一种地诺孕素的分析方法与流程

本发明涉及药物分析检测领域，具体涉及一种地诺孕素的分析方法。

背景技术：

1、在药物分析中所称的有关物质(related substances)是指特定药物中不是主要组成物，但与主成份相关的物质。由于一种药品从合成原料药到制备有关的制剂，再经贮藏、运输、使用，要经历一段较为复杂和漫长的过程，在此期间，每一过程都有可能产生有关的物质，如生产中可能带入起始原料、试剂、中间体、副产物和异构体等；在贮藏和运输过程中可能产生降解产物、聚合物或晶型转变等特殊杂质。为保证药物的安全有效，同时也要考虑到生产实际情况，因此，国内外对药物的研究，可允许含有一定限量的无害或低毒性的有关物质，但对毒性较大，能危害人体健康的、无效的或能影响药物稳定性的有关物质则必须严格控制。因此有关物质检测是控制药品质量的重要指标。

2、地诺孕素(dienogest)，化学名：17α-氰甲基-17β-羟基-13β-甲基甾烷-4,9-二烯-3-酮，化学结构：

3、

4、它是一种混合孕激素，同时具有天然和合成孕激素的药理学优点，主要用于治疗子宫内膜异位症的治疗。

5、现有的地诺孕素片有关物质高效液相色谱分析方法(进口注册标准jx20170016)，测定很不方便，采用该方法系统压力很高，并且存在seco-地诺未检测到，a杂与k杂分离度不优选，基线陡峭等诸多问题。因此需要对测定条件进行探索改进，建立起一套快速、简单，并且有效、可靠的成品反应监控及有关物质分析方法。

6、

7、本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本发明的一个目的在于提出一种利用高效液相色谱分析地诺孕素片有关物质的方法，该方法可以使地诺孕素a杂、k杂有效分离，并且系统压力适中，对地诺孕素的多个杂质均可有效检出，灵敏度高，专属性强。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是现有的地诺孕素的分析方法不能有效地分析k杂。为此，本发明提供了一种地诺孕素的分析方法。本发明提供的分析方法可以使地诺孕素a杂、k杂有效分离，并且系统压力适中，对地诺孕素的多个杂质均可有效检出，灵敏度高，专属性强，可进一步用于监测地诺孕素终产品或原料药及制剂的质量。

2、本发明提供了一种地诺孕素的分析方法，其包括以下步骤：采用高效液相色谱法，将待测物进行梯度洗脱，即可；

3、所述的高效液相色谱法的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；

4、所述的高效液相色谱法的流动相为流动相a和流动相b；所述的流动相a为水和乙腈，所述的水和所述的乙腈的体积比为95:5-85:15；流动相b为甲醇和乙腈，所述的甲醇和乙腈的体积比为70:30-80:20；

5、所述的待测物包含地诺孕素；

6、所述的梯度洗脱开始时，所述的流动相a在所述的流动相中的体积占比为65％-75％；所述的梯度洗脱进行时，所述的流动相a在所述的流动相中的体积占比每分钟降低0.8％-1.2％。

7、所述分析方法中，所述高效液相色谱法的进样体积为本领域常规的进样体积，优选为1-100μl，更优选为40-80μl，最优选为50μl。

8、所述分析方法中，所述高效液相色谱法的柱温为本领域常规的柱温，优选地为35-45℃，例如45℃或40℃。

9、所述分析方法中，所述高效液相色谱法的检测波长为本领域常规的波长，优选地为210-350nm；更优选地为220nm和/或310nm。

10、所述分析方法中，所述高效液相色谱法的流速为本领域常规的流速，优选地为0.8-1.2ml/min，更优选地为1.0ml/min。

11、所述分析方法中，所述十八烷基硅烷键合硅胶的粒径可为2.7-5μm，例如2.7μm、3.5μm或5μm。

12、所述分析方法中，所述高效液相色谱法的色谱柱为本领域常规的色谱柱。

13、所述分析方法中，所述色谱柱的长度可为100-200mm，例如150mm。

14、所述分析方法中，所述色谱柱的直径可为3-6mm，例如4.6mm。

15、所述分析方法中，所述色谱柱的型号可为agilent xdb-c18(150*4.6mm，3.5μm)、agilent xdb-c18(150*4.6mm，5μm)或waters x-bridge c18(150*4.6mm，3.5μm)。

16、所述分析方法中，所述流动相a中，所述的水与所述乙腈的体积比可为90:10。

17、所述分析方法中，所述流动相b中，所述的甲醇与所述的乙腈的体积比可为70:30、75:25或者80:20。

18、所述分析方法中，所述的待测物在洗脱前可进行预处理，以符合进样标准。所述的预处理为本领域常规条件的预处理，优选地，所述预处理包括下述步骤：将所述待测物溶解于溶剂中。

19、所述预处理中，所述溶剂为本领域常规的溶剂，优选为水、甲醇和乙腈中的一种或多种，更优选为水和/或甲醇，最优选为水和甲醇，其中甲醇与水的体积比为25:75。

20、所述预处理中，所述待测物的浓度为本领域常规的浓度，优选地为0.04-0.1mg/ml，例如0.05mg/ml-0.08mg/ml。

21、所述分析方法中，所述待测物还可包含物质a，所述的物质a为seco-地诺、a杂、k杂、g杂、h杂、式ii所示化合物、聚维酮k25和c杂中的一种或多种；

22、

23、所述分析方法中，所述待测物还可包含聚维酮。所述的聚维酮可为聚维酮k25。

24、所述分析方法中，所述待测物还可包含物质b，所述的物质b为k杂和a杂；

25、

26、

27、所述分析方法中，所述待测物还可包含物质c，所述的物质c为k杂、a杂和聚维酮；

28、

29、所述的聚维酮可为聚维酮k25。

30、所述分析方法中，所述待测物还可包含物质d，所述的物质d为k杂和如式ii所示化合物；

31、

32、所述分析方法中，所述待测物还可包含物质e，所述的物质e为k杂、a杂和式ii化合物；

33、

34、

35、所述分析方法中，所述待测物可为地诺孕素片或地诺孕素原料药。

36、所述分析方法中，所述地诺孕素片可包含聚维酮。所述的聚维酮可为聚维酮k25。

37、所述分析方法中，所述地诺孕素片优选如下处方：

38、 物料 处方量(mg) 地诺孕素 2 一水乳糖 62.8 微晶纤维素 18 马铃薯淀粉 36 聚维酮k25 8.1 硬脂酸镁 1.35 滑石粉 4.05 交联聚维酮 2.7

39、。

40、所述分析方法中，所述的梯度洗脱开始时，所述的流动相a在所述的流动相中的体积占比可为70％-75％。

41、所述分析方法中，所述的梯度洗脱进行时，所述的流动相a在所述的流动相中的体积占比每分钟可降低1.0％。

42、所述分析方法中，所述的梯度洗脱里，所述的流动相a在所述的流动相中的体积占比可始终降低。

43、所述分析方法中，所述的梯度洗脱里，所述的流动相a在所述的流动相中的体积占比可线性降低。

44、所述分析方法中，所述的梯度洗脱的时间可根据分析标的、分析条件确定，优选1min～18min，进一步优选2min、3min、4min、5min、6min、7min、8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min、15min、16min或17min。

45、所述分析方法中，所述的梯度洗脱可如下任一所述：

46、梯度洗脱1

47、

48、梯度洗脱2

49、

50、梯度洗脱3

51、

52、梯度洗脱4

53、

54、梯度洗脱5

55、

56、梯度洗脱6

57、

58、所述分析方法中，所述待测物还可包含物质a，所述的物质a为seco-地诺、a杂、k杂、g杂、h杂、式ii所示化合物、聚维酮k25和c杂中的一种或多种；

59、

60、

61、所述的梯度洗脱如下所述：

62、

63、所述分析方法中，所述待测物还可包含物质b，所述的物质b为k杂和a杂；

64、

65、所述的梯度洗脱如下所述：

66、

67、所述分析方法中，所述待测物还可包含物质c，所述的物质c为k杂、a杂和聚维酮；

68、

69、

70、所述的梯度洗脱如下所述：

71、

72、所述的聚维酮可为k25。

73、所述分析方法中，所述待测物还可包含物质d，所述的物质d为k杂和如式ii所示化合物；

74、

75、所述的梯度洗脱如下所述：

76、

77、所述分析方法中，所述待测物还可包含物质e，所述的物质e为k杂、a杂和式ii化合物；

78、

79、所述的梯度洗脱如下所述：

80、

81、所述分析方法可为以下任一方案：

82、方案一：

83、所述的流动相a为水和乙腈，所述的水和所述的乙腈的体积比为90:10；流动相b为甲醇和乙腈，所述的甲醇和乙腈的体积比为75:25；所述高效液相色谱法的柱温为40℃；所述高效液相色谱法的进样体积为50μl；

84、所述色谱柱型号为agilent xdb-c18(150*4.6mm，3.5μm)；所述待测物进行如下的梯度洗脱：

85、

86、方案二：

87、所述的流动相a为水和乙腈，所述的水和所述的乙腈的体积比为90:10；流动相b为甲醇和乙腈，所述的甲醇和乙腈的体积比为75:25；所述高效液相色谱法的柱温为40℃；所述高效液相色谱法的进样体积为50μl；

88、所述色谱柱型号为waters x-bridge c18(150*4.6mm，3.5μm)；所述待测物进行如下的梯度洗脱：

89、

90、方案三：

91、所述的流动相a为水和乙腈，所述的水和所述的乙腈的体积比为90:10；流动相b为甲醇和乙腈，所述的甲醇和乙腈的体积比为80:20；所述高效液相色谱法的柱温为45℃；所述高效液相色谱法的进样体积为50μl；

92、所述色谱柱型号为agilent xdb-c18(150*4.6mm，5μm)；所述待测物进行如下的梯度洗脱：

93、

94、方案四：

95、所述的流动相a为水和乙腈，所述的水和所述的乙腈的体积比为90:10；流动相b为甲醇和乙腈，所述的甲醇和乙腈的体积比为80:20；所述高效液相色谱法的柱温为40℃；所述高效液相色谱法的进样体积为50μl；

96、所述色谱柱型号为agilent xdb-c18(150*4.6mm，3.5μm)；所述待测物进行如下的梯度洗脱：

97、

98、方案五：

99、所述的流动相a为水和乙腈，所述的水和所述的乙腈的体积比为90:10；流动相b为甲醇和乙腈，所述的甲醇和乙腈的体积比为80:20；所述高效液相色谱法的柱温为40℃；所述高效液相色谱法的进样体积为10μl；

100、所述色谱柱型号为agilent xdb-c18(150*4.6mm，3.5μm)；所述待测物进行如下的梯度洗脱：

101、

102、方案六：

103、所述的流动相a为水和乙腈，所述的水和所述的乙腈的体积比为90:10；流动相b为甲醇和乙腈，所述的甲醇和乙腈的体积比为80:20；所述高效液相色谱法的柱温为40℃；所述高效液相色谱法的进样体积为50μl；

104、所述色谱柱型号为agilent xdb-c18(150*4.6mm，3.5μm)；所述待测物进行如下的梯度洗脱：

105、

106、所述分析方法可将物质f中各组分相互区分，所述的物质f为地诺孕素、k杂和a杂；

107、

108、所述分析方法可将物质g中各组分进行区分，所述的物质g为地诺孕素、k杂、a杂和聚维酮，所述的聚维酮可为k25；

109、

110、所述分析方法可将物质h中各组分相互区分，所述的物质h为地诺孕素、k杂和如式ii所示化合物；

111、

112、

113、所述分析方法可将物质i中各组分相互区分，所述的物质i为地诺孕素、k杂、a杂和式ii化合物；

114、

115、所述分析方法也可将物质g中的各组分相互区分，所述的物质g为地诺孕素、seco-地诺、a杂、k杂、g杂、h杂、式ii所示化合物、聚维酮k25和c杂；

116、

117、

118、其中，*代表手性中心。

119、所述分析方法中，所述待测物各组分的出峰顺序可为seco-地诺→a杂→k杂→g杂→h杂→式ii所示化合物→c杂。

120、在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各优选实例。

121、本发明所用试剂和原料均市售可得。

122、本发明的积极进步效果在于：本发明提供的分析方法可以使地诺孕素a杂、k杂有效分离，并且系统压力适中，对地诺孕素的多个杂质均可有效检出，灵敏度高，专属性强，可进一步用于监测地诺孕素终产品或原料药及制剂的质量。