检测原始细胞的样本分析方法、分析仪、试剂及其用途与流程

本技术涉及体外诊断领域，特别涉及一种用于检测原始细胞的样本分析法、样本分析仪、试剂及其用途。

背景技术：

1、血细胞的发育是从未成熟的血细胞向成熟的血细胞分化，并最终移送释放到外周血液中。对于健康人而言，未成熟的白细胞不会出现在外周血液中。当患上白血病等血液病、骨髓癌转移、重症感染等疾病时，血液中才会出现未成熟白细胞。因此，测定人体外周血液中未成熟白细胞对于疾病诊断具有重要的意义。

2、针对原始淋巴细胞、原始粒细胞等未成熟血液细胞检测的方法主要依靠特异性抗体，而这种方法由于抗体的使用虽准确性较好，但检测成本也较高，在应用于白血病等外周血中含有原始细胞的样本筛选时存在耗时长，操作复杂，成本高等问题。目前，已开发了基于血液细胞分析仪的快速分析未成熟白细胞的检测方法，其中主要利用荧光染料对细胞内核酸物质进行差异化染色。然而，由于正常细胞与未成熟白细胞内核酸含量差异不大，检测核酸的方法存在准确度不足，假阳和假阴偏高的问题。

3、因此，需要进一步提高基于血液细胞分析仪对原始细胞进行检测的准确性。

技术实现思路

1、本公开的目的在于提供一种用于检测原始细胞的样本分析方法、样本分析仪、用于检测的试剂及其用途，其中利用所属试剂对血液样本中的原始细胞进行分析能够利用原始细胞与成熟白细胞的细胞膜结构差异，加大原始细胞与成熟白细胞的检测信号差异，从而显著提升检测的准确性。

2、为此，本公开第一方面提供一种样本分析方法。所述方法包括：获取受试者的待测样本；制备第一试样，所述第一试样含有所述待测样本的至少一部分和第一试剂，其中所述第一试剂包括含有至少一种失水山梨醇脂肪酸酯类非离子表面活性剂的溶血剂，和含有荧光染料的染色剂；使所述第一试样中的粒子逐个通过光学检测器的检测区并且利用所述光学检测器的光源对所述第一试样中的粒子进行照射，以获取所述粒子的光信号；基于所述光信号获得第一特征区域信息和血影区域信息，所述第一特征区域信息包括原始细胞信息和至少部分血影区域信息；和基于所述第一特征区域信息和所述血影区域信息获取所述原始细胞信息。

3、根据一些实施方式，所述光信号包括侧向散射光强度信号、前向散射光强度信号和来自所述含有荧光染料的染色剂的第一荧光强度信号；其中基于所述光信号获得第一特征区域信息和血影区域信息包括：根据所述侧向散射光强度信号和所述前向散射光强度信号获得所述第一特征区域信息，根据至少所述第一荧光强度信号获得所述血影区域信息。

4、根据一些实施方式，根据至少所述第一荧光强度信号获得所述血影区域信息包括：根据所述侧向散射光强度信号和所述前向散射光强度信号中的任一种和所述第一荧光强度信号获得所述血影区域信息。

5、根据一些实施方式，基于所述第一特征区域信息和所述血影区域信息获取所述原始细胞信息包括：从所述第一特征区域信息中扣除至少部分所述血影区域信息，从而获得所述原始细胞信息。

6、根据一些实施方式，所述至少一种失水山梨醇脂肪酸酯类非离子表面活性剂的浓度为0.4～200mg/l，优选为20～50mg/l。

7、具体地，所述至少一种失水山梨醇脂肪酸酯类非离子表面活性剂选自吐温和司盘。更具体地，所述司盘选自司盘40～司盘80，所述吐温选自吐温20～吐温100。

8、根据一种实施方式，所述溶血剂进一步包括：0.1～10g/l，优选2～5g/l的助溶剂；0.1～10g/l的缓冲剂；和0.05～2g/l，优选0.1～1g/l的抗凝剂。

9、根据一些实施方式，所述第一试剂中所述荧光染料的浓度为1～500mg/l，优选10～50mg/l。

10、根据一种实施方式，所述溶血剂和所述染色剂分别是单独包装的试剂，仅在处理所述待测样本时或在处理所述待测样本之前混合成为所述第一试剂。根据另一种实施方式，所述溶血剂和所述染色剂是以混合形式包装的试剂。

11、本公开第二方面提供另一种样本分析方法。所述方法包括：获取受试者的待测样本；制备第二试样，所述第二试样含有所述待测样本的至少一部分和第二试剂，其中所述第二试剂包括溶血剂，含有荧光染料的染色剂和含有荧光标记的cd45的抗体处理剂；使所述第二试样中的粒子逐个通过光学检测器的检测区并且利用所述光学检测器的光源对所述第二试样中的粒子进行照射，以获取所述粒子的光信号，其中所述光信号包括侧向散射光强度信号、前向散射光强度信号、来自所述含有荧光染料的染色剂的第一荧光强度信号以及来自所述含有荧光标记的cd45的抗体处理剂的第二荧光强度信号；根据所述侧向散射光强度信号和所述第二荧光强度信号获得第一特征区域信息，根据至少所述第一荧光强度信号获得血影区域信息，所述第一特征区域信息包括原始细胞信息和至少部分血影区域信息；和基于所述第一特征区域信息和所述血影区域信息获取所述原始细胞信息。

12、根据一些实施方式，根据至少所述第一荧光强度信号获得血影区域信息包括：根据所述侧向散射光强度信号和所述前向散射光强度信号中的任一种与所述第一荧光强度信号获得血影区域信息。

13、根据进一步的实施方式，基于所述第一特征区域信息和所述血影区域信息获取所述原始细胞信息，包括：从所述第一特征区域信息中扣除至少部分所述血影区域信息，从而获得所述原始细胞信息。

14、根据一些实施方式，所述第二试剂中所述荧光标记的cd45的浓度为25～1000μg/ml，优选为50～250μg/ml。

15、根据一些实施方式，所述溶血剂包括选自阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂、烷基糖苷、三萜皂苷、甾族皂苷和二甘醇中的至少一种。

16、根据一种实施方式，所述阳离子表面活性剂选自季铵盐类阳离子表面活性剂；所述非离子表面活性剂选自聚氧乙烯类和失水山梨醇脂肪酸酯类非离子表面活性剂；优选地，所述失水山梨醇脂肪酸酯类非离子表面活性剂选自司盘和吐温中的至少一种。较优地，所述司盘选自司盘40～司盘80，所述吐温选自吐温20～吐温100。

17、根据一些实施方式，所述失水山梨醇脂肪酸酯类非离子表面活性剂的浓度为0.2～2g/l，优选为0.3～1.5g/l。

18、根据一种实施方式，所述溶血剂进一步包括：0.1～10g/l，优选2～5g/l的助溶剂；0.1～10g/l缓冲剂；和0.05～2g/l，优选0.2～1g/l的抗凝剂。

19、根据一些实施方式，所述第二试剂中所述荧光染料的浓度为1～500mg/l，优选10～50mg/l。

20、根据一种实施方式，所述溶血剂、所述染色剂和抗体处理剂分别是单独包装的试剂，仅在处理所述待测样本时或在处理所述待测样本之前混合成为所述第二试剂。根据另一种实施方式，所述溶血剂、所述染色剂和所述抗体处理剂中的任意两者或三者是以混合形式包装的试剂。

21、本公开的一些实施方式，还提供一种样本分析方法，所述方法包括：获取受试者的待测样本；制备第二试样，所述第二试样含有所述待测样本的至少一部分和第二试剂，其中所述第二试剂包括溶血剂，含有荧光染料的染色剂和含有荧光标记抗体的抗体处理剂；使所述第二试样中的粒子逐个通过光学检测器的检测区并且利用所述光学检测器的光源对所述第二试样中的粒子进行照射，以获取所述粒子的光信号，其中所述光信号包括侧向散射光强度信号、前向散射光强度信号、来自所述含有荧光染料的染色剂的第一荧光强度信号以及来自所述含有荧光标记抗体的抗体处理剂的第二荧光强度信号；根据所述侧向散射光强度信号和所述第二荧光强度信号获得第一特征区域信息，根据至少所述第一荧光强度信号获得血影区域信息，所述第一特征区域信息包括原始细胞信息和至少部分血影区域信息；和基于所述第一特征区域信息和所述血影区域信息获取所述原始细胞信息。

22、上述各样本分析方法中，所述待测样本是外周血。

23、上述各样本分析方法中，所述原始细胞信息包括原始细胞的计数和/或报警。

24、本公开的第三方面提供又一种样本分析方法。所述方法包括：接收操作指令，对样本进行原始细胞检测，其中，所述对样本进行原始细胞检测，包括上述样本分析方法中的步骤。

25、本公开的第四方面提供一种样本分析仪。所述样本分析仪包括吸样装置、样本制备装置、光源、流动室、光学检测器、处理器和编程有计算机应用程序的非暂时性计算机可读存储介质，其中，所述吸样装置配置为吸取待测样本的至少一部分并输送至所述样本制备装置；所述样本制备装置包括试剂供应部和反应池，其中所述试剂供应部配置为提供第一试剂到所述反应池，所述反应池配置为使所述第一试剂与所述待测样本的至少一部分在其中混合得到第一试样，并将所述第一试样输送到所述流动室，其中所述第一试剂包括含有至少一种失水山梨醇脂肪酸酯类非离子表面活性剂的溶血剂和含有荧光染料的染色剂；所述光源配置为将光束对准与所述反应池相连通的所述流动室的检测孔；所述流动室配置为使所述试样中的粒子逐个通过所述流动室；所述光学检测器被装配于所述流动室周围用于检测通过所述流动室的检测孔的各粒子的光信号；所述处理器与所述光学检测器可操作地连接，当所述非暂时性计算机可读存储介质中的计算机应用程序被所述处理器执行时，使所述处理器执行以下步骤：基于所述光信号获得第一特征区域信息和血影区域信息，所述第一特征区域信息包括原始细胞信息和至少部分所述血影区域信息；和基于所述第一特征区域信息和所述血影区域信息获取所述原始细胞信息。

26、根据一些实施方式，所述光信号包括侧向散射光强度信号、前向散射光强度信号和来自所述含有荧光染料的染色剂的第一荧光强度信号；其中基于所述光信号获得第一特征区域信息和血影区域信息包括：根据所述侧向散射光强度信号和所述前向散射光强度信号获得所述第一特征区域信息，根据至少所述第一荧光强度信号获得所述血影区域信息。

27、根据一些实施方式，根据至少所述第一荧光强度信号获得所述血影区域信息包括：根据所述侧向散射光强度信号和所述前向散射光强度信号中的任一种和所述第一荧光强度信号获得所述血影区域信息。

28、根据一些实施方式，所述试剂供应部包括多个试剂贮存容器，所述溶血剂和所述染色剂分别贮存在不同的贮存容器中；或者所述溶血剂和所述染色剂以混合形式贮存在一个贮存容器中。

29、根据一些实施方式，所述原始细胞信息包括原始细胞的计数和/或报警。

30、根据一些实施方式，所述样本分析仪进一步包括用户交互界面，所述用户交互界面配置为用于显示检测结果和/或向所述样本分析仪输入指令。

31、本公开的第五方面提供另一种样本分析仪。所述样本分析仪包括吸样装置、样本制备装置、光源、流动室、光学检测器、处理器和编程有计算机应用程序的非暂时性计算机可读存储介质，其中，所述吸样装置配置为吸取待测样本的至少一部分并输送至所述样本制备装置；所述样本制备装置包括试剂供应部和反应池，其中所述试剂供应部配置为提供第二试剂到所述反应池，所述反应池配置为使所述第二试剂与所述待测样本的至少一部分在其中混合得到第二试样，并将所述第二试样输送到所述流动室，其中所述第二试剂包括溶血剂，含有荧光染料的染色剂和含有荧光标记的cd45的抗体处理剂；所述光源配置为将光束对准与所述反应池相连通的所述流动室的检测孔；所述流动室配置为使所述试样中的粒子逐个通过所述流动室；所述光学检测器被装配于所述流动室周围用于检测通过所述流动室的检测孔的各粒子的光信号，其中所述光信号包括侧向散射光强度信号、前向散射光强度信号、来自所述含有荧光染料的染色剂的第一荧光强度信号以及来自所述含有荧光标记的cd45的抗体处理剂的第二荧光强度信号；所述处理器与所述光学检测器可操作地连接，当所述非暂时性计算机可读存储介质中的计算机应用程序被所述处理器执行时，使所述处理器执行以下步骤：根据所述侧向散射光强度信号和所述第二荧光强度信号获得第一特征区域信息，根据至少所述第一荧光强度信号获得血影区域信息，所述第一特征区域信息包括原始细胞信息和至少部分血影区域信息；和基于所述第一特征区域信息和所述血影区域信息获取所述原始细胞信息。

32、根据一些实施方式，根据所述至少第一荧光强度信号获得血影区域信息包括：根据所述侧向散射光强度信号和所述前向散射光强度信号中的任一种与所述第一荧光强度信号获得血影区域信息。

33、根据进一步的实施方式，基于所述第一特征区域信息和所述血影区域信息获取所述原始细胞信息，包括：从所述第一特征区域信息中扣除至少部分所述血影区域信息，从而获得所述原始细胞信息。

34、根据一些实施方式，所述试剂供应部包括多个试剂贮存容器，所述溶血剂、所述染色剂和所述抗体处理剂分别贮存在不同的贮存容器中；或者所述溶血剂、所述染色剂和所述抗体处理剂中任意两种或三者以混合形式贮存在一个贮存容器中。

35、根据一些实施方式，其中所述原始细胞信息包括原始细胞的计数和/或报警。

36、根据一些实施方式，所述样本分析仪进一步包括用户交互界面，所述用户交互界面配置为用于显示检测结果和/或向所述样本分析仪输入指令。

37、本公开的一些实施方式进一步提供一种样本分析仪，包括吸样装置、样本制备装置、光源、流动室、光学检测器、处理器和编程有计算机应用程序的非暂时性计算机可读存储介质，其中，所述吸样装置配置为吸取待测样本的至少一部分并输送至所述样本制备装置；所述样本制备装置包括试剂供应部和反应池，其中所述试剂供应部配置为提供第二试剂到所述反应池，所述反应池配置为使所述第二试剂与所述待测样本的至少一部分在其中混合得到第二试样，并将所述第二试样输送到所述流动室，其中所述第二试剂包括溶血剂，含有荧光染料的染色剂和含有荧光标记抗体的抗体处理剂；所述光源配置为将光束对准与所述反应池相连通的所述流动室的检测孔；所述流动室配置为使所述试样中的粒子逐个通过所述流动室；所述光学检测器被装配于所述流动室周围用于检测通过所述流动室的检测孔的各粒子的光信号，其中所述光信号包括侧向散射光强度信号、前向散射光强度信号、来自所述含有荧光染料的染色剂的第一荧光强度信号以及来自所述含有荧光标记抗体的抗体处理剂的第二荧光强度信号；所述处理器与所述光学检测器可操作地连接，当所述非暂时性计算机可读存储介质中的计算机应用程序被所述处理器执行时，使所述处理器执行以下步骤：根据所述侧向散射光强度信号和所述第二荧光强度信号获得第一特征区域信息，根据至少所述第一荧光强度信号获得血影区域信息，所述第一特征区域信息包括原始细胞信息和至少部分血影区域信息；和基于所述第一特征区域信息和所述血影区域信息获取所述原始细胞信息。

38、本公开的第六方面提供一种用于检测原始细胞的试剂。所述试剂包括至少一种失水山梨醇脂肪酸酯类非离子表面活性剂的溶血剂，和含有荧光染料的染色剂。

39、根据一些实施方式，在所述试剂中所述表面活性剂的浓度为0.2～2g/l，优选为0.3～1.5g/l。

40、根据一些实施方式，所述至少一种失水山梨醇脂肪酸酯类非离子表面活性剂选自吐温和司盘；优选地，所述司盘选择司盘40～司盘80，所述吐温选自吐温20～吐温100。

41、根据一种实施方式，所述溶血剂进一步包括：0.1～10g/l，优选2～5g/l的助溶剂；0.1～10g/l的缓冲剂；和0.05～2g/l，优选0.2～1g/l的抗凝剂。

42、根据一些实施方式，所述荧光染料为选自以下通式i和通式ii所示的化合物：

43、

44、其中r1和r2各自独立选自c2-c8烷基；

45、

46、其中r独立选自c2-c8烷基或h。

47、示例性的，所述荧光染料选自染料a～c：

48、

49、根据一些实施方式，所述试剂中所述荧光染料的浓度为1～500mg/l，优选10～50mg/l。

50、根据一些实施方式，所述试剂进一步包括含有荧光标记的cd45的抗体处理剂。

51、根据一些实施方式，所述试剂中所述荧光标记的cd45的浓度为25～1000μg/ml，优选为50～250μg/ml。

52、根据一种实施方式，所述溶血剂、所述染色剂和抗体处理剂分别是单独包装的试剂。根据另一种实施方式，所述溶血剂、所述染色剂和所述抗体处理剂中的任意两者或三者是以混合形式包装的试剂。

53、本公开的第七方面提供上述试剂在利用样本分析仪检测样本中原始细胞的用途。

54、本公开一些实施方式的样本分析方法中使用包括含有失水山梨醇脂肪酸酯类非离子表面活性剂作为溶血剂以及含有荧光染料的染色剂的试剂对样本进行处理，其中所述表面活性剂一方面能够使红细胞裂解，另一方能够对原始细胞与白细胞的细胞膜进行差异化处理，使核酸染料更优先进入成熟白细胞对核酸进行染色，加大原始细胞和白细胞的光学特性，特别是散射光信号的差异，并结合核酸染料的荧光信号，能够实现原始细胞与白细胞的区分。

55、本公开另一些实施方式的样本分析方法中使用包括溶血剂、含有荧光标记的cd45的抗体处理剂以及含有荧光染料的染色剂的试剂对样本进行处理，其中在溶血的情况下，通过cd45与原始细胞表面抗原的特异性结合，获得来自荧光标记的cd45的荧光信号，通过结合散射光信号能够加大原始细胞和白细胞的光学特性的差异，从而准确地区分原始细胞与白细胞。

56、此外，本公开提供的样本分析方法对急性淋巴白血病来源的原始细胞的识别更加灵敏和准确。