本发明涉及免疫组织化学染色,尤其是涉及其中的阳性对照技术,具体而言涉及一种用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法。
背景技术:
1、免疫组织化学是利用抗原抗体特异性结合的特点,通过化学反应,使标记于抗体上的显色剂(酶、金属离子、荧光素)显示出一种颜色,借助电子、荧光或普通显微镜观察其颜色变化,从而在抗原结合部位确定组织细胞某种成分的方法。免疫组织化学是病理诊断中常用的检测技术。
2、目前,检测机构所检测的项目中依然沿用传统的方式,即一个检测指标加一种阳性对照,在检测项目较多时,耗时耗力。而且,在检测项目量大时,大量的切片标签的粘贴增加了工作量,也增加了标签贴错的风险,导致检测过程和结果出现偏差和错误,影响检测项目的正常运行。
3、为此,现有技术中尝试通过预置检测试剂盒的方式来解决批量检测时的工作量和容易出错的问题,开发的使用培养细胞切片做的检测试剂盒产品,例如杭州百凌生物科技有限公司提供的配备有液体阳性细胞切片的eb病毒检测试剂盒,试剂盒自带液体阳性细胞切片,由此通过自带的液体阳性细胞切片,可以有效监测检测过程,并确保了染色结果的可靠性,可实现在一张切片上有待检测组织的情况下,同时添加阳性对照,以对角线方式滴加有效检测试剂覆盖面,实现对待检样品的检测。这样配备了液态阳性细胞切片的eb病毒检测试剂盒产品,虽然保证了染色结果的可靠性,但是,阳性细胞的获取是一个难点,很多细胞比较娇弱,每种细胞的培养方式都不一样,在实际使用和普及过程中,其局限性太强,从细胞的获取到细胞的培养及验证,耗费了大量金钱和时间,而且要求试验人员有过硬的细胞培养技术,大大限制了液体阳性细胞切片的使用范围。同时,并非所有的肿瘤靶点或者药物靶点都有对应的阳性细胞,导致这样配备自带的液态阳性细胞切片的检测试剂盒的普遍应用成为难点。
技术实现思路
1、鉴于现有技术存在的技术问题,本发明目的在于提供一种用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法,采用液态阳性组织切片,节省玻片损耗并减少大量检测时的标签黏贴耗时和贴错的风险。
2、为实现上述目的,根据本发明的第一方面,提出一种用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法,包括以下步骤:
3、步骤1、使用切片机对组织进行切片,获得一定厚度的蜡片;
4、步骤2、将切好的蜡片放入离心管中,使用玻璃棒进行碾碎;
5、步骤3、在所述离心管中加入二甲苯,离心分离一定时间;
6、步骤4、离心结束后,倒去管内二甲苯,加入等量无水乙醇,混匀,离心分离一定时间;
7、步骤5、离心结束后,倒去管内无水乙醇,根据沉淀物量加入75%~100%的乙醇;
8、步骤6、将步骤5得到的产物在烤片机进行烘烤,然后在载玻片上除了蜡片以外的地方滴加;
9、步骤7、滴加好阳性对照的切片在烤片机烤片一段时间,即得,可进行后续的免疫组织化学染色。
10、其中,所述步骤5中,根据沉淀物量的1:20~1:50,加入75%~100%乙醇。
11、其中,所述步骤6中,被检组织周围均滴加阳性对照,尤其是,在被检组织上方及下方各一滴,或者以对角线方式滴加。
12、其中,所述步骤7中,滴加好的切片在烤片机上的烤片时间设定为:80℃下烤片30分钟;或者在60℃下烤片3小时。
13、由以上本发明的技术方案可见,本发明提出的用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法,可解决检测项目量多时阳性对照组织切片添加的繁琐问题,减少和消除玻片损耗和切片标签的粘贴费时且贴错的风险。
1.一种用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法,其特征在于,包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法,其特征在于,所述步骤1中,切片时控制蜡片的厚度为2~3μm。
3.根据权利要求1所述的用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法,其特征在于,所述步骤2中,所述离心管可以被替换为烧杯。
4.根据权利要求1所述的用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法,其特征在于,所述步骤3和步骤4中,离心分离的转速控制在2000~3000转/分钟,离心时间2~5分钟。
5.根据权利要求1所述的用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法,其特征在于,所述步骤5中,根据沉淀物量的1:20~1:50,加入75%~100%乙醇。
6.根据权利要求1所述的用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法,其特征在于,所述步骤6中,被检组织周围均滴加阳性对照。
7.根据权利要求6所述的用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法,其特征在于,所述步骤6中,在被检组织上方及下方各一滴,或者以对角线方式滴加。
8.根据权利要求1所述的用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法,其特征在于,所述步骤7中,滴加好的切片在烤片机上的烤片时间设定为:80℃下烤片30分钟;或者,60℃下烤片3小时。