一种从凝胶和啫喱中快速提取检测胶原蛋白的方法及其应用与流程

本发明涉及胶原蛋白，具体涉及一种从凝胶和啫喱中快速提取检测胶原蛋白的方法及其应用。

背景技术：

1、公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

2、伴随着基因工程、蛋白质工程等分子生物学研究的发展，利用基因工程技术生产类人胶原蛋白是近几年来研究的热点，其中重组人源化胶原蛋白不仅具有安全、稳定重现性好等优点，还解决了传统提取方法存在的如疯牛病病毒隐患等缺点，同时也改善胶原蛋白的亲水性、免疫排异性等性能，是一种理想型胶原蛋白材料。

3、胶原蛋白及其水解产物在分子结构方面与皮肤角质层有着相似之处，因此，它能够顺利与皮肤实现相容。胶原蛋白的渗透性和亲和性较强，能够渗透到人体皮肤深层，为皮肤提供营养。同时，胶原蛋白还能够使皮肤表面形成一层薄膜，使得皮肤的密度得到提升，有效改善皮肤松弛、老化等情况。因此，胶原蛋白在各类护肤品中得到了广泛应用。然而，市场中胶原蛋白类产品质量参差不齐，因此胶原蛋白类产品的质量检测显得尤为重要，而如何提取胶原蛋白是胶原蛋白类产品检测的关键。

4、胶原蛋白化妆品中往往成分较为复杂，这些复杂的成分会影响到胶原蛋白的提取和检测。如何低成本、简单、有效的提取和检测胶原蛋白化妆品中的胶原蛋白是化妆品检测行业的一个难点。

技术实现思路

1、为了克服上述问题，本发明提供了一种从凝胶和啫喱中快速提取检测胶原蛋白的方法及其应用.

2、为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明的第一个方面，提供了一种从凝胶或啫喱中快速提取检测胶原蛋白的方法，所述方法包括：

4、将凝胶或啫喱与乙醇和丙酮进行混合，混合均匀后放入冰箱冷冻沉淀一段时间；

5、取出样品，进行离心，去掉离心后的上层清液，离心后的下层样品进行干燥处理；

6、向干燥后的下层样品中加入蛋白提取液进行涡旋溶解，将溶解后的液体移入大孔径的超滤管中进行第一次超滤，收集下层滤过液；

7、将第一次超滤后的下层滤过液于小孔径的超滤管中进行第二次超滤，待超滤管上层液体体积浓缩至一定量后，直接吸取超滤管上层液体用于sds凝胶电泳检测。

8、本发明的第二个方面，提供上述快速提取检测胶原蛋白的方法应用于胶原蛋白类化妆品中胶原蛋白的提取和检测。

9、本发明实施例中提供的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：

10、本发明提供了一种经济、有效且快速的方式提取凝胶和啫喱中的胶原蛋白的方法，采用乙醇和丙酮共沉淀、蛋白溶解、超滤再超滤浓缩的方式进行前处理，能够满足琼脂糖凝胶电泳和高效液相色谱法检测化妆品中胶原蛋白的目的。该方法不仅操作简单、花费较少且省时省力，是一种用于快速检测凝胶和啫喱中胶原蛋白的理想前处理方案。

技术特征：

1.一种从凝胶或啫喱中快速提取检测胶原蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述凝胶或啫喱与乙醇、丙酮的体积比为：1～2:4～10：4～10，优选为1.5:5:5；

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述冰箱冷冻的温度为：-30～-10℃,优选为-20℃；

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品离心时的温度为2～6℃，优选为4℃；

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述下层样品进行干燥的条件为：在通风橱内将样品自然晾干，干燥的时间为15～45min，优选为30min。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白提取液的体积与凝胶或啫喱的质量比为5ml:1～2g，优选为5ml:1.5g；

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大孔径的超滤管的孔径为100kda；

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述小孔径的超滤管的孔径为30kda或50kda；

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二次超滤时，超滤管上层液体体积浓缩至小于等于100μl；

10.权利要求1～9任一项所述的方法用于胶原蛋白类化妆品中胶原蛋白的提取和检测。

技术总结
本发明公开了一种从凝胶或啫喱中快速提取检测胶原蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括：将凝胶或啫喱与乙醇和丙酮进行混合，混合均匀后放入冰箱冷冻沉淀一段时间；取出样品，进行离心，去掉离心后的上层清液，离心后的下层样品进行干燥处理；向干燥后的下层样品中加入蛋白提取液进行涡旋溶解，将溶解后的液体移入大孔径的超滤管中进行第一次超滤，收集下层滤过液；将第一次超滤后的下层滤过液于小孔径的超滤管中进行第二次超滤，待超滤管上层液体体积浓缩至一定量后，直接吸取超滤管上层液体用于SDS凝胶电泳检测。采用共沉淀、蛋白溶解、超滤再超滤浓缩的方式，能够满足琼脂糖凝胶电泳和高效液相色谱法检测化妆品中胶原蛋白的目的。

技术研发人员：马红伟,邵佳佳,艾锦豪,张同
受保护的技术使用者：山东多美康生物医药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13