一种赖氨酸注射用溶剂中L-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的检测方法与流程

本发明涉及一种高效液相色谱法测定赖氨酸注射用溶剂中l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的分析方法，属于药物分析领域。

背景技术：

1、对于赖氨酸的检测和质量控制，中国药典采用非水电位滴定法测定含量，薄层色谱法控制有关物质。滴定法相对于高效液相色谱法而言，其专属性较差，操作复杂不利于批量自动化检测。另外，赖氨酸注射液本身是水溶液，若使用非水滴定法，则需要先去除水分，该步骤操作过程复杂，重现性差，切工作量大。薄层色谱法可用于其他氨基酸的控制，但无法检出赖氨酸注射用溶剂中主要的降解产物α-氨基ε-己内酰胺。

2、中国药学杂志2006年7月第41卷第13期收载赵鹏等论文“rp-hplc测定腺苷蛋氨酸注射用溶剂中赖氨酸的含量及有关物质”，该论文采用的分析方法为diamonsiltm(钻石)c18-ods柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为甲醇-水-三乙胺(250:750:0.1)，流速为0.8ml/min，紫外检测波长为210nm，柱温为30℃。该方法下赖氨酸出峰时间较早，不利于杂质的分离和检出。且未能同时检出降解产物α-氨基ε-己内酰胺。同时，该方法含有较高浓度的甲醇，在210nm波长处接近于甲醇的截止波长，对色谱基线会造成一定的影响。

3、中国发明专利授权公布号cn112824890 b(2022.02.18)公开了一种生物质反应液中己内酰胺、赖氨酸和α-二甲氨基己内酰胺同时检测的分析方法。该方法采用了极性官能团封端的c18色谱柱(aq柱)对三种目标化合物进行分离。但该方法的局限性在于：aq柱的分离效果在高水相条件下易发生变化，导致保留时间不稳定，色谱柱使用寿命降低等。另外，aq柱的碳载量普遍偏低，对于结构接近的化合物分离效果不如反相c18色谱柱。

4、公开号为cn 105092741 a的中国专利申请公开了一种高效液相色谱法检测3-氨基-2-己内酰胺的方法，该方法采用如下色谱条件：色谱柱：ods柱；流动相a：磷酸二氢钾溶液；流动相b：甲醇、乙腈的混合水溶液；流速：0.4～1.2ml/min；检测波长：100～300nm；柱温：20～60℃；进样量：5～20μl。该方法3-氨基-2-己内酰胺回收率高，平均回收率达到99.42％，该方法未同时检测l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺，然而α-氨基ε-己内酰胺的定量检测也同样重要。

技术实现思路

1、本发明提供了一种在赖氨酸注射用溶剂中l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的检测方法，该检测方法可同时检测l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺，并且准确度和回收率较高。

2、一种赖氨酸注射用溶剂中l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的检测方法，包括以下步骤：

3、(1)配制盐酸赖氨酸和盐酸α-氨基ε-己内酰胺标准溶液(std)，利用高效液相色谱仪进行分析，分别记录l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的峰面积，采用外标法测定其响应系数；

4、(2)取待测赖氨酸注射用溶剂，利用上述相同的色谱条件，利用高效液相色谱仪进行分析，分别记录l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的峰面积，代入std中求得的响应系数，计算出赖氨酸注射用溶剂中l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的浓度；

5、步骤(1)和步骤(2)中，色谱分析时所用的流动相为缓冲液和乙腈的混合溶液；

6、所述缓冲液由磷酸二氢铵和离子对试剂配制，并用氨水调节ph得到。

7、作为优选，所述标准溶液(std)中l-赖氨酸的浓度范围为0.1～5mg/ml，优选0.8～1.2mg/ml，该范围内具有较高的线性。

8、作为优选，步骤(1)和步骤(2)中，所用的高效液相色谱条件是：所用的色谱柱为agilent zorbax-xdb c18、welch ultimate xb-c18、ymc-pack ods-am中的一种；柱温：20℃～45℃；洗脱方式为等度洗脱，流量为0.5～1.5ml/min；紫外检测器，检测波长为200nm～280nm。

9、作为优选，所述缓冲液和乙腈的体积比为75:25～95:5，进一步优选为85:15～90:10。

10、作为优选，所述缓冲液中，磷酸二氢铵的含量为10mmol/l～200mmol/l，进一步优选为20mmol/l～50mmol/l；

11、用氨水调节后的ph值为4.5～5.5。

12、作为优选，所述离子对试剂为辛烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、十二烷基硫酸钠或吐温80，本发明中，通过将上述离子对试剂加到流动相中，可以使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配，达到保留及分离的效果。在大极性化合物分析中采用离子对色谱法，可以增加极性化合物在色谱柱上的保留，实现用反相色谱法，采用高含水量的流动相对极性化合物的有效分离。

13、作为优选，所述的色谱柱柱温为25℃～45℃，优选为30℃～45℃。在其他条件相同的情况下，在此温度范围内，对样品的分离度、峰型等方面影响较小，样品组分及杂质能实现良好的基线分离。

14、作为优选，所述的洗脱液流量为0.5～1.5ml/min，优选0.8～1.2ml/min，更优选为1.0ml/min。在此流量下，其他条件相同的情况下，对样品的分离度、峰型等方面影响较小，样品组分及杂质能实现良好的基线分离。

15、步骤(2)中，进一步根据标示量计算出赖氨酸注射用溶剂中l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的百分含量。

16、同现有技术相比，本发明的有益效果体现在：

17、本发明的检测方法操作简便、快速、检测准确、精密度高、专属性好、重现性好，为赖氨酸注射用溶剂控制l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的含量提供了一个简便易行的分析方法。

技术特征：

1.一种赖氨酸注射用溶剂中l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的赖氨酸注射用溶剂中l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的检测方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中，所用的高效液相色谱条件如下：所用的色谱柱为agilent zorbax-xdb c18、welch ultimate xb-c18、ymc-pack ods-am中的一种；柱温为20℃～45℃；洗脱方式为等度洗脱，流量为0.5～1.5ml/min；检测器为紫外检测器，检测波长为200nm～280nm。

3.根据权利要求1所述的赖氨酸注射用溶剂中l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的检测方法，其特征在于，所述缓冲液和乙腈的体积比为75:25～95:5。

4.根据权利要求3所述的赖氨酸注射用溶剂中l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的检测方法，其特征在于，所述缓冲液和乙腈的体积比为85:15～90:10。

5.根据权利要求1所述的赖氨酸注射用溶剂中l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的检测方法，其特征在于，所述缓冲液中，磷酸二氢铵的含量为10mmol/l～200mmol/l；

6.根据权利要求5所述的赖氨酸注射用溶剂中l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的检测方法，其特征在于，所述缓冲液中，磷酸二氢铵的含量为20mmol/l～50mmol/l。

7.根据权利要求1所述的赖氨酸注射用溶剂中l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的检测方法，其特征在于，所述离子对试剂为辛烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、十二烷基硫酸钠或吐温80。

8.根据权利要求2所述的赖氨酸注射用溶剂中l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的检测方法，其特征在于，所述的色谱柱柱温为25℃～45℃。

9.根据权利要求2所述的赖氨酸注射用溶剂中l-赖氨酸及α-氨基ε-己内酰胺的检测方法，其特征在于，所述的洗脱液流量为0.8～1.2ml/min。

技术总结
本发明公开了一种赖氨酸注射用溶剂中L‑赖氨酸及α‑氨基ε‑己内酰胺的检测方法，包括以下步骤：(1)配制盐酸赖氨酸和盐酸α‑氨基ε‑己内酰胺标准溶液，利用高效液相色谱仪进行分析，分别记录L‑赖氨酸及α‑氨基ε‑己内酰胺的峰面积，采用外标法测定其响应系数；(2)取待测赖氨酸注射用溶剂，利用上述相同的色谱条件，利用高效液相色谱仪进行分析，分别记录L‑赖氨酸及α‑氨基ε‑己内酰胺的峰面积，代入STD中求得的响应系数，计算出赖氨酸注射用溶剂中L‑赖氨酸及α‑氨基ε‑己内酰胺的浓度；该检测方法可同时检测L‑赖氨酸及α‑氨基ε‑己内酰胺，并且准确度和回收率较高。

技术研发人员：张桅,殷蓉,张玲,杨婷婷,马红莉,宋英梅,姜利军,张付玉,詹威强,何春
受保护的技术使用者：浙江普洛家园药业有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15