,5-o-咖啡酰奎宁酸，3,4-o-咖啡酰奎宁酸中顺序为1,4》4,5》3,4。子离子353和母离子515的强度比值(353/515)在1,3-o-咖啡酰奎宁酸，1,5-o-咖啡酰奎宁酸，3,5-o-咖啡酰奎宁酸中顺序为3,5-o-咖啡酰奎宁酸》1,5-o-咖啡酰奎宁酸》1,3-o-咖啡酰奎宁酸。
78.二阿魏酰奎宁酸是由两分子阿魏酸和奎宁酸酯化而成。在15ev碰撞能下，1,4-o-阿魏酰奎宁酸，3,4-o-阿魏酰奎宁酸的基峰为349，而1,3-o-阿魏酰奎宁酸，1,5-o-阿魏酰奎宁酸，3,5-o-阿魏酰奎宁酸，4,5-o-阿魏酰奎宁酸的基峰为367。随着碰撞能的增加，母离子543的信号强度逐渐减弱，子离子367的信号强度逐渐增加。子离子367和母离子543的强度比值(367/543)可以进一步对上述异构体进行区分。在15、20ev碰撞能下(图7)，子离子367和母离子543的强度比值(367/543)在3,4-o-阿魏酰奎宁酸中比1,4-o-阿魏酰奎宁酸中高。子离子353和母离子515的强度比值(353/515)在1,3-o-阿魏酰奎宁酸，1,5-o-阿魏酰奎宁酸，3,5-o-阿魏酰奎宁酸，4,5-o-阿魏酰奎宁酸中顺序为1,5-o-阿魏酰奎宁酸》1,3-o-阿魏酰奎宁酸》4,5-o-阿魏酰奎宁酸＞3,5-o-阿魏酰奎宁酸。
79.二对香豆酰奎宁酸是由两分子对香豆酸和奎宁酸酯化而成。在高碰撞能下，1,4-o-对香豆酰奎宁酸的基峰为173；1,3-o-对香豆酰奎宁酸和3,5-o-对香豆酰奎宁酸的基峰为163；而3,4-o-对香豆酰奎宁酸，1,5-o-对香豆酰奎宁酸，4,5-o-对香豆酰奎宁酸的基峰为191。随着碰撞能的增加，母离子483的信号强度逐渐减弱，子离子337的信号强度逐渐增加。子离子337和母离子483的强度比值(337/483)可以进一步对上述异构体进行区分。在15、20ev碰撞能下(图8)，子离子337和母离子483的强度比值(337/483)在1,3-o-对香豆酰奎宁酸中比3,5-o-对香豆酰奎宁酸中高。子离子337和母离子483的强度比值(337/483)在3,4-o-对香豆酰奎宁酸，1,5-o-对香豆酰奎宁酸，4,5-o-对香豆酰奎宁酸中顺序为3,4-o-对香豆酰奎宁酸》1,5-o-对香豆酰奎宁酸》4,5-o-对香豆酰奎宁酸。
80.二香草酰奎宁酸是由两分子香草酸和奎宁酸酯化而成。在15ev碰撞能下(图9)，1,3-o-香草酰奎宁酸，3,4-o-香草酰奎宁酸，1,5-o-香草酰奎宁酸的基峰为323，子离子323和母离子491的强度比值(323/491)的顺序为1,5-o-香草酰奎宁酸＞1,3-o-香草酰奎宁酸＞3,4-o-香草酰奎宁酸。1,4-o-香草酰奎宁酸，3,5-o-香草酰奎宁酸的基峰为317，子离子317和母离子491的强度比值(317/491)在3,5-o-香草酰奎宁酸中比1,4-o-香草酰奎宁酸中高。然而4,5-o-香草酰奎宁酸的基峰为491。此外，与其它二香草酰奎宁酸相比，1,3-o-香草酰奎宁酸和3,4-o-香草酰奎宁酸没有191的信号离子。
81.二丁香酰奎宁酸是由两分子丁香酸和奎宁酸酯化而成。在15ev碰撞能下(图10)，1,3-o-丁香酰奎宁酸，3,4-o-丁香酰奎宁酸，1,5-o-丁香酰奎宁酸的基峰为353，子离子353和母离子551的强度比值(353/551)的顺序为1,5-o-丁香酰奎宁酸＞3,4-o-丁香酰奎宁酸＞1,3-o-丁香酰奎宁酸。1,4-o-香草酰奎宁酸，3,5-o-香草酰奎宁酸，4,5-o-丁香酰奎宁酸的基峰为377，子离子377和母离子551的强度比值(377/551)的顺序为3,5-o-香草酰奎宁酸＞1,4-o-香草酰奎宁酸＞4,5-o-丁香酰奎宁酸。此外，与其它二丁香酰奎宁酸相比，1,3-o-丁香酰奎宁酸，3,4-o-丁香酰奎宁酸和4,5-o-丁香酰奎宁酸没有191的信号离子。
82.以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。