一种尿液葡萄糖干化学检测试纸及其制备方法与流程

1.本发明涉及尿液检测领域，具体涉及一种尿液葡萄糖干化学检测试纸及其制备方法。


背景技术：

2.尿糖的测定方法有很多，比如班氏尿糖定性检查法，尿糖试纸法，糖化血红蛋白检测，比较常用的就是尿糖试纸法。抗生素对班氏尿糖定性检查法、糖化血红蛋白检测结果都有一定的影响，而对干化学法的测试结果无影响。尿液存放时间过长也能使尿糖被细菌分解使浓度下降，但含有抗生素时几乎不下降。
3.酶法测试采用葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶两种酶，由于酶法相比较于以前的各种方法具有特异性强、灵敏度高、反应所需时间短等最大的优越性。现阶段所有的试纸都是采用酶法，不同型号的试纸所选用的指示剂有所不同。尿葡萄糖试纸检测的原理为：葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下分解成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢被过氧化物酶催化，释放出新生态氧，氧化色源物质反应进而产生颜色变化，从而对样本中的葡萄糖含量进行定性和半定量的分析。
4.葡萄糖试纸反应属于氧化还原反应，当样本中存在强还原剂时，会影响氧化还原反应，造成检测结果误差，干扰临床诊断。抗坏血酸(vc)是尿糖检测过程中主要的干扰因素，vc因其具有强还原性可与反应体系中的过氧化氢竞争与色源底物发生反应，使得检测结果偏低。综上所述，在尿糖检测中vc是很重要的干扰因素，直接影响检测结果的准确性，因此解决vc的干扰作用对于提高临床检测的准确性是至关重要的。


技术实现要素：

5.本发明克服了现有技术中的不足，在于提供一种具有很好的抗vc干扰能力的尿液葡萄糖干化学检测试纸及其制备方法。
6.本发明的具体技术方案如下：一种尿液葡萄糖干化学检测试纸，通过将滤纸先浸入到a液中、然后再浸入到b液中制得；a液包括缓冲液、热稳定剂、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、抗坏血酸氧化酶、碘酸钾和酶保护剂，各组分在缓冲液中的浓度为：热稳定剂5~10g/l、葡萄糖氧化酶0.1~0.2g/l、过氧化物酶0.2~0.3g/l、抗坏血酸氧化酶0.5~1g/l、碘酸钾0.5~2g/l、酶保护剂2~10g/l；b液包括溶剂、肼黄、表面活性剂和四甲基联苯胺，各组分在溶剂中的浓度为：肼黄0.1~0. 5g/l、表面活性剂0.5~3g/l、四甲基联苯胺0.5~2g/l。
7.优选的，所述缓冲液的ph值为4.8~5.2。
8.优选的，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液和tris-盐酸缓冲液中的一种。
9.优选的，所述热稳定剂选自明胶、阿拉伯树胶、聚乙烯吡咯烷酮、乙基纤维素中的
一种或两种以上任意比例混合。
10.优选的，所述酶保护剂选自海藻糖、甘露醇、甘油中的一种。
11.优选的，所述溶剂包括去离子水和有机溶剂，去离子水和有机溶剂的体积比为1:7~13。
12.优选的，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮中的一种。
13.优选的，所述表面活性剂选自十六烷基三甲基溴化铵、十二烷基硫酸钠、多库酯钠、聚乙二醇中的一种。
14.四甲基联苯胺具有脂溶性较强的基团，由于这种高度的脂溶性，使其易形成多聚体，在过氧化物酶的活性部位产生深蓝色沉淀物，这一原理使得四甲基联苯胺成为一种很好的发色团，同时反应产物的沉淀，使得过氧化物酶的活性部位更加暴露，利于酶氧化反应的进行。如果体系中含有碘酸钾，在酸性条件下，也会与四甲基联苯胺发生氧化还原反应生成黄色的亚胺盐，具体反应原理如下式所示：因此，当溶液中同时包含四甲基联苯胺、过氧化物酶和碘酸钾，会发生至少2种或2种以上的反应，而使溶液发生颜色变化，如果该溶液用于浸渍试纸，也会导致试纸失效，无法测试；因此本发明采用如下方法制备试纸。
15.本发明还涉及所述尿液葡萄糖干化学检测试纸的制备方法，包括如下步骤：a、将滤纸浸入a液后，在40～60℃条件下进行第一次干燥，时间为20～30分钟；b、将第一次干燥后的滤纸浸入b液后，在40～60℃条件下进行第二次干燥，时间为10～20分钟；c、将第二次干燥后的滤纸裁剪后与基板固定，得到尿液葡萄糖干化学检测试纸。
16.本发明制备的干化学检测试纸能够迅速与尿液中的葡萄糖发生反应，随着葡萄糖浓度的逐渐升高，试纸颜色从黄色到草绿色再到深绿色，色阶明显，易于目测和仪器读值。同时，本发明所述试纸体系中酶保护剂和碘酸钾的加入，使测定结果具有很好的抗vc干扰能力；当尿液中的vc浓度不超过5.6mol/l时，检测结果不出现阴性。
具体实施方式
17.下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
18.实施例1一种尿液葡萄糖干化学检测试纸的制备方法，包括如下步骤：配置浸渍液a液：0.5mol/l的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液1000ml、阿拉伯树胶7.5g、葡萄糖氧化酶0.14g、过氧化物酶0.28g、抗坏血酸氧化酶0.7g、碘酸钾1g、甘露醇8g。
19.配置浸渍液b液：甲醇1000ml、四甲基联苯胺0.5g、肼黄0.4g、去离子水100ml、聚乙二醇0.8g。
20.将a液和b液配置完成，先将滤纸充分浸入浸渍液a液后取出，于50℃条件下干燥25分钟，然后将干燥后的滤纸浸入浸渍液b液后取出，于50℃条件下干燥15分钟，将干燥后的滤纸裁剪后与基板固定，得到一种尿液葡萄糖干化学检测试纸。
21.配制浓度分别为0mmol/l、5.6mmol/l、14mmol/l、28mmol/l、56mmol/l的葡萄糖标准溶液。
22.使用本发明试纸在迪瑞hc-900型全自动尿液分析仪进行检测，连续测试三次结果如下。
23.向上述5支标准液中，每支均加入抗坏血酸10mg，使得每支葡萄糖标准溶液中含vc浓度为5.6mmol/l，再次使用本发明试纸在迪瑞hc-900型全自动尿液分析仪进行检测，连续测试三次结果如下。
24.同时使用市售某品牌试纸对比测试，结果如下：实施例2一种尿液葡萄糖干化学检测试纸的制备方法，包括如下步骤：配置浸渍液a液：0.5mol/l柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液1000ml、明胶7.5g、葡萄糖氧化酶0.1g、过氧化物酶0.2g、抗坏血酸氧化酶0.7g、碘酸钾0.7g、甘露醇2g。
25.配置浸渍液b液：丙酮1000ml、四甲基联苯胺0.75g、肼黄0.4g、去离子水150ml、十二烷基硫酸钠1g。
26.将a液和b液配置完成，先将滤纸充分浸入浸渍液a液后取出，于42℃条件下干燥30
分钟，然后将干燥后的滤纸浸入浸渍液b液后取出，于60℃条件下干燥10分钟，将干燥后的滤纸裁剪后与基板固定，得到一种尿液葡萄糖干化学检测试纸。
27.配制浓度分别为0mmol/l、5.6mmol/l、14mmol/l、28mmol/l、56mmol/l的葡萄糖标准溶液。
28.使用本发明试纸在迪瑞hc-900型全自动尿液分析仪进行检测，连续测试三次结果如下。
29.向上述5支标准液中，每支均加入抗坏血酸10mg，使得每支葡萄糖标准溶液中含vc浓度为5.6mmol/l，再次使用本发明试纸在迪瑞hc-900型全自动尿液分析仪进行检测，连续测试三次结果如下。
30.实施例3一种尿液葡萄糖干化学检测试纸的制备方法，包括如下步骤：配置浸渍液a液：0.5mol/l磷酸盐缓冲液1000ml、聚乙烯吡咯烷酮5g、葡萄糖氧化酶0.2g、过氧化物酶0.25g、抗坏血酸氧化酶1g、碘酸钾1.5g、海藻糖10g。
31.配置浸渍液b液：乙醇1000ml、四甲基联苯胺1g、肼黄0.2g、去离子水100ml、十六烷基三甲基溴化铵0.5g。
32.将a液和b液配置完成，先将滤纸充分浸入浸渍液a液后取出，于55℃条件下干燥25分钟，然后将干燥后的滤纸浸入浸渍液b液后取出，于45℃条件下干燥20分钟，将干燥后的滤纸裁剪后与基板固定，得到一种尿液葡萄糖干化学检测试纸。
33.配制浓度分别为0mmol/l、5.6mmol/l、14mmol/l、28mmol/l、56mmol/l的葡萄糖标准溶液。
34.使用本发明试纸在迪瑞hc-900型全自动尿液分析仪进行检测，连续测试三次结果
如下。
35.向上述5支标准液中，每支均加入抗坏血酸10mg，使得每支葡萄糖标准溶液中含vc浓度为5.6mmol/l，再次使用本发明试纸在迪瑞hc-900型全自动尿液分析仪进行检测，连续测试三次结果如下。
36.实施例4一种尿液葡萄糖干化学检测试纸的制备方法，包括如下步骤：配置浸渍液a液：0.3mol/l tris-盐酸缓冲液1000ml、阿拉伯树胶7.5g、乙基纤维素2g、葡萄糖氧化酶0.18g、过氧化物酶0.28g、抗坏血酸氧化酶0.5g、碘酸钾2g、甘油5g。
37.配置浸渍液b液：甲醇1000ml、四甲基联苯胺2g、肼黄0.5g、去离子水80ml、多库酯钠3g。
38.将a液和b液配置完成，先将滤纸充分浸入浸渍液a液后取出，于50℃条件下干燥20分钟，然后将干燥后的滤纸浸入浸渍液b液后取出，于55℃条件下干燥15分钟，将干燥后的滤纸裁剪后与基板固定，得到一种尿液葡萄糖干化学检测试纸。
39.配制浓度分别为0mmol/l、5.6mmol/l、14mmol/l、28mmol/l、56mmol/l的葡萄糖标准溶液。
40.使用本发明试纸在迪瑞hc-900型全自动尿液分析仪进行检测，连续测试三次结果如下。
41.向上述5支标准液中，每支均加入抗坏血酸10mg，使得每支葡萄糖标准溶液中含vc浓度为5.6mmol/l，再次使用本发明试纸在迪瑞hc-900型全自动尿液分析仪进行检测，连续测试三次结果如下。
42.通过上述实验数据，可得出结论，本发明制作的尿葡萄糖检测试纸具有很好的抗vc干扰能力，当尿液中的vc浓度不超过5.6mmol/l时，检测结果不出现阴性，符合行标要求。
43.对比例一种尿液葡萄糖干化学检测试纸的制备方法，包括如下步骤：配置浸渍液a液：0.5mol/l的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液1000ml、阿拉伯树胶7.5g、葡萄糖氧化酶0.14g、过氧化物酶0.28g、抗坏血酸氧化酶0.7g、碘化钾1g、甘露醇8g。
44.配置浸渍液b液：甲醇1000ml、四甲基联苯胺0.5g、肼黄0.4g、去离子水100ml、聚乙二醇0.8g。
45.将a液和b液配置完成，先将滤纸充分浸入浸渍液a液后取出，于50℃条件下干燥25分钟，然后将干燥后的滤纸浸入浸渍液b液后取出，于50℃条件下干燥15分钟，将干燥后的滤纸裁剪后与基板固定，得到一种尿液葡萄糖干化学检测试纸。
46.配制浓度分别为0mmol/l、5.6mmol/l、14mmol/l、28mmol/l、56mmol/l的葡萄糖标准溶液。
47.使用本发明试纸在迪瑞hc-900型全自动尿液分析仪进行检测，连续测试三次结果如下。
48.通过上述实验数据，可得出结论，上述制作的尿葡萄糖检测试纸测值会偏高，测试结果不准确。