一种度骨化醇有关物质的高效液相色谱分析方法与流程

本发明属于药物分析，具体涉及一种度骨化醇有关物质的高效液相色谱分析方法。

背景技术：

1、度骨化醇(doxercalciferol)是一种合成的维生素d2类似物，化学名为(1α,3β,5z,7e,22e)-9,10-开环麦角甾-5,7,10(19),22-四烯-1,3-二醇，其化学结构式如下：

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3、度骨化醇是一种选择性维生素d受体(vdr)激动剂，主要作用于甲状旁腺，与甲状旁腺vdr的亲和力更高，在肝脏中代谢，较小程度增加血钙和血磷浓度，对骨骼和肠道的副作用影响较小，被fda批准用于降低进行性慢性肾透析的继发性甲状旁腺功能亢进(shpt)患者的甲状旁腺激素(ipth)水平，具有良好的疗效和较低的副作用，有广泛的临床应用前途。

4、在度骨化醇原料药的合成工艺中不可避免的会产生杂质，如杂质h、杂质i、杂质j、杂质k，结构式见下图所示，这些度骨化醇中的杂质会直接影响度骨化醇的质量，从而影响度骨化醇制剂的治疗效果。

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7、目前，仅美国药典(usp43)中收载了该品种，我们重现了美国药典的方法，发现度骨化醇出峰附近有多个杂质峰未分开，因此建立可简单、快速并能同时分离度骨化醇多个杂质的高效液相色谱法很有必要。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种度骨化醇有关物质的高效液相色谱分析方法。

2、本发明主要是通过如下技术方案实现的：

3、本发明提供一种度骨化醇有关物质的高效液相色谱分析方法，所述方法能够分离度骨化醇中有关物质，各色谱峰之间的分离度不小于1.5；

4、根据本发明实施方案，所述方法色谱条件设置为：

5、色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，规格为4.6mm×150mm，3μm；

6、流动相：以水为流动相a，以乙腈为流动相b，按下表进行梯度洗脱；

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8、流速：1～2ml/min；

9、柱温为20～30℃；

10、检测波长：260～270nm；

11、进样体积：2～10μl。

12、根据本发明实施方案，所述色谱柱c18柱选自ymc-pack ods-aq，规格为4.6mm×150mm，3μm。

13、根据本发明实施方案，所述柱温为25℃；流速为1.7ml/min；进样体积为5μl；波长为265nm。

14、所述有关物质包括杂质j、杂质h、杂质i、杂质k，各色谱峰之间的分离度不小于1.5；

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16、根据本发明实施方案，本发明提供一种度骨化醇有关物质的高效液相色谱分析方法，具体包括以下步骤：

17、(1)样品配制：

18、供试品溶液制备：取度骨化醇约40mg，置10ml量瓶中，加4ml乙酸乙酯溶解后，用乙腈稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含度骨化醇4mg的溶液；；

19、杂质贮备液制备：取杂质h、杂质i、杂质k各约4mg，置不同的10ml量瓶中，分别加4ml乙酸乙酯溶解，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为各杂质母液；精密量取杂质h母液1.5ml、杂质i母液0.5ml、杂质k母液1ml，置5ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；

20、混合溶液制备：取度骨化醇对照品约40mg，置10ml量瓶中，加4ml乙酸乙酯溶解，摇匀，精密量取杂质贮备液1ml，用乙腈稀释至刻度，摇匀，即得；

21、系统适用性溶液制备：取度骨化醇对照品约20mg，置5ml量瓶中，加2ml乙酸乙酯溶解后，用乙腈稀释至刻度，摇匀，取适量于40℃条件下加热1小时后取出，放至室温，即得。

22、(2)色谱条件设置：

23、色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

24、流动相：以水为流动相a，以乙腈为流动相b，按下表进行梯度洗脱；

25、

26、流速：1～2ml/min；

27、柱温：20～30℃；

28、检测波长：260～270nm；

29、进样体积：2～10μl。

30、(3)检测和计算：

31、精密量取系统适应性溶液5μ1，注入液相色谱仪，再精密量取对照溶液和供试品溶液各5μ1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

32、根据本发明实施方案，所述色谱柱c18柱选自ymc-pack ods-aq，规格为4.6mm×150mm，3μm。

33、根据本发明实施方案，所述柱温为25℃；流速为1.7ml/min；进样体积为5μl；波长为265nm。

34、根据系统适用性要求，系统适用性溶液色谱图中，前度骨化醇与度骨化醇分离度应大于2.0。

35、根据本发明实施方案，所述的杂质的检测限度为：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，除溶剂峰外，杂质h峰面积不得大于对照溶液主峰面积的3倍(0.30％)；杂质i峰面积按校正后的峰面积(乘以校正因子1.2)计算，不得大于对照溶液主峰面积(0.10％)；杂质j峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍(0.15％)，杂质k峰面积不得大于对照溶液主峰面积的2倍(0.20％)；其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的5倍(0.50％)；各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的10倍(1.0％)。本发明有益效果：

36、(1)本发明提供一种度骨化醇有关物质的高效液相色谱分析方法，通过调节柱温、改变色谱柱类型、优化流动相洗脱梯度，设置合理的梯度洗脱条件，提高了主峰与相关杂质的分离度，分离效果突出。

37、(2)本发明分析方法基线平稳，稳定性良好，专属性良好，灵敏度高，可以准确检测度骨化醇的有关物质，从而全面、准确、客观的评价产品质量，具有非常重要的意义。

技术特征：

1.一种度骨化醇有关物质的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述方法能够分离度骨化醇中有关物质，各色谱峰之间的分离度不小于1.5；

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱c18柱选自ymc-pack

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述柱温为25℃；流速为1.7ml/min；进样体积为5μl；波长为265nm。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有关物质包括杂质h、杂质i、杂质j、杂质k，各色谱峰之间的分离度不小于1.5；

5.一种度骨化醇有关物质的高效液相色谱分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，按照下表进行梯度洗脱：

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述色谱柱c18柱选自ymc-pack

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述柱温为25℃；流速为1.7ml/min；进样体积为5μl；波长为265nm。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，根据系统适用性要求，系统适用性溶液色谱图中，前度骨化醇与度骨化醇分离度应大于2.0。

10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的杂质的检测限度为：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，除溶剂峰外，杂质h峰面积不得大于对照溶液主峰面积的3倍即0.30％；杂质i峰面积按校正后的峰面积计算，不得大于对照溶液主峰面积即0.10％；杂质j峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍即0.15％，杂质k峰面积不得大于对照溶液主峰面积的2倍即0.20％；其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的5倍即0.50％；各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的10倍即1.0％。

技术总结
本发明提供一种度骨化醇有关物质的高效液相色谱分析方法。通过调节柱温、改变色谱柱类型、优化流动相洗脱梯度，设置合理的梯度洗脱条件，提高了主峰与相关杂质的分离度，分离效果突出。本发明分析方法基线平稳，稳定性良好，专属性良好，灵敏度高，可以准确检测度骨化醇的有关物质，从而全面、准确、客观的评价产品质量，具有非常重要的意义。

技术研发人员：周洋,丁伯祥,汪芝香,王隽,杨敏,葛元丽,胡永康
受保护的技术使用者：南京海融医药科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/4