一种饲料原料中植酸磷释放率的体外检测方法与流程

本发明涉及饲料酶制剂评估领域，具体涉及一种饲料原料中植酸磷释放率的体外检测方法。

背景技术：

1、磷是动物必需的矿物元素之一。植物中的磷主要以植酸磷的形式储存，植酸磷只有通过植酸酶降解为无机磷才能被动物吸收。

2、植酸酶是能催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸盐的一类酶的总称，学名为六磷酸肌醇水解酶。植酸酶具有特殊的空间结构，能够分离植酸分子中的磷，将植酸水解为肌醇和无机磷，同时释放出与植酸结合的其它营养物质。植酸酶广泛存在与动物、植物和微生物中。因此植物饲料原料中的植酸磷的利用需要植物性饲料原料和动物肠道内源植酸酶以及添加外源植酸酶被加以利用，如何评价植酸酶酶解饲料原料后有效磷含量至关重要。

3、目前饲料磷生物学效价的评定方法主要有体内法和体外法。体内法即动物试验费力、费时，系统误差和偶然误差因素多。体外法具有快速、简便、费用低等优点，现有诸多研究报道。体外法在模拟总结生长猪消化道主要消化酶变异规律的基础上，根据杜×长×大三元杂交生长猪在典型饲粮条件下的酶谱与水解环境，模拟动物消化道内环境，完成模拟生长猪饲料在单胃动物仿生消化系统消化过程，下机后的水解产物通过处理操作完成测定。而体外法中基于饲料仿生消化测定的方法更受青睐，然而体外法的关键点在于，消化液中有效磷含量即其游离的无机磷含量的测定，其难点在于如何对消化液进行处理，去除干扰因子，使得无机磷检测更加准确。现有技术中，一般的后处理方法参考团体标准《植酸酶磷释放率的分光光度法》t/cbfia 02002-2020，但是经大量试验发现该方法容易受饲料原料本身的特性干扰，导致结果的批内和批间重复性变异较大，然而如何选择有效的植酸酶产品对于饲料厂而言至关重要，因此急需对现有后处理方法进行改进以为畜牧行业提供一个更加快速、准确、有效的评估方法。

技术实现思路

1、为了解决以上问题，本发明提出一种植酸酶酶解饲料原料后中植酸磷释放率的体外检测方法。

2、本发明提出的饲料原料中植酸磷释放率的体外检测方法，按体外法将饲料原料样品消化后，将消化液离心获得上清液，取得的上清液经过抗干扰处理后，获得的待测液再按体外法进行磷含量的检测。

3、进一步，所述抗干扰处理为在上清液中加入体积比为四倍的浓度为10%的硝酸水溶液，室温震荡30min，然后离心获得待测液。

4、进一步，所述抗干扰处理为在上清液中加入体积比为十分之一的浓度为10%的sds溶液和体积比为四分之一的浓度为1mol/l的kcl溶液，混匀后离心并过0.22μm水系膜获得待测液。

5、进一步，所述抗干扰处理为在上清液中加入体积比为四倍的浓度为10%的硝酸水溶液，室温震荡30min，然后离心，取本次经硝酸水溶液处理并离心分离的上清液，加入体积比为十分之一的浓度为10%的sds溶液和体积比为四分之一的浓度为1mol/l的kcl溶液，混匀后再次离心并过0.22μm水系膜获得待测液。

6、进一步，所述体外法为团体标准《t/cbfia 02002-2020植酸酶磷释放率的测定 分光光度法》记载的方法。

7、进一步，所述消化液于8000转/分钟离心10分钟。

8、进一步，所述抗干扰处理中的离心参数为4000转/分钟离心10分钟。

9、本发明提供的饲料原料中植酸磷释放率的体外检测方法应用在饲料检测中。

10、本发明的有益效果如下：

11、1、本发明提出的饲料原料中植酸磷释放率的体外检测方法，是对现行团体标准《植酸酶磷释放率的分光光度法》t/cbfia 02002-2020所述方法存在缺陷的优化。

12、2、本发明发现，现行团体标准测定植酸酶对饲料原料中无机磷释放效果的结果存在批内和批间重复性变异较大的问题，而这个问题是由于检测中蛋白质干扰造成的，经过抗干扰处理能有效解决蛋白质对样品中无机磷含量测定的干扰影响，获得重复性和准确度高的结果，并在现有可行的消除蛋白质干扰的方法中确定了两种效果好的方法，其一为在上清液中加入体积比为四倍的浓度为10%的硝酸水溶液，室温震荡30min，然后离心获得待测液；其二为在上清液中加入体积比为十分之一的浓度为10%的sds溶液和体积比为四分之一的浓度为1mol/l的kcl溶液，混匀后离心并过0.22μm水系膜获得待测液；并通过实验验证将这两种方法叠加使用，即所述抗干扰处理为在上清液中加入体积比为四倍的浓度为10%的硝酸水溶液，室温震荡30min，然后离心，取本次经硝酸水溶液处理并离心分离的上清液，加入体积比为十分之一的浓度为10%的sds溶液和体积比为四分之一的浓度为1mol/l的kcl溶液，混匀后再次离心并过0.22μm水系膜获得待测液，获得的结果准确度更高，重复性更好。

13、3、本发明的方法操作简单，重复性和准确度高。为饲粮禁抗环境下饲料企业快速筛选可以大规模商用的植酸酶提供了有力的保障。

技术特征：

1.一种饲料原料中植酸磷释放率的体外检测方法，其特征在于，按体外法将饲料原料样品消化后，将消化液离心获得上清液，取得的上清液经过抗干扰处理后，获得的待测液再按体外法进行磷含量的检测。

2.根据权利要求1所述饲料原料中植酸磷释放率的体外检测方法，其特征在于，所述抗干扰处理为在上清液中加入体积比为四倍的浓度为10%的硝酸水溶液，室温震荡30min，然后离心获得待测液。

3.根据权利要求1所述饲料原料中植酸磷释放率的体外检测方法，其特征在于，所述抗干扰处理为在上清液中加入体积比为十分之一的浓度为10%的sds溶液和体积比为四分之一的浓度为1mol/l的kcl溶液，混匀后离心并过0.22μm水系膜获得待测液。

4.根据权利要求1所述饲料原料中植酸磷释放率的体外检测方法，其特征在于，所述抗干扰处理为在上清液中加入体积比为四倍的浓度为10%的硝酸水溶液，室温震荡30min，然后离心，取本次经硝酸水溶液处理并离心分离的上清液，加入体积比为十分之一的浓度为10%的sds溶液和体积比为四分之一的浓度为1mol/l的kcl溶液，混匀后再次离心并过0.22μm水系膜获得待测液。

5.根据权利要求1所述饲料原料中植酸磷释放率的体外检测方法，其特征在于，所述体外法为团体标准《t/cbfia 02002-2020植酸酶磷释放率的测定 分光光度法》记载的方法。

6.根据权利要求1所述饲料原料中植酸磷释放率的体外检测方法，其特征在于，所述消化液于8000转/分钟离心10分钟。

7.根据权利要求2、3或4任一所述饲料原料中植酸磷释放率的体外检测方法，其特征在于，所述抗干扰处理中的离心参数为4000转/分钟离心10分钟。

8.权利要求1至6任一所述饲料原料中植酸磷释放率的体外检测方法在饲料检测中的应用。

技术总结
本发明涉及一种饲料原料中植酸磷释放率的体外检测方法，按体外法将饲料原料样品消化后，将消化液离心获得上清液，取得的上清液经过抗干扰处理后，获得的待测液再按体外法进行磷含量的检测。本发明提出的饲料原料中植酸磷释放率的体外检测方法，是对现行团体标准《植酸酶磷释放率的分光光度法》T/CBFIA 02002‑2020所述方法存在缺陷的优化，操作简单，重复性和准确度高，为快速筛选可以大规模商用的植酸酶提供了有力的保障。

技术研发人员：暴宁,胡小龙,李爽,李阳,张广民,李勇,雷恒,蔡辉益
受保护的技术使用者：北京挑战生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13