一种测定阿比特龙口服乳剂中阿比特龙相关杂质的分析方法与流程

本发明涉及阿比特龙口服乳剂的分析方法，具体涉及一种用高效液相色谱梯度法进行测定的方法，属于药物分析检测领域。

背景技术：

1、本发明所述的醋酸阿比特龙为(3β)-17-(3-吡啶基)-雄甾-5，16-二烯-3醇醋酸酯，分子式为c26h33no2，其化学结构式如(i)所示。

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3、阿比特龙口服乳剂是一类改良新剂型药。目前在世界各国的药典及专利文献中未收录相关制剂的标准。

4、本文通过考察不同的流动相比例、不同色谱柱、不同的缓冲盐、首次实现了测定阿比特龙口服乳剂中有关物质的目的，很好地保证了阿比特龙口服乳剂的质量可控。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种测定阿比特龙口服乳剂中阿比特龙相关杂质的方法，可用于阿比特龙口服乳剂制备过程及最终产品的有关物质的控制。本发明提到的阿比特龙相关杂质为杂质1～10，具体如下表所示。

2、本发明的技术方案为：

3、一种利用高效液相色谱测定阿比特龙口服乳剂中的阿比特龙及其他有关物质的方法，醋酸阿比特龙及其有关物质的名称、分子式及结构式如下表所示。

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6、优选地，该检测方法用于测定阿比特龙口服乳剂中阿比特龙及其他杂质的含量，包括以下步骤：

7、(1)系统适用性试验和灵敏度测试

8、制备系统适用性溶液：取阿比特龙系统适用性混合对照品与溶剂混合，制成浓度为0.625mg/ml的系统适用性溶液；其中，所述溶剂由甲醇与乙腈以体积比为50:50混合而成；

9、制备灵敏度测试溶液：取醋酸阿比特龙对照品，用所述溶剂定量稀释，制成浓度为0.4μg/ml的灵敏度测试溶液；

10、分别以所述系统适用性溶液和所述灵敏度测试溶液在以下色谱条件下进行系统适用性试验和灵敏度测试，校定检测系统；

11、所述色谱条件为：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，以醋酸盐缓冲液-流动相b体积比(50:50)为流动相a，以甲醇与乙腈体积比例为20：80的混合溶液为流动相b，梯度洗脱，所述醋酸盐缓冲液的浓度为0.005mol/l～0.015mol/l，所述色谱柱的柱温为35℃～45℃，流速为1.1ml/min～1.3ml/min，检测波长为254nm；

12、分别精密量取10μl所述系统适用性溶液和10μl所述灵敏度测试溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，校定检测系统至阿比特龙异丙醚峰与脱水阿比特龙峰之间的分离度大于1.0，醋酸阿比特龙峰拖尾因子小于1.5；所述灵敏度测试溶液的色谱图中醋酸阿比特龙峰的信噪比不小于10。

13、(2)制备供试品溶液和对照品溶液

14、取阿比特龙口服乳剂待测样品约1250mg(约相当于醋酸钠比特龙100mg)，加所述溶剂制成(按醋酸阿比特龙计)浓度为2.0mg/ml的供试品溶液；

15、取醋酸阿比特龙对照品，加所述溶剂制成浓度为4μg/ml的对照品溶液；

16、(3)通过高效液相色谱测定所述供试品溶液中阿比特龙及其它杂质的含量；

17、将所述对照品溶液注入步骤(1)校定后的液相色谱仪，调节检测灵敏度，再将所述对照品溶液和供试品溶液注入所述液相色谱仪，在步骤(1)所述的色谱条件下进行高效液相色谱测定，记录色谱图。

18、所述色谱条件为：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，以醋酸盐缓冲液-流动相b(45:55)～(55:45)为流动相a，以甲醇-乙腈(1.5:8.5)～(2.5:7.5)为流动相b，梯度洗脱，醋酸盐缓冲液的浓度为0.005～0.015mol/l，柱温为35～45℃，流速为1.1～1.3ml/min，检测波长为254nm，进样体积为10μl；

19、(4)计算所述阿比特龙口服乳剂待测样品中阿比特龙相关杂质1～10的含量；按外标法以峰面积计算阿比特龙及其他杂质的含量。供试品溶液的色谱图中如显示杂质峰(对醋酸阿比特龙峰的相对保留时间约为0.81的二丁基羟基甲苯辅料峰除外)，按加校正因子的主成分外标法计算：

20、合格的阿比特龙乳剂所包含的阿比特龙含量不得大于0.40％(w/w)，其他单个杂质不得大于0.20％(w/w)，各杂质总和不得大于2.0％(w/w)。

21、优选地，上述梯度洗脱为：0分钟～13分钟，线性梯度洗脱，流动相a的比例从87％变化为74％，流动相b的比例从13％变化为26％；13分钟～31分钟，线性梯度洗脱，流动相a的比例从74％变化为30％，流动相b的比例从26％变化为70％；31分钟～36分钟，等度洗脱，流动相a的比例保持30％不变，流动相b的比例保持70％不变；36分钟～37分钟，流动相a和b回到初始比例；37分钟～45分钟，色谱柱重新平衡。

22、优选地，上述醋酸盐选自醋酸铵。

23、优选地，上述醋酸盐缓冲液为浓度为0.01mol/l的醋酸铵溶液。

24、优选地，上述色谱柱为规格4.6mm×150mm，填料粒径3.5μm的十八烷基硅烷键合硅胶柱。

25、更优选地，上述色谱柱为waters x-bridge shield rp18色谱柱。

26、优选地，上述阿比特龙口服乳剂待测样品为阿比特龙口服乳剂。

27、优选地，上述阿比特龙口服乳剂待测样品包含活性成分醋酸阿比特龙、增溶剂，乳化剂、和抗氧剂。

28、优选地，上述增溶剂选自辛酸癸酸单双甘油酯、丙二醇单辛酸酯、或辛酸癸酸单双甘油酯和丙醇单辛酸酯的混合物中的任意一种，所述乳化剂选自聚氧乙烯40氢化草麻油，所述抗氧剂选自二丁基羟基甲苯。

29、本发明通过使用高效液相色谱梯度法测定阿比特龙口服乳剂中阿比特龙相关杂质1～10的含量，通过对色谱条件的探索，确定了可以有效测定阿比特龙及其他杂质的色谱条件。本发明方法首次实现了测定阿比特龙口服乳剂中有关物质的含量，且专属性好、分离度佳、灵敏度高、重现性好，对评价制剂工艺的优劣、终产品质量控制及稳定性样品检测具有重要的意义。

30、本发明方法适用于阿比特龙口服乳剂检测。本发明检测方法准确，时间迅速，可以充分满足有关物质测定的要求，较好地控制样品中的特定杂质与非特定杂质，保证产品质量，在实际质量控制工作中实用性强。

技术特征：

1.一种利用高效液相色谱同时测定阿比特龙口服乳剂中阿比特龙相关杂质1～10的方法，所述阿比特龙口服乳剂的活性成分为醋酸阿比特龙，结构式如式(i)所示，

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的梯度洗脱为：

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的醋酸盐选自醋酸铵。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的醋酸盐缓冲液为浓度为0.01mol/l。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相b为体积比20：80的甲醇-乙腈，流动相a为体积比50：50的0.01mol/l醋酸铵缓冲液-流动相b。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的色谱条件为：流速为1.2ml/min，柱温为40℃，进样器温度为室温。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的色谱柱为waters x-bridge shieldrp18色谱柱。

8.如权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，所述的阿比特龙口服乳剂待测样品包含活性成分醋酸阿比特龙、增溶剂，乳化剂、和抗氧剂。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述增溶剂选自辛酸癸酸单双甘油酯、丙二醇单辛酸酯、或辛酸癸酸单双甘油酯和丙醇单辛酸酯的混合物中的任意一种，所述乳化剂选自聚氧乙烯40氢化蓖麻油，所述抗氧剂选自二丁基羟基甲苯。

技术总结
本发明公开了一种测定阿比特龙口服乳剂中阿比特龙相关杂质的高效液相色谱分析法，色谱条件为色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，以醋酸盐缓冲液‑流动相B体积比(45:55)～(55:45)为流动相A，以甲醇‑乙腈体积比(1.5:8.5)～(2.5:7.5)为流动相B，梯度洗脱，醋酸盐缓冲液的浓度为0.005～0.015mol/L，柱温为35～45℃，流速为1.1～1.3ml/min，检测波长为254nm，进样体积为10μl。本发明所述测定方法可快速准确的检测出阿比特龙口服乳剂中阿比特龙相关杂质的含量，操作简单，重现性好，灵敏度高，可较好地控制阿比特龙口服乳剂中间产品及制剂杂质，为制剂工艺优化提供了保证。

技术研发人员：郭青,孔萌,卢晓莹,张佳旭
受保护的技术使用者：深圳海王医药科技研究院有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12