一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法与流程

本发明涉及分析检测领域，具体地，涉及一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，具体地，本发明提供一种柱前衍生化法结合反相高效液相色谱和紫外检测器对头孢曲松钠中的甲基肼进行检测。

背景技术：

1、头孢曲松钠是第三代头孢菌素类抗生素，临床用于治疗敏感细菌所致的支气管炎、肺炎、胸膜炎、腹膜炎、皮肤及软组织等感染。

2、甲基肼是一种使用广泛的医药中间体，可以用来合成三嗪环，三嗪环是合成头孢曲松钠的原料。肼类化合物是已知的遗传毒性杂质，因此需要控制其在头孢曲松钠中的残留量。甲基肼由于分子结构简单，没有共轭响应，在紫外检测器中响应信号弱，无法直接使用高效液相色谱和紫外检测器进行检测。

技术实现思路

1、本发明旨在克服上述缺陷，使用芳香甲氧羰酰氯作为衍生化试剂，在室温条件下，与甲基肼的胺基反应，生成有较强紫外吸收的衍生物。衍生反应后采用实验室常见的色谱用的紫外检测器即可实现对甲基肼衍生物的测定。

2、本发明提供了一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征在于：

3、使用芳香甲氧羰酰氯作为衍生化试剂，与头孢曲松钠样本中的甲基肼进行反应，生成甲基肼衍生物后，基于对甲基肼衍生物的含量测定，来确定头孢曲松钠样本中甲基肼的含量。

4、进一步地，本发明提供的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征还在于：

5、对头孢曲松钠样本的处理方法为：

6、将头孢曲松钠样本溶液、芳香甲氧羰酰氯溶液和碱剂溶液按6:2:1-7:2:1的体积比混匀，于室温下，静置25-40mi n后，再加入相当于上述混合溶液体积百分比8-20％的酸溶液，混匀，终止反应。

7、进一步地，本发明提供的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征还在于：

8、上述头孢曲松钠样本溶液中头孢曲松钠样本的质量浓度为10-20mg/ml。

9、进一步地，本发明提供的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征还在于：

10、上述芳香甲氧羰酰氯溶液中芳香甲氧羰酰氯的质量浓度为7-10mg/m l。

11、进一步地，本发明提供的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征还在于：

12、上述碱剂溶液中的碱的摩尔浓度为0.1-1mo l/l。

13、进一步地，本发明提供的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征还在于：

14、上述酸溶液中的酸的摩尔浓度为0.5-4mo l/l。

15、进一步地，本发明提供的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征还在于：

16、用于溶解头孢曲松钠样本、芳香甲氧羰酰氯、碱剂、酸的溶剂选自腈类试剂、水中的一种或以上。

17、进一步地，本发明提供的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征还在于：

18、生成甲基肼衍生物后，通过反相高效液相色谱使甲基肼衍生物被分离出。

19、进一步地，本发明提供的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征还在于：

20、色谱条件如下：

21、色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂

22、流动相a：0.5％磷酸水溶液

23、流动相b：乙腈

24、梯度洗脱：0-5mi n流动相a的体积百分数为45-55％；

25、5-10mi n流动相a的体积百分数由45-55％降至35-44％；

26、10-25mi n流动相a的体积百分数由35-44％降至30-34％；

27、25-27mi n流动相a的体积百分数由30-34％降至5-15％；

28、27-32mi n流动相a的体积百分数为5-15％；

29、32-32.1mi n流动相a的体积百分数由5-15％增加至45-55％；

30、32.1-39mi n流动相a的体积百分数为45-55％；

31、检测波长：260-270nm

32、柱温：25-45℃

33、流速：0.8-1.0m l/mi n

34、进样量:10-50μl。

35、进一步地，本发明提供的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征还在于：

36、上述甲基肼衍生物的色谱峰确定方法如下：

37、s1.采用如权利要求2相同的反应条件，将其中的头孢曲松钠样本替换为硫酸甲肼，作为对照样本；

38、s2.采用如权利要求9相同的色谱条件，分离出对照样本中的甲基肼衍生物；

39、s3.对比头孢曲松钠样本的色谱图和s2获取的甲基肼衍生物的色谱图，判断对比头孢曲松钠样本的色谱图中是否存在与s2获取的甲基肼衍生物的色谱图中的甲基肼衍生物保留时间一致的色谱峰；

40、如结果为“存在”，则按外标法以峰面积计算头孢曲松钠中甲基肼的含量。

41、本发明的作用和效果：

42、在本发明的研究中发现，芳香类的甲氧羰酰氯与甲基肼反应快速，反应条件温和，反应产物稳定，检测灵敏度高，能够满足头孢曲松钠中ppm级甲基肼的准确测定。虽然，芳香类的甲氧羰酰氯(如：芴甲氧羰酰氯)，其本身也具有紫外吸收，但可以通过反相高效液相色谱使其与甲基肼衍生物分离，不干扰甲基肼衍生物的检测。

技术特征：

1.一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征在于：

2.如权利要求1所述的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征在于：

3.如权利要求1所述的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征在于：

4.如权利要求1所述的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征在于：

5.如权利要求1所述的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征在于：

6.如权利要求1所述的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征在于：

7.如权利要求3-6任一所述的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征在于：

8.如权利要求1所述的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征在于：生成甲基肼衍生物后，通过反相高效液相色谱使甲基肼衍生物被分离出。

9.如权利要求8所述的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征在于：色谱条件如下：

10.如权利要求1所述的一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征在于：所述甲基肼衍生物的色谱峰确定方法如下：

技术总结
本发明提供了一种头孢曲松钠中甲基肼的检测方法，其特征在于：使用芳香甲氧羰酰氯作为衍生化试剂，与头孢曲松钠样本中的甲基肼进行反应，生成甲基肼衍生物后，基于对甲基肼衍生物的含量测定，来确定头孢曲松钠样本中甲基肼的含量。本发明反应条件温和，反应产物稳定，检测灵敏度高。

技术研发人员：沈宏一,陈丽莉
受保护的技术使用者：上海上药新亚药业有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12