本发明属于中药制剂指纹图谱检测，具体是一种口服液质量检测及指纹图谱的生成方法。
背景技术：
1、指纹图谱是指某些复杂物质，比如中药，某种生物体或某种组织或细胞的dna，蛋白质经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。指纹图谱主要分为中药指纹图谱，dna指纹图谱和肽指纹图谱。中药指纹图谱的研究以反映中药的整体化学特征为立论依据，提出以解决两个关键技术为突破口，实现指纹图谱技术在中药质量控制方面的应用。
2、它的特色主要表现在三个方面：1、用规范化的程序获得中药特征性总成分提取物，并用1hnmr、hplc、uv、ir等多种手段表征其组成和结构。不同的表征手段间的区别主要表现在所得到的信息多少不同和操作上的方便程度不同。同此，核心的问题在于这种特征性总成分提取物要有真正的特征性，它的组成和结构要能真正代表这种中药。
3、2、由于同时采用多种检测手段来表征中药特征总提物的结构和相对组成方式，因此，方便了各部门在质量控制方面可以根据自己的实际情况选择应用。其中，由于1hnmr具有操作简便、快速、检测成本低、重现性好和信息量大等优点，更是中药指纹图谱研究的主要特色之一。
4、3、中药指纹图谱的解析研究以及中药特征总提物和各单体成分的生理活性研究体现了这一技术的科学性。
5、以指纹图谱作为中药(天然药物)提取物及其制剂的质量控制方法，已成为国际共识，各种符合中药(天然药物)特色的指纹图谱控制技术体系正在研究和建立。作为一项新技术，中药指纹图谱在实际应用中还面临许多问题，只有进一步加强中药材种植加工和中成药生产贮存的规范化；中药化学成分和中药药理研究的系统化和标准化；以及技术上多学科的渗透，才能保证中药质量的稳定，进而保证中药指纹图谱的建立和实施。所以本发明提出一种口服液质量检测及指纹图谱的生成方法。
技术实现思路
1、本发明提出了一种口服液质量检测及指纹图谱的生成方法，是为了提供一种稳定性高，准确性与重复性好的质量检测及指纹图谱的生成方法，能较全面的反映口服液的质量信息，可用于口服液的生产过程监控和制剂质量的控制，从而保证产品质量均一稳定。
2、为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：一种口服液质量检测及指纹图谱的生成方法，包括以下步骤：步骤一，制备若干组口服液供试品；
3、步骤二：采用薄层鉴别对步骤一中的供试品进行鉴别；
4、步骤三：对步骤一中的供试品的密度、ph值和装量进行检查；
5、步骤四：采用hplc，生成指纹图谱；
6、步骤五：对步骤四中的指纹图谱多指标含量测定，通过测定结果对步骤一中的供试品进行质量检测。
7、有益效果：根据步骤生成指纹图谱，并且通过测定结果对步骤一中的供试品进行质量检测，提供了一种稳定性高，准确性与重复性好的质量检测及指纹图谱的生成方法，能较全面的反映口服液的质量信息，可用于口服液的生产过程监控和制剂质量的控制，从而保证产品质量均一稳定。
8、进一步，步骤一中供试品包括样本溶液和对照溶液。
9、有益效果：主要以金花三宝口服液为例，金花三宝口服液是选用广西大宗特色壮瑶药材玉叶金花，金银花和金花茶为原料进行组方的，主要具有清热解毒，辛凉解表，生津利喉等功效的中医药保健饮品。样本溶液为金花三宝口服液。
10、进一步，步骤一中供试品制备方法为：取口服液3～10ml于100ml容量瓶中，加入体积百分含量为30％～100％甲醇溶液50～100ml，超声处理5～30min，超声功率400w，超声频率40w，放冷至室温，摇匀过滤，取10ml续滤液于25ml容量瓶中，加入体积百分含量为30％～100％甲醇溶液稀释定容至刻度。
11、有益效果：甲醇是一种有机化合物，是结构最为简单的饱和一元醇，高效液相色谱的流动相中就有甲醇，用甲醇是为了让检测结果不受溶剂的影响，同时加入甲醇,也可以稀释口服液浓度以便于后面是操作步骤。
12、进一步，步骤二中薄层鉴别依照薄层色谱试验法为：吸取不同组别的供试品分别点在同一硅胶薄板上，以体积比为乙酸乙酯:乙醇:甲酸的比例为24-26：0.5-1.5：0.5-1.5为展开剂展开，晾干，置365nm紫外灯下检视。
13、有益效果：薄层色谱试验法具有操作方便、设备简单、显色容易等特点，同时展开速率快，一般仅需15～20分钟；混合物易分离，分辨力一般比以往的纸层析高10～100倍，它既适用于只有0.01μg的样品分离，又能分离大于500mg的样品作制备用，实用性强。
14、进一步，步骤三中主要是对供试品中样品溶液进行检查，使用0601相对密度测定法测定密度，0631的ph值测定法测定ph值，采用容量分析方法测定装量。
15、有益效果：密度测定方法为：取洁净、干燥并精密称定重量的比重瓶，装满供试品(温度应低于20℃或各品种项下规定的温度)后，装上温度计(瓶中应无气泡)，置20℃(或各品种项下规定的温度)的水浴中放置若干分钟，使内容物的温度达到20℃(或各品种项下规定的温度)，用滤纸除去溢出侧管的液体，立即盖上罩。然后将比重瓶自水浴中取出，再用滤纸将比重瓶的外面擦净，精密称定，减去比重瓶的重量，求得供试品的重量后，将供试品倾去，洗净比重瓶，装满新沸过的冷水，再照上法测得同一温度时水的重量，按下式计算：
16、
17、ph值测定方法为：ph值是水溶液中氢离子活度的方便表示方法。ph值定义为水溶液中氢离子活度(ah+)的负对数，即ph＝-lgah+，但氢离子活度却难以由实验准确测定。为实用方便，溶液的ph值规定为由下式测定：
18、
19、式中e为含有待测溶液(ph)的原电池电动势；es为含有标准缓冲液(phs)的原电池电动势；k为与温度(t,℃)有关的常数,k＝0.05916+0.000198(t-25)。
20、装量的测定方法为：(适用于标示装量以容量计者)除另有规定外，取供试品5个，开启时注意避免损失，将供试品口服液转移至预经标化和干燥的量入式量筒或注射器中(量具的大小应使待测体积至少占其额定体积的40％)，黏稠液体倾出后，除另有规定外，将容器倒置15分钟，尽量倾净，读出每个容器内容物的装量，并求其平均装量。平均装量与每个容器装量(按标示装量计算出标示装量的百分率)，结果取三位有效数字进行结果判断。
21、通过对样品溶液的密度、ph值和装量检测，从而能较全面的反映样品溶液的质量信息，可用于口服液的生产过程监控和制剂质量的控制。
22、进一步，步骤四中hplc色谱条件为：色谱柱：kinetex-xb-c18，4.6×250mm，5μm；测定波长：340nm；柱温：30℃；进样体积：5μl；流动相：0.35％磷酸溶液-乙腈；流速：1.0ml/min；采用梯度洗脱方式洗脱70min。
23、有益效果：梯度洗脱程序见表1：表1梯度洗脱程序
24、 时间/min 乙腈/％ 0.35％磷酸溶液/％ 0→12 12 88 12→25 12→15 88→85 25→28 15→19 85→85 28→40 19→23 81→77 40→46 13→25 77→75 46→55 25 75 55→60 25→33 75→67 60→65 33 67 65→70 33→90 67→10
25、采用hplc分别对不同的样品溶液及对照混合溶液进行进样分析，记录10组样品溶液hplc色图谱及对照溶液hplc指纹图谱，以第一组的样品溶液hplc指纹图谱作为参照图谱进行共有峰匹配，设置时间窗宽度设为0.1min，采用中位数矢量法计算，经多点校正、数据匹配，生成对照指纹图谱，提供一种稳定性高，准确性与重复性好的指纹图谱生成方法。
26、进一步，步骤五中的多指标含量测定，主要通过色谱考察和对照溶液指认，对指纹图谱的共有峰和相似度进行分析。
27、有益效果：通过比对对照溶液hplc指纹图谱和对照指纹图谱中各色谱峰的出峰时间，确认共有峰及共有峰保持的时间，再指认出对照溶液分别对应的峰，以其中一组对照溶液作为参照峰，利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)，对10组样品溶液hplc指纹图谱与对照指纹图谱进行相似度计算分析，10组供试品溶液hplc指纹图谱与对照指纹图谱叠加，计算得到的相似度，根据相似度的高低，相似度较高则表明工艺和产品质量相对稳定。
28、进一步，对照溶液为绿原酸溶液、隐绿原酸溶液、异绿原酸a、异绿原酸c、芦丁混合溶液。
29、有益效果：绿原酸是木质素生物合成的重要中间体。绿原酸是一种抗氧化剂和佛波酯促肿瘤活性的抑制剂，它对链脲佐菌素-烟酰胺产生的氧化应激引起的糖尿病具有保护作用，还可以预防心血管疾病；绿原酸溶液、隐绿原酸溶液、异绿原酸a和异绿原酸c均为金银花提取物，金花三宝口服液中也含有金银花提取物，芦丁混合溶液具有抗炎作用，能降低如芥子油对动物眼睛或皮肤引起的炎症，有抗病毒作用，样本溶液和对照溶液既有相同物质也有不同的物质，实验才具有参照性。