一种癌症相关蛋白及其抗体和应用的制作方法

本发明属于生物，具体涉及一种癌症相关蛋白及其抗体和应用。

背景技术：

1、肝细胞癌相关蛋白1(hepatocellular carcinoma related protein 1,hcrp1)被认为是一种抑癌基因。hcrp1是escrt-i复合体中的一个重要组成亚基。人体内多种受体是在escrt-i复合体的结合下，并转运至mvbs，最后在溶酶体参与下进行降解。xu等通过pcr技术提出并命名了hcrp1，并证明了它是一种抑癌基因。bache等研究证实hcrp1是人escrt-i复合体中的一个亚基，其功能对于表皮生长因子受体(egfr)的降解至关重要。egfr为跨膜受体酪氨酸激酶(rtk)，在调控多种细胞过程中起着重要作用，尤其在肿瘤细胞的生长和侵袭中起关键作用。多项研究显示，hcrp1在肝癌、卵巢癌、乳腺癌以及泌尿系肿瘤(肾癌、前列腺癌)等多种恶性肿瘤中均有低表达或缺失表达，而在正常组织或细胞中却明显高表达。但是，目前，缺少针对hcrp1的诊断试剂，尤其是免疫学诊断试剂。

技术实现思路

1、为了弥补现有技术的不足，本发明的目的之一，提供一种hcrp1及其单克隆抗体和制备方法；本发明的目的之二，提供了一种使用本发明制备的单克隆抗体和hcrp1制备用于hcrp1检测的试剂盒。

2、一方面，本发明提供了一种检测癌症相关蛋白表达水平的试剂盒，所述蛋白为hcrp1蛋白，所述的试剂盒包括有效量的hcrp1蛋白、两株有效量的抗hcrp1蛋白单克隆抗体和配套的检测试剂，所述两株抗hcrp1蛋白单克隆抗体为单克隆抗体1和单克隆抗体2，所述的编码单克隆抗体1的重链可变区和轻链可变区序列如seq id no.1和seq id no.2所示，所述的编码单克隆抗体2的重链可变区和轻链可变区序列如seq id no.3和seq id no.4所示。

3、优选地，本发明所述的有效量的hcrp1蛋白为使用hcrp1蛋白配制的校准品，所述校准品浓度分别为3000pg/ml、500pg/ml、100pg/ml、25pg/ml、5pg/ml、2.5pg/ml、0pg/ml。

4、优选地，本发明所述单克隆抗体1识别的抗原表位的氨基酸序列为mhsdlgkiiqslldefwknppvlap。

5、优选地，本发明所述单克隆抗体2识别的抗原表位的氨基酸序列为ieelarknlllepsleakrqtvldk。

6、优选地，本发明所述的单克隆抗体1偶联磁微粒，所述的偶联磁微粒的单克隆抗体1使用时的浓度为0.5mg/ml。

7、优选地，本发明所述的单克隆抗体2标记吖啶酯，所述标记吖啶酯的单克隆抗体2使用时的稀释倍数为500倍。

8、优选地，本发明所述的配套的检测试剂包括洗涤液和吖啶酯发光液。

9、优选地，本发明所述的洗涤液为tbst缓冲液。

10、再一方面，本发明还提供了一种所述的抗hcrp1蛋白单克隆抗体1和抗hcrp1蛋白单克隆抗体2在制备hcrp1蛋白检测试剂中的应用

11、本发明筛选的hcrp1蛋白的3条多肽(用于制备单克隆抗体)，具有较好的抗原性，为hcrp1蛋白的研究提供了重要参考。

12、本发明在hcrp1蛋白抗原多肽2、抗原多肽6和抗原多肽7的基础上筛选了3株特异性的单克隆抗体，为建立hcrp1蛋白的检测提供了良好的工具。其中单克隆抗体1和单克隆抗体2均具有良好的特异性和敏感性以及配对检测的适配性，适用于hcrp1蛋白的检测。

13、本发明在研究的hcrp1蛋白和单克隆抗体的基础上，开发了用于hcrp1蛋白检测的试剂盒。本发明的试剂盒具有灵敏度高、线性范围宽、检测速度快、检测准确度高的优点。

技术特征：

1.一种检测癌症相关蛋白表达水平的试剂盒，所述蛋白为hcrp1蛋白，其特征在于，所述的试剂盒包括有效量的hcrp1蛋白、两株有效量的抗hcrp1蛋白单克隆抗体和配套的检测试剂，所述两株抗hcrp1蛋白单克隆抗体为单克隆抗体1和单克隆抗体2，所述的编码单克隆抗体1的重链可变区和轻链可变区序列如seq id no.1和seq id no.2所示，所述的编码单克隆抗体2的重链可变区和轻链可变区序列如seq id no.3和seq id no.4所示。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的有效量的hcrp1蛋白为使用hcrp1蛋白配制的校准品，所述校准品浓度分别为3000pg/ml、500pg/ml、100pg/ml、25pg/ml、5pg/ml、2.5pg/ml、0pg/ml。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述单克隆抗体1识别的抗原表位的氨基酸序列为mhsdlgkiiqslldefwknppvlap。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述单克隆抗体2识别的抗原表位的氨基酸序列为ieelarknlllepsleakrqtvldk。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的单克隆抗体1偶联磁微粒，所述的偶联磁微粒的单克隆抗体1使用时的浓度为0.5mg/ml。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的单克隆抗体2标记吖啶酯，所述标记吖啶酯的单克隆抗体2使用时的稀释倍数为500倍。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的配套的检测试剂包括洗涤液和吖啶酯发光液。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的洗涤液为tbst缓冲液。

9.一种如权利要求1所述的抗hcrp1蛋白单克隆抗体1和抗hcrp1蛋白单克隆抗体2在制备hcrp1蛋白检测试剂中的应用。

技术总结
本发明公开了一种检测癌症相关蛋白表达水平的试剂盒，所述蛋白为HCRP1蛋白，所述的试剂盒包括有效量的HCRP1蛋白、两株有效量的抗HCRP1蛋白单克隆抗体和配套的检测试剂，所述两株抗HCRP1蛋白单克隆抗体为单克隆抗体1和单克隆抗体2，所述的编码单克隆抗体1的重链可变区和轻链可变区序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述的编码单克隆抗体2的重链可变区和轻链可变区序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。本发明的试剂盒具有灵敏度高、线性范围宽、检测速度快、检测准确度高的优点。

技术研发人员：惠展
受保护的技术使用者：广州顺泰生物医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13