CRMP3作为癫痫的诊断、治疗、预后分子标志物的应用

本发明属于生物医药，具体涉及crmp3作为癫痫的诊断、治疗、预后分子标志物的应用。

背景技术：

1、全世界有超过5000万人患有癫痫，其中约30％的患者尽管接受了抗癫痫药物(asm)的治疗，仍无法彻底治愈而癫痫发作。癫痫病因很多，包括感染、代谢异常、外伤、遗传和免疫等。自身免疫相关的癫痫是指继发于自身免疫性脑病的癫痫，而神经自免抗体的检测在该病的诊断中具有不可或缺的作用。这些抗体多靶向神经元表面抗原，包括突触神经递质受体和离子通道相关蛋白(例如：lgi1、nmdar、ampar、gabar、caspr2、mglur5、glyr)，这类患者免疫治疗的预后较好；另有一些抗体靶向神经元胞内抗原(例如：gad65、ma2、hu)，这类患者免疫治疗效果较差。由于现有抗体标志物不足，自身免疫相关癫痫的真实发病率仍不明确，有报道显示约6％-10％的晚发性癫痫患者都可能为该类疾病。新抗体标志物的发现对于自身免疫相关癫痫的病因诊断、免疫因素检测和治疗策略(免疫疗法)选择具有重要意义，特别是对asm耐受患者的诊治。

2、自免脑相关的癫痫可表现为急性、亚急性或慢性癫痫发作。急性或亚急性表现为从起病开始就频繁癫痫发作，且常有前驱病毒感染史。对于没有癫痫发作病史或相关危险因素的患者，这种频繁的癫痫发作是诊断自身免疫性癫痫的重要表征。这部分患者的癫痫常呈多灶性且asm耐受。个别抗体引发的癫痫症状具有特征性，例如抗lgi1抗体的面臂肌张力障碍性癫痫发作。除了癫痫，还有一些神经症状也很常见，包括自主神经功能障碍、精神行为异常、记忆力减退或运动障碍。一些患者可能表现为新发难治性癫痫持续状态(norse)或热性感染相关性癫痫综合征(fires)，自免也是norse最常见病因(37％)。然而，仍有约50％的为病因不明的隐源性新发难治性癫痫持续状态(c-norse)，更多新的疾病标志物有待发现。

3、在临床特征和诊断上，患者脑电图具有多样性，包括正常、局灶性或弥漫性延迟；癫痫样放电；或明显的癫痫发作。当癫痫灶较深或参与的神经元群体太小时，头皮脑电可能是正常的。在发病初期，脑部mri也可以是正常的(约30％-50％)。mri异常通常稍晚出现，包括双侧和不对称性内侧颞叶或边缘t2高信号。脑部pet的结果不具特异性，可能检测到高代谢或低代谢的局灶区域。但全身pet或ct进行肿瘤扫描通常是有必要的，特别是副肿瘤神经综合征抗体出现时。国内外指南和共识指出，自身免疫相关癫痫诊断的关键是患者血清和脑脊液中检出针对神经元的自身免疫性抗体。这依赖于针对多种相关抗体的实验室免疫方法检测(cba、膜条法等)。基于临床表现的aces和ape2评分对于判断患者是否有神经自免抗体参与也有一定的辅助价值。在某些案例中抗体可能只出现在脑脊液或血清中。例如，抗lgi1抗体在血清中更常见，而抗nmdar抗体则有约15％的患者只能在脑脊液中检测到。

4、自身抗体阴性的自身免疫相关癫痫是困扰临床的重要问题，这是由于已知抗体谱有限和未知抗体的存在。含未知抗体的自身免疫性脑病患者可能是已知抗体确诊患者的2倍。如果对已知神经元自身抗体的筛查为阴性，但仍高度怀疑自身免疫相关癫痫，则需要将样本送实验室研究，寻找潜在的未知神经元自身抗体。最初的血清和脑脊液应该保存起来用于未来的检测，因为后续的样本可能被免疫治疗影响或破坏。一线免疫治疗包括静脉注射类固醇、免疫球蛋白和血浆置换。在疗效不佳的情况下，可使用二线免疫治疗药物环磷酰胺和利妥昔单抗等。抗体检测阴性的癫痫患者通常得不到立即和持续的免疫治疗，进而可能导致更严重的癫痫持续状态，甚至死于无法控制的癫痫发作。因此，除了排除感染后及早进行试验性免疫治疗，需要有更多的研究来发现相关标志物，帮助诊断、指导治疗和长期病情监测。

5、塌陷反应调节蛋白3(collapsin response mediator protein 3，crmp3)系crmps蛋白家族5个成员之一。crmp3在中枢神经系统中高表达，在神经发育、突触功能和神经递质调控中具有重要作用。有报道，抗crmp3自身抗体可能与脑炎相关。然而，目前尚无抗crmp3自身抗体与癫痫相关的报道。发明人通过研究，在癫痫患者中发现了抗crmp3抗体，提示它可能是自身免疫相关的癫痫的标志物。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种新的抗体标志物并建立其检测体系，用于神经系统自身免疫相关癫痫的诊断和治疗。

2、本发明所采取的技术方案是：

3、本发明的第一方面，提供crmp3作为癫痫标志物的应用。

4、本发明的第二方面，提供抗crmp3抗体作为癫痫标志物的应用。

5、本发明的第三方面，提供检测抗crmp3抗体的试剂在制备癫痫的检测、诊断、治疗和/或预后评估试剂中的应用。

6、在本发明的一些实施方式中，所述检测抗crmp3抗体的方法选自cba、免疫荧光(亦称tba法)、免疫印迹、膜条法、elisa、化学发光、放射免疫法、液相芯片法、侧向层析、电化学、流式细胞中的至少一种。

7、在本发明的一些实施方式中，所述试剂包括抗原。

8、在本发明的一些实施方式中，所述试剂还包括：二抗、缓冲液、封闭液等。

9、在本发明的一些实施方式中，所述产品包括试剂、试剂盒、试纸、芯片中的至少一种。

10、在本发明的一些实施方式中，所述检测的样本为脑脊液、血液或血清。

11、在本发明中，检测用到的crmps蛋白或编码序列来源包括但不限于人源的、鼠源的和其它物种的；可以是不同的亚型或转录本；可以是序列的全长，也可以是部分；crmp3蛋白获得可以是体内组织细胞分离纯化的，也可以是合成或重组表达的。

12、本发明的第四方面，提供一种用于癫痫的诊断、治疗或预后评估的系统，包括：

13、检测模块，用于检测样本中抗crmp3抗体的水平；

14、分析模块：用于获取上述检测结果，根据预定规则判断诊断结果。

15、在本发明的一些实施方式中，所述预定规则为：当检测到抗crmp3抗体的水平高于正常样本，则判断为癫痫高风险。

16、本发明的第五方面，提供抑制抗crmp3抗体表达或翻译的试剂在制备癫痫药物中的应用。

17、在本发明的一些实施方式中，所述抑制抗crmp3抗体表达或翻译的制剂包括抗crmp3抗体基因启动子抑制剂、抗crmp3抗体基因转录抑制剂、抗crmp3抗体蛋白合成抑制剂、抗crmp3抗体基因的sirna。

18、本发明的第六方面，提供使抗crmp3抗体活性降低或失活的制剂在制备癫痫药物中的应用。

19、在本发明的一些实施方式中，使抗crmp3抗体活性降低或失活的试剂包括：抑制抗crmp3抗体活性的物质、或降解抗crmp3抗体活性的物质、或降低抗crmp3抗体蛋白水平的基因工具。

20、在本发明的一些实施方式中，所述癫痫为自身免疫相关癫痫。

21、本发明的有益效果是：

22、本发明通过cba法和tba法发现一种与自身免疫相关的癫痫相关的分子标志物-抗crmp3抗体，通过检测抗crmp3抗体的水平可用于该疾病的诊断，也可以为免疫治疗方案提供依据，并可通过检测该自身抗体的滴度变化监测治疗效果及判断预后及复发。