一种快速测定衢枳壳中33种农药和代谢物残留的方法与流程

本发明涉及农产品中农药和代谢物残留检测，尤其涉及一种快速测定衢枳壳中33种农药和代谢物残留的方法。

背景技术：

1、中药材是我国特色资源，随着人民群众对健康和品质生活需求日益增长。中药材中农药残留和重金属等外源性污染物残留已给其使用带来安全隐患，成为制约中医药发展的瓶颈。随着世界各国对中药材外源性污染物关注的升级，建立简单、准确的分析方法进行中药材中农药残留的检测和质量控制，已成为中药质量和安全性研究的重要问题之一。

2、作为新“浙八味”之一的衢枳壳是芸香科植物常山胡柚(citruschangshan-huyou)的干燥未成熟果实，主产于浙江，2015版《浙江省中药炮制规范》修订后，将“常山胡柚片”收录其中，并正式命名为“衢枳壳”。衢枳壳味苦、辛、酸，性微寒，归脾、胃经，有理气宽中、行滞消胀功效，可用于胸胁气滞、胀满疼痛、食积不化、痰饮内停、胃下垂、脱肛、子宫脱垂等症。

3、中国发明专利申请(公开号：cn113945656a，公开日：2022-01-18)公开了一种检测中药材中农药残留的方法，该方法包括以下步骤：s1、将中药材基质、水和乙酸乙腈水溶液混合并进行第一提取，得到第一提取物；s2、将所述第一提取物与无水硫酸镁和氯化钠混合并进行第二提取，得到第二提取物；s3、将所述第二提取物进行第一离心后取上清液作为基质提取液，并将所述基质提取液与净化剂混合并进行净化处理，然后将净化处理后的物料进行第二离心后的上清液作为待测液；所述净化剂包括无水硫酸镁、乙二胺-n-丙基硅烷化硅胶和十八烷基硅烷键合硅胶；s4、利用气相色谱-串联质谱和/或超高效液相色谱-串联质谱对所述待测液进行测定。该方法可以实现中药材中75种农药的同时检测，并且具有较高的准确度和重复性。

技术实现思路

1、为了解决上述的技术问题，本发明的目的是提供一种快速测定衢枳壳中33种农药和代谢物残留的方法，该方法样品前处理简单、快速，结果准确，适用于衢枳壳中多种禁用农药残留的快速筛查和确证。

2、为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案：

3、一种快速测定衢枳壳中33种农药和代谢物残留的方法，33种农药和代谢物残留分别为灭线磷、治螟磷、甲拌磷、alpha-六六六、特丁硫磷、gamma-六六六、艾氏剂、beta-六六六、甲基对硫磷、delta-六六六、p,p-三氯杀螨醇、对硫磷、甲基异柳磷、水胺硫磷、alpha-硫丹、4,4'-滴滴伊、狄氏剂、o,p'-ddt、除草醚、4,4'-滴滴滴、氟虫腈、4,4'-滴滴涕、蝇毒磷、内吸磷-o、杀虫脒、内吸磷-s、苯线磷、硫丹硫酸盐、氟甲腈、甲基硫环磷、o,p-三氯杀螨醇、氟虫腈砜和氟虫腈亚砜；该方法包括以下的步骤：

4、一、样品前处理

5、称取1-5g样品置于离心管中，加入0.5-2.0％体积百分比冰醋酸溶液10-20ml，涡旋使药粉充分浸润，放置20-40min；加入乙腈8-10ml，涡旋混匀，置振荡器上剧烈振荡3-8min；加入无水硫酸镁5.0-8.0g与无水乙酸钠1.0-2.0g，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡2-5min，水浴冷却至常温，每分钟3000-5000转离心3-8min；

6、二、净化

7、取上清液5-8ml，置预先装有净化材料2000-2500mg的分散固相萃取净化管中，涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡3-8min使净化完全，每分钟3000-5000转离心3-8min，精密吸取上清液2ml，置氮吹仪上于30-50℃水浴浓缩至近干；加入120μl5mg/l的内标溶液，再用乙腈稀释至1.0ml，涡旋混匀，每分钟3000-5000转离心3-8min，滤过，取续滤液，获得试样溶液；所述的净化材料采用无水硫酸镁、n-丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶和石墨化碳黑，重量比为10-15:3-5：3-5：1-3；

8、三、气相色谱-串联质谱仪测定

9、将基质混合标准工作溶液和试样溶液依次注入气相色谱-质谱联用仪中，保留时间和定性离子定性，测得定量离子峰面积；内标法或外标法定量测定。

10、作为优选，气相色谱条件如下：

11、色谱柱：(5％苯基)甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱；柱温箱升温程序：初始温度90℃，保持1min，以30℃每分钟的速率升至130℃，再以10℃每分钟的速率升至300℃，保持10min；载气：高纯氦气；恒线速度模式，线速度55.0cm/sec；进样口温度：250℃；进样方式：高压不分流进样，进样量1μl。

12、作为优选，质谱条件如下：

13、离子源：电子轰击源；离子源温度：230℃；接口温度：290℃；溶剂延迟时间：2.41min；采用多反应监测模式，每个农药选取2个特征mrm反应，其中一个作为定量离子对，一个作为定性离子对；具体如下：

14、 序号 名称 保留时间/min 定量离子对 ce/v 定性离子对 ce/v 1 灭线磷 7.306 200.0>158.0 6 158.0>97.0 18 2 治螟磷 7.688 322.0>202.0 10 322.0>174.0 18 3 甲拌磷 7.894 260.0>75.0 8 231.0>129.0 24 4 alpha-六六六 7.997 180.9>144.9 16 218.9>182.9 8 5 特丁硫磷 8.743 231.0>128.9 26 231.0>174.9 14 6 gamma-六六六 8.651 180.9>144.9 16 218.9>182.9 8 7 艾氏剂 10.747 262.9>191.0 34 262.9>193.0 28 8 beta-六六六 8.508 180.9>144.9 16 218.9>182.9 8 9 甲基对硫磷 9.925 263.0>109.0 14 125.0>47.0 12 10 delta-六六六 9.217 180.9>144.9 16 218.9>182.9 8 11 p,p-三氯杀螨醇 11.005 139.0>111.0 16 139.0>75.0 28 12 对硫磷 10.863 291.1>109.0 14 139.0>109.0 8 13 甲基异柳磷 11.219 199.0>121.0 14 241.1>121.1 22 14 水胺硫磷 10.940 289.1>136.0 14 230.0>212.0 10 15 alpha-硫丹 12.210 194.9>160.0 8 194.9>125.0 24 16 4,4'-滴滴伊 12.621 246.0>176.0 30 317.9>248.0 24 17 狄氏剂 12.710 276.9>241.0 8 262.9>193.0 34 18 o,p'-ddt 13.445 235.0>165.0 24 237.0>165.0 28 19 除草醚 13.091 202.0>139.0 24 282.9>253.0 12 20 4,4'-滴滴滴 13.411 235.0>165.0 24 237.0>165.0 28 21 氟虫腈 11.443 366.9>212.9 30 368.9>214.9 30 22 4,4'-滴滴涕 14.106 235.0>165.0 24 237.0>165.0 28 23 蝇毒磷 16.877 362.0>109.0 16 362.0>226.0 14 24 内吸磷-o 7.017 88.0>60.0 6 89.0>61.0 9 25 杀虫脒 7.492 196.0>181.1 9 181.0>140.1 18 26 内吸磷-s 8.191 88.0>60.0 6 89.0>61.0 6 27 苯线磷 12.272 154.0>139.1 9 303.0>195.0 9 28 硫丹硫酸盐 13.974 272.0>236.9 12 274.0>238.8 15 29 氟甲腈 9.815 388.0>333.0 18 333.0>280.9 15 30 甲基硫环磷 10.574 168.0>109.0 12 92.0>63.9 18 31 o,p-三氯杀螨醇 10.332 139.0>111.0 15 139.0>75.1 27 32 氟虫腈砜 12.514 383.0>254.9 18 385.0>257.0 18 33 氟虫腈亚砜 11.191 199.0>121.1 12 351.0>254.9 18

15、。

16、作为优选，分散固相萃取净化管中的净化材料为无水硫酸镁1200mg，n-丙基乙二胺400mg，十八烷基硅烷键合硅胶400mg和石墨化碳黑200mg。

17、作为优选，该方法还包括以下的步骤：精确吸取一定量的混合标准溶液，逐级用乙腈释成质量浓度为0.01mg/l、0.02mg/l、0.05mg/l、0.1mg/l、0.2mg/l和0.5mg/l的标准工作溶液。

18、作为优选，该方法还包括以下的步骤：空白基质溶液氮气吹干，加入20μl内标溶液，分别加入1ml上述标准工作溶液复溶，过微孔滤膜配制成系列基质混合标准工作溶液，供气相色谱-质谱联用仪测定；以农药定量离子峰面积和内标物定量离子峰面积的比值为纵坐标，农药标准溶液质量浓度和内标物质量浓度的比值为横坐标，绘制标准曲线。

19、作为优选，33种测定物质均在0.01～0.5mg/l范围内线性关系良好，方法定量限loq为0.02～0.1mg/kg；在loq、2.5倍loq和5倍loq加标水平下，除内吸磷-o和内吸磷-s之外，其他农药和代谢物平均回收率均大于60％，相对标准偏差rsd小于17％。

20、本发明由于采用了上述的技术方案，样品经改良的quechers方法提取净化后，在多反应监测(mrm)模式下进行gc-ms/ms分析，内标法定量。在优化实验条件下，33种测定物质均在0.01～0.5mg/l范围内线性关系良好，方法定量限(loq)为0.02～0.1mg/kg；在loq、2.5倍loq和5倍loq加标水平下，除内吸磷-o和内吸磷-s之外，其他农药和代谢物平均回收率均大于60％，相对标准偏差(rsd)小于17％。该方法样品前处理简单、快速，结果准确，适用于衢枳壳中多种禁用农药残留的快速筛查和确证。