一种氨甲环酸注射液有关物质的HPLC测试方法及其应用与流程

本发明属于柱色谱法测试，具体涉及一种氨甲环酸注射液有关物质的hplc测试方法及其应用以及专用于氨甲环酸注射液有关物质的hplc测试方法的流动相。

背景技术：

1、氨甲环酸(tranexamic acid)是一种人工合成的赖氨酸类似物，与纤溶酶原或纤溶酶的赖氨酸结合区有高度亲和力，故能竞争性抑制纤维蛋白的赖氨酸与纤溶酶结合，从而抑制纤维蛋白凝块的裂解，产生止血作用。

2、目前氨甲环酸国内销售剂型有注射剂、片剂、胶囊剂，其中注射剂为常用剂型，且为国家基本药物目录品种。

3、氨甲环酸为氨基酸类似物，结构较简单，具有一个羧基和一个氨基，极性较强，紫外吸收弱，氨甲环酸主流合成方法为以对甲氨基苯甲酸为原料，在催化剂的作用下通过一步催化加氢得到4-氨甲基环己基-1-甲酸，再通过立体转型即得到目标产物氨甲环酸，其主要已知杂质包括氨甲苯酸，z-异构体，环烯烃，酰胺聚合物，均为小分子两性极性物质。目前《中国药典》2020年版，usp2022，ep10.0及jp18中均采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱对氨甲环酸注射液的有关物质进行检测，以0.23％十二烷基硫酸钠溶液(含三乙胺、磷酸及约130mmol·l-1磷酸二氢钠)-甲醇系统为流动相进行检查，存在色谱系统平衡时间长，基线波动大，灵敏度较低，高浓度盐及离子对试剂损耗仪器及色谱柱的问题。

4、cn108732288a也公开了一种氨甲环酸或其有关物质含量的检测方法，该方法包含下列步骤：采用高效液相色谱联用紫外分光法分析氨甲环酸；其中，所述的高效液相色谱联用紫外分光法中的色谱柱为cr柱；流动相为磷酸、水和极性有机溶剂的混合溶液；所述的流动相中，所述的极性有机溶剂和水的体积比为20％：80％～80％：20％，该方法具有成本低，操作简便的优点，但该方法仅能分离两种已知杂质。

技术实现思路

1、基于上述问题，本发明提供一种氨甲环酸注射液中有关物质的hplc测试方法，该方法可实现氨甲环酸与四个已知杂质的基线分离，并能同时检测其他未知杂质。

2、一种氨甲环酸注射液有关物质的hplc测试方法，该测试方法色谱条件：

3、色谱柱，色谱柱为反相/阳离子混合模式色谱柱；

4、流速：0.5-1.5ml/min；

5、检测波长：208-226nm；

6、柱温：20-35℃；

7、进样量：5-20μl；

8、流动相：磷酸二氢钠溶液、水和乙腈，其中，磷酸二氢钠溶液：水：乙腈体积比为45:5:50～55:5:40；

9、所述氨甲环酸注射液中有关物质是指在氨甲环酸原料合成工艺及氨甲环酸注射液制剂工艺中引入或降解产生的杂质。

10、本发明采用高效液相色谱法，利用反相/阳离子混合模式色谱柱实施分离，利用紫外检测器进行定量分析，水为溶剂进行等度洗脱。反相/阳离子混合模式色谱柱上同时键合有疏水烷基链及端机羧基，具有弱的离子交换作用及反相双重分离机制，常用乙酸铵-乙腈体系或磷酸盐-乙腈体系，由于氨甲环酸及其杂质均为末端吸收，乙酸铵在低波段也有吸收，会产生干扰，故选择磷酸盐-乙腈体系进行试验。

11、以一定比例的磷酸二氢钠缓冲液、水和乙腈混合溶液作为流动相进行等度洗脱，定量检测氨甲苯酸，z-异构体，环烯烃，酰胺聚合物四个已知杂质及其他未知杂质的含量，从而有效控制氨甲环酸注射液的质量，具有简单、灵敏、稳定、不损害仪器及色谱柱等优点。

12、本发明方法检测杂质包括氨甲苯酸，z-异构体，环烯烃，酰胺聚合物四种已知杂质及其他未知杂质，实现高灵敏度的检测。

13、在本技术的一个或多个具体的实施方式中，氨甲环酸在0.6768～54.1424μg/ml范围内，标准曲线方程为y＝0.0148x+0.0082，r＝0.9997；氨甲苯酸在0.007042～11.2666μg/ml范围内，标准曲线方程为y＝0.9425x+0.0076，r＝1.0000；环烯烃在0.02238～8.9526μg/ml范围内，标准曲线方程为y＝0.9559x-0.0018，r＝1.0000；z-异构体在1.0007～20.0131μg/ml范围内，标准曲线方程为y＝0.0120x+0.0083，r＝0.9990；酰胺聚合物在0.2412～9.6480μg/ml范围内，标准曲线方程为y＝0.1063x+0.0028，r＝0.9999。

14、在本技术的一个或多个具体的实施方式中，所述氨甲环酸注射液有关物质的hplc测试方法还包括供试品溶液的溶剂为水。

15、在本技术的一个或多个具体的实施方式中，所述磷酸二氢钠溶液的制取包括以下步骤：

16、取10mmol/l磷酸二氢钠溶液；

17、用0.1mol/l氢氧化钠溶液调ph值至5.2±0.05。

18、在本技术的一个或多个具体的实施方式中，所述氨甲环酸注射液有关物质的hplc测试方法还包括计算方法：供试品溶液中各已知杂质按外标法计算含量，其他单个杂质按主成分外标法计算含量。

19、在本技术的一个或多个具体的实施方式中，所述色谱柱为thermo mixed-modewcx，150mm×4.6mm，5μm。

20、在本技术的一个或多个具体的实施方式中，所述柱温为25℃或30℃。

21、在本技术的一个或多个具体的实施方式中，所述流速为0.9ml/min、1ml/min、1.1ml/min中的一种。

22、在本技术的一个或多个具体的实施方式中，所述检测波长为210nm。

23、本发明在柱温为25℃、流速1ml/min、检测波长210nm下，所有已知杂质及氨甲环酸间均能完全分离，氨甲环酸与相邻环烯烃的分离度大于2.0，回收率均在95％～105％之间，回收率的rsd值均小于5％，方法分离度好、准确度高。

24、本发明还提供一种测试方法的应用。

25、一种测试方法的应用，该应用将上述的氨甲环酸注射液有关物质的hplc测试方法应用于检测中。

26、在本技术的一个或多个具体的实施方式中，所述检测为氨甲环酸原料、氨甲环酸注射液、注射用氨甲环酸的有关物质测定。

27、本发明还提供一种专用于氨甲环酸注射液有关物质的hplc测试方法的流动相。

28、一种专用于氨甲环酸注射液有关物质的hplc测试方法的流动相，所述流动相由磷酸二氢钠溶液、水和乙腈组成，其中，磷酸二氢钠溶液：水：乙腈体积比为45:5:50～55:5:40。

29、在本技术的一个或多个具体的实施方式中，所述磷酸二氢钠溶液：水：乙腈体积比为50：5：45。

30、在本技术的一个或多个具体的实施方式中，所述磷酸二氢钠溶液的制取包括以下步骤：

31、取10mmol/l磷酸二氢钠溶液；

32、用0.1mol/l氢氧化钠溶液调ph值至5.2±0.05。

33、本发明采用高效液相色谱法对有关物质进行测定，以反相/阳离子交换混合模式色谱柱进行分离，流动相是由磷酸二氢钠(以氢氧化钠溶液调ph值)、水和乙腈混匀得到的溶液，以水作为溶剂，对杂质进行等度洗脱。

34、将本发明方法应用于氨甲环酸注射液有关物质测定，可实现氨甲环酸与四个已知杂质的良好分离，并能同时检测其他未知杂质，可避免离子对试剂及高浓度盐的使用，同时具有色谱系统稳定，灵敏度高，专属性强等优点。

35、本发明方法色谱系统稳定，专属性好，灵敏度高，线性好，精密度高，准确度好，耐用性试验结果表明柱温、流速的微小变化不影响杂质检测。

36、名词术语解释

37、氨甲环酸注射液中有关物质：氨甲环酸注射液中有关物质是指在氨甲环酸原料合成工艺及氨甲环酸注射液制剂工艺中引入或降解产生的杂质。