一种酸性底物中胺类溶剂的检测方法与流程

本发明涉及分析化学，具体而言，涉及一种酸性底物中胺类溶剂的检测方法。

背景技术：

1、司美格鲁肽属于胰高血糖素样肽-1受体激动剂（glp-1受体激动剂）类降糖药物，这种药物以葡萄糖依赖的形式增加胰岛素分泌，抑制胰高糖素分泌，并可促进胃排空，可以中枢性抑制食欲，减少进食量，进而减少葡萄糖的吸收，达到降低血糖的作用。

2、司美格鲁肽在国内外均已能够大规模生产，其中酸性底物2,5-dioxopyrrolidin-1-yl(6s,12s)-12-(3-(tert-butoxy)-3-oxopropyl)-2,2,9,9-tetramethyl-4,7,10,13-tetraoxo-6-((1-trityl-1h-imidazol-4-yl)methyl)-3-oxa-5,8,11,14-tetraazahexadecan-16-oate为其关键侧链，该关键侧链在合成过程中经常使用到胺类溶剂作为缩合剂/缚酸剂。上述酸性底物制备过程中使用了胺类溶剂物料，可能有残留，从而带入最终药品中，增加患者用药风险。

3、因此，建立一种酸性底物中测定胺类溶剂方法，完善酸性底物的质量控制，对于提升酸性底物质量，减少终产品风险，是非常有必要的。

4、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种酸性底物中胺类溶剂的检测方法，旨在更精确地检测酸洗底物中胺类溶剂的含量。

2、本发明是这样实现的：

3、第一方面，本发明提供一种酸性底物中胺类溶剂的检测方法，包括：

4、将酸性底物与有机溶媒和碱性反应液混合得到供试品溶液；

5、将胺类溶剂对照品、有机溶媒和碱性反应液混合得到对照品储备溶液；

6、采用气相色谱法对供试品溶液和对照品储备溶液进行检测，利用外标一点法计算酸性底物中胺类溶剂的含量；

7、其中，碱性反应液选自氨水和氢氧化钠溶液中的至少一种。

8、在可选的实施方式中，有机溶媒选自二甲基亚砜、n-n二甲基乙酰胺和异丙醇中的至少一种；

9、优选地，有机溶媒为二甲基亚砜。

10、在可选的实施方式中，在供试品溶液中，酸性底物的浓度为50mg/ml-200mg/ml；优选为80mg/ml-120mg/ml。

11、在可选的实施方式中，每0.2g酸性底物对应碱性反应液的用量为0.01ml-0.50ml；优选为0.08ml-0.15ml；

12、优选地，经碱性反应液处理之后，供试品溶液的ph值为7.5-8.0；

13、优选地，供试品溶液的制备过程包括：先将酸性底物和部分有机溶媒混合，再与碱性反应液混合，然后再与剩余有机溶媒混合；

14、优选地，采用外标一点法计算酸性底物中胺类溶剂的含量，具体公式如下：

15、

16、式中：

17、ai表示供试品溶液色图谱中溶剂i的峰面积；

18、as表示对照品溶液色图谱中溶剂i的峰面积；

19、ms表示对照品中溶剂i的称样量，mg；

20、vs表示对照品溶液稀释体积，ml；

21、m供表示供试品称样量，mg；

22、v供表示供试品溶液稀释体积，ml；

23、pi表示溶剂i对照品的含量，%。

24、在可选的实施方式中，在对照品储备溶液中，胺类溶剂对照品的浓度为0.20mg/ml-1.00mg/ml；优选为0.20mg/ml-0.30mg/ml。

25、在可选的实施方式中，酸性底物选自2，5-二氧代吡咯烷-1-基（6s，12s）-12-（3-（叔丁氧基）-3-氧代丙基)-2,2,9,9,9-四甲基-4，7，10，13-四氧代-6-（（1-三丁基-1h-咪唑-4-基）甲基）-3-氧杂-5，8，11，14-四氮杂十六烷-16-酸酯、(s)-22-羧基-1-((2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基)-1，10，19，24-四氧代-3，6，12，15-四氧杂-9，18，23-三氮杂四十一烷酸、(s)-2-（2-叔丁氧羰基)氨基)-3-（1-三苯甲基- 1h-咪唑-4-基)丙酰胺)-2-甲基丙酸中的至少一种；

26、优选地，胺类溶剂选自三乙胺、n-甲基吗啉和n,n-二异丙基乙胺中的至少一种。

27、在可选的实施方式中，按质量分数计，所采用的色谱柱的固定相包括：氰丙基苯基5%-7%和二甲基聚硅氧烷93%-95%；

28、优选地，采用agilent8860气相色谱仪进行检测；

29、优选地，采用顶空进样器进行加热，从而使有机溶媒悬浮于顶空瓶上端；

30、优选地，采用分流进样的方式时，控制分流进样比为（5-50）:1；更优选为（10-20）:1。

31、在可选的实施方式中，测试过程中的升温程序如下：控制初始温度为30℃-60℃，保持1min-18min，然后控制以5℃/min-25℃/min的升温速率升温至110℃-130℃，保持3min-10min，再以10℃/min-20℃/min的升温速率升温至190℃-210℃，保持3min-15min；

32、优选地，控制初始温度为35℃-45℃，保持4min-6min，然后控制以7℃/min-9℃/min的升温速率升温至115℃-125℃，保持8min-10min，再以18℃/min-22℃/min的升温速率升温至195℃-205℃，保持4min-6min。

33、在可选的实施方式中，控制进样口温度为180℃-240℃，fid检测器温度为220℃-270℃；

34、控制色谱柱流速为2.0ml/min-3.5ml/min，氢气流量为30ml/min-50ml/min；空气流量为300ml/min-500ml/min，尾吹气流量为25ml/min-50ml/min；

35、定量环体积为1.0ml，顶空平衡温度为70℃-90℃，传输线温度为80℃-120℃，定量环温度85℃-120℃，顶空平衡时间为15min-50min，进样持续时间为0.1min-1.0min。

36、在可选的实施方式中，控制进样口温度为190℃-210℃，fid检测器温度为240℃-260℃；

37、控制色谱柱流速为2.3ml/min-2.7ml/min，氢气流量为30ml/min-35ml/min；空气流量为300ml/min-350ml/min，尾吹气流量为25ml/min-30ml/min；

38、定量环体积为1.0ml，顶空平衡温度为85℃-90℃，传输线温度为105℃-115℃，定量环温度100℃-110℃，顶空平衡时间为40min-50min，进样持续时间为0.3min-0.7min。

39、本发明具有以下有益效果：利用酸性底物与有机溶媒和碱性反应液混合制备供试品溶液，利用碱性反应液和酸性底物中的游离酸反应，防止游离酸会干扰测定过程，减少或避免基质效应，提高检测的准确性。本发明提供的检测方法线性范围宽、精密度好、简捷快速高效，能够很好地控制酸性底物的质量。