一种银黄药物组合物的检测方法与流程

本发明属于中药质量检测，具体涉及一种银黄药物组合物的检测方法。

背景技术：

1、银黄含化滴丸，为贵州威利德制药有限公司的产品，功能与主治：清热解毒，消炎。用于急慢性扁桃体炎、咽炎、上呼吸道感染。

2、处方：金银花提取物90g、黄芩提取物90g；制法：以上两味，粉碎成细粉，加812g聚乙二醇-4000混合均匀后，加热(约80～90℃)熔融成均匀的药液，再加入阿司帕坦4.5g及薄荷脑3.5g，混合均匀后，药液保持温度在70～80℃，滴入二甲基硅油(5～10℃)中，滴制成丸，制成1000g，即得。

3、现有技术中，《中华人民共和国药典》2020版中收载有银黄口服液、银黄丸、银黄片等中药制剂，其制备工艺各不相同，检测标准中只包括黄芩苷和绿原酸含量测定，每种功效成分的含量测定需要通过采取不同的测定方法，导致其检测效率低；且没有药物功效成分的鉴别，不能有效全面控制药物质量。

4、为了提高检测效率，有效控制药物质量，提升银黄药物组合物的质量标准，本发明团队对银黄药物组合物的检测进行深入研发、考察，建立了一种银黄药物组合物的检测方法，增加了提取物中黄芩苷和绿原酸的薄层鉴别，采用高效液相色谱法在相同条件下可同时测出黄芩苷和绿原酸的含量。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种银黄药物组合物的检测方法。

2、本发明技是通过如下技术方案实现的：

3、一种银黄药物组合物的检测方法，所述检测方法包括：(1)黄芩提取物中黄芩苷的薄层鉴别；(2)金银花提取物中绿原酸的薄层鉴别；(3)黄芩苷和绿原酸的含量测定。

4、本发明所述黄芩苷的薄层鉴别方法为：

5、取样品细粉1-3g，加乙醚10-30ml，超声处理10-20min，滤过，滤渣挥尽乙醚，加甲醇10-30ml，超声处理10-20min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10-30ml，加热使溶解，加稀盐酸调节ph值至2-3，加乙酸乙酯振摇提取1-3次，每次10-30ml，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每lml含1mg的溶液，作为黄芩苷对照品溶液；吸取上述两种溶液各2-4μl，分别点于同一硅胶g板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(15:4.5:1:2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3-5％三氯化铁乙醇溶液，置紫外光灯365nm下检视。

6、优选的，本发明所述黄芩苷的薄层鉴别方法为：

7、取样品细粉2g，加乙醚20ml，超声处理15min，滤过，滤渣挥尽乙醚，加甲醇20ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml，加热使溶解，加稀盐酸调节ph值至2.5，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每lml含1mg的溶液，作为黄芩苷对照品溶液；吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶g板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(15:4.5:1:2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以4％三氯化铁乙醇溶液，置紫外光灯365nm下检视。

8、本发明所述绿原酸的薄层鉴别方法为：

9、取样品细粉2-4g，加无水乙醇40-60ml，超声处理20-40min，滤过，滤液蒸干，残渣加10-20ml水使溶解，过聚酰胺柱，用40-60ml水洗脱，弃去水液，用甲醇20-40ml分次洗脱，收集洗脱液，置水浴锅上蒸干，残渣加甲醇1-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每lml含1mg的溶液，作为绿原酸对照品溶液；吸取上述两种溶液各2-4μl，分别点于同一硅胶g板上，以乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水(15:12:4:3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1-5％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯365nm下检视。

10、优选的，本发明所述绿原酸的薄层鉴别方法为：

11、取样品细粉3g，加无水乙醇50ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加15ml水使溶解，过聚酰胺柱，用50ml水洗脱，弃去水液，用甲醇30ml分次洗脱，收集洗脱液，置水浴锅上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每lml含1mg的溶液，作为绿原酸对照品溶液；吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶g板上，以乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水(15:12:4:3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯365nm下检视。

12、本发明所述黄芩苷和绿原酸的含量测定方法包括如下步骤：

13、(1)对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷和绿原酸对照品适量，加甲醇制成质量浓度分别为40μg·ml-1黄芩苷、25μg·ml-1绿原酸的混合对照品溶液，即得；

14、(2)供试品溶液的制备：取样品0.1g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇适量，超声处理0.5h，放冷至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，得续滤液，精密吸取续滤液10m1，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

15、(3)色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含0.01％甲酸的乙腈溶液为流动相a，以含0.2％甲酸水溶液为流动相b，梯度洗脱：0-5min，15％a；5-15min，85％a；15-20min，15％a；检测波长为315nm；柱温32℃；流速1.0ml·min-1；进样量10ul；理论板数按黄芩苷和绿原酸峰计算应不低于3000；

16、(4)测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

17、本发明步骤(1)和(2)所述甲醇的浓度为：50-70％甲醇溶液。

18、优选的，本发明步骤(1)和(2)所述甲醇的浓度：60％甲醇溶液。

19、本发明步骤(2)所述超声处理的条件为：超声功率300-400w，频率30-50khz。

20、优选的，本发明步骤(2)所述超声处理的条件为：超声功率350w，频率40khz。

21、本发明的有益效果：

22、1.本发明增加了对黄芩苷和绿原酸的薄层鉴别，对薄层鉴别中供试品的称样量、溶剂选择及提取方法、展开剂等进行了大量筛选实验，得到黄芩苷和绿原酸的薄层鉴别方法的优选方案，并对其进行了方法学考察，结果在专属性考察中，在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的主斑点，且斑点分离较好，阴性无干扰，表明此方法专属性强；在重现性考察中，10批样品检验结果一致，表明此方法的稳定性；在耐用性考察中，在不同薄层板、温度、湿度下考察，结果斑点分离好，无干扰，表明此方法耐用性好。

23、2.本发明利用高效液相色谱建立了灵敏、准确、简便测定银黄药物中黄芩苷和绿原酸含量的检测方法，可作为关键功效成分的质量控制方法，此方法条件下黄芩苷和绿原酸色谱峰形较理想，基线平稳，分离效果好。将该方法应用于银黄药物组合物的测定，其方法特异性、重复性、中间精密度、稳定性、准确度良好。

24、3.本发明对含量测定方法中供试品提取溶剂、提取方法、提取时间，流动相等进行了的筛选实验，得到了含量测定的优选方案，并对其进行了方法学考察，结果：

25、(1)在线性考察中，黄芩苷在0.0799μg-0.3995μg范围内呈良好的线性关系(r2＝0.9994)；绿原酸在0.0498μg-0.2492μg范围内与其峰面积呈良好的线性关系(r2＝0.9998)；

26、(2)在精密度考察中，测定黄芩苷和绿原酸峰面积，结果黄芩苷的rsd为1.96％，绿原酸的rsd为1.81％，表明仪器的精密度良好；

27、(3)在稳定性考察中，测定黄芩苷和绿原酸峰面积，结果黄芩苷的rsd为1.94％，绿原酸的rsd为1.18％，表明供试品溶液在12h小时内检测具有良好的稳定性；

28、(4)在重复考察中，测定黄芩苷和绿原酸的含量，结果黄芩苷的rsd为0.89％，绿原酸的rsd为1.14％，表明该方法重复性良好；

29、(5)在回收率考察中，结果黄芩苷平均回收率为98.73％，rsd为0.93％，绿原酸平均回收率为98.35％，rsd为1.32％，均符合要求；

30、(6)在专属性考察结果表明样品溶液色谱在对照品溶液色谱相应位置有相应的色谱峰，且阴性无干扰；并对10批样品进行了黄芩苷和绿原酸含量测定，结果10批样品中黄芩苷和绿原酸平均含量分别为81.78mg/g，15.21mg/g，均符合要求。